病毒性心肌炎小鼠白细胞介素17和γ干扰素双阳性细胞的变化

目的 观察病毒性心肌炎(VMC)小鼠不同时间点白细胞介素17和γ干扰素双阳性细胞(IL-17 +/IFN-γ+细胞)的变化,探讨其在VMC发病中的作用.方法 雄性Balb/c小鼠腹腔注射柯萨奇病毒B3( CVB3)建立VMC小鼠模型(VMC组),对照组注射等量磷酸盐缓冲液,在注射的第0、1、2、3、4和6周苏木精-伊红染色观察心肌病理改变并计算心肌病理积分,流式细胞仪检测小鼠IL-17+/IFN-γ+细胞占CD4+T细胞的比例.结果 VMC组小鼠心肌组织病理积分于第1周升高(1.8±0.5),第2周达到最高(2.8±0.5),第3周开始逐渐降低,VMC组各时点与对照组相应时点比较差异均有统计学意义(P均＜0.05).VCM组小鼠各时点脾IL-17+/IFN-γ+细胞维持在低水平,与对照组相应时点比较差异均无统计学意义(P均＞0.05),Spearman相关性分析显示IL-17+/IFN-γ+细胞与心肌病理积分无显著相关(P＜0.05).结论 VMC小鼠中存在少量IL-17 +/IFN-γ+细胞,但可能与VMC的炎性过程无关.     

黄芪总黄酮对柯萨奇B3病毒性心肌炎小鼠急性期心肌组织连接蛋白43表达的影响

目的探讨黄芪总黄酮（TFA）对柯萨奇B3病毒性心肌炎（VMC）小鼠急性期心肌组织连接蛋白43（Cx43）表达的影响。方法Balb／c小鼠腹腔注射柯萨奇B3病毒感染建立VMC小鼠模型,给予TFA40mg／L灌胃治疗,第14天无痛苦处死全部小鼠并留取心脏。免疫组织化学法检测Cx43蛋白水平表达,并进行定量分析。结果①VMC组小鼠心室肌组织炎症病灶中变性、坏死周围心肌细胞Cx43表达明显减弱,甚至阴性,分布不规则,Cx43蛋白表达明显低于对照组,差异有统计学意义（P〈0．01）。@TFA组Cx43蛋白表达明显高于模型组,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论VMC心肌炎小鼠急性期心肌组织Cx43蛋白表达下降。TFA能明显提高CVB心肌炎小鼠急性期心肌组织Cx43蛋白表达。     

缝隙连接蛋白Cx43的磷酸化对缝隙连接通讯的调控

缝隙连接介导细胞间通讯。磷酸化通过影响缝隙连接蛋白生命周期中的各个过程而调节细胞间通讯,这些过程涉及到缝隙连接蛋白的转运、组装/解离、降解以及通道的门控等。本文将探讨缝隙连接蛋白Cx43的磷酸化对缝隙连接通讯的调控,继而讨论Cx43蛋白的磷酸化特异性抗体,有助于我们深入研究特定位点的磷酸化事件对缝隙连接通道功能的影响。     

病毒性心肌炎病程中小鼠血清白细胞介素2及白细胞介素10浓度的变化

目的 :观察白细胞介素 - 2 ( IL- 2 )及白细胞介素 - 1 0 ( IL- 1 0 )在急性病毒性心肌炎 ( VMC)小鼠病程中的变化。方法 :用 Cox B3 病毒感染 Balb/c小鼠 ,建立心肌炎模型 ,接种后 4、7、1 4、2 1 d,用 ELISA试剂盒检测血清 IL- 2 ,IL- 1 0 ,并对心肌组织进行病理学检测。结果 :在接种病毒后 4d,小鼠血清 IL- 2低于正常组 ,在第 1 4、2 1天 ,血清 IL- 2水平高于正常组 ,血清 IL- 2水平与病理严重程度密切相关 ;IL- 1 0在接种病毒后逐渐下降 ,在第 1 4、2 1天 ,明显低于正常组。结论 :IL- 2 ,IL-1 0在 VMC病程中起不同的作用 ,VMC时细胞免疫紊乱与细胞因子平衡失调有关     

