α干扰素联合GM-CSF体外培养多发性骨髓瘤患者外周血树突状细胞

树突状细胞 (ＤＣ)是目前公认的体内功能最强的抗原提呈细胞 (ＡＰＣ) ,它能显著地刺激初始Ｔ细胞 (ｎａｉｖｅＴｃｅｌｌｓ)的增殖 ,启动机体免疫反应 ,在激发以抗原特异性细胞毒性Ｔ细胞过继性免疫治疗肿瘤中起着重要的作用。ＤＣ经典的培养方法是用ＧＭ ＣＳＦ ＩＬ 4从外周血ＣＤ1 4+细胞或用ＧＭ ＣＳＦ和ＴＮＦα从ＣＤ3 4 +造血干细胞中制备生成[1 3 ] 。 1998年Ｐａｑｕｅ ｔｔｅ等[4] 发现ＩＦＮα能诱导正常人外周血单核细胞向ＤＣ分化。但ＩＦＮα是否也能诱导多发性骨瘤 (ＭＭ)患者ＤＣ的生成尚不清楚。我们在体外应用ＩＦＮα…     

再生障碍性贫血患者细胞免疫功能与造血细胞因子的研究

目的：进一步探讨再生障碍性贫血（再障）的免疫发病机制，阐明细胞免疫、造血细胞因子在再障患者中发生变化的基础与临床意义。方法：用单抗试剂盒，采用改良ＡＰＡＡＰ法及酶联免疫试剂盒，采用ＥＬＩＳＡ法对３８例再障患者及２０名正常人外周血Ｔ细胞亚群，ＨＬＡ－ＤＲ抗原表达以及外周血单个核细胞（ＰＢＭＮＣ）培养上清诱生Ｇ－ＣＳＦ、ＩＬ－６、ＴＮＦα、ＩＦＮα及ＩＬ－８水平进行测定。结果：再障患者外周血ＣＤ４细胞减低、ＣＤ８细胞增高、ＣＤ４／ＣＤ８降低或倒置，ＨＬＡ－ＤＲ抗原表达率增高。再障患者ＰＢＭＮＣ培养上清中Ｇ－ＣＳＦ阳性率减低，ＩＬ－６、ＴＮＦα、ＩＦＮα及ＩＬ－８水平增高。相关分析发现Ｇ－ＣＳＦ与ＣＤ４细胞及ＣＤ４／ＣＤ８呈正相关，而与ＩＦＮα呈负相关；ＩＬ－６与白细胞数及ＣＤ４细胞呈负相关；ＴＮＦα与ＣＤ８细胞呈正相关而与ＣＤ４／ＣＤ８呈负相关；ＩＬ－８与ＣＤ８细胞及ＨＬＡ－ＤＲ呈正相关。结论：细胞免疫功能异常及细胞因子网络失调在再障发病中起一定的作用。     

再生障碍性贫血患者T细胞亚群及细胞因子的检测

为了探讨再生障碍性贫血（再障）的免疫发病机制，阐明细胞免疫、细胞因子在再障患者中的变化。本文采用ＡＰＡＡＰ法和ＥＬＩＳＡ分别检测间患者及正常人外周血Ｔ细胞亚群、ＰＢＭＣ经ＰＨＡ培养上清中ＩＬ－２、ＩＬ－３和ＩＦＮγ水平，结果表明，再障患者外周血ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ４／ＣＤ８降低，ＣＤ８升高，ＩＬ－２、ＩＦＮγ水平升高，ＩＬ－３水平降低，相关分析发现ＣＤ８与ＩＬ－３呈负相关，而与ＩＦＮγ呈正相关。据     

三丁酸甘油酯对早幼粒细胞白血病细胞株的诱导分化及促凋亡作 …

目的 研究三丁酸甘油酯（ＴＢ）与全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）不同浓度组合对ＮＢ４及ＭＲ２细胞的诱导分化作用,并观察ＴＢ对ＮＢ４,ＭＲ２细胞是否具有促凋亡作用。方法 通过硝基四唑氮蓝（ＮＢＴ）还原率及细胞表面抗原ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１４、ＣＤ３３表达观察细胞分化程度;通过细胞形态、ＤＮＡ片段化电泳,流式细胞术（ＦＣＭ）ＤＮＡ含量分析及凋亡细胞原位标记（ＴＵＮＥＬ）试剂盒检测细胞凋亡;用逆转录－聚合酶链反应（     

