广州市58株单增李斯特菌菌株特征分析

目的 了解广州市动物源性食品中单增李斯特菌菌株优势血清型、携带毒力基因和分子分型情况。方法 对广州地区365份动物源性食品中的单增李斯特菌分离鉴定,并进行血清分型,毒力基因鉴定和肠道细菌基因间重复序列扩增(ERIC-PCR)。结果 单增李斯特菌阳性率为15.89%(58/365),其中生畜肉类检出率最高,为25.38%(33/130);血清型分析将58株单增李斯特菌分为4种血清型,分别为1/2b、1/2a、1/2c和4b,优势的血清型为1/2b(44.80%)和 1/2a(32.80%);10株缺失毒力基因actA;ERIC-PCR扩增出9~18条100~8000bp之间的条带,将58株单增李斯特菌在相似系数为0.8处分为6个群19个类型。结论 广州市动物源性食品中单增李斯特菌菌株污染严重,优势血清型是与人或动物感染有关的致病血清型(1/2b和1/2a),大部分毒力基因均存在,ERIC-PCR结果显示分子型别呈多样性,应加强防控。     

2016-2019苏州市副溶血性弧菌的毒力基因和耐药性及分子分型研究

目的了解2016-2019年苏州市副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)分离株毒力基因携带情况,耐药性及分子分型。方法利用荧光定量PCR技术对154株分离自苏州各区、县级市的VP的3种毒力基因(tlh、tdh、trh)进行检测。采用微量肉汤稀释法测定其对14种抗生素的耐药性。采用脉冲场凝胶电泳(Pulsed-Field Gel Electrophoresis, PFGE)进行分子分型。采用卡方检验对统计结果进行分析(α=0.05)。结果 154株VP分离株tlh基因均为阳性;trh基因阳性4株,阳性率为2.60%,均为病患分离;tdh基因阳性107株,阳性率为69.48%,其中病患分离株阳性106株,食品及环节(用具)分离株阳性1株。154株VP仅对氨苄西林耐药,总体耐药率为80.52%(124/154),其中病患分离株耐药率为88.98%(105/118)高于食品及环节分离株耐药率52.78%(19/36),差异具有统计学意义(P<0.001)。154株VP经PFGE分子分型显示带型相似性为45%～100%,按相似度85%为判读标准可分为73个带型...     

上海市单核细胞增生李斯特菌基因分型及耐药性研究

目的了解上海市单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)食品和临床分离株的毒力特点、耐药性及其基因特征。方法采用试管凝集法对89株LM食品和临床分离株进行血清分型,采用聚合酶链反应(PCR)方法对LM中7个毒力基因进行检测,采用琼脂扩散(K-B)法对其进行药敏试验,采用脉冲场凝胶电泳法(PFGE)对89株LM分离株进行分型研究。结果血清分型结果显示1/2a和1/2c是LM优势血清型。只有4株LM食品分离株对四环素显示耐药,其余均为敏感。89株LM食品和临床分离株都含有7种毒力基因。89株食品和临床分离株经双酶切分型可得40条不同的条带,且1株临床菌株的PFGE分型显示其为食品分离株的亚型。结论上海市LM分离株的耐药性并不严重,但是其均为产毒株,且PFGE分型结果显示临床菌株与食品分离株之间有较近的亲缘关系,这提示上海市LM分离株对公共卫生具有潜在的危险,需要对其加强监测。     

