沙门菌鉴定卡的研究与开发

目的:研究沙门菌快速简易的鉴定方法,并开发出具有应用价值的沙门菌鉴定卡。方法:应用硫化氢琼脂(H2S)、赖氨酸琼脂(LDC)、TTC琼脂(M)、甘露醇琼脂(MAN)、β-半乳糖苷琼脂(ONPG)、蔗糖琼脂(SAC),作为沙门菌鉴定的系列生化制备成鉴定卡。对22株标准菌种和72株本室分离的菌种进行鉴定,并进行了样品检测菌株的鉴定。结果:鉴定卡对菌种的鉴定表明沙门菌在鉴定模式之内;非沙门菌在鉴定模式以外,符合率达100%;样品检测表明鉴定卡和常规法结果一致,符合率也达100%。结论:该鉴定卡敏感性高、特异性强,而且操作简便,鉴定快速。     

比浊法控制菌悬液浓度在分值计算法鉴定培养基中的应用

在 2 0 0 1年度浙江省消毒、灭菌检测实验室室间质量控制的培养基质量鉴定项目中 ,为了控制检测过程中的不利因素 ,提高检测质量 ,保证结果准确有效 ,要求 10 - 6 稀释的菌悬液 0 1ml在对照培养基 1号上涂布培养 ,菌落形成单位控制在 5 0～ 10 0cfu/皿范围内[1 ] 。在实验过程中较难掌握 ,在控制培养环境等因素的条件下 ,由于各菌种生物学特性不同 ,往往超出此范围。关键在于制备菌悬液时加入菌量较难控制。本次实验采用比浊法控制菌量 ,现将结果报告如下。材料与方法1　材料　指示菌 :痢疾志贺菌 (ATCC12 0 2 2 )、大肠埃希菌(ATCC2 5…     

PCR实验联合MPB64免疫胶体金检测在分枝杆菌菌种鉴定中的应用

目的评价PCR荧光定量实验联合MPB64免疫胶体金检测在分枝杆菌菌种鉴定中的应用价值。方法以分枝杆菌罗氏培养基TCH/PNB生长实验为"金标准",选取287例河南省胸科医院2018年6月～12月结核分枝杆菌培养菌株,进行PCR和MPB64免疫胶体金检测,分析两种菌种鉴定能力。结果胶体金法、PCR荧光定量法与TCH/PNB实验结果一致率分别是88.9%和99.3%,胶体金法鉴定结核分枝杆菌敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别是94.0%、100.0%、93.7%、68.6%。延长培养后复查MPB64的阴性预测值是87.5%,联合PCR荧光定量实验所得结果与"金标准"符合率100.0%。结论 MPB64免疫胶体金法在分枝杆菌菌种鉴定中假阴性率较高,可选择重复实验或者联合PCR实验进行菌种鉴定,方法简便、快速、价格低廉,可推广基层医院应用。     

MALDI-TOF MS在液体培养分枝杆菌菌种鉴定中的研究

目的研究基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)对液体培养分枝杆菌菌种鉴定的能力。方法回顾性收集本院2017年10月-2018年10月液体培养分离到的结核分枝杆菌40株,非结核分枝杆菌85株,采用MALDI-TOF MS菌种鉴定,与传统生化鉴定方法和16S r DNA测序结果进行比较,以测序结果为金标准分析MALDITOF MS对分枝杆菌菌种鉴定的准确性,评价其应用价值。结果测序结果46株为结核分枝杆菌,40株符合初筛结果,另有6株初筛非结核菌株鉴定为结核分枝杆菌,78株为非结核分枝杆菌,1株奴卡菌。MALDI-TOF MS从46株结核分枝杆菌中正确鉴定出44株,正确鉴定率为95.65%;78株非结核分枝杆菌中,69株正确鉴定,1株奴卡菌正确鉴定,NTM正确鉴定率为88.46%(69/78);奴卡菌鉴定率为100.00%(1/1),另对常见堪萨斯分枝杆菌、脓肿分枝杆菌等非结核分枝杆菌均能正确鉴定。结论MALDI-TOF MS对液体培养分枝杆菌具有较高鉴定率,是一种快速、简便准确的鉴定方法,在临床应用中具有重要价值。     

