Caspase-3活性改变与人卵巢癌细胞系COC1/DDP耐药的关系

目的 探讨人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP中抗凋亡蛋白Bcl-XL、Bcl-2、细胞色素C的表达及半胱天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)活性与人卵巢癌顺铂耐药的关系。方法:采用RT-PCR和Western Blot分析人卵巢癌顺铂敏感细胞株COC1和顺铂耐药株COC1/DDP中Bcl-XL、Bcl-2、细胞色素C的表达和caspase-3的活性。并用流式细胞术测定顺铂作用后COC1和COC1/DDP细胞株的凋亡率。结果:在COC1/DDP细胞中,Bcl-XL和Bcl-2的表达明显高于COC1细胞;顺铂作用后,在COC1/DDP细胞株中细胞色素C的表达明显减少,caspase-3活性明显降低(P<0.05);其凋亡率也明显低于COC1细胞株(P<0.05)。结论:人卵巢癌细胞株COC1/DDP对顺铂产生耐药可能与细胞内Bcl-XL、Bcl-2过度表达抑制了线粒体细胞色素C的释放及caspase-3活性有关。     

卵巢癌细胞对顺铂耐药及其逆转的实验研究

目的：探明卵巢癌对顺铂耐药的发生机理，并筛选出逆转其耐药性的有效调节剂。方法：建立对顺铂耐药的人卵巢癌细胞系ＳＫＯＶ３／ｃｐ，采用微囊包裹肿瘤细胞技术建立人类卵巢癌小鼠异种移植耐药模型。比较耐药细胞和非耐药细胞生化特征的差异，采用相应的耐药调节剂来进行耐药逆转实验。结果：在ＳＫＯＶ３细胞内，铂（Ｐｔ）累积浓度、Ｐｔ－ＤＮＡ加合物、ＤＮＡ链间交联指数（ＩＳＣ）分别是ＳＫＯＶ３／ｃｐ细胞的５．１、２．４和４．８倍（Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１）；二性霉素Ｂ（ＡｍＢ）和新生霉素（ＮＶＢ）能提高ＳＫＯＶ３／ｃｐ细胞内铂浓度或Ｐｔ－ＤＮＡ加合物浓度，从而完全或部分逆转ＳＫＯＶ３／ｃｐ对顺铂的耐药性。结论：导致ＳＫＯＶ３／ｃｐ对顺铂耐药的主要原因是细胞内药物浓度下降和对Ｐｔ－ＤＮＡ清除能力增强。ＡｍＢ和ＮＶＢ能够逆转ＳＫＯＶ３／ｃｐ对顺铂的耐药性。     

YB1和CD44在上皮性卵巢癌中的表达及其与铂类耐药的关系

目的:检测上皮性卵巢癌中Y-盒结合蛋白1(YB-1)和黏附分子CD44的表达,分析其与卵巢癌化疗耐药的关系。方法:采用免疫组化SP法分别检测YB-1及CD44蛋白在铂类耐药或敏感的上皮性卵巢癌及正常卵巢组织中的表达情况,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western blot法分别检测上皮性卵巢癌顺铂敏感与耐药细胞中YB1及CD44 mRNA与蛋白水平,分析两者表达的相关性。结果:YB-1和CD44在上皮性卵巢癌组织中阳性率分别为56.3%和60.9%,耐药组织中表达均明显高于敏感组织,且两者表达呈正相关(r=0.456);顺铂耐药上皮性卵巢癌细胞株中YB-1和CD44 mRNA及蛋白水平明显高于敏感株(P均0.05)。结论:YB-1和CD44与上皮性卵巢癌铂类耐药相关,独立或联合检测可能预测化疗的敏感性。     