血管紧张素Ⅱ下调肥厚心肌细胞缝隙连接蛋白Cx43的表达

目的 研究血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大后连接蛋白43(Cx43)表达的变化及与细胞周期分布的关系.方法 分离培养大鼠心肌细胞,用血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大,72 h后用RT-PCR,Western-blot和免疫荧光方法 观察心肌细胞Cx43基因和蛋白表达,用流式细胞仪测定法观察心肌细胞周期分布变化以及与Cx43表达量的关系.结果 血管紧张素Ⅱ处理后的心肌细胞表现细胞肥大且细胞活力增强,S期、G2-M期细胞百分比增加,细胞内G2-M(二倍体)DNA含量降低,Cx43蛋白表达明显低于正常对照组,呈浓度依赖性下调,Cx43 mRNA表达水平显著下调,Cx43蛋白表达下调与细胞周期分布的改变相关.结论 血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大后Cx43基因及Cx43蛋白表达出现浓度依赖性下调,这一改变与心肌肥大过程中的细胞周期变化有关,提示血管紧张素Ⅱ可能通过调控Cx43基因的表达而参与缝隙连接重构过程,而Cx43表达的变化可能与心肌肥大的机制有关.     

缝隙连接蛋白43在心房颤动发病及维持中的作用

<正>心房颤动(房颤)是一种临床常见心律失常,普通人群的发病率约为1%,其发病率随年龄的增长而增加[1]。房颤发病与高血压、冠状动脉疾病、心脏瓣膜病、心肌病、心脏外科手术、炎症、内分泌疾病、药物等多种因素相关。房颤可引起心房的电重构和结构重构,同时心脏的电重构和结构重构又为房颤复发和持续提供了条件。近年研究发现缝隙连接在房颤的心房电重构中发挥重要作用,但其确切机制尚不明     

血管紧张素Ⅱ对心肌细胞缝隙连接蛋白Cx43表达的时相性调控

目的研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导心肌细胞肥大后缝隙连接蛋白Cx43表达的变化规律和机制。方法分离培养大鼠心肌细胞后分为正常对照组、AngⅡ组和缬沙坦组,用Westernblot和免疫荧光法观察不同时间(12、24、48、72h)和不同浓度(1.0×10-9～1.0×10-5mol/L)下心肌细胞Cx43表达的变化,采用免疫荧光法检测3组心肌细胞24和72hCx43的表达。结果AngⅡ组心肌细胞较正常对照组明显肥大,蛋白含量增加。AngⅡ组心肌细胞在24～48hCx43表达上调,72h则明显下调,较正常对照组减少30%,而且在AngⅡ作用下呈浓度依赖性下调,24hAngⅡ组荧光阳性细胞数较正常对照组和缬沙坦组明显上调,72h则较其他组明显下调。缬沙坦可拮抗AngⅡ对Cx43表达的作用。结论AngⅡ诱导心肌细胞肥大过程中Cx43的表达出现一定时相性变化,并和AngⅡ呈明显的量效关系,提示AngⅡ可能通过AT1受体调控Cx43的表达而参与心肌细胞缝隙连接重构。     

血管紧张素Ⅱ下调肥厚心肌细胞缝隙连接蛋白Cx43的表达

目的研究血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大后连接蛋白43（Cx43）表达的变化及与细胞周期分布的关系。方法分离培养大鼠心肌细胞，用血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大，72h后用RT-PCR，Western-blot和免疫荧光方法观察心肌细胞Cx43基因和蛋白表达，用流式细胞仪测定法观察心肌细胞周期分布变化以及与Cx43表达量的关系。结果血管紧张素Ⅱ处理后的心肌细胞表现细胞肥大且细胞活力增强，S期、G2-M期细胞百分比增加，细胞内G2-M（二倍体）DNA含量降低，Cx43蛋白表达明显低于正常对照组，呈浓度依赖性下调，Cx43mRNA表达水平显著下调，Cx43蛋白表达下调与细胞周期分布的改变相关。结论血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大后Cx43基因及Cx43蛋白表达出现浓度依赖性下调，这一改变与心肌肥大过程中的细胞周期变化有关，提示血管紧张素Ⅱ可能通过调控Cx43基因的表达而参与缝隙连接重构过程，而Cx43表达的变化可能与心肌肥大的机制有关。     

