巢式PCR在腺病毒F亚属引起的致腹泻肠道感染检测中的应用

目的 建立一种特异、敏感、快速地检测致腹泻肠道腺病毒F亚属的巢式PCR方法,了解引起肠道致腹泻感染中腺病毒的携带情况. 方法 根据腺病毒F亚属基因编码序列,设计一对通用引物扩增靶基因片段,扩增后片段长度为520 bp,另根据相对保守序列设计一对特异性的引物以第一次PCR扩增后的产物为模板,再进行PCR扩增,片段长度为300 bp.通过ABI3130基因检测仪来评价该方法的特异性;对腺病毒模板做10倍比系列稀释后进行巢式PCR检测,并对其敏感性进行分析,对PCR扩增产物进行电泳和测序鉴定. 结果肠道致腹泻肠道感染中通过巢式PCR扩增反应可检出腺病毒F亚属,通过基因序列测定证实了PCR产物的特异性;在敏感性检测中PCR检测肠道腺病毒模板的下限为2.08×10-4μg/ml. 结论本研究建立了一个快速、特异、敏感的肠道腺病毒PCR检测方法,适用于流行病学调查及临床检测.     

PCR检测金黄色葡萄球菌肠毒素C基因的研究

目的建立一种检测金黄色葡萄球菌肠毒素C的快速敏感PCR方法。方法根据金黄色葡萄球菌肠毒素C基因编码序列,设计1对PCR引物来特异性扩增靶基因片段,片段长度为600 bp,通过对1株金黄色葡萄球菌产肠毒素C菌株和5株非金黄色葡萄球菌产肠毒素C菌株进行检测来评价该方法的特异性;对金黄色葡萄球菌产肠毒素C菌株做一系列10倍稀释后进行PCR检测,并对其进行敏感性分析,对PCR扩增产物进行电泳和测序鉴定。结果1株金黄色葡萄球菌产肠毒素C菌株PCR扩增反应呈阳性,5株非金黄色葡萄球菌产肠毒素C菌株PCR扩增反应为阴性;通过基因测序证实了PCR产物的特异性;PCR检测金黄色葡萄球菌肠毒素C基因的检测下限为1.5×10^2cfu/ml。结论本研究建立了一个快速、特异、敏感的金黄色葡萄球菌肠毒素C基因PCR检测方法。     

用DNA microarray快速检测淋球菌耐喹诺酮类药物基因突变

研究DNA microarray的制备及其检测淋球菌耐喹诺酮类药物基因突变的准确性。方法根据淋球菌药敏及测序结果分别对淋球菌gyrA和parC基因的序列设计特异引物和探针并制作DNA microarray。对淋球菌临床拭子进行PcR扩增并荧光标记包含gyrA和parC基因的目的DNA片段，与芯片杂交，同时以测序法进行双盲淋球菌耐喹诺酮类药物基因突变的检测。结果87份泌尿生殖道试子全部可用DNA microarray检测出来，芯片检测结果与药敏结果符合率为100％，与测序结果符合率为97．7％。结论用DNA microarray来检测淋球菌gyrA和parC基因突变快速、特异性高和灵敏度高，可以应用于临床耐药性检测。     

SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测西尼罗病毒

目的建立快速、敏感和特异的检测西尼罗病毒的SYBRGreenⅠ荧光定量PCR法，用于西尼罗病毒（WNV）疾病的早期诊断。方法采用RT—PCR扩增WNV基因片段，将其克隆至T载体，重组质粒测序并进行同源性分析；阳性质粒用于替代WNV，以阳性质粒为模板，建立SYBRGreenⅠ荧光定量PCR检测方法，并进行敏感性和特异性检测。结果经测序证实扩增片段属于WNV，所建立的SYBRGreenⅠ荧光定量PCR法可检测到10拷贝的西尼罗病毒RNA，而对其他黄病毒科成员日本脑炎病毒及登革热病毒的检测则为阴性，表明该方法特异。结论SYBRGreenⅠ荧光定量PCR简便快速，具有较高的敏感性和特异性，可以成为一种早期检测西尼罗病毒的新方法。     

PCR检测金黄色葡萄球菌肠毒素A、E基因

目的 建立一种用PCR快速敏感地检测金黄色葡萄球菌肠毒素A、E的方法.方法 根据genebank报道的编码金黄色葡萄球菌肠毒素A、E的基因序列,设计一对特异性引物来扩增靶基因片段,长度为327 bp,通过对金黄色葡萄球菌产肠毒素A、E菌株和14株非金黄色葡萄球菌产肠毒素A、E菌株进行检测,评价该方法的特异性;对金黄色葡萄球菌产肠毒素E菌株做系列10倍稀释,进行PCR检测,对其敏感性进行分析;PCR扩增产物进行电泳和测序鉴定.结果 金黄色葡萄球菌肠毒素A、E菌株出现PCR扩增反应,14株非金黄色葡萄球菌产肠毒素A、E菌株没有出现PCR扩增反应,通过测序分析证实了PCR产物的特异性;PCR检测金黄色葡萄球菌肠毒素E基因的检测下限为120 cfu/ml.结论 建立了一个快速、特异、敏感的金黄色葡萄球菌肠毒素A、E基因的PCR检测方法,可用于金黄色葡萄球菌肠毒素的临床诊断和食品安全监测.     