X连锁凋亡抑制蛋白cDNA转染与卵巢癌细胞顺铂耐药性

目的：探讨X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）功能片段cDNA转染和表达对卵巢癌细胞顺铂耐药性的影响。方法：构建XIAP真核表达载体。脂质体转染法转染ES2人卵巢透明细胞癌细胞，甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞生存率。结果：不同浓度顺铂作用24h，未转染XIAP功能片段的ES2和转染后的ES2的细胞生存率之间差异具有统计学意义（t=3．296，P=0．013）。结论：在体外培养的卵巢癌细胞中增加XIAP功能片段表达水平，能够在一定程度上增加卵巢癌细胞对顺铂的耐药性。XIAP可能在卵巢癌耐药中起一定的作用。     

β-连环素对卵巢癌细胞顺铂耐药性的影响

目的:探讨信号分子β连环素(β-catenin)在多个卵巢癌耐药细胞系中的表达及其对顺铂耐药性的影响。方法:首先在2个卵巢癌耐药细胞系(C13K,SKOV-3),2个卵巢癌敏感细胞系(OV2008,A2780),A2780顺铂敏感株、A2780-cis顺铂耐药株,COC10顺铂敏感株、COC1-cis顺铂耐药株中检测β-catenin蛋白的水平。通过小干扰RNA(si RNA)介导的RNA干扰技术靶向沉默细胞中β-catenin的表达,实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)和蛋白质印迹法(Western blotting)验证β-catenin基因沉默效果。台盼蓝染色方法分析β-catenin基因沉默对细胞化疗药物顺铂敏感性的影响,流式细胞术检测顺铂处理后β-catenin基因沉默细胞的凋亡率。Western blotting筛选多个凋亡相关信号分子的改变。结果:β-catenin在2个卵巢癌耐药细胞系C13K,SKOV-3中蛋白水平较敏感细胞系明显上调。与亲本A2780和COC10细胞相比,在耐药株A2780-cis和COC1-cis中表达水平也明显增高。β-catenin si RNA能显著抑制细胞中β-catenin蛋白的水平。β-catenin基因沉默后,卵巢癌耐药细胞C13K,SKOV-3对顺铂敏感性显著增高;流式细胞术进一步分析发现β-catenin基因沉默可以促进顺铂介导的卵巢癌耐药细胞的细胞凋亡。Western blotting发现β-catenin基因沉默后,顺铂处理可以显著上调促凋亡分子p53和caspase-3蛋白水平。结论:β-catenin在卵巢癌耐药细胞系表达明显增高,β-catenin沉默可以促进卵巢癌耐药细胞对顺铂的敏感性,并同时促进了顺铂介导的细胞凋亡。     

带hTERT启动子的腺病毒干扰ERCC1基因表达逆转卵巢癌顺铂耐药的研究

目的:研究带hTERT启动子的腺病毒通过干扰ERCC1基因表达而逆转卵巢癌顺铂耐药的作用。方法:以1、10、50、80感染复数(MOI)的重组腺病毒分别感染卵巢癌细胞株SKOV3、卵巢癌细胞顺铂耐药株SKOV3/DDP和脐静脉内皮细胞ECV304,同时以相同滴度的空载体腺病毒感染细胞,将感染前的细胞作为对照,以RT-PCR方法检测重组腺病毒转染细胞中ERCC1 mRNA表达,以Western blot方法检测重组腺病毒转染细胞中ERCC1蛋白表达,并以MTT法检测肿瘤细胞对顺铂化疗敏感性的影响。结果:(1)在SKOV3及SKOV3/DDP细胞中,不同剂量Ad-hTERT-ERCC1 shRNA转染组与转染前相比,ERCC1 mRNA及ERCC1蛋白表达水平下调,差异有统计学意义(P<0.01)。而在空载体腺病毒转染组及ECV304细胞中,ERCC1 mRNA及ERCC1蛋白表达水平无改变,差异无统计学意义(P>0.05);(2)重组腺病毒转染后,SKOV3/DDP细胞对顺铂的敏感性显著增加(P<0.01),并呈剂量依赖性。结论:带hTERT启动子的腺病毒能够通过干扰ER-CC1基因表达而逆转卵巢癌顺铂耐药,并且具有剂量依赖性。     