外源性白细胞介素-17对病毒性心肌炎小鼠脾淋巴细胞分泌的细胞因子的影响

目的:观察外源性白细胞介素(IL)-7对病毒性心肌炎小鼠脾淋巴细胞分泌的干扰素(IFN)-γ、IL-6及转化生长因子(TGF)-β的影响。方法:雄性BALB/c小鼠腹腔注射柯萨奇病毒,1周后分离提取脾脏淋巴细胞,分别用0、25、50ng/ml重组IL-17(rIL-17)培养24、48、72h,流式细胞术测定培养后T辅助细胞(Th)1比例,RT-PCR测定培养细胞IFN-γ、IL-6及TGF-β的mRNA表达,ELISA法测定培养上清液中IFN-γ、IL-6及TGF-β的水平。结果:与0ng/ml组比较,25ng/ml组rIL-17作用后Th1细胞的比例、IFN-γmRNA表达水平及IFN-γ浓度均下降(均P<0.05)。但是不同浓度组和时间组内,IL-6和TGF-β的mRNA及蛋白表达量均差异无统计学意义。结论:外源性IL-17对病毒性心肌炎小鼠脾淋巴细胞中Th1细胞分化及IFN-γ的分泌起抑制作用,但是对TGF-β及IL-6没有显著影响。     

柯萨奇B病毒性心肌炎小鼠急性期心肌组织微小RNA1初始体和连接蛋白43的表达

目的观察柯萨奇B病毒性心肌炎小鼠急性期心肌组织微小RNA1初始体(pri-miRNA-1)和连接蛋白43(Cx43)表达变化,探讨病毒性心肌炎(VMC)室性心律失常发生机制。方法40只4周龄雄性Balb/c小鼠随机分为VMC组(n=20)和对照组(n=20)。VMC组小鼠腹腔注射柯萨奇病毒B3(CVB3)Nancy株悬液0.1ml,对照组小鼠腹腔注射不含病毒的RPMI1640培养基0.1ml,分别于接种病毒后第14天无痛苦处死全部小鼠并留取心脏。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测心室肌组织pri-miRNA-1的表达,免疫组织化学法检测Cx43蛋白水平表达,并进行半定量分析。结果①VMC组小鼠心室肌组织pri-miRNA-1表达量明显高于对照组(0.82±0.04vs0.63±0.07,P(0.01);②VMC组小鼠心室肌组织炎症病灶中变性、坏死周围心肌细胞Cx43表达明显减弱,甚至阴性,分布不规则,Cx43蛋白表达明显低于对照组(0.27±0.01vs0.42±0.02,P(0.01);③VMC组小鼠心室肌组织的pri-miRNA-1表达量与Cx43蛋白水平呈显著负相关(r=-0.868,P(0.01)。结论CVB心肌炎小鼠急性期心肌组织pri-miRNA-1表达上调,Cx43蛋白表达下降,miRNA-1可能通过抑制Cx43表达促进室性心律失常的发生。     

