益肾化浊方对Aβ25-35介导神经干细胞增殖与分化的影响

目的:观察益肾化浊方对阿尔茨海默病(AD)脑中神经干细胞(NSCs)增殖分化的影响,为益肾化浊方治疗AD提供实验依据。方法:分离孕14 d小鼠胚胎NSCs,并以β淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)处理,分为空白组(正常培养基),模型组(5μmol·L-1Aβ25-35),Aβ25-35+益肾化浊方低剂量(0.1 mg·L-1)组,Aβ25-35+益肾化浊方中剂量(1 mg·L-1)组,Aβ25-35+益肾化浊方高剂量(10 mg·L-1)组,共5组,药物在Aβ25-35作用2 h后加入,培养至48 h后,进行检测。采用WST法检测益肾化浊方对NSCs增殖的影响,免疫荧光法检测其对NSCs分化的影响。结果:与空白组比较,模型组细胞活力明显降低,(GFAP+/DAPI)%比例上升,(Tubulin+/DAPI)%比例降低,差异具有统计学意义(P0.05)。与模型组相比,益肾化浊方各剂量组均可以提高Aβ25-35损伤NSCs活力,降低(GFAP+/DAPI)%比例,升高(Tubulin+/DAPI)%比例,差异具有统计学意义(P0.05),且均以低剂量组效果更为明显。结论:益肾化浊方可促进Aβ25-35介导的NSCs增殖,诱导其向神经元方向分化,抑制其向星形胶质细胞方向分化。     

二苯乙烯苷对Aβ25-35致神经干细胞损伤的保护作用

目的:观察不同浓度二苯乙烯苷(TSG)对β-淀粉样肽(Aβ25-35,25μmol· L-1)致损伤的神经干细胞(NSCs)生长、增殖及自我更新能力的影响,探讨TSG对Aβ25-35致NSCs损伤的保护作用.方法:从孕14 d昆明小鼠体外提取神经干细胞,以25 μmol·L-1浓度Aβ25-35诱导NSCs建立稳定的AD细胞模型,与不同浓度二苯乙烯苷共同孵育,分为对照组、模型组(Aβ25-3525 μmol· L-1)、TSG 1×10-8mol· L-1+ Aβ25-35组、TSG 1×10-7 mol·L-1+ Aβ25-35组、TSG 1×10-6mol·L-1+ Aβ25-35组,共5组,分别采用EDU化学荧光染色法检测NSCs增殖情况;采用WST-1细胞增殖及细胞毒性检测法检测不同时段NSCs的细胞活性;体外培养7d后通过神经干细胞球计数法观察NSCs的自我更新能力.结果:与模型组相比,二苯乙烯苷各剂量组均能在一定程度上抑制Aβ25-35对NSCs的损伤,细胞生长状态良好,细胞增殖率、细胞活性及神经干细胞球计数与模型组相比均有显著性差异(P＜0.01).结论:二苯乙烯苷对Aβ25-35诱导的神经干细胞损伤具有一定保护作用.     

从JAK/STAT信号转导通路探讨益肾化浊方对神经干细胞定向分化的影响

目的探讨益肾化浊方治疗阿尔茨海默病的可能作用机制。方法从孕14天昆明小鼠体外提取并培养神经干细胞,建立分化系统中可溶性Aβ25-35(5μmol/L)介导的具有神经毒性的阿尔茨海默病细胞模型。实验分为对照组(等量培养基)、模型组(5μmol/L Aβ25-35100μl)和益肾化浊中药组(5μmol/L Aβ25-35100μl+0.1μg/ml益肾化浊方100μl)。常规消化细胞,计数后以细胞密度每毫升2×105/个(每孔2ml)接种于6孔板,培养48 h。Western Blot法检测神经胶质酸性蛋白(GFAP)、微管蛋白(Tubulin)和转录激活子3(STAT3)、磷酸化转录激活子3(P-STAT3)、Smad1蛋白表达;RT-PCR法检测GFAP、STAT3、Smad1、Tubulin基因的表达。结果与对照组比较,模型组GFAP、STAT3基因及蛋白表达显著增加、PSTAT3蛋白表达显著增加,Tubulin基因及蛋白表达显著减少(P0.05),Smad1基因及蛋白表达增加不明显(P0.05);与模型组比较,益肾化浊中药组GFAP、STAT3、Smad1基因及蛋白表达均显著下降、PSTAT3蛋白表达亦下降,而Tubulin基因及蛋白表达显著增加(P0.05)。结论益肾化浊方可能通过调控JAK/STAT信号通路中相关蛋白及基因表达,从而抑制神经干细胞向星形胶质细胞方向分化来延缓阿尔茨海默病发展。     

