接骨药对体外培养成骨细胞增殖影响的研究

目的：观察接骨药对人成骨细胞增殖的影响。方法：从成人骨髓来源的成骨细胞在含不同浓度接骨药的RPMI1640培养液中培养1、3、5、7天，用细胞计数法和MTT比色法观察接骨药对其增殖的影响，结果：本实验条件下不同浓度的接骨药能促进成骨细胞的增殖，且促进作用与浓度、时间呈正相关。     

健骨二仙丸提取物对大鼠体外培养成骨细胞增殖作用的研究

目的:探讨健骨二仙丸提取物对大鼠体外培养成骨细胞的作用效果及对成骨细胞增殖的作用机理。方法:采用新生大鼠颅骨进行成骨细胞分离,并在含10%的胎牛血清DMEM中进行体外培养,分别加入高、低剂量的健骨二仙丸提取物并与高、低剂量Premarin组、阴性组、Tamoxifen对照组、Tamoxifen阻断对照组进行对照,用MTT法进行成骨细胞增殖和活性检测。结果:在培养24h后,健骨二仙丸提取物对培养成骨细胞增殖有明显的促进作用,培养到48h促进作用更为明显,表现出一定的时间相关性,且其作用不能被Tamoxifen阻断或完全阻断。结论:健骨二仙丸提取物可促进成骨细胞增殖,且其对骨代谢的影响不通过或者主要不是通过雌激素样作用生效。     

杜仲叶β-谷甾醇对成骨细胞和卵巢颗粒细胞的影响

目的研究杜仲叶β-谷甾醇(β-sitosterol)对骨代谢平衡的调控作用及其机制。方法采用溶剂法、柱层析与重结晶等技术从杜仲叶提取部位Ⅰ中分离得到白色针状晶体B,根据理化性质和光谱分析鉴定化学结构为β-谷甾醇;建立体外大鼠成骨细胞、卵巢颗粒细胞单独培养与混合培养模型,研究杜仲叶β-谷甾醇对骨代谢平衡的调节作用。结果杜仲叶β-谷甾醇可明显促进卵巢颗粒细胞分泌雌二醇E2,有效提高成骨细胞护骨素与破骨细胞分化因子的比值(OPG/ODF),是调节骨代谢平衡的机制之一。结论杜仲叶β-谷甾醇通过提高成骨细胞OPG/ODF比值和刺激卵巢颗粒细胞分化E2,从而促进和加强成骨作用。     

红曲提取物对体外培养成骨细胞的作用研究

目的：研究红曲不同提取物对体外培养大鼠成骨细胞（ROB）增殖、分化的影响。方法：采用新生大鼠颅骨分离培养ROB,MTT法测定细胞增殖,碱性磷酸酶（ALP）试剂盒法测定ALP活性,观察红曲提取物对ROB增殖、分化的作用,同时考察了MTT法和ALP试剂盒法中细胞数和吸收值之间的线性关系。结果：10^-2和10^-3mg/ml的水提物能刺激ROB的增殖（P〈0.05）,10^-3mg/ml的水提物还能提高ROB的ALP活性（P〈0.05）;10^-2和10^-3mg/ml的95%乙醇提取物对ROB的增殖与分化均有明显的促进作用（P〈0.05或P〈0.01）。结论：红曲水提物和95%乙醇提取物均能促进ROB骨形成过程中增殖、分化,95%乙醇提取物作用效果显著。     

四种中药对体外培养大鼠成骨细胞增殖分化功能的影响

目的:观察中药海螵蛸、骨碎补、三七、阿胶含药血清对体外培养大鼠成骨细胞增殖、分化功能的影响。方法:应用MTT法观察海螵蛸、骨碎补、三七、阿胶对体外培养成骨细胞增殖功能的影响,ELISA法观察海螵蛸、骨碎补、三七、阿胶对体外培养成骨细胞ALP含量的影响。结果:在成骨细胞的增殖方面,海螵蛸、三七含药血清对成骨细胞增殖有抑制作用,骨碎补、阿胶对成骨细胞增殖没有明显促进作用。在对成骨细胞内碱性磷酸酶(ALP)的作用方面,海螵蛸、骨碎补对体外培养大鼠成骨细胞内ALP的合成有抑制作用;三七没有明显作用;阿胶有明显的促进作用。结论:4种中药对体外培养大鼠成骨细胞增殖、分化功能的影响各不相同。海螵蛸对体外培养大鼠成骨细胞的增殖、分化功能有抑制作用;骨碎补对体外培养大鼠成骨细胞的增殖无明显作用,对其分化功能有抑制作用;三七对体外培养大鼠成骨细胞的增殖有抑制作用,对其分化功能作用不明显;阿胶对体外培养大鼠成骨细胞的增殖无促进作用,但能促进体外培养大鼠成骨细胞的分化功能。     

补肾中药对体外培养成骨细胞增殖和功能的影响

目的:观察补肾中药活性成分对体外培养成骨细胞增殖和功能的影响.方法:体外培养成骨细胞,观察补肾中药含药血清对成骨细胞增殖率和ALP活性的影响.结果:补肾中药含药血清对成骨细胞增殖能力和ALP活性有增强作用.结论:补肾中药活性成分对体外培养成骨细胞的增殖和功能有促进作用.     