维甲酸、砷剂及柔红霉素对NB4细胞组织因子表达的影响

目的　探讨全反式维甲酸（ Ａ Ｔ Ｒ Ａ） 、三氧化二砷（ Ａｓ２ Ｏ３） 及柔红霉素（ Ｄ Ｎ Ｒ） 对急性早幼粒细胞白血病（ Ａ Ｐ Ｌ） 细胞株 Ｎ Ｂ４ 细胞组织因子（ Ｔ Ｆ） 表达的影响。方法　用复钙时间检测 Ｎ Ｂ４ 细胞的促凝活性（ Ｐ Ｃ Ａ） ;用 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 方法检测其 Ｔ Ｆ 抗原;用逆转录聚合酶链反应（ Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ） 检测 Ｔ Ｆｍ Ｒ Ｎ Ａ的转录水平。结果　 Ａ Ｔ Ｒ Ａ 和 Ａｓ２ Ｏ３ 均呈时间依赖的方式下调 Ｎ Ｂ４ 细胞的 Ｐ Ｃ Ａ、 Ｔ Ｆ 抗原水平以及 Ｔ Ｆ ｍ Ｒ Ｎ Ａ的转录;而 Ｄ Ｎ Ｒ 处理 Ｎ Ｂ４ 细胞的 Ｐ Ｃ Ａ及 Ｔ Ｆ 抗原在早期上调,至２４ ～４８ 小时达到最大值。对 Ｐ Ｃ Ｒ 产物测序,发现 Ａ Ｐ Ｌ 细胞 Ｔ Ｆ 第５ 个外显子缺失的转录本。结论　 Ａ Ｔ Ｒ Ａ 和 Ａｓ２ Ｏ３ 均可下调 Ａ Ｐ Ｌ 细胞 Ｔ Ｆ的表达并降低其 Ｐ Ｃ Ａ,改善 Ａ Ｐ Ｌ患者的弥散性血管内凝血（ Ｄ Ｉ Ｃ） 出血症状; Ａｓ２ Ｏ３ 和 Ｄ Ｎ Ｒ 对 Ａ Ｐ Ｌ凝血障碍不同效应的作用机制至少部分与药物对 Ａ Ｐ Ｌ细胞 Ｔ Ｆ 表达和 Ｐ Ｃ Ａ 的不同调节作用有关。     

干扰素和三氧化二砷诱导淋巴瘤细胞凋亡及细胞周期阻滞的协同作用

干扰素 (ＩＦＮ)局部应用可直接杀伤肿瘤细胞 ,其作用机制和疗效尚不十分清楚。为探讨ＩＦＮ α直接抗肿瘤机制 ,我们研究了ＩＦＮ α对ＥＢ病毒感染的Ｂｕｒｋｉｔｔ淋巴瘤细胞株Ｒａｊｉ和ＥＢ病毒阴性细胞株Ｄａｕｄｉ凋亡和细胞周期阻滞的诱导作用及其与三氧化二砷 (Ａｓ2 Ｏ3)的协同作用 ,旨在探索难治性淋巴瘤治疗的新手段。材料和方法1　药品和试剂　ＩＦＮ α为天津华立达生物制品公司产品 ,Ａｓ2 Ｏ3为哈尔滨伊达制药公司产品 ,溶于ＲＰＭＩ 16 4 0培养液中 ,1ｍｍｏｌ Ｌ作为贮存液于 4℃保存 ,应用前稀释为 1μｍｏｌ Ｌ工作液。…     

正常人骨髓基质细胞支持造血的实验研究

我们对正常人骨髓基质细胞在体外传代培养情况、ＣＦＵ Ｆ及基质细胞上清对造血的影响及基质细胞层有核细胞的粘附能力进行了观察 ,现报道如下。材料和方法1　正常人骨髓细胞的来源　取无血液疾患的胸外科手术患者肋骨 5～ 7ｃｍ ,取出骨髓分离单个核细胞 (ＭＮＣ) ,调浓度至(2～ 5 )× 10 6 ｍｌ备用。2　骨髓基质细胞培养　将 2× 10 6 ｍｌＭＮＣ置ＩＭＤＭ培养基中 (含体积分数为 30 %的人ＡＢ型血清 ,10 - 4 ｍｏｌ Ｌ氢化考的松 ,0 .1ｍｌｂＦＧＦ) ,在 37℃ ,体积分数 5 %的ＣＯ2 ,饱合湿度条件下培养 3～ 5ｄ ,半量换液。 7～ 9ｄ形…     