单增李斯特菌鉴定方法比较研究

[目的]对单增李斯特菌鉴定方法进行研究。[方法]分别用API检测方法、16SrRNA序列分析法和焦磷酸测序法对17株单核细胞增生李斯特菌进行检测。[结果]3种方法均能准确鉴定单增李斯特菌。[结论]焦磷酸测序方法检测单增李斯特菌特异性强、经济、操作简便、检测快速,为单增李斯特菌的快速、高通量检测提供了一种新的手段。     

肠道菌鉴定一管多用生化培养基在我国的开发和应用

目前，细菌学的分类和鉴定技术有了很大的改进，名目繁多的技术已应用于诊断感染以及分离和鉴定微生物试验中，但就我国目前情况来看，在基层单位，细菌培养和生化试验仍是细菌鉴定过程中必不可少的。肠道菌的种类和数量在分类上占很大的比例，也是和人类生活紧密相关的一类细菌，即有益生菌也有致病菌，不同性质的细菌有不同的应用和作用，需要一一鉴定区分出来。为了缩短时间和简化操作程序，节省人力、物力，确保临床用药和追溯传染源，几十年来，为适应发展要求，集各种生化试验于同一支试管的一管多用筛选鉴定培养基不断地被开发和应用，具有很大的经济和社会效益。笔者结合肠道菌检验工作实际，收集一些文献资料，就肠道菌鉴定一管多用生化培养基在我国的开发应用情况做一综述。     

167种食品中的李斯特菌检验

通过对南京某地区 6类 16 7种食品李斯特菌的初步分离鉴定 ,发现 MMA分离平板上除 45°光线下为蓝色或灰蓝色的 S型小菌落外 ,呈现扁平、干燥、边缘不整齐的菌落 (R菌落 )也为李斯特菌的可疑菌落 ,同时发现触酶阴性、MR阴性、VP阴性及尿素酶阳性的菌株。结果表明 ,S型小菌落、尿素酶阴性、MR阳性、VP阳性及触酶阳性均不能作为李斯特菌鉴定的严格标准     

两株不同生物型鼠伤寒沙门菌鉴定

浙江省疾病预防控制中心下达的一份质控考核标本,经鉴定,报省疾控中心核实,结果为鼠伤寒沙门菌.2004年10月,从一位发热腹泻病人粪便中分离到一株鼠伤寒沙门菌,在鉴定过程中发现这两株菌存在着生化反应差异,但药敏试验结果则完全相同,这一特点我们首次发现.现报告如下.     

台州市非结核分枝杆菌的菌种分布特征和流行状况分析

目的 分析台州市非结核分枝杆菌(NTM)的菌种分布和流行状况,为NTM病防治提供实验室依据。方法 对台州市2018年—2021年收集的1 437株分枝杆菌,先通过抗酸染色和MPB64抗原胶体金试验进行初步鉴定,然后分别用ITS、rpoB和hsp65基因测序方法进行菌种鉴定。结果 1 437株分枝杆菌中236株最终鉴定为NTM,总体分离率为16.4%;2018年—2021年分离率分别为7.0%、15.2%、17.2%、29.6%,呈上升趋势(χ²_趋势=54.90,P<0.05)。236株NTM被鉴定为22个菌种,以鸟分枝杆菌复合群(MAC)为主(72.9%),其中胞内分枝杆菌占57.2%;其次为脓肿分枝杆菌(9.7%)和堪萨斯分枝杆菌(4.2%)。感染者男女比例为1.56:1,主要集中在≥60岁人群。结论 台州地区NTM总体分离率处于较高水平,建议加强本地区NTM病监测并及时对菌种进行鉴定。     

3种方法鉴定单核细胞增生李斯特菌比较

[目的]采用分子生物学方法(accuprobe和PCR)对传统方法经ATB鉴定为单核细胞增生李斯特菌和疑为单核细胞增生李斯特菌的菌株进行鉴定比较,建立灵敏,快速,可靠的鉴定方法。[方法]对经传统方法结合ATB鉴定分离的菌株(单核细胞增生李斯特菌)分别采用accuprobe和PCR试剂盒进行鉴定比较。[结果]对10株经传统方法结合ATB鉴定的Lm菌(包括疑似Lm菌)经PCR鉴定,3株为阳性,7株为阴性,与accuprobe法鉴定结果一致。[结论]分子生物学方法检测单核细胞增生李斯特菌是对传统方法的有效补充,可用于大批量样品中致病菌的快速鉴定     