三种补肾中药有效成分对AD小鼠胚胎神经干细胞自我更新及神经元样分化作用研究

目的观察三种补肾中药补骨脂、女贞子、何首乌各自有效成分补骨脂素、齐墩果酸、二苯乙烯苷对Aβ25-35介导的神经干细胞（neural stem cells,NSCs）自我更新及向神经元方向分化的调控作用。方法取孕14天昆明小鼠体外分离、培养其胚胎神经干细胞,并随机分为对照组、Aβ25-35组、Aβ25-35+补骨脂素组、Aβ25-35+齐墩果酸组、Aβ25-35+二苯乙烯苷组,其中Aβ25-35干预浓度为25 μmol/L,中药有效成分的干预浓度均为10-7mol/L,通过NSCs计数法观察NSCs增殖能力;采用Western blot及免疫荧光法观察神经元标志物Tubulin蛋白表达。计算Tubulin+/DAPI比值。结果与对照组比较,Aβ25-35组NSCs球的形态破坏,NSCs计数、Tubulin蛋白表达及Tubulin+/DAPI均降低（P<0.01,P<0.05）。与Aβ25-35组比较,3个给药组NSCs计数、Tubulin蛋白表达及Tubulin+/DAPI均升高（P<0.01,P<0.05）。结论25 μmol/L Aβ25-35可抑制NSCs自我更新及神经元样分化,而补骨脂素、二苯乙烯苷及齐墩果酸能促进NSCs的自我更新,并能促进其向神经元方向分化。     

蛇床子素上调miR-9促进神经干细胞分化的研究

目的:探讨蛇床子素对β-淀粉样蛋白(Aβ1-42)诱导的神经干细胞分化的作用及其可能作用的机制。方法:体外分离并培养新生小鼠脑源NSCs,体外以20μmol/L的Aβ1-42诱导神经干细胞,建立阿尔茨海默病的神经干细胞模型,通过CCK-8法检测神经干细胞存活率;免疫荧光细胞化学法研究蛇床子素对Aβ1-42诱导的神经干细胞分化能力的影响;RT-PCR检测miR-9 mRNA的表达情况。结果:免疫荧光细胞化学法显示神经球显Nestin、Sox2阳性,即所培养的细胞为NSCs;CCK8法结果显示50μmol/L、100μmol/L蛇床子素作用可明显促进NSC存活;Aβ1-42孵育的NSCs用蛇床子素(50、100μmol/L)作用后,神经干细胞向神经元分化的数量明显增加,以蛇床子素100μmol/L作用神经干细胞向神经元分化的数量增加最显著。而转染了miR-9抑制剂后,与Aβ1-4220μmol/L组相比,Aβ1-4220μmol/L+miR-9抑制剂组的NF-M阳性细胞率明显降低,而Aβ1-4220μmol/L+miR-9抑制剂+蛇床子素100μmol/L组NF-M阳性细胞率与Aβ1-4220μmol/L+miR-9抑制剂组相比显著增加;PCR结果显示,蛇床子素100μmol/L可增加miR-9 mRNA的表达。结论:蛇床子素可促使NSCs向神经元分化,其机制可能与蛇床子素上调miR-9信号通路有关。     

黄连素对Aβ25-35诱导的星形胶质细胞的细胞因子及氧化应激的影响

目的:探讨黄连素对β-淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)诱导的大鼠星形胶质细胞的细胞因子及氧化应激的影响。方法:培养第3代的大鼠星形胶质细胞,将其分为空白对照组、模型组、多奈哌齐组,以及黄连素低、高剂量组,分别加入相应药物培养24 h后,模型组和各药物组再加入Aβ25-35。检测各组IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA的表达及SOD、MDA水平。结果:Aβ25-35浓度为20μmol/L时星形胶质细胞增殖率最高;与空白组比较,模型组的IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白分泌及其mRNA表达增多,伴随着MDA水平上升,SOD水平下降;与模型组比较,各药物组的IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白分泌及其mRNA表达减少,伴随着MDA水平下降,SOD水平上升,尤以黄连素高剂量组疗效最好。结论:黄连素可降低Aβ25-35诱导的大鼠星形胶质细胞的炎性细胞因子,并减少氧化应激。     