抗原负载的树突细胞介导的特异性抗慢性粒细胞白血病作用

慢性粒细胞白血病 (ＣＧＬ)来源的树突细胞 (ＤＣ)在体外能较强地激发特异性细胞毒Ｔ细胞产生 ,对自身白血病细胞具有较强的杀伤活性[1 ] 。我们探讨ＣＧＬ细胞冻融抗原(ＣＬＡ)负载的ＤＣ与细胞因子诱导的杀伤细胞 (ＣＩＫ)共同培养能否进一步提高特异性细胞毒Ｔ细胞的杀伤活性。材料和方法1　细胞来源　 12例外周血样本采自ＣＧＬ慢性期初诊患者(ＷＢＣ >5 0× 10 9) ,冻存后作为靶细胞及制备ＣＬＡ。采缓解后患者外周血进行ＤＣ及ＣＩＫ细胞培养。2　主要试剂　ｒｈＩＬ 4 (比活性 13Ｕ ｎｇ)、ｒｈＴＮＦα(比活性 36Ｕ ｎｇ)购自Ｐｒｏ…     

53例急性白血病患者还原性叶酸载体功能的测定

还原性叶酸载体 (ＲＦＣ)功能下降、甲氨蝶呤 (ＭＴＸ)聚谷氨酸合成减少、二氢叶酸还原酶活性增加是ＭＴＸ耐药的三大主要原因[1] 。ＲＦＣ是转运ＭＴＸ进入细胞使其产生抗肿瘤作用的首要环节[2 6] 。因而检测急性白血病 (ＡＬ)患者的ＲＦＣ功能 ,可部分反映白血病细胞对ＭＴＸ代谢的差异 ,为临床预测耐药、估计预后、指导白血病的个体化治疗提供一定的理论依据。病例和方法1　研究对象主要为本院 1998年 6月～ 1999年 9月收治的ＡＬ患者。选取白血病细胞比例大于 0 .70、细胞数大于 10 7及部分经二甲基亚砜 (ＤＭＳＯ)冷冻保存、复苏培养 …     

2型糖尿病患者外周血细胞凋亡与一氧化氮、血糖的关系

目的：探讨２型糖尿病（Ｔ２ＤＭ）２外周血淋巴细胞（ＰＢＬ）凋亡与一氧化氮（ＮＯ）、血糖浓度的关系。方法：用琼脂糖凝胶电泳测定５３例Ｔ２ＤＭ「ＤＭ组,其中无血管并发症（ＤＭＩ）组２６５例,伴血管并发症（ＤＭ２组２７例」,患者及队列３空（ＮＣ组）ＰＢＬ在体外培养２４小时的凋亡发生率,同时因清ＮＯ葡萄糖浓度及糖化血红蛋白的变化。结果：ＤＭ组细胞凋亡、ＮＯ、葡萄糖、ＨｂＡ１ｃ镁明显高于ＮＣ组,此现象ＳＤＭ     

再生障碍性贫血的免疫抑制治疗现状

再生障碍性贫血 (再障 )是一类病死率很高的疾病 ,目前认为免疫机制在再障发病中起重要作用。近二十年来 ,随着再障免疫抑制治疗 (ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅｔｈｅｒａｐｙ,ＩＳＴ)的广泛开展 ,本病的预后有了极大的改善。1　ＩＳＴ药物机制1.1　抗淋巴细胞球蛋白 /抗胸腺细胞球蛋白 (ＡＬＧ/ＡＴＧ) :Ｔ淋巴细胞可对造血前体细胞有直接杀伤作用 ,或分泌肿瘤坏死因子α(ＴＮＦ α)、干扰素γ(ＩＦＮ γ)抑制骨髓造血干 /祖细胞 ,诱导ＣＤ3 4 + 细胞表达Ｆａｓ抗原而凋亡[1] 。ＡＬＧ/ＡＴＧ能通过补体依赖的细胞溶解途径直接杀伤…     

T淋巴细胞识别自体慢性粒细胞白血病肿瘤细胞抗原的研究

目的：验证慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）患者体内是否存在细胞毒Ｔ淋巴细胞前体细胞，并鉴定其表型和功能特征。方法：用混合淋巴瘤细胞培养技术，用自体瘤细胞和细胞因子刺激扩增ＣＭＬ患者骨髓和外周血单个核细胞（ＭＮＣ）。结果：ＣＭＬ缓解期和慢性期均存在对自体和异体ＣＭＬ细胞杀伤活性的Ｔ淋巴细胞，这些细胞对自体和异体正常ＭＮＣ没有杀伤活性，对正常ＣＦＵ－ＧＭ无抑制作用。而ＬＡＫ细胞对自体ＣＭＬ细胞无杀伤活性（＜１０％），只对异体ＣＭＬ细胞有杀伤活性。上述Ｔ细胞包括ＣＤ３＋ＣＤ５６＋非主要组织相容性抗原（ＭＨＣ）限制性Ｔ细胞，和ＣＤ３＋ＣＤ６－ＭＨＣ限制性Ｔ细胞。用自体ＣＭＬ细胞刺激可增加Ｔ细胞激活抗原ＣＤ２５和ＨＬＡ－ＤＲ的表达。上述Ｔ细胞对自体ＣＭＬ细胞呈较弱的增殖反应，对异体ＣＭＬ细胞几乎无增殖反应，对载有ＢＣＲ－ＡＢＬ肽的自体缓解期ＥＢ病毒转染Ｂ细胞也无增殖反应。结论：ＣＭＬ细胞可能有共同的肿瘤抗原，后者可以被Ｔ细胞识别，但尚无证据表明是ｐ２１０的融合区序列。     