基于微球液态阵列分子技术的沙门菌血清分型研究

目的 了解基于微球液态阵列分子技术对广东省腹泻病例沙门菌分离株的分型效果。方法 在微球液态阵列分子平台上应用SSA试剂盒对沙门菌人源株进行分子血清分型。结果 2010-2014年广东省人源沙门菌4 942株分为189种血清型,前100种血清型占所有菌株的98.08%（4 847/4 942）,其中98%可用SSA试剂盒完整分型;采用SSA试剂盒检测198株菌O抗原,可检出181株;用SSA检测H抗原的结果（98.32%,528/537）与传统血清凝集试验结果相符;fljB基因的符合率为93.09%（175/188）,fljB基因假阴性率为7.35%（9/134）,假阳性率为7.41%（4/54）;sdf基因和Vi基因符合率均为100%;用SSA试剂盒检测12株血清不能分型的沙门菌,有11株能成功分型。结论 SSA试剂盒能对96%以上的广东省人源沙门菌株进行分子血清分型,其结果与传统方法符合率超过98%。基于微球液态阵列分子技术的血清分型法比传统方法更具有高通量且快速的特点。     

1株分离于肿物积液的单增李斯特菌的病原学特点及分子特征

目的了解1株分离于肿物积液的单增李斯特菌的病原学特点和分子特征。方法对该菌株进行血清型、毒力基因、耐药性、脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分型(MLST)等分析。结果该菌株属于1/2b血清型、ST87型,携带12种毒力基因(actA,hlyA,prfA,flaA,plcA,plcB,Inl 1A,Inl 1B,Inl 1C,Inl J,iap,Mpl)。该菌株与LM263(江苏)、LM417(上海)的PFGE带型一致,与2株北京分离株(LM188、LM403)的PFGE带型相差一条带,相似性为95%。该菌株对青霉素G、苯唑西林、氨苄西林、头孢克洛、头孢噻肟、克拉霉素等6种抗生素耐药,对其他18种抗生素敏感或中介。结论该菌株属于引起李斯特菌病的常见血清型(1/2b)和ST型(ST87),具有强致病性,其PFGE型别已在中国其他地区出现。该菌对青霉素类抗生素耐药,应选用其他药物进行治疗。     

2013-2016年山东省食品中单核细胞增生李斯特菌的血清型、耐药性及分子分型分析

目的  了解分离于2013-2016年山东省食品中单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes, LM)的主要血清型、耐药谱和分子分型特点。 方法  采用微量肉汤稀释法测定LM抗生素敏感性, 使用玻片凝集法和PCR方法确定其血清型, 利用脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis, PFGE)和多位点序列分型(multilocus sequence typing, MLST)进行分子分型。 结果  191株LM对8种抗生素总体基本敏感, 四环素耐药率最高(15/191, 7.85%), 8种抗生素耐药性连续监测4年无差异(P=1.000);血清型1/2a占38.82%(66/170), 1/2b占18.82%(32/170), 1/2c占42.36%(72/170); SDSRZXDZ016、S2014L031和SDSRZX030带型共占33.78%, 呈明显聚集性, 为优势带型; 优势ST型为ST9、ST8和ST121, 占81.18%(69/85), 临床常见ST3, ST7和ST87占8.23%(7/85), 未发现新ST型。 结论  2013-2016年分离于山东省的食源性LM菌株对所测定的大多数抗生素敏感, 但已经发现耐四环素和红霉素菌株; 优势血清型为1/2c和1/2a, 未发现易引起李斯特菌病暴发的4b血清型; SDSRZXDZ016、S2014L031和SDSRZX030为山东省2013-2016年PFGE优势带型; 主要ST型为ST8、ST9和ST121, 临床常见的ST3、ST7和ST87型均从食品中分离到, 应予以重视。     