NAC-1通过自噬介导卵巢癌细胞顺铂耐药的研究

目的:探讨NAC-1在自噬介导的卵巢癌细胞顺铂耐药中的作用。方法:Western blot及流式细胞术检测顺铂诱导的耐药卵巢癌细胞(SKOV3/DDP)自噬及凋亡过程中,NAC-1蛋白的表达情况。采用siRNA下调NAC-1表达,检测其对SKOV3/DDP细胞自噬及凋亡的影响,并检测其对顺铂耐药性的影响。结果:顺铂处理SKOV3/DDP细胞后,细胞自噬及凋亡水平升高,NAC-1蛋白表达升高。siRNA下调NAC-1基因后,顺铂处理SKOV3/DDP细胞的自噬水平降低,凋亡升高,细胞顺铂耐药性降低。结论:NAC-1基因可能通过调节自噬参与卵巢癌细胞顺铂耐药,降低NAC-1基因表达有助于提高顺铂对卵巢癌细胞的杀伤作用。     

人卵巢上皮性癌顺铂耐药细胞系3AO/cDDP模型的建立及耐药机理的实验研究

目的：模拟临床卵巢上皮性癌化疗的用药特点建立顺铂耐药细胞系3AO／CDDP,检测LRP、MRP、P－gp、GSTπ和TopeⅡ表达。方法：以临床卵巢上皮性癌化疗用药的最低剂量换算终浓度,采用大剂量顺铂（10μg／ml）反复间歇24h暴露法建立顺铂耐药细胞系;用FCM法检测LRP、MRP、P－gp、GSTπ和TopoⅡ表达。结果：历时4．5个月建成顺铂耐药株3AO／cDDP,耐药性稳定,耐药指数1．62,与临床耐药倍数相近。3AO／cDDP细胞MRP、P－gp表达与3AO相比无明显变化（P＞0．05）,LPR、GSTπ表达明显升高（P＜0．005及P＜0．05）,Tope-Ⅱ含量明显降低（P＜0．05）。结论：3A0／cDDP是模拟临床用药特点建立的、研究顺铂耐药的理想模型;顺铂耐药与LRP、GSTπ表达升高及TopoⅡ含量降低有关,与MRP、P-gp无关。     

肝素结合表皮生长因子在顺铂耐药卵巢癌中的表达及相关性研究

目的检测肝素结合表皮生长因子（HB-EGF）在顺铂耐药卵巢癌中的表达水平并探讨HB-EGF与卵巢癌对顺铂耐药性的关系。方法①体外实验：蛋白印迹法检测卵巢癌亲本细胞株A2780和顺铂耐药株A2780/CDDP中HB-EGF蛋白的表达。分别予以HB-EGF抑制剂CRM197治疗,四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测细胞的增殖能力,酶标仪检测加药前后caspase-3蛋白的活性;②体内实验：建立A2780组和A2780/CDDP组卵巢癌裸鼠移植瘤模型,免疫组化法检测2组移植瘤中HB-EGF蛋白的表达。分别予以CRM197治疗观察移植瘤的生长情况并计算CRM197抑瘤率。结果体内外实验结果表明,与A2780组相比,HB-EGF在A2780/CDDP组中高表达。CRM197可有效地降低A2780/CDDP细胞的增殖能力和caspase-3的表达,抑制A2780/CDDP组裸鼠移植瘤的生长（P〈0.001）。结论 HB-EGF在顺铂耐药卵巢癌中高表达,并与卵巢癌对顺铂的耐药性相关。     