LCR技术在检测淋球菌和泌尿生殖道沙眼衣原体感染中的应用

连接酶链反应技术(Ligase Chain Reaction,LCR)与PCR技术相似,是近年来发展的一门新的分子生物学技术,LCR技术与PCR相比所不同的是,其使用了两对引物对靶序列作扩增,同时在扩增过程后,还应用微粒子酶免疫技术(MEIA)对扩增产物进行测定,进一步提高了检测的敏感性和特异性。本文就近年来LCR技术在临床检测淋球菌(GN)和泌尿生殖道沙眼衣原体(CT)的应用情况综述如下。     

葡萄球菌肠毒素B基因的PCR快速检测法

目的 建立快速检测葡萄球菌肠毒素B(staphylococcal enterotoxin B,SEB)基因的聚合酶链反应(PCR)方法.方法 ①根据SEB基因的序列,设计PCR引物特异性扩增靶基因片段.通过对1株产SEB金黄色葡萄球菌和9株对照菌株进行PCR检测,评价该方法的特异性;通过对产SEB金黄色葡萄球菌菌株做10倍系列稀释后进行PCR检测,评价该方法的敏感性;②分析30株金黄色葡萄球菌SEB基因的携带情况.结果 ①建立PCR方法快速检测SEB基因,扩增产物长度为494 bp.PCR反应体系中有26 CFU的产SEB金黄色葡萄球菌即可检出SEB基因;②30株分离的金黄色葡萄球菌中有2株携带有SEB基因.结论 PCR法可以快速、敏感地检测SEB基因,为金黄色葡萄球菌食物中毒诊断提供依据.     

PCR快速检测猪链球菌2型方法的建立

目的建立一种快速、特异且敏感的猪链球菌菌型的检测方法。方法从疑似猪链球菌感染患者血液（抗凝血）中提取DNA为模板，并合成引物检测猪链球菌特异性16 Sr RNA基因片段、2型猪链球菌特异性荚膜多糖编码基因片段cps2J、溶菌酶释放相关蛋白编码基因片段mrp、细胞外蛋白因子编码基因片段ef。结果PCR扩增结果证实是猪链球菌2型。结论PCR反应体系是一种检测和鉴定猪链球菌2型的快速、特异且敏感的方法。     

基于TaqMan探针实时定量PCR技术在高危型HPV感染检测中的应用

目的建立一种快速、特异的实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测方法,用于高危型人乳头状瘤病毒感染的快速检测。方法根据GenBank公布的人乳头状瘤病毒16的E7基因序列设计一对特异性引物和TaqMan探针,提取组织DNA,优化反应体系与条件,建立基于TaqMan探针的FQ-PCR检测HPV E7基因的方法,对方法的敏感性、特异性和重复性进行评价。结果所设计的引物与探针能特异性地扩增出HPV16 E7基因,熔解曲线峰值单一,对应温度值与预期值相同,产物经琼脂糖凝胶电泳显示PCR产物分子量与预期一致,最低检测下限可达10 fg,且扩增效率达到96.0%,扩增产物测序后经Blast比较具有很高的特异性,设计的反应体系与条件具有稳定的可重复性。结论建立的FQ-PCR方法能特异、敏感地检测高危型人乳头状瘤病毒E7基因,可应用于临床检测及宫颈癌筛查工作。     

多重半套式聚合酶链反应在检测脑脊液病原菌中的应用

目的：建立多重半套式聚合酶链反应（PCR）快速检测脑脊液标本中常见的病原菌。方法：通过对病原菌16S rRNA基因保守区和变异区的序列分析，设计通过引物及革兰阴性菌、革兰阳性菌的特异性引物，分别作为外、内侧引物，对脑脊液标本中不同细菌的DNA进行多重半套式PCR扩增；同时与常规细菌培养法作比较，并检测了该方法的敏感性。结果：外侧扩增后革兰阳性菌、革兰阴性菌经扩增后均有长约1032bp的片段产生；内侧扩增两种细菌除1032bp的产物外，革兰阳性菌另有一336bp的特异性产物，革兰阴性菌另有一127bp的特异性产物。该方法最低可检测出8cfu/ml的大肠埃希菌；62份脑脊液标本扩增结果与培养法相比，敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预没值分别为93．8％、5．7％、88．2％、97．8％。结论：多重半套式PCR方法能特异、敏感、快速地检测出脑脊液感染的常见病原菌。     