普伐他汀对心肌梗死大鼠缝隙连接及室性心律失常的影响

目的:探讨大鼠心肌梗死(MI)时普伐他汀对室性心律失常的影响及其潜在的机制。方法:结扎大鼠冠状动脉前降支制备MI模型后随机分为假手术组(SO组,20只);MI组,25只;MI+普伐他汀组(MI-Pra组,25只),其中MI组和MI-Pra组分别用生理盐水和80mg/kg的普伐他汀喂养,每天2次,持续1周。给予程序性期前刺激诱发室性心律失常的发生,心电图监测室性心律失常。蛋白免疫印记法(Western blot)检测缝隙连接蛋白43(Cx43)的磷酸化蛋白及总量表达变化。免疫荧光观察Cx43表达分布情况。结果:MI组室性心动过速(室速)/心室颤动(室颤)诱发率(80.0%,20/25)较SO组(5.0%,1/20)明显增加(P<0.05);与MI组相比,MI-Pra组明显减少了MI导致的室速/室颤的发生(13.3%,6/25,P<0.05)。MI组Cx43的表达较SO组显著降低(P<0.05);与MI组相比,MI-Pra组Cx43的表达显著增高。免疫荧光结果显示,与SO组相比,MI组Cx43由端-端连接转化为侧-侧连接;与MI组相比,MI-Pra组Cx43分布紊乱明显改善。结论:普伐他汀能够显著减少MI大鼠室性...     

风湿性心脏病心房颤动心房肌缝隙连接蛋白40和43 mRNA表达水平的变化

目的测定风湿性心脏瓣膜病(风心病)心房颤动(Af)心房肌缝隙连接蛋白(Connexin)40(Cx40)和Connexin43(Cx43)mRNA表达水平的变化。方法11例风心病患者[Af8例,窦性心律3例;男4例,女7例;平均年龄(50.8±13.7)岁;平均Af时间(5.6±6.5)年]的右心耳心肌1小块,提取所有标本的总RNA,等量转移至尼龙膜上,用PCR合成的特异cDNA探针,标记上放射性同位素(α32PdCTP)后与尼龙膜杂交,然后将杂交膜与X光胶片行放射自显影,在灰度扫描仪下得到每例标本mRNA水平的灰度值,为了进一步矫正转膜时可能的定量不统一,将同1块杂交膜先后与Cx40探针、Cx43探针和内参照βactin杂交,以Cx40/βactin和Cx43/βactin的百分比作为统计变量进行分析。结果在Af与窦性心律标本中,Cx40和Cx43的mRNA表达量未发生明显改变(P>0.05)。结论在风心病Af患者中,未发现缝隙连接蛋白Cx40和Cx43的mRNA表达量明显改变。     

庚醇预处理的心脏保护作用对细胞膜缝隙连接蛋白43的影响

目的探讨庚醇预处理对家兔心肌缺血再灌注损伤的作用及其机制。方法将50只新西兰大白兔随机分为5组:假手术组、缺血再灌注组(IR组)、缺血预处理组(IP组)、庚醇预处理组(HP组)、庚醇预处理加5-羟葵酸(5-HD)预处理组(HP+5-HD组),每组10只。所有新西兰大白兔再灌注4h后处死。分别于术前、缺血时、再灌注2、4h检测血浆肌酸激酶同工酶和心肌肌钙蛋白活性;采用免疫荧光标记检测Cx43。结果与IR组比较,IP组及HP组心肌坏死区/左心室范围明显降低(P<0.01)。与假手术组比较,IR组、HP+5-HD组Cx43mRNA表达明显降低(P<0.01);与HP+5-HD组比较,IP组、HP组Cx43mRNA表达明显升高(P<0.01);与IR组比较,IP组、HP组、HP+5-HD组Cx43mRNA表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论庚醇预处理可以通过衰减由心肌缺血再灌注诱导的细胞膜Cx43表达下降,对损伤心肌起到保护作用。     