开心散含药血清对Aβ_(1-42)损伤的神经干细胞增殖和分化能力的影响

目的:探讨开心散含药血清对人β淀粉样蛋白1-42(Aβ_(1-42))损伤的神经干细胞(NSCs)增殖和分化能力的影响。方法:取6月龄C57BL/6小鼠40只,分成4组,空白组给予0.9%氯化钠溶液,其他组分别给予开心散水煎液12、24、48 g·kg~(-1)制备含药血清。原代培养新生C57BL/6小鼠海马NSCs,采用Aβ_(1-42)孵育24 h诱导NSCs的阿尔茨海默病(AD)细胞模型。细胞分为5组,分别为对照组、模型组及开心散含药血清高、中、低剂量组。对照组和模型组给予10%空白血清,给药组分别给予10%的开心散48、24、12 g·kg~(-1)组含药血清;CCK-8法检测NSCs活力;免疫荧光法(IF)检测增殖条件下Ki67阳性细胞数量,分化条件下胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、中分子量神经丝蛋白(NF-M)和硫酸软骨素蛋白多糖2(NG2)阳性细胞数量及占比。结果:与模型组比较,各组开心散含药血清均能提高Aβ_(1-42)损伤的NSCs存活率,增加Ki67阳性细胞数量,并增加NF-M阳性细胞占比。结论:开心散含药血清能够提高Aβ_(1-42)损伤的NSCs的存活率,拮抗NSCs增殖和分化能力的异常。     

二苯乙烯苷、远志皂苷元及其合用抗Aβ25-35损伤PC12细胞作用的比较研究

目的探讨二苯乙烯苷(TSG)、远志皂苷元(TEN)及二者合用对Aβ25-35损伤PC12细胞的保护作用及相关机制。方法 PC12细胞采用Aβ25-35诱导建立阿尔茨海默病的损伤模型。用析因设计,设立正常组、模型组(20μmol/L Aβ25-35)、TSG组(100μmol/L TSG)、TEN组(50μmol/L TEN)、TSG+TEN组(100μmol/L TSG+50μmol/L TEN),每组分设6个复孔。检测各组细胞存活率、乙酰胆碱酯酶(Ach E)活力、超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)含量,统计各组细胞分化率。结果 TSG组、TEN组及TSG+TEN组细胞存活率、SOD活力及细胞分化率均明显高于模型组(P均<0.05),Ach E活力、MDA含量均明显低于模型组(P均<0.05)。且细胞存活率、细胞分化率从高到低依次为TSG+TEN组、TSG组、TEN组(P均<0.05),Ach E活力从低到高依次为TSG+TEN组、TSG组、TEN组(P均<0.05)。TSG组和TSG+TEN组Ach E活力和MDA含量均明显低于TEN组(P均<0.05),SOD活力均明显高于TEN组(P均<0.05),TSG+TEN组SOD活力和MDA含量与TSG组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论 TSG与TEN合用抗Aβ25-35损伤PC12细胞具有明显协同作用,机制可能与明显改善神经胆碱能系统功能、保护神经细胞突触可塑性有关,而与对氧化应激系统的影响关系不显著;TSG对PC12细胞的保护作用优于TEN,机制可能与TSG改善神经胆碱能系统功能、神经细胞抗氧化应激功能及保护神经细胞突触可塑性的作用较TEN显著有关。     