泌尿生殖道感染患者病原体检验结果分析

目的：对男女患者泌尿生殖道感染进行分析,并对造成泌尿生殖道感染的病原体存在的差异性与可疑人群的感染情况进行探讨。方法：选取本院2009-2012年收治的120例泌尿生殖道感染患者与可疑人群100例,采用医学检测受感染人群的病原体。结果：淋病奈瑟菌病原体感染患者在120例病患者中占有13%,男9例,女7例;沙眼衣原体感染患者在120例患者中占有40%,男30例,女18例;三重复合感染患者占有46%,男44例,女12例。结论：淋病奈瑟菌病原体、沙眼衣原体、三重复合感染在男性与女性感染率上无显著差异性。     

随机扩增多态性DNA在淋球菌基因分型中的应用

目的 建立随机扩增多态性DNA(RAPD)对淋球菌进行基因分型的方法。方法 用4种不同的预处理方法提取淋球菌基因组DNA,对其优劣进行比较;并运用RAPD对淋球菌菌株进行区分及对经性伴传播的淋病病例进行RAPD指纹图谱比较。结果 运用经典的十六烷基三乙基溴化铵法可以抽提较完整的基因组DNA,获得良好的RAPD指纹图谱;各菌株的RAPD指纹图谱间有明显不同DNA多态性;性伴传播的病例中获得了非常相似的RAPD指纹。结论 选择最佳的DNA抽提技术,运用RAPD可以对淋球菌进行有效基因分型,并可用于分子流行病学对传染源的追踪。     

女性生殖道性传播疾病病原体混合感染调查

目的 探讨女性生殖道性传播疾病病原体混合感染的检测现状及临床意义。方法 分别采用革兰染色镜检、金标法、培养法、酶标法进行淋菌、沙眼衣原体、解脲脲支原体、人支原体、单纯疱疹病毒等5种病原体检测。结果 2188例女性患者中有〉2种病原体混合感染者175例，占8．0％；21～40岁年龄段的患者占总数的77．7％。结论 应重视性传播疾病的监测与控制工作。     

Penicillinase-producing Neisseria gonorrhoeae infection in adolescent prostitutes in detention

In the first quarter of 1983, four (17%) of 24 cases of Neisseria gonorrhoeae infection diagnosed in female adolescent detainees in King County, Washington were caused by penicillinase-producing (PPNG) strains. Twelve (3%) of 397 reported cases of female gonorrhea in the rest of King County during this time were caused by PPNG strains (p less than 0.01). All the detainees with PPNG infection were prostitutes. Their case histories are presented here. Three had signs and symptoms suggestive of pelvic inflammatory disease. In areas with endemic PPNG, all isolates of N. gonorrhoeae from female adolescent detainees should be tested for pencillinase production, and all prostitutes with genitourinary symptoms suggestive of gonorrhea should be treated with an antimicrobial resistant to pencillinase.     

男性泌尿生殖道感染奈瑟菌属菌种的基因检测分析

目的 研究男性泌尿生殖道感染奈瑟菌属菌种的基因的检测分析,同时探讨非淋球菌奈瑟菌引起男性泌尿生殖道感染的病原学诊断及临床意义.方法 自2010年3月～2011年10月采集的102例慢性前列腺炎患者的前列腺的精液或按摩液标本,接种于淋球菌琼脂培养基中,放入烘箱中进行培养,采用聚合酶链反应(PCR)检测淋球菌隐蔽性质粒pJDL基因.结果 102例患者的前列腺液、精液标本分离到103株革兰阴性双球菌,其中粘液奈瑟菌39株、灰色奈瑟47株、嗜乳糖奈瑟菌7株、干燥奈瑟菌6株、微黄奈瑟菌2株、多糖奈瑟菌2例.pJDL基因经PCR检测结果显示,99株(95.19％)形成与淋病奈瑟菌一致的阳性反应;103株奈瑟菌对头孢菌素类、喹诺酮类抗生素具有显著的耐药性(35.6％～99.9％).结论 常规的细菌学形态检查、氧化酶试验以及检测隐蔽性质粒,其他淋球菌非特异性基因的方法,可导致对于非淋球菌奈瑟菌感染的误诊与漏诊.感染了泌尿生殖道非淋球菌奈瑟菌对临床常用的多种抗生素具有耐药性或多重耐药性,在疑似奈瑟菌属菌种感染的实验室检查中联合使用常规细菌学方法与基因检测方法,可有助于提高奈瑟菌属菌种鉴定及其感染诊断的准确率.     