DNA修复相关蛋白ERCC1、BRCA1和hMLH1与卵巢上皮性癌顺铂耐药的关系

目的 研究DNA修复相关蛋白ERCC1、BRCA1和hMLH1与卵巢上皮性癌顺铂耐药的关系.方法 应用免疫组化链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶连接(SP)法检测1996年1月至2003年5月在天津医科大学总医院的58例卵巢上皮性癌组织中ERCC1、BRCA1和hMLH1蛋白的表达,分析其与临床病理特征和顺铂耐药的关系及3种DNA修复蛋白的相关性.结果 58例卵巢癌组织ERCC1、BRCA1、hMLH1蛋白的阳性表达率分别为37.93%、32.76%、75.86%,ERCC1和BRCA1表达与患者年龄、临床分期、病理组织学类型、组织学分级及有无腹水无相关性(P＞0.05).hMLH1表达与病理组织学类型相关(P=0.023).顺铂化疗耐药组ERCC1、BRCA1和hMLH1蛋白的阳性表达率分别为57.89%、52.63%和78.95%,化疗敏感组的阳性表达率分别为28.21%、23.08%和74.36%,两组比较,ERCC1和BRCA1的表达差异有统计学意义(P=0.029,P=0.024),hMLH1的表达差异无统计学意义(P=0.486).BRCA1和hMLH1蛋白的表达具有相关性(P=0.023).结论 ERCC1、BRCA1蛋白的表达与卵巢癌顺铂耐药有关,可能成为预测卵巢癌顺铂敏感性的指标.     

人卵巢癌细胞系A2780及顺铂耐药系蛋白质双向电泳图谱的差异分析

近年来，生命科学研究领域的热点，蛋白质组学理论和技术的迅速发展和完善，可望从组织或细胞蛋白质整体水平这一全新角度，探讨卵巢癌顺铂耐药的机理。本研究应用固相pH梯度双向凝胶电泳技术，分离人卵巢癌细胞系A2780及顺铂(DDP)耐药系(A2780-DDP)的总蛋白，建立双向凝胶电泳(2-DE)图谱，再应用基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术，及数据库鉴定部分差异蛋白质，希望发现与顺铂耐药有关的特异性蛋白质。     

卵巢癌顺铂耐药细胞模型中14-3-3蛋白的差异表达

目的探讨卵巢癌顺铂化疗耐药模型中14-3-3蛋白的差异表达,为深入研究卵巢癌顺铂耐药机制提供理论依据。方法分别提取卵巢癌顺铂耐药和敏感细胞的蛋白质,应用差异凝胶电泳(DIGE),通过DecyderTM分析软件获得差异表达蛋白质点,进行基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析、鉴定。结果经过二维电泳技术分离,MALDI-TOF-MS成功鉴定出2个14-3-3蛋白亚型,即14-3-3σ和14-3-3ζ,在耐药细胞中表达分别上调31%和38%,t检验P值分别为0.0049和0.0032。结论差异蛋白14-3-3σ和14-3-3ζ的鉴定为探讨这类蛋白在卵巢癌顺铂耐药中的作用奠定了基础,并提供了候选治疗靶点。     

APE1 siRNA增强卵巢癌细胞铂类敏感性的实验研究

目的:本研究通过观察脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶(APE1/Ref-1)小分子干扰核糖核酸(siRNA)对卵巢癌细胞中APE1表达水平及顺铂敏感性的影响,探讨以APE1为靶点的基因治疗在卵巢癌化疗增敏中的临床应用前景。方法:应用RNAi技术抑制卵巢癌顺铂敏感株A2780和顺铂耐药株A2780/CP70中APE1的表达,并用MTT法及TUNEL等技术检测APE1 siRNA对卵巢癌细胞铂类敏感性的影响。结果:MTT药物敏感试验表明,20MOI和40MOI APE1 siRNA处理后,A2780细胞顺铂IC50值由对照组的31.62μmol/L分别降低为13.38μmol/L和3.48μmol/L,有统计学差异(P<0.01)。20MOI和40MOI APE1 siRNA处理后,A2780/CP70细胞的顺铂IC50值分别为39.73μmol/L和12.43μmol/L,较对照组(64.20μmol/L)分别下降了38.12%和80.64%,有统计学差异(P<0.01)。TUNEL凋亡原位检测表明,40MOI APE1 siRNA处理后,A2780和A2780/CP70细胞的凋亡指数分别为(42.16±3.61)%和(46.11±3.81)%,分别是DDP组的3.57倍、4.94倍,有统计学差异(P<0.01)。结论:抑制APE1表达能显著增加卵巢癌细胞对顺铂的敏感性,APE1可能是逆转卵巢癌铂类耐药的有效靶点。     