2014—2015年北京市批发市场肉类食品中沙门菌表型和基因组特征分析

目的分析北京批发市场肉类食品中沙门菌的表型和基因组特征。方法对分离自北京市批发市场的336株肉类食品来源沙门菌, 采用微量肉汤稀释法对25种抗菌药物进行耐药性测试, 开展全基因组测序并使用SeqSero2、SISTR软件分析血清型和ST型, 使用Abricate软件的CARD、VFDB模块预测菌株的耐药基因和毒力因子, 使用沙门菌分子血清分型试剂盒和血清凝集法验证部分疑难菌株血清型。结果 336株沙门菌菌株对萘啶酸、氨苄西林的耐药率分别为62.5%(210/336)和55.1%(185/336), 对替加环素、头孢西丁和碳青霉烯类抗菌药物均敏感;207株(61.6%, 207/336)为多重耐药株, 最高可同时耐受10类药物, 最常见耐药谱为NAL-AMP-SAM。共检出24种血清型, 主要型别为肠炎(34.5%, 116/336)、德尔卑(17.3%, 58/336)和印第安纳(10.4%, 35/336);共检出27种ST型, 主要型别为ST11, ST型与血清型较为相符。氨基糖苷类、氟喹诺酮类、β-内酰胺类、磺胺类、四环素类耐药基因的携带率均超过48%, 耐药基因预测与耐药表型结...     

食源性单核细胞增生李斯特菌的自动化核糖体基因分型

[目的]为了解我国食品来源的单核细胞增生李斯特菌(Listeria Monocytogene,LM)的遗传物质多态性特征,探索LM鉴定及溯源新方法. [方法]运用自动化的核糖体基因分型系统(RiboPrinter),用EcoRI酶,对我国食品污染物监测网来源的67株LM进行了分子分型研究. [结果]67株菌均被鉴定为LM;并获得了13种RiboPrinter 核糖体基因条带型,除2种被系统判定为新条带型,另外11种分别与杜邦数据库中的DUP-1038、DUP-1039、DUP-1042、DUP-1044、DUP-1045、DUP-1052相似. [结论]RiboPrinter分型结果为建立我国LM分子分型数据库积累了一定的数据和经验,但由于菌株的来源地及数量都有限,因此尚不能看出核糖体基因型是否有明显的地域分布特征.     

珠海地区副溶血性弧菌病原学特征及分子分型分析

目的研究珠海地区副溶血性弧菌血清型、毒力基因以及分子分型的病原学特征,分析流行株的分布情况。方法对珠海市2009年-2014年共81株副溶血性弧菌进行血清型鉴定及基因型耐热溶血素(tdh)、耐热直接相关溶血素(trh)和不耐热溶血素(tlh)检测,并从中选取60株进行多位点序列分析(MLST)。结果共分出35种血清型,其中优势型别为O3∶K6,占整个血清型的20.99%。所有菌株均含有tlh基因,含有tdh基因的有31株菌株,含有trh基因只有2株菌株为阳性。根据Pub MLST网络数据库提供的方法进行比对分析,60株副溶血性弧菌共分为33种ST型别。结论珠海市引起食物中毒的副溶血性弧菌主要为O3∶K6。tlh基因可以作为鉴别副溶血性弧菌的鉴定基因,多数食物中毒事件菌株中携带tdh基因。MLST的优势型别为ST3,为副溶血性弧菌其他型别共同祖先。而食品株血清型和MLST分型均呈多样化、分散趋势。     

应用分子血清分型技术鉴定抗原缺失沙门菌血清型

目的 利用液相芯片技术和全基因组测序2种分子血清分型技术,对抗原缺失血清型沙门菌进行血清分型.方法 采用玻片凝集法对3株沙门菌进行分型;提取沙门菌基因组DNA,采用液相芯片技术进行血清型分型;然后全基因组测序后组装草图,用SISTR预测沙门菌血清型.结果 3株沙门菌分离株,用传统玻片凝集法鉴定属于B群和E1群沙门菌,未...     