二苯乙烯苷、远志皂苷元2∶1配伍抗Aβ_(25-35)损伤PC12细胞作用的最适浓度研究

目的:研究不同浓度下二苯乙烯苷(TSG)、远志皂苷元(TEN)2∶1配伍抗Aβ25-35损伤PC12细胞的作用,以筛选最适配伍浓度。方法:采用MTT比色法筛选Aβ25-35最适造模浓度,在所得最适Aβ25-35浓度基础上采用MTT比色法筛选TSG-TEN合用抗Aβ25-35损伤PC12细胞作用的最适浓度。结果:与正常组比较,模型组的细胞存活率明显降低(P0.01);与模型组比较,合用4组(100μmol/L TSG+50μmol/L TEN)的细胞存活率最高(P0.01)。结论:在本实验所选取的浓度范围内,TSG与TEN 2∶1配伍抗Aβ25-35损伤PC12细胞以"100μmol/L TSG+50μmol/L TEN"合用浓度为最佳。     

益肾化浊方条件培养基对神经干细胞增殖分化影响的研究

目的从JAK/STAT信号转导通路,探讨益肾化浊通过微环境调控神经干细胞(NSCs)增殖与分化,为益肾化浊方治疗AD提供部分实验依据。方法分离提取孕14 d昆明小鼠胚胎NSCs,以5μmol·L-1β淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)干预建立AD细胞模型,并以不同浓度益肾化浊方共培养48h后,分别收集各组细胞培养基,使用基础培养基稀释成10%浓度条件培养基,培养正常神经干细胞,分为空白对照组,正常条培组,Aβ条培组,复方0.1μg·ml-1条培组,复方1μg·ml-1条培组,复方10μg·ml-1条培组,共6组。采用CCK-8法检测益肾化浊方条件培养基对NSCs增殖与细胞活性的影响,免疫荧光法与Western Blot法检测其对NSCs分化的影响;Western Blot与PCR法检测JAK/STAT信号转导通路关键靶点蛋白与基因表达的变化。结果与Aβ条培组相比,益肾化浊方条件培养基可促进NSCs增殖,提高其细胞活性;同时可促进NSCs向神经元分化,抑制其向星形胶质细胞分化,差异具有统计学意义(P0.05)。复方0.1μg·ml-1条培组均可明显降低STAT3、P-STAT3、Smad1、GFAP蛋白表达,下调GFAP、STAT3、Smad1基因同时上调ngn1基因表达,促进NSCs向神经元分化,差异具有统计学意义(P0.05)。结论益肾化浊方条件培养基可通过调控JAK/STAT信号转导通路,提高NSCs活性,促进神经元分化,延缓AD进展。     

中药复方“脊髓康”对神经干细胞分化作用的影响

目的：探讨中药复方“脊髓康”对神经干细胞（Neural stem cells,NSCs）分化作用的影响。方法：制备“脊髓康”（JSK）含药血清;分离、培养原代NSCs;对NSCs进行鉴定;在胎牛血清（FBS）诱导NSCs分化后,加入不同剂量的JSK含药血清干预其分化,分为高、中、低剂量组,另设空白对照组,选取抗β3-微管蛋白（βⅢ-Tubulin）抗体、抗兔胶质纤维酸性蛋白(GFAP)抗体对NSCs进行免疫荧光双标,检测其分化情况,并与不加含药血清的对照组进行对比;在荧光显微镜下,对不同视野βIII-Tubulin、GFAP的阳性细胞进行计数,并算出阳性细胞数占总细胞数的百分比,并进行荧光定量。结果：培养的神经球均表打巢蛋（Nestin）;JSK含药血清高、中、低剂量组βIII-Tubulin阳性细胞所占百分比明显高于空白组（P<0.05）;JSK含药血清高、中、低剂量组GFAP阳性细胞所占百分比均低于空白组（P<0.05）,且高剂量组与中、低剂量组比较均有统计学意义（P<0.01）。结论：中药复方JSK促进NSCs向βIII-Tubulin阳性细胞方向分化,为中医药治疗SCI提供一定的依据。     