抗凋亡基因NF-κB和Survivin对卵巢癌细胞株耐药性的诊断价值

目的:探讨凋亡抑制基因NF-κB、Survivin对卵巢癌细胞株耐药性的诊断价值。方法:采用卵巢上皮性癌细胞株A2780和由此细胞株诱导的耐顺铂细胞株AD4,分别加入顺铂(DDP)和紫杉醇(Taxol),并设空白对照,测定两组细胞中凋亡抑制基因核因子(NF-κB)、Survivin和多耐药基因(Mdr1)mRNA的表达;同时检测各组细胞的凋亡率。结果:经DDP处理后,Mdr1在两株细胞中均无明显表达,与G3PDH的比值均低于0.1;而Taxol作用后,Mdr1在两株细胞中表达均增加,与G3PDH的比值分别为1.98和1.86,但差异无显著性。NF-κB在各组细胞中均有表达,各组之间差异无显著性。Survivin有较强表达,与G3PDH的比值为4.5,耐药细胞株的比值为6.9。在两细胞株的不同实验中,Mdr1的表达与凋亡率无明显相关性,而Survivin则是负相关(P<0.05,r=-0.89)。结论:在卵巢癌及卵巢癌耐顺铂细胞株中,紫杉醇可诱导Mdr1高表达,而DDP对Mdr1表达无影响;NF-κB主要是通过活性增加,促进Mdr1表达来诱发卵巢癌细胞耐药;Survivin的表达与细胞凋亡率呈负相关,提示Survivin可作为肿瘤细胞耐药检测指标之一。     

CTHRC1对卵巢癌细胞顺铂耐药的作用及机制研究

目的:探究胶原三股螺旋重复蛋白1(CTHRC1)对卵巢癌细胞顺铂耐药的作用及其相关机制。方法:Western blot法检测卵巢癌细胞株A2780、SKOV3及顺铂耐药细胞株A2780/DDP、SKOV3/DDP中CTHRC1蛋白表达水平。慢病毒lenti-sh CTHRC1转染SKOV3/DDP细胞,下调CTHRC1表达水平。CCK-8法检测沉默CTHRC1后SKOV3/DDP细胞增殖情况及顺铂半数抑制浓度(IC_(50))的变化。Western blot法检测转染后SKOV3/DDP细胞中抗凋亡蛋白Bcl-2的表达情况及Akt、STAT3的磷酸化水平。结果:与A2780和SKOV3细胞相比,顺铂耐药细胞株A2780/DDP和SKOV3/DDP细胞中CTHRC1蛋白表达水平相对较高(P0.05)。靶向下调CTHRC1表达后,SKOV3/DDP-sh CTHRC1细胞的增殖能力无明显变化,但顺铂的IC_(50)显著降低(P0.01),Akt、STAT3磷酸化水平受到抑制,Bcl-2表达水平降低(P0.05)。结论:CTHRC1可能通过Akt、STAT3信号通路,调节抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,继而影响卵巢癌细胞对顺铂的敏感度。     