一例输入性布鲁菌病的病原学诊断

目的 分离和鉴定布鲁氏菌,为病例的诊断、治疗及疫情的控制提供科学依据. 方法 无菌采集病人血液标本,接种血培养瓶增菌,转种羊血琼脂平板进行分离培养,用Vitek对分离的菌株进行生化鉴定,应用诊断血清进行血清学分型,用PCR技术检测布鲁菌属特异基因、布鲁菌各型特异性基因. 结果从患者的血液中分离出布鲁菌,经鉴定为羊种布鲁氏菌,布氏菌阳性血清、A因子和M因子血清凝集试验均为阳性. 结论该病例为布鲁菌属羊种布鲁氏菌的实验室确诊病例.     

API20E、PCR方法在沙门菌鉴定中的应用

为了评价API 20E试条、PCR方法在沙门菌鉴定中的应用，本研究利用API 20E、PcR方法对54株疑似沙门菌进行鉴定，利用常规生化和血清学方法对鉴定结果进行确认。结果发现API20E、PCR方法与常规鉴定方法的结果一致，51株为沙门菌，3株非沙门菌（1株为柠檬酸杆菌，2株为河生肠杆菌）。API20E、PCR方法具有简便、特异、敏感的特点，可适用于沙门菌鉴定。     

1株引起肺部感染的按蚊伊丽莎白菌的鉴定及耐药分析

目的 分离鉴定1株引起肺炎的按蚊伊丽莎白菌并对其进行耐药分析。方法 利用MALDI Biotyper质谱仪、VITEK 2 Compact 30全自动细菌鉴定仪、VITEK MS质谱仪、Illumina Miseq测序仪对菌株进行鉴定,利用微量肉汤稀释法对菌株进行药敏试验。结果 MALDI Biotyper质谱仪和VITEK 2 Compact 30全自动细菌鉴定仪鉴定结果均为脑膜脓毒性伊丽莎白菌,VITEK MS质谱仪和Illumina Miseq全基因组测序鉴定结果均为按蚊伊丽莎白菌。药敏结果显示该菌涉及的耐药类别包括青霉素类、β-内酰胺/β-内酰胺酶抑制剂复合物、头孢类、碳青霉烯类、氨基糖苷类、四环素类、氯霉素类等,对上述各类别中的1种或多种抗生素耐药,但对哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、米诺环素、替加环素敏感。结论 引起患者肺部感染的病原菌为按蚊伊丽莎白菌。该菌具有多重耐药现象,应加强监测和注意合理用药。     

一起椰毒假单胞菌酵米面亚种食物中毒鉴定分析

20 0 0年 7月 3日 ,本市某医院肠道门诊收入一名食物中毒患者 ,女性 ,年龄 48岁。其主要临床症状 :上腹部痛 ,恶心、呕吐 (呕吐物为胃内容物 ) ,腹胀、轻微腹泻、头痛、头晕、全身无力、烦躁、轻度皮下出血。1　材料与方法1 1　样品来源 :患者呕吐物 ,残存食物 (凉拌银耳及未加工的鲜银耳 )。1 2　诊断血清 :系卫生部营养与食品卫生研究所供给 ,在有效期内使用 ;所用生化培养基均由本实验室自制 ,按[1] 培养基制造方法进行。1 3　分离鉴定 :方法按[2 ] 食物中毒的细菌检验方法进行。1 3 1　分离 :将所采取的标本接种ＰＤＡ平板 ,同时将检样…     

药品微生物检验菌种保藏方法

菌种是重要的生物资源，研究和选择良好的菌种保藏方法是微生物检验中一项重要工作，特别是《中国药典》2005年版要求对药品的无菌检查和微生物限度检查进行方法学验证，并规定所用标准菌种的传代次数不得超过5代。因此，菌种的纯度、活性、变异可直接影响检验结果，采用一种适宜的菌种保藏方法至关重要，可保持菌种原有的各种生物学特性，从而达到研究和检验目的。     