广西单核细胞增生李斯特菌数据库的建立及菌株特征分析

目的 掌握2002—2020年广西3种来源(食源株、病源株及健康人员携带株)单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)耐药情况和菌株的耐药基因、血清群、基因型及相互之间的分布特征，构建广西LM数据库，应用于LM引起的食源性疾病暴发的识别和调查。方法 采用肉汤稀释法测定LM抗生素敏感性；通过全基因组测序获取LM谱系、血清群、序列分型(ST)、克隆群(CC)及耐药基因分布。结果 317株实验菌株分属3个谱系、5个血清群、32个ST型、22个CC型及1个未分型的ST619，谱系Ⅱ和Ⅱa血清群占比最高，分别为57.41%(182/317)、43.53%(138/317)，优势ST型及CC型分别为ST8(17.98%)、ST87(12.62%)、ST9(11.99%)和CC8(17.98%)、CC9(13.88%)、CC87(12.93%)。食源株优势菌株主要分布于谱系Ⅱ、Ⅱa、CC8和Ⅱc、CC9及谱系Ⅰ、Ⅱb、CC87;7株病源株中6株为谱系Ⅰ、Ⅳb;4株健康人员携带株全部为谱系Ⅱ、Ⅱa、CC8。依据CLSI M45-2015及EUCAST-2017判定标准，...     

食品中沙门氏菌血清及PFGE分型研究

目的了解吉林省食品中分离的沙门氏菌血清型与脉冲场凝胶电泳（PFGE）基因分型,探索沙门氏菌的分子多态性。方法将从市售鸡肉、鸡胴体、中式凉拌菜及婴儿配方奶中分离出的10株沙门氏菌进行血清学分型、PFGE分子分型,BioNumerics version软件分析比较同源性。结果 10株沙门氏菌血清型分别为4株肠炎沙门氏菌,3株里定沙门氏菌,2株阿贡纳沙门氏菌和1株雷摩沙门氏菌。PFGE聚类分型结果主要分为4型：1型4株,相似度超过95%;2型3株,又分2个亚型,亚型间的相似度为78%;3型2株,相似度为100%;4型1株。结论吉林省食品中沙门氏菌具有不同血清学及PFGE型别,相同来源和血清型的菌株PFGE型别显示高度同源性。     

自贡市2014年农贸市场食品中单增李斯特菌污染状况调查

目的 探索自贡市农贸市场食品中单核细胞增生性李斯特菌(单增李斯特菌,Listeria monocytogenes, L. monocytogenes)的污染状况。方法 2014年12月采集四川自贡市农贸市场的各类食品样品,分离单增李斯特菌,采用血清分型,多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)对分离的单增李斯特菌进行分子分型,并用脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis,PFGE)研究菌株之间的同源性。结果 从农贸市场626份各类食品中检出单增李斯特菌48株(阳性率7.67%),牛羊肉样品的菌株分离率(37.50%)最高。菌株分为 3种血清型:1/2a(17株,占35.41%)、1/2b(22株,占45.83%)、1/2c(9株,占18.75%)。9种ST型,以ST87型(13株,占27.08%)、ST8型(12株,占25.00%)、ST9型(9株,占18.75%)为主;PFGE分为21 种PT型,9个PFGE带型的菌株来自不同种类的食品。结论 自贡市各类食品中单增李斯特菌污染情况广泛存在,不同食品存在交叉污染,食品监督部门应加强市场卫生情况的监管。     

陕西省婴幼儿食品中分离的132株蜡样芽胞杆菌呕吐型基因的检测

目的 了解2012-2016年陕西省市售婴幼儿食品中蜡样芽胞杆菌的呕吐型基因的携带情况及携带呕吐基因菌株的分子分型。方法 采用PCR 方法对2012-2016年陕西省不同地区市售婴幼儿食品中收集到的132株蜡样芽胞杆菌的呕吐型基因进行检测,用多位点序列分型(MLST)方法对携带呕吐型基因的蜡样芽胞杆菌进行分子分型。结果 132株蜡样芽胞杆菌中携带呕吐型基因的共计9株,携带率682%。这9株菌分为4个序列类型(Sequence Type,ST),分别为ST-100(1111%,1/9)、ST-164(1111%,1/9)、ST-246(1111%,1/9)、ST-26(6667%,6/9)。结论 陕西省市售婴幼儿食品中的蜡样芽胞杆菌携带有呕吐型基因,携带率682%,以ST-26为主要流行株,基因型多样,地区间有地区特征性差异。     