皮下免疫热休克蛋白65对小鼠巨噬细胞胆固醇流出率的影响及机制

目的观察皮下免疫不同剂量热休克蛋白65(HSP65)对载脂蛋白E缺失小鼠动脉粥样硬化及巨噬细胞TC流出率的影响。方法选择apoE-/-小鼠24只,随机分为磷酸盐缓冲液(PBS)对照组、5μg HSP65组及25μg HSP65组,每组8只,第3、6周进行皮下免疫。实验第16周末取标本,分离小鼠主动脉测定血管斑块面积;用自动生化仪测定小鼠血脂水平,酶联免疫吸附法分别检测血清HSP65抗体滴度及炎性因子白细胞介素10(IL-10)和干扰素γ水平,液闪计数仪检测巨噬细胞TC流出率;提取肝脏mRNA及膜蛋白,分别检测ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)和G1(ABCG1)、B族Ⅰ型清道夫受体(SR-BⅠ)的表达。结果与PBS对照组比较,5μg HSP65组和25μg HSP65组TC流出率明显降低,HSP65抗体滴度和干扰素γ水平明显升高,主动脉粥样硬化斑块面积明显增加(P<0.05,P<0.01);其中25μg HSP65组血清HDL-C和IL-10表达较PBS对照组明显降低(P<0.01);5μg HSP65组和25μg HSP65组ABCA1、ABCG1及SR-BⅠmRNA表达明显低于PBS对照组(P<0.05)。结论皮下免疫HSP65可抑制小鼠巨噬细胞TC流出,可能是通过下调ABCA1、ABCG1和SR-BⅠ的表达。     

缬沙坦抑制血管紧张素Ⅱ刺激下心肌细胞缝隙连接蛋白43表达的上调

目的研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激心肌细胞肥大后,缝隙连接蛋白43(Cx43)表达的变化及缬沙坦的干预作用。方法分离培养大鼠心肌细胞,分为对照组,AngⅡ组(AngⅡ1.0×10~6mol/L)和缬沙坦组(AngⅡ1.0×10~6mol/L+缬沙坦1.0×10~6mol/L)。另外将缬沙坦以1.0×10~5、1.0×10~6和1.0×10~7mol/L刺激分为A组、B组和C组。先用AngⅡ诱导心肌肥大24 h后,采用免疫荧光法和免疫印迹蛋白法观察心肌细胞Cx43蛋白表达以及缬沙坦的干预作用。结果与对照组比较,AngⅡ组心肌细胞明显肥大,蛋白质含量明显增加,Cx43蛋白表达明显上调;与AngⅡ组比较,缬沙坦组拮抗AngⅡ刺激下Cx43蛋白的上调,并呈明显浓度依赖性下降。与A组比较,B、C组Cx43蛋白表达下降(P<0.05)。结论 AngⅡ刺激心肌细胞24 h后,通过AngⅡ1型受体信号通路,导致Cx43蛋白表达浓度依赖性上调,缬沙坦明显抑制其上调,Cx43上调可能与心肌肥大过程有关。     

益气温阳、活血化瘀方对慢性病毒性心肌炎模型小鼠IL-2活性的影响

目的 观察益气温阳、活血化瘀方对慢性病毒性心肌炎模型小鼠白细胞介素-2(IL-2)活性的影响.方法 采用多次腹腔注射柯萨奇B3m病毒稀释液方法 ,复制小鼠慢性病毒性心肌炎的模型.将BALB/c小鼠120只,随机分为模型组、空白组、中药组,每组40只.中药组予益气温阳、活血化瘀方治疗,空白组和模型组灌胃同体积生理盐水.于给药4周后检测小鼠外周血清IL-2的含量.结果中药组与空白组和模型组比较,血清IL-2差异有统计学意义(P<0.01).结论 益气温阳、活血化瘀方对慢性病毒性心肌炎具有一定的防治作用.     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞分泌白细胞介素-10 干扰素-γ水平的研究