一株鱼腥草内生真菌的菌种鉴定及抑菌活性初探

目的 对鱼腥草内生真菌J3菌株进行菌种鉴定;研究J3菌株菌丝和发酵液粗提物的抑菌活性。方法 提取J3菌株基因组DNA,应用PCR技术获得ITS区扩增产物,经测序得到ITS序列,结合菌落形态、孢子形态对J3菌株进行鉴定;依次用乙酸乙酯和水饱和正丁醇分别对J3菌株菌丝和发酵液进行提取,并应用纸片扩散法研究粗提物对大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌和粪肠球菌的抑菌活性。结果 J3菌株的分生孢子为镰刀形;在系统进化树中J3菌株也与Fusarium oxysporum菌株聚在一类,因此结合形态学特征和ITS区序列,鉴定内生真菌J3菌株为尖孢镰刀菌;发酵液和菌丝的乙酸乙酯粗提物和水饱和正丁醇粗提物对粪肠球菌和金黄色葡萄球菌均有抑菌作用,但是对大肠埃希氏菌和铜绿假单胞菌无明显抑菌效果。结论 鱼腥草内生真菌J3菌株能够产生具有抑菌活性的代谢产物,值得进一步研究。     

液相芯片技术在沙门菌抗原缺失血清型鉴定中的应用

目的探讨液相芯片技术在检测、鉴定抗原缺失的沙门菌中的应用。方法依据国标GB 4789.4-2016和盲样考核手册,对3份考核盲样进行增菌分离培养和生化鉴定,分别采用血清凝集和多重PCR液相芯片技术进行血清型分型,比较其优缺点。结果 3份考核样经分离、纯化,以血清凝集法和多重PCR液相芯片技术进行分型分析,鉴定结果一致,2份样品为阿贡纳沙门菌和婴儿沙门菌,1份样品为未检出。2017S-10(5)-1 H相中第二相未观察到凝集现象,2017S-10(5)-3第一相观察不到凝集现象,分别经3次、2次诱导后才获得鉴定结果,分别耗时3d、2d,平均成本为1 000元/样本;液相芯片技术分型耗时4h,平均成本为500元/样本。结论利用液相芯片技术能够快速、准确鉴定抗原缺失血清型沙门菌,可在有条件的机构推广。     

痰抗酸菌涂片检查的质量控制分析

本文对５个质控点，进行痰抗酸菌涂片检查质量控制，涂片质量与染色质量总体合格率分别为８６．５％和８９．３％，质控各项指标逐次均有所提高，阳性符合性率由第１次的９３．２％上升为第３次的９４．２％；阴性一符合率第１次９３．３％，第３次上升９７．２％基本达到和接近质控要求。资料分析表明，涂片镜下痰细胞数合格与否，是判断痰标本质量好坏的重要指标，认真做好痰检质控，痰检不明显提高。     

现代分析技术在中药鉴定中的应用

中药是中医开展医疗活动的重要基础,若其存在伪劣现象,必将对治疗效果产生影响,在情况严重时甚至将对患者生命健康安全构成威胁.因此为避免该种现象发生,本文通过实际调查及分析文献资料,对现代分析技术手段进行分析,并对其在中药鉴定工作中的应用进行研究,以期可以为医疗活动顺利进行提供可靠依据.     

微量生化鉴定1株沙门细菌结果的分析

[目的]建立细菌微量生化快速反应鉴定系统,用于细菌检验中的快速诊断。[方法]利用肠杆菌科细菌生化鉴定编码册(第二代15e系统)要求的15种生化组合与被沙门菌A-F多价O血清凝集的细菌培养物进行培养鉴定。[结果]经查系统编码册得出总值为43265,结果为亚利桑那沙门菌。[结论]用细菌微量快速生化反应系统鉴定细菌,具有简单、快速的特点,无需特殊设备,成本低廉,所得结果准确、可靠,能够满足各级医院实验室及基层疾控中心应用。