丹皮酚对AD模型鼠脑组织神经细胞与胶质细胞活性的影响

目的:观察丹皮酚(paeonol,Pae)对β淀粉样蛋白(Aβ)诱导的大鼠脑组织星形胶质细胞蛋白(GFAP)和S100β蛋白的表达,探讨丹皮酚(Pae)对老年痴呆症(Alzheimer disease AD)治疗的作用机理.方法:24只大鼠随机分为生理盐水对照组、β淀粉样蛋白(Aβ)诱导AD模型构建组(模型组)和AD模型+丹皮酚治疗组(Pae组).动物喂养40 d后取大鼠脑组织观察其病理变化,用免疫组化染色法检测Aβ标记部位以及神经细胞毒性作用和GFAP与的S100β蛋白的表达水平.结果:发现脑组织病变在Pae组明显轻于模型组.免疫组化结果显示:Aβ的表达水平在模型组和Pae组二者间无明显差异,但对海马CA3区神经元损伤作用在模型组要大于Pae组(P＜0.05).GFAP和S100β表达水平在模型组也明显高于Pae组和正常组.结论:用丹皮酚治疗可降低AD模型鼠胶质细胞GFAP和S100β蛋白的表达水平,丹皮酚具有保护大脑神经元,改善Aβ对脑组织损伤的作用.     

补益脾胃元气方药对海马神经干细胞增殖分化的影响

目的:探讨人参、大补元煎、洗心汤三组补益脾胃元气方药对海马神经干细胞(neural stem cells,NSCs)增殖分化的影响。方法:从新生24小时内的Wistar胎鼠脑中分离培养海马NSCs,制备不同药物含药脑脊液并与Aβ_(1-42)共同处理海马NSCs。通过CCK8实验检测各组海马NSCs增殖率,免疫荧光法与蛋白印迹法检测海马NSCs分化为神经元与星形胶质细胞的情况。结果:含中药各实验组的海马NSCs增殖率显著高于Aβ_(1-42)处理组(P0.05);含中药各实验组海马NSCs分化为神经元与星形胶质细胞数量明显多于Aβ_(1-42)处理组(P0.05),各中药组之间对比,差异不具有统计学意义(P0.05)。结论:人参、大补元煎、洗心汤能显著促进海马NSCs增殖、诱导海马NSCs分化为神经元与星形胶质细胞。     

二苯乙烯苷联合PDTC抗H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡

目的:研究二苯乙烯苷(2,3,5,4’-tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside,TSG)联合吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)对过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的作用及机制.方法:体外培养人脐静脉内皮细胞,实验分为正常对照组、模型组(300 μmol·L-1H2O2)、TSG组(10 μmol·L-1TSG+300μmol·L-1H2O2)、联合预处理组(75μmol·L-1PDTC+10 μmol·L-1TSG+300 μmol·L-1H2O2)、PDTC组(75 μmol·L-1 PDTC+300 μmol·L-1H2O2),采用MTT法检测细胞增殖率,Hoechst 33258染色观察凋亡细胞形态,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测Caspase-3,核因子-κB(NF-κB)蛋白的表达.结果:与正常对照组比较,模型组细胞凋亡率增加,细胞增殖率降低;Caspase-3,NF-κB蛋白表达增加,差异均有显著性(P＜0.01).与模型组相比,经TSG或PDTC预处理后,细胞的增殖率增加,细胞凋亡率降低;Caspase-3,NF-κB蛋白表达显著减少(P＜0.01).联合预处理组与PDTC组或TSG组相比,细胞活力增加,细胞凋亡率下降;Caspase-3,NF-κB蛋白表达进一步减少(P＜0.01).结论:PDTC或TSG预处理可抑制H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡,PDTC可联合TSG协同发挥抗H2O2诱导的内皮细胞凋亡,其机制与抑制NF-κB、Caspase-3的表达有关.     

地黄多糖对大鼠骨髓间充质干细胞向神经样细胞诱导分化作用的研究

目的:探讨地黄多糖体外对大鼠骨髓间充质干细胞( BMSCs)分化为神经样细胞的诱导作用.方法:以大鼠BMSCs为研究对象,采用流式细胞仪检测BMSCs表面标志,MTT法检测细胞生长曲线,当第3代细胞爬片达到80％以上汇合时,分为对照组、化学方法诱导组(5 mmol·L -1,β-mercap toethanol)、脑源性神经生长因子(10 μg·L-1,BDNF)组和地黄多糖组(200 mg·L-1)进行诱导,6h后应用免疫细胞化学染色法检测各实验组神经元巢蛋白(nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,RT-PCR检测nestin,NSE,βⅢ-微管蛋白(βⅢ-tubulin)和GFAP mRNA的表达情况.结果:经分离鉴定培养5代以内大鼠BMSCs增殖旺盛、具有较好的细胞活力;免疫细胞化学染色和RT-PCR检测结果显示,对照组不表达神经细胞标志物,各诱导组诱导后有特异性神经细胞标志物表达.其中地黄多糖组Nestin,NSE阳性细胞率分别为( 56.74±1.36)％,(73.37±1.27)％,高于化学诱导组(28.21±2.43)％,(2.31±2.72)％和神经生长因子组(31.3±1.61)％,(28.87±1.65)％,(P＜0.05);GFAP阳性细胞率(20.17±1.27)％低于化学诱导组和神经生长因子组,差异具有统计学意义(P＜0.05);化学诱导组Nestin,NSE和GFAP阳性细胞率与生长因子组比较,差异无统计学意义.结论:地黄多糖具有诱导BMSCs向神经样细胞分化的作用,主要向神经元样细胞方向诱导.     