白细胞介素6对急性髓系白血病细胞生长及核因子激活的影响

多年来的研究表明 ,白细胞介素 6 (ＩＬ 6 )可影响多种急性髓系白血病 (ＡＭＬ)细胞的生长与分化[1] ,现在知道 ,ＩＬ 6主要通过ＪＡＫ ＳＴＡＴｓ途径 (激活的核因子主要是ＳＴＡＴ3)和Ｒａｓ/ＭＡＰＫ/ＮＦ ＩＬ6途径将信号转导至核内[2 ] 。我们选择了多个ＡＭＬ细胞系 ,首先明确了ＩＬ 6的效应 ,然后通过凝胶阻滞电泳 (ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓｍｏｂｉｌｉｔｙｓｈｉｆｔａｓｓａｙ ,ＥＭＳＡ)的方法分析了ＩＬ 6对这些ＡＭＬ细胞核因子 (ＳＴＡＴ3与ＮＦ ＩＬ6 )的激活情况。在此基础上 ,运用ＳＴＡＴ3、ＮＦ ＩＬ6反义寡核苷…     

Th2细胞移植减低异基因骨髓移植后移植物抗宿主病的实验研究

免疫抑制剂和Ｔ细胞去除虽然可以明显降低移植物抗宿主病 (ＧＶＨＤ)的发生 ,但存在继发感染、白血病和其它恶性肿瘤高复发的问题。如何改良Ｔ细胞 ,提高异基因骨髓移植(ａｌｌｏ ＢＭＴ)效果成为引人注目的问题。我们采用体外诱导的Ｔｈ2细胞进行ａｌｌｏ ＢＭＴ ,探讨该种Ｔ细胞对ＧＶＨＤ发生的调控作用。材料和方法1　材料　Ｃ5 7ＢＬ/ 6鼠 (Ｈ 2ｂ ,8周 ,雄性 )、ＢＡＣ鼠 (ＢＡＬＢ/ｃ×Ｃ5 7ＢＬ/ 6 ,Ｈ 2ｂ×ｄ ,Ｆ1,10周 ,雌性 )由第一军医大学清洁动物实验部提供。ＲＰＭＩ 16 40培养基为Ｇｉｂｃｏ公司产品 ,鼠白细胞介素 4(ｍＩ…     

醒胸注射液抗脑缺血再灌注损伤作用的实验研究

目的 探讨醒脑静注射液９ＸＮＪＩ）对脑缺血灌注操作的防治作用及其机理。方法 制备家兔ＣＩＲＩ模型,随机分为对照组和ＸＮＪＩ组,动态观察血浆及脑组织一氧化氮（ＮＯ）水平、内皮素９ＥＴ）含量、丙二醛（ＭＤＡ）浓度、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性及脑超微结构的变化。结果 脑缺血再灌注期间,血浆和脑组织ＮＯ水平及ＳＯＤ活性明显下降（Ｐ〈０．０５和Ｐ〈０．０１）,ＥＴ及ＭＤＡ含量显著升高（Ｐ〈０．０５和Ｐ〈０     

慢性粒细胞白血病树突状细胞对特异性抗白血病T细胞的作用

树突状细胞（ＤＣ）是有效的抗原呈递细胞,我们从初诊慢性粒细胞白血病慢性期（ＣＭＬＣＰ）患者的外周血中培养出ＤＣ,探讨其对特异性抗白血病Ｔ细胞（ＡｎｔｉＬＢＴ）的作用。病例和方法１　病例　初诊ＣＭＬＣＰ患者１６例。均有ｔ（９;２２）染色体异常。其中男１０例,女６例。年龄３２（１８～４５）岁。分别将与其中６例患者ＨＬＡ相合的６名健康亲属作为正常对照。２　单个核细胞（ＭＮＣ）的分离制备　取肝素抗凝的外周血或骨髓２～３ｍｌ,按文献［１］分离外周血单个核细胞（ＰＢＭＮＣ）或骨髓单个核细胞（ＢＭＭＮ…     