Etiology of urethral discharge in West Africa: the role of Mycoplasma genitalium and Trichomonas vaginalis

OBJECTIVE: To determine the etiological role of pathogens other than Neisseria gonorrhoeae and Chlamydia trachomatis in urethral discharge in West African men. METHODS: Urethral swabs were obtained from 659 male patients presenting with urethral discharge in 72 primary health care facilities in seven West African countries, and in 339 controls presenting for complaints unrelated to the genitourinary tract. Polymerase chain reaction analysis was used to detect the presence of N. gonorrhoeae, C. trachomatis, Trichomonas vaginalis, Mycoplasma genitalium, and Ureaplasma urealyticum. FINDINGS: N. gonorrhoeae, T. vaginalis, C. trachomatis, and M. genitalium--but not U. urealyticum--were found more frequently in men with urethral discharge than in asymptomatic controls, being present in 61.9%, 13.8%, 13.4% and 10.0%, respectively, of cases of urethral discharge. Multiple infections were common. Among patients with gonococcal infection, T. vaginalis was as frequent a coinfection as C. trachomatis. M. genitalium, T. vaginalis, and C. trachomatis caused a similar clinical syndrome to that associated with gonococcal infection, but with a less severe urethral discharge. CONCLUSIONS: M. genitalium and T. vaginalis are important etiological agents of urethral discharge in West Africa. The frequent occurrence of multiple infections with any combination of four pathogens strongly supports the syndromic approach. The optimal use of metronidazole in flowcharts for the syndromic management of urethral discharge needs to be explored in therapeutic trials.     

呼吸道感染患者奈瑟菌属致病性相关基因的检测

目的 检测呼吸道感染患者分离奈瑟菌属的致病性相关基因,探讨非淋病奈瑟菌、非脑膜炎奈瑟菌的致病性.方法 采用PCR扩增和序列分析技术,对慢性呼吸道感染患者下呼吸道分离奈瑟菌属致病性相关基因orf1与nspA进行检测.结果 从呼吸道感染患者标本分离的230株奈瑟菌属,orf1基因阳性35株,序列比对与淋病奈瑟菌TCDC-NG08107 orf1序列同源性达95.0％～99.0％;nspA无阳性反应.结论 人体上呼吸道正常菌群奈瑟菌属缺乏nspA基因,少数菌株可具有淋病奈瑟菌及脑膜炎奈瑟菌致病性相关基因orf1,提示该基因并不是人体上呼吸道正常菌群奈瑟菌属致病性和引起呼吸道继发性感染的毒力因素     

淋病奈瑟菌外膜蛋白PorB编码基因的克隆及序列分析

目的 获取淋病奈瑟菌外膜蛋白PorB编码基因(porB)并构建其重组表达质粒。方法 根据porB已知序列，设计合成一对引物，用PCR方法从淋病奈瑟菌基因组DNA中扩增出porB基因片段，克隆到原核表达质粒pQE30中，转化大肠埃希菌M15感受态细胞，经酶切和PCR鉴定，然后进行测序。结果 porB基因体外扩增产物大小约为911bp。重组质粒经双酶切和PCR鉴定表明为正确重组子，测序结果与已知序列基本吻合。结论 成功克隆了淋病奈瑟菌外膜蛋白PorB编码基因，为下一步PorB蛋白的功能研究和淋病奈瑟菌蛋白质疫苗的研制提供了基本的物质基础：     

Emergency department screening for asymptomatic sexually transmitted infections

OBJECTIVES: This study assessed the prevalence and correlates of asymptomatic genital tract infection with Neisseria gonorrhoeae and Chlamydia trachomatis among emergency department patients. METHODS: Individuals seeking emergency department evaluation for nongenitourinary complaints provided urine samples for N gonorrhoeae and C trachomatis testing by ligase chain reaction and completed a sociodemographic and behavioral questionnaire. RESULTS: Asymptomatic N gonorrhoeae or C trachomatis was found in 9.7% of persons tested. Correlates of C trachomatis infection included younger age, residence in high-morbidity zip code areas, previous history of N gonorrhoeae or C trachomatis, and number of sex partners in the past year. CONCLUSIONS: Urine-based screening of asymptomatic emergency department patients detected significant numbers of N gonorrhoeae and C trachomatis infections. Targeted screening programs may contribute to community-level prevention and control of sexually transmitted infections.     

感染在早产发生中的作用

早产是引起围生儿死亡的重要原因,而感染是引起早产的重要原因之一。感染多表现为亚临床感染。微生物可经多种途径入侵羊膜腔,其中最常见的是上行感染。主要病原微生物有厌氧菌、支原体、衣原体及淋球菌等。感染引发早产的机制与前列腺素的合成、细胞因子的异常分泌、基质金属蛋白酶活性增加等有关。