北京市房山区腹泻病例分离副溶血性弧菌的分子流行病学特征

目的了解2016年北京市房山区腹泻病例副溶血性弧菌分离株的血清型、毒力基因、耐药性及PFGE分子分型特征。方法依照GB 4789.7-2013《食品安全国家标准食品微生物学检验副容血性弧菌检验》进行副溶血性弧菌生化鉴定,使用玻片血清凝集法进行血清分型,实时荧光聚合酶链式反应(PCR)测定毒力基因,微量肉汤稀释法进行药敏试验,脉冲场凝胶电泳进行分子分型及聚类分析。结果在检出的20株副溶血性弧菌中,O3:K6血清型占60%。所有菌株均携带tlh、tdh基因,trh基因的携带率为10%,tdh~+trh~-为优势基因型。抗生素敏感性结果显示,90%的菌株对至少1种抗生素耐药,其中多重耐药菌株5株。耐药率高的前3种抗生素分别是:头孢唑林(85%)、庆大霉素(75%)、氨苄西林(30%)。PFGE分型共得到10种带型,5株菌的PFGE带型一致,为优势带型。副溶血弧菌的血清型和PFGE带型之间具有高度的一致性。结论本地区副溶血性弧菌以tdh~+,trh~-的O3:K6型别为主,对头孢唑林、庆大霉素、氨苄西林等早期用药耐药率高,应慎重使用。     

广东省138株不可分型流感嗜血杆菌的病原学特征分析

目的 了解广东省138株不可分型流感嗜血杆菌临床分离株的分子血清分型、多位点序列分型(multilocussequence typing,MLST)、耐药表型和耐药基因等病原学特征。方法 通过国家致病菌识别网监测收集广东省2018—2019年的138株来自不同医院门诊和住院患者的流感嗜血杆菌分离株为研究对象,采用PCR技术对荚膜基因和耐药基因进行检测,同时应用MLST分析菌株之间的群落分布关系并使用描述性流行病学对病例资料进行回顾性分析。结果 138株流感嗜血杆菌临床株男女检出比为1.68∶1,检出人群以儿童(52.90%)和老年人(30.43%)为主,发病季节集中在2—6月份;血清分型结果均为不可分型菌株,其中35.51%(49/138)菌株携带TEM耐药基因,耐药基因亚型可分为3个等位基因亚型(HAEM0118∶8、HAEM0118∶6、HAEM0118∶10),ROB基因未检出。MLST分型一共分成54个ST型,其中12个ST型为新发现的ST型,ST103、ST422、ST836和ST57为4个主要流行的ST型。结论 广东省138株不可分型流感嗜血杆菌在该省部分地区已成为流行的主导血清型,耐药基因携带率高。建议加强本市对不可分型流感嗜血杆菌临床感染株的病原学和耐药性监测,合理使用抗生素,重视并加快疫苗和药物的开发,防止其形成优势克隆后导致社区感染的暴发流行。     

广州地区70株副溶血性弧菌病原学特征分析

目的 了解广州地区人源性和食源性副溶血性弧菌优势血清型、携带毒力基因和分子分型情况。方法 收集2014 - 2016年广州地区腹泻患者和食源性监测中分离到的副溶血性弧菌进行血清分型、毒力基因鉴定和脉冲场凝胶电泳分型（PFGE）。结果 70株副溶血性弧菌,临床分离株48株,血清型分别为O3∶K6、O4∶K8、O1∶K1、O4∶K9、O1∶K36,其中O3∶K6为主要型别（70.8%）,其次为O4∶K8（20.8%）。食品分离株22株,血清型分散无明显优势。毒力基因检测,临床分离株46株tdh、toxRS/new、orf8全部阳性。食品分离株6株tdh阳性,toxRS/new、orf8全部阴性。所有菌株均未检出trh基因。PFGE分析70株副溶血性弧菌可分为45种带型,2种聚类,菌株间的相似值为45.6 %～100 %。结论 副溶血性弧菌临床分离株与食品分离株在血清型和毒力基因分布上具有分离现象。引起广州地区食源性疾病的副溶血性弧菌株,是主要以携带tdh、toxRS/new、orf8基因的O3:K6型菌株。PFGE图谱显示,本区域70株副溶血弧菌呈现基因多样性。     