二苯乙烯苷调控CREB/BDNF信号通路对Aβ25-35损伤的小鼠神经元突触的保护作用

目的:研究中药何首乌有效成分二苯乙烯苷(TSG)对β-淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)损伤的小鼠海马神经元的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法:小鼠海马神经元细胞分离自新生48 h内胎鼠大脑海马,培养9 d待神经元成熟后,采用免疫荧光法对其进行鉴定。将培养成熟的神经元细胞分为正常组、模型组(Aβ25-35孵育造模)和TSG组(Aβ25-35孵育造模后,分别加入TSG 6.25,12.5,25,50,100μmol·L~(-1))。细胞增殖毒性检测(CCK-8)试剂盒和乳酸脱氢酶(LDH)法检测各组细胞活性,免疫荧光法检测突触素-1(SYN-1)蛋白的表达,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测突触后膜致密蛋白-95(PSD-95)和突触体素(SYP)的含量,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)和脑源性神经营养因子(BDNF) mRNA的表达,免疫荧光法和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测CREB,磷酸化CREB(p-CREB)和BDNF蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组细胞存活率显著降低,LDH释放量显著增高(P0.01),SYN-1,PSD-95和SYP的含量明显降低(P0.05,P0.01),p-CREB和BDNF mRNA及蛋白的表达明显下调(P0.05,P0.01);与模型组比较,不同浓度TSG均可提高细胞存活率,降低LDH释放量(P0.05,P0.01),TSG对Aβ25-35造模的小鼠海马神经元细胞的最适治疗浓度为25μmol·L~(-1); 25μmol·L~(-1)TSG能够显著增强SYN-1的表达量(P0.01),明显提高PSD-95和SYP的含量(P0.05);上调p-CREB和BDNF mRNA及蛋白的表达(P0.05,P0.01),但对CREB mRNA及蛋白的表达无显著影响。结论:TSG对Aβ25-35损伤的小鼠海马神经元突触具有保护作用,其机制可能与促进CREB的磷酸化使p-CREB表达增多,并促进神经营养因子BDNF的释放有关。     

氧化苦参碱对Aβ_(1-42)诱导原代星形胶质细胞的影响

目的:探讨氧化苦参碱(Oxymatrine,OMT)对Aβ_(1-42)诱导的原代星形胶质细胞的影响。方法:采用原代星形胶质细胞模型,随机将细胞分为正常对照组、模型组(Aβ_(1-42)30μmol/L)及OMT低(10μg/m L)、中(100μg/m L)、高(1 000μg/m L)浓度组。应用MTT比色法检测OMT对Aβ_(1-42)诱导原代细胞存活率的影响;应用ELISA试剂盒,检测细胞培养液中脑源性神经营养因子(BDNF)、神经胶质细胞源性的神经营养因子(GDNF)、神经生长因子(NGF)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)含量;应用Western blot法测定营养因子的特异性受体Trk B、Trk A、RET及凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达水平。结果:OMT可呈剂量依赖的提高原代星形胶质细胞的存活率(P0.05)。各浓度OMT均能提高营养因子分泌水平,抑制促炎因子的分泌,并呈剂量依赖性的上调Aβ_(1-42)诱导后原代星形胶质细胞Trk B、Trk A、RET、Bcl-2蛋白表达,抑制Bax蛋白表达。结论:OMT能缓解Aβ_(1-42)诱导原代星形胶质细胞的损伤,促进营养因子分泌,其机制可能与促进营养因子受体Trk B、Trk A、RET蛋白和抗凋亡蛋白Bcl-2表达并抑制凋亡蛋白Bax和促炎因子水平有关。     