目的：通过检测系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血单个核细胞（PBMC）分泌细胞因子白细胞介素－10（IL－10）、干扰素－γ（IFN－γ）水平，探讨了T淋巴细胞亚群与SLE发病关系。方法：采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定30例SLE患者和10名健康志愿者PBMC培养上清IL－10和IFN－γ水平。结论：①SLE活动组PBMC自发分泌IL－10水平明显升高，与非活动组、对照组比较差异有显著性（P＜0．001）；非活动组明显高于对照组（P＜0．01）。②PBMC分泌IFN－γ水平三组（SLE活动组、非活动组和对照组）比较差异无显著性（P＞0．05）。结论：IL－10、IFN－γ作为区分CD4T细胞亚群的指标之一，间接反映了Th1、Th2细胞活化状态。本文研究结果显示，SLE患者PBMC分泌IL－10水平明显增高，且增高程度与病情活动性相关，IFN－γ分泌水平无明显变化。提出Th2型细胞因子介导的免疫应答在SLE的发病机制中占主导地位，即“Th2优势应答”。我们认为PBMC分泌IL－10水平对SLE诊断和病情活动性监测均有一定临床意义。寻找有效方法调节SLE患者体内IL－10水平，从而调节Th1/Th2平衡，将为治疗SLE开辟一条新途径。     

β2受体对心肌缝隙连接蛋白Cx43的调节

目的探讨β-肾上腺素受体（β-AR）亚型对心肌缝隙连接蛋白connexin43（Cx43）表达及功能的调节。方法采用免疫印迹技术和划痕标记示踪技术（SLDT）观察心肌细胞Cx43的表达和功能变化。结果给予异丙基肾上腺素（ISO）刺激5min，即可明显增加心肌细胞非磷酸化Cx43的表达，同时促进荧光染料在细胞间的扩散；选择性β2-AR拮抗剂ICI 118551，可完全拮抗异丙基肾上腺素所诱导的该作用。结论异丙基肾上腺素主要通过刺激BrAR参与调控Cx43，这可能是β2-AR诱导心律失常的一个重要机制。     

病毒性心肌炎患儿细胞因子的改变及临床意义

目的探讨白细胞介素6、8(IL-6、IL-8)、肿瘤坏死因子(TNF-α)与病毒性心肌炎(VMC)的相关性。方法采用双抗体夹心(ELISA)法测定48例患儿及48名健康儿童外周血清IL-6、IL-8、TNF-α水平。结果VMC组IL-6、IL-8、TNF-α分别为(39.73±77.4)pg/ml、(142.27±36.12)pg/ml、(23.27±14.24)pg/ml,健康组分别为(30.26±89.0)pg/ml、(42.17±20.38)pg/ml、(19.91±11.14)pg/ml,VMC组IL-6、IL-8、TNF-α水平均显著高于健康组(P均<0.05)。结论IL-6、IL-8、TNF-α参与了VMC的发病,检测VMC患儿IL-6、IL-8、TNF-α水平有助于VMC的诊断、病情估计和预后,并为临床治疗开辟新途径。     

庚醇后处理对兔缺血再灌注心肌缝隙连接蛋白43表达的影响

目的通过观察家兔心肌线粒体缝隙连接蛋白43(Cx43)基因及蛋白的表达,探讨庚醇后处理对缺血再灌注心肌保护作用的机制。方法将50只新西兰大白兔随机分为5组,每组10只:对照组,缺血再灌注组,庚醇后处理组,5-羟葵酸干预组,庚醇后处理加5-羟葵酸干预组(联合处理组)。所有兔于心肌缺血再灌注4h后处死,取心肌组织,检测Cx43mRNA表达水平,提取心肌细胞线粒体蛋白并采用Western blot检测其含量。结果与对照组比较,缺血再灌注组、庚醇后处理组、5-羟葵酸干预组、联合处理组Cx43mRNA和Cx43蛋白表达明显减少(P<0.05);与庚醇后处理组比较,缺血再灌注组、5-羟葵酸干预组和联合处理组Cx43mRNA和Cx43蛋白表达明显减少(P<0.05);与联合处理组比较,缺血再灌注组和5-羟葵酸干预组Cx43mRNA和Cx43蛋白表达明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论庚醇后处理对心肌缺血再灌注损伤引起的Cx43表达降低有抑制作用,并且可能与线粒体敏感性钾离子通道的参与有关。