神经酰胺增强卵巢癌顺铂敏感性的体外研究

目的:探讨神经酰胺增强卵巢癌顺铂敏感性的作用及机制,为筛选有效的卵巢癌顺铂耐药逆转剂提供实验依据。方法:本研究采用MTT法测定不同剂量的C6-神经酰胺(Ceramide C6)(5、10、20、40μmol/L)对卵巢癌顺铂化疗的增敏作用,以RT-PCR、Westernblot法检测Ceramide C6对肿瘤细胞Bcl-2 mRNA及其蛋白表达的影响,应用流式细胞技术观察Ceramide C6对肿瘤细胞凋亡的影响。结果:Ceramide C6对SKOV3、SKOV3/DDP细胞生长有抑制作用,与DDP联合应用时可增强DDP敏感性。SKOV3细胞中,与对照组相比,不同浓度Ceramide C6使顺铂敏感性分别增加了7.23%、20.14%、45.02%、57.75%。SKOV3/DDP细胞中,顺铂敏感性分别增加了23.08%、24.57%、45.86%、65.78%。随Ceramide C6浓度增加,SKOV3和SKOV3/DDP细胞中Bcl-2 mRNA及蛋白表达逐渐减低,差异有统计学意义(F=41.780,P=0.000;F=223.258,P=0.000;F=98.306,P=0.000;F=224.687,P=0.000)。Ceramide C6可增加SKOV3、SKOV3/DDP细胞凋亡率,差异有统计学意义(F=135.625,P=0.000;F=224.906,P=0.000)。结论:神经酰胺可能通过抑制肿瘤细胞Bcl-2 mRNA及其蛋白表达,诱导肿瘤细胞凋亡途径,增强顺铂对卵巢癌SKOV3和SKOV3/DDP细胞体外生长的抑制作用,在一定程度上逆转了卵巢癌顺铂耐药。     

调节细胞自噬增强卵巢癌顺铂敏感性的体外研究

目的:探讨细胞自噬与上皮性卵巢癌顺铂耐药的关系及调节细胞自噬对卵巢癌顺铂耐药的影响。方法:应用MTT法、MDC荧光染色法及激光共聚焦显微镜技术,观察SKOV3、SKOV3/DDP细胞株自噬现象;通过自噬特异性抑制剂3-MA作用,了解3-MA对卵巢癌细胞胞浆内自噬体的抑制作用及抑制细胞自噬对卵巢癌顺铂敏感性的影响。结果:SKOV3细胞株顺铂IC50值为3.330μg/ml,SKOV3/DDP细胞株顺铂IC50值为14.152μg/ml。3-MA联合顺铂作用后SKOV3细胞株的顺铂IC50值为3.312μg/ml,其对顺铂的敏感性无明显影响(P=0.221),SKOV3/DDP细胞株顺铂IC50值为6.386μg/ml,提示3-MA可提高上皮性卵巢癌顺铂耐药细胞对顺铂的敏感性(P=0.000)。MDC荧光染色及激光共聚焦显微镜观察SKOV3、SKOV3/DDP细胞株胞浆自噬体的形成情况,顺铂能够诱导自噬体的生成,在3-MA作用下,SKOV3/DDP细胞株顺铂诱导的自噬体荧光强度变小,而SKOV3细胞株自噬体的荧光强度变化不大。结论:细胞自噬活性增强与上皮性卵巢癌顺铂耐药有关,抑制细胞自噬活性可以部分逆转上皮性卵巢癌SKOV3/DDP顺铂耐药,但不改变顺铂敏感型细胞SKOV3对顺铂的敏感性。     