基于DKK3调控探讨藏红花素对Aβ25-35诱导神经元损伤的保护作用

目的:探究藏红花素通过调控dickkopf WNT信号通路抑制因子3 (Dickkopf3,DKK3)对Aβ25-35诱导神经细胞损伤的保护作用及机制。方法:Aβ25-35诱导小鼠海马神经细胞系HT22细胞模拟细胞损伤,CCK8增殖实验检测藏红花素最佳干预浓度。qPCR检测DKK3沉默质粒(DKK3 siRNA)以及DKK3过表达质粒(DKK3-OE)的DKK3 mRNA表达,随后进行细胞转染。细胞分为正常组、Aβ25-35组、Aβ25-35+藏红花素组(1.0μmol/L)、Aβ25-35+DKK3 siRNA组、Aβ25-35+siRNA对照组、DKK3-OE组、空白质粒对照组、DKK3-OE+藏红花素组(1.0μmol/L)组。采用流式细胞数检测细胞凋亡,Tubulin β染色观察细胞神经突触形态,Western blot检测细胞Aβ、DKK3、β-catenin、GSK-3β、p-GSK-3β、Caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白表达。结果:0.5～2.0μmol/L藏红花素可显著上调HT22细胞活力(P<0.05)。与正常组相比,Aβ25-35组和DKK3-OE组...     

钩藤对脑损伤早期癫痫易感性的影响

目的研究中药钩藤(UR)对脑损伤小鼠早期癫痫的影响,初步确定其抑痫的神经机制。方法采取Feeney自由落体法建立小鼠颅脑损伤模型。通过行为学观察各组小鼠强直、阵挛癫痫发作的潜伏期;经脑电图(EEG)记录分析额叶皮层放电活动;采用脑干湿重法检测脑组织含水量变化;采用免疫荧光法计数海马齿状回(DG)区胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的阳性细胞数;采用蛋白免疫印迹法检测海马转化生长因子-β2(TGF-β2)蛋白表达水平。结果与模型组相比,UR低、高剂量组均能延长小鼠强直、阵挛发作潜伏期(P0.05),减少脑部异常放电,减轻脑水肿(P0.05),降低海马区星形胶质细胞GFAP阳性细胞数和TGF-β2蛋白的表达(P0.05)。其中,钩藤高剂量组较模型组改善效果更为显著。结论中药钩藤能够降低脑损伤早期癫痫的易感性,并具有神经保护作用,其机制与星形胶质细胞的调控作用有关。     

远志皂苷+β-细辛醚对阿尔茨海默病细胞模型Akt/GSK-3β信号途径的影响

目的:通过观察远志汤有效成分即远志皂苷+β-细辛醚对Aβ_(25-35)诱导的海马神经元损伤的影响,探讨远志汤对阿尔茨海默病(AD)氧化应激损伤的保护作用和可能机制。方法:通过Aβ_(25-35)诱导原代培养的C57BL/6J小鼠海马神经元建立Aβ毒性损伤细胞模型,把神经元分为正常对照组,Aβ_(25-35)诱导组,Aβ_(25-35)与远志皂苷+β-细辛醚共同孵育3个剂量组(5、10、20μmol·L~(-1)),采用WST-1比色法、流式细胞术、荧光显微镜和Western blot方法检测远志皂苷协同β-细辛醚对原代培养的海马神经元细胞活性、细胞凋亡率和ROS含量,以及AKt、GSK-3β和磷酸化蛋白表达的影响。结果:成功复制了Aβ_(25-35)致海马神经元氧化应激损伤模型;远志皂苷协同β-细辛醚可以提高Aβ_(25-35)损伤的海马神经元细胞活力,降低Aβ_(25-35)所致的细胞凋亡率,同时降低ROS含量,诱导Akt表达,抑制GSK-3β活化。结论:远志皂苷+β-细辛醚对Aβ_(25-35)诱导的海马神经元氧化应激损伤发挥保护作用,可能是通过调控Akt/GSK-3β信号途径。