重庆地区乙型肝炎病毒B/adw2和C/adrq+亚型PreS/S基因参照序列的初步建立

目的 建立重庆地区不同亚型乙型肝炎病毒(HBV)流行株PreS/S基因参照序列。方法 扩增18例HBV慢性无症状携带者的PreS/S基因，应用同源性分析和对齐比较等方法确定基因型／血清型，并选同HBV亚型的PreS/S拟定参照序列。结果 9株基因型B/血清型adw2、6株基因型C／血清型adrq 、3株基因型B/血清型aywl；建立的重庆地区基因型B/血清型adw2、基因型C／血清型adrq HBV流行株PreS/S参照序列，与华东华南、东北华南地区同亚型的参照序列比较分别有6个、13个核苷酸差异，均可引起4个氨基酸差异。结论 初步建立了重庆地区HBV基因型吲血清型adw2、基因型C/血清型adrq HBV流行株PreS/S基因参照序列。     

临床分离CRKP耐药和毒力基因检测及分子进化分析

 目的 了解临床耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)的耐药和毒力基因携带情况,为临床防治提供依据。方法 收集某院2020年3月—2021年3月临床标本分离的CRKP 36株,对菌株进行药敏鉴定,采用聚合酶链反应(PCR)扩增检测耐药基因、荚膜血清型基因、毒力基因,采用多位点序列分型(MLST)方法对菌株进行序列分型(ST分型),基于wzi测序结果进行血清型分型和分子进化分析。结果 36株CRKP均检出bla_KPC基因,未检出bla_IMP、bla_VIM、bla_OXA-48基因。黏液丝试验均为阴性,未检出K1、K2、K5、K20、K57五种常见荚膜血清型,36株CRKP rmpA2、wcaG、ybtS、aerobactin、iutA、iroN、ycf、mrkD、mrkA、silS、uge、Plvpk、fimH、wzi基因检出率为100%;TerW为86.11%;fimA、magA均为阴性。MLST结果分析显示,36株均为ST11型。仅32株成功测序wzi基因,wzi分型结果为K14.K64 96.88%(31/32),K24 3.12%(1/32)。基于测序结果构建分子进化树,结果显示32株菌中31株100%同源,1株与浙江菌株KP18069 99%同源。结论 该院CRKP对碳青霉烯类耐药的主要机制是携带bla_KPC基因,优势ST分型为ST11,wzi分型以K14.K64为主,且携带了大量的毒力基因。分子进化树提示存在同源性感染,怀疑有输入性传播,应及时采取防控措施,防止耐碳青霉烯类高毒力肺炎克雷伯菌医院传播。     

1例孕妇感染李斯特菌病例的病原学分析及分子特征研究

目的对北京市1名孕妇感染单核细胞增生李斯特菌(listeria monocytogenes,Lm)病例进行病因食品溯源、病原学检测、血清学分型、耐药及分子特征研究。方法对流行病学相关的1株孕妇病例Lm分离株和1株可疑食品Lm分离株进行血清型分型及脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)分子分型,并采用CLSI和EUCAST推荐的微量肉汤稀释法检测菌株对12种抗生素的敏感性。结果 2株Lm分离株均为1/2a血清型,药敏结果一致,对有国际标准的青霉素、氨苄西林、复方新诺明及红霉素敏感,其他8种抗生素的MIC值均较小,经AscⅠ酶切后具有100%同源的PFGE指纹图谱带型。结论结合流行病学调查、实验室病原学检测、药敏和PFGE分子分型结果,高度怀疑本例孕妇感染李斯特菌病例是由进食受1/2a血清型单核细胞增生李斯特菌污染的牛肉三明治所致。