急性髓系白血病用IFM和FCM检测免疫表型的比较

ＣＤ19是Ｂ淋巴细胞的主要标志之一 ,但近年发现ＣＤ19在急性髓系白血病 (ＡＭＬ)中也有表达 (阳性率在 10 %左右 )。国外应用流式细胞仪 (ＦＣＭ)免疫表型分析表明ＣＤ19在Ｍ2 特别是Ｍ2 /ｔ(8;2 1)中高表达[1～ 3 ] ,最近Ｆｅｌｉｃｅｔｔｏ等[3 ] 证实以ＣＤ19配合ＣＤ3 4 可以预测ｔ(8;2 1)ＡＭＬ。但国内应用间接免疫荧光显微镜技术 (ＩＦＭ)检测的结果为ＣＤ19在ＡＭＬ甚至Ｍ2 /ｔ(8;2 1)均不表达[4 ,5] ,与国外文献相反。本文对 35 5例ＡＭＬ进行ＭＩＣ分型 (其中免疫学检测分别采用ＦＣＭ和ＩＦＭ ) ,以进一步论证ＦＣＭ在免疫表型…     

NKT细胞--一种新型的T细胞

ＮＫＴ细胞 (ｎａｔｕｒａｌｋｉｌｌｅｒＴｃｅｌｌ)主要是指携带一恒定的Ｔ细胞受体 (ＴＣＲ)αβ和ＮＫ细胞活化性受体的ＣＤ4- ＣＤ8- 或ＣＤ4+ ＣＤ8- Ｔ细胞 ,是由Ｂｕｄｄ等在 1 987年首先报道的 ,以后有大量的研究表明这类细胞是不同于传统Ｔ细胞的新一类Ｔ细胞 ,在发育、表型及免疫功能等方面有其自身的特殊性 ,尤其是近年来的研究认为ＮＫＴ细胞在机体免疫自稳、抗感染和抗肿瘤免疫等方面具有重要的作用。1　ＮＫＴ细胞的表型特征ＮＫＴ细胞具有与成熟的激活 /记忆型Ｔ细胞相似的一些表型 (见表 1) ,其中ＮＫＴ细胞最显著的特征是…     

脐血CIK细胞诱导K562细胞凋亡的作用

我们用ｒｈＩＬ 2、ＣＤ3 单抗和干扰素的不同组合诱导脐血单个核细胞而获得细胞因子活化的杀伤细胞 (ＣＩＫ细胞 ) ,研究其诱导肿瘤细胞凋亡的作用 ,旨在探讨经多种细胞因子适当组合诱导的脐血单个核细胞是否既能提高杀瘤活性又能保留重建造血的功能 ,以期为恶性肿瘤的非手术疗法提供一种更为有效的方法。材料和方法1　材料 :ｒｈＩＬ 2、ＩＦＮ γ、Ｇ ＣＳＦ、ＣＤ3 单抗购自北京邦定生物制品公司 ;ＲＰＭＩ 16 40购自Ｇｉｂｃｏ公司 ;Ｋ5 6 2细胞购自武汉大学典型物培养中心 ;原位细胞凋亡检测试剂盒 (ＰＯＤ)购自德国宝灵曼公司。2　脐…     

紫外线照射自血回输对脑梗塞患者外周血淋巴细胞亚群和血浆纤维连接蛋白的影响

对２４例脑梗塞患者紫外线照射自血回输（ＵＢＩＯ）治疗前、后外周血淋巴细胞亚群及血浆纤维连接蛋白（Ｆｎ）含量变化进行了观察．结果ＵＢＩＯ治疗前脑梗塞患者外周血中总Ｔ细胞（ＣＤ）、Ｔ抑制细胞（ＣＤ）数均较正常人明显减少，ＣＤ４／ＣＤ８比值上升；Ｂ＋和人类白细胞抗原（ＨＬＡ－ＤＲ＋）细胞数增多；白细胞介素Ⅱ受体（ＩＬ－２Ｒ＋）和Ｔ辅助（ＣＤ＋）细胞数则与正常人无差异。血浆Ｆｎ含量低于正常人。提示脑梗塞患者存在免疫功能紊乱．ＵＢＩＯ治疗后，外周血中ＣＤ、ＣＤ细胞和Ｆｎ水平上升，ＣＤ４／ＣＤ８比值下降，Ｂ细胞数下降，ＨＬＡ－ＤＲ＋细胞数无明显变化．提示ＵＢＩＯ具有免疫调节作用．