谷胱甘肽-S-转移酶P1启动子调控的胞嘧啶脱氨酶和尿嘧啶磷酸核糖转移酶融合基因对卵巢癌顺铂耐药细胞的体外杀伤作用

目的　观察谷胱甘肽 S 转移酶P1(GSTP1)启动子调控的胞嘧啶脱氨酶和尿嘧啶磷酸核糖转移酶融合基因 (CD UPP ,即自杀基因 )表达的腺病毒载体 ,对卵巢癌顺铂耐药细胞的体外杀伤作用。方法　采用细菌内同源重组法构建腺病毒载体 ,设立卵巢癌顺铂敏感细胞株A2 780和以其诱导的耐药细胞株A2 780 /DDP ,在体外用重组腺病毒转染两组细胞并联合应用前药 5 氟胞嘧啶 (5 FC) ,观察两组卵巢癌细胞对 5 FC的敏感性。将CD UPP阳性和CK UPP阴性的A2 780 /DDP细胞按不同比例混合后给予 5 FC ,观察 5 FC对混合细胞的杀伤作用。结果　当重组腺病毒滴度为 10 0感染复数(MOI)、5 FC浓度为 2 5 0 μg/ml时 ,对顺铂耐药的A2 780 /DDP细胞的存活率为 (3 6± 1 0 ) % ,对顺铂敏感的A2 780细胞的存活率为 (76 5± 2 8) % ,两者比较 ,差异有显著性 (P <0 0 5 )。此外 ,2 0 ? UPP阳性A2 780 /DDP细胞 ,即可引起 80 3%的混合细胞死亡 ,CD UPP / 5 FC系统表现出明显的旁观者效应。结论　由腺病毒介导的含有GSTP1调控的CD UPP/ 5 FC系统 ,对卵巢癌顺铂耐药细胞具有特异性杀伤作用 ,为临床上克服卵巢癌化疗耐药 ,提供了一条安全、高效的治疗途径。     

格列卫对卵巢癌细胞COC1增殖及血管形成的影响

目的探讨格列卫(gleevec)对耐药卵巢癌细胞COC1增殖、顺铂敏感性和血管形成的影响,为临床应用格列卫治疗难治性卵巢癌提供实验依据。方法2006年9月至2007年5月于哈尔滨医科大学第一临床医学院采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测格列卫对细胞增殖的影响;采用ELISA法检测格列卫对COC1表达血管内皮细胞生长因子(VEGF)和内皮抑素(endostatin)的影响。结果格列卫对COC1细胞增殖的抑制作用表现出浓度依赖性,并显著提高了其对顺铂的敏感性;格列卫对COC1表达VEGF具有明显的抑制作用,格列卫对COC1表达内皮抑素具有明显促进作用,并呈浓度依赖性。结论格列卫能够抑制顺铂耐药卵巢癌细胞COC1的增殖,并显著增强其对顺铂的敏感性;格列卫对抑制肿瘤细胞产生VEGF具有明显的作用。     

胰岛素样生长因子1受体与卵巢癌SKOV3细胞顺铂耐药相关性的研究

目的:探讨胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)与卵巢癌SKOV3细胞顺铂耐药的相关性。方法:建立人卵巢癌细胞系SKOV3异种移植瘤模型,其中部分用顺铂处理;由此模型获得细胞分为SKOV3-P组(未化疗组)和SKOV3-R组(化疗组)。采用免疫细胞化学法和流式细胞术检测瘤细胞中IGF-1和IGF-1R的表达差异;MTT法和流式细胞术分别检测不同浓度顺铂(0、1、5、10、15、20μg/ml)和IGF-1R抑制剂NVP-AEW541(0、1、5、10、20μmol/L)单独及联合应用对瘤细胞的增殖及凋亡的影响。结果:SKOV3-P组、SK-OV3-R组细胞中均表达IGF-1和IGF-1R,且SKOV3-R组细胞的表达均显著高于SKOV3-P组细胞(P<0.05);NVP-AEW541对SKOV3-P组、SKOV3-R组细胞均表现增殖抑制,呈现剂量-时间依赖关系;NVP-AEW541联合顺铂作用瘤细胞时抑制作用显著增强,移植瘤细胞的顺铂敏感性显著增加(P<0.05);流式细胞术检测联合用药组细胞(10μmol/LNVP-AEW541+10μg/ml顺铂)凋亡率明显高于对照组和单独用药组(10μmol/L NVP-AEW541),且SKOV3-P组细胞的抑制率和凋亡率均显著高于SKOV3-R组细胞(P<0.05)。结论:IGF-1R参与了化疗耐药过程,通过NVP-AEW541抑制IGF-1R可能逆转卵巢癌细胞的顺铂耐药。