补肾益精中药调控体外培养成骨细胞IGF-I分泌与表达的研究

目的观察补肾益精中药对体外培养成骨细胞类胰岛素样生长因子I(IGF-I)分泌和表达的影响,探讨补肾益精中药调节骨重建的作用机理。方法采用连续酶消化法培养大鼠颅盖骨成骨细胞,观察补肾益精药物血清对成骨细胞增殖率、碱性磷酸酶(ALP)、矿化结节数目以及成骨细胞不同分化时期IGF-I分泌和mRNA表达的影响。结果与对照组比较,补肾益精中药能明显增加成骨细胞增殖率,提高成骨细胞ALP分泌量,增加矿化结节数;中药组IGF-I的分泌在第7d、第21d时与对照组比较无差异,但在第14d时IGF-I的分泌量明显高于对照组,同时其成骨细胞IGF-I mRNA表达下调。结论补肾益精中药可能通过调控细胞因子IGF-I的表达与分泌发挥促进骨形成的作用。     

健骨二仙丸提取物对大鼠体外培养成骨细胞PKC和Bag-1的影响

目的:探讨健骨二仙丸提取物对大鼠体外培养成骨细胞的作用机理。方法:采用新生大鼠颅骨进行成骨细胞分离,并在含10%的胎牛血清DMEM中进行体外培养,分别加入高、低剂量的健骨二仙丸提取物并与高、低剂量Premarin组、阴性组、Tamoxifen对照组、Tamoxifen阻断对照组进行对照,用Western免疫印迹检测蛋白激酶C、抗凋亡蛋白Bag-1表达。结果:健骨二仙丸提取物能明显提高体外成骨细胞PKC的表达量和抗凋亡蛋白Bag-1的表达量。结论:健骨二仙丸提取物可促进成骨细胞增殖并明显提高PKC和抗凋亡蛋白Bag-1的表达量是其防治骨质疏松的机理之一。     

大鼠成骨细胞的体外培养研究

目的:改良大鼠新生乳鼠颅骨来源成骨细胞的分离培养纯化方法。方法:采用改良的胰蛋白酶和I型胶原酶联合的二次酶消化法对SD大鼠乳鼠成骨细胞进行原代培养、扩增。通过差速贴壁法进行成骨细胞纯化。通过成骨细胞形态学、茜素红矿化结节染色法观测,确定其增殖与成骨活性。结果:改良的二次酶消化法培养颅骨来源成骨细胞可获得原代细胞增殖,传代扩增细胞具有典型成骨细胞形态学和生物学活性。形态学、茜素红染色均呈阳性结果。结论:改良的二次酶消化法能够在更短时间内获得大量的高纯度的成骨细胞,细胞生物学特征稳定,适用于做体外实验研究模型。     

补肾益精中药调控体外培养成骨细胞IGF-Ⅰ分泌与表达的研究

目的 观察补肾益精中药对体外培养成骨细胞类胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)分泌和表达的影响,探讨补肾益精中药调节骨重建的作用机理.方法 采用连续酶消化法培养大鼠颅盖骨成骨细胞,观察补肾益精药物血清对成骨细胞增殖率、碱性磷酸酶(ALP)、矿化结节数目以及成骨细胞不同分化时期IGF-Ⅰ分泌和mRNA表达的影响.结果 与对照组比较,补肾益精中药能明显增加成骨细胞增殖率,提高成骨细胞ALP分泌量,增加矿化结节数;中药组IGF-Ⅰ的分泌在第7d、第21d时与对照组比较无差异,但在第14d时IGF-Ⅰ的分泌量明显高于对照组,同时其成骨细胞IGF-Ⅰ mRNA表达下调.结论 补肾益精中药可能通过调控细胞因子IGF-Ⅰ的表达与分泌发挥促进骨形成的作用.     

红曲对体外培养成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响

目的:研究中药红曲对体外培养成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响。方法:取SD大鼠48只,随机将大鼠分为A组(空白组)、B组(倍美力组)、C组(普拉固组)、D、E、F组(红曲高、中、低剂量组)六组,按10 ml/kg分别予以生理盐水、倍美力水溶液(6.25μg/ml)、普拉固水溶液(0.2 mg/ml)及红曲水提液(1.25g/ml、0.625 g/ml、0.125 g/ml)灌胃。灌胃10天后,制备含药血清;将从乳鼠颅骨取材的成骨细胞培养于含药血清培养液中,然后应用MTT法、对硝基苯磷酸盐法及茜素红染色方法观察体外培养成骨细胞、碱性磷酸酶及矿化结节的变化。结果:经过10天红曲水提液灌胃后采血制备的含药血清明显增加了成骨细胞数量(P<0.01或P<0.05)、碱性磷酸酶的表达水平及矿化结节的形成,作用随红曲剂量的增加而增加。结论:成功地运用血清药理学的方法,模拟了体内的药理环境;证实了红曲含药血清可以呈剂量依赖性地促进成骨细胞增殖。     

红曲对体外培养成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响1

目的：研究中药红曲对体外培养成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响。方法：取SD大鼠48只，随机将大鼠分为A组（空白组）、B组（倍美力组）、C组（普拉固组）、D、E、F组（红曲高、中、低剂量组）六组，按10ml／kg分别予以生理盐水、倍美力水溶液（6.25μg／ml）、普拉固水溶液（0．2mg／m1）及红曲水提液（1．25g／ml、0．625g／ml、0．125g／ml）灌胃。灌骨10天后，制备含药血清；将从乳鼠颅骨取材的成骨细胞培养于含药血清培养液中，然后应用MTT法、对硝基苯磷酸盐法及茜素红染色方法观察体外培养成骨细胞、碱性磷酸酶及矿化结节的变化。结果：经过10天红曲水提液灌胃后采血制备的含药血清明显增加了成骨细胞数量（P〈0．01或P〈0．05）、碱性磷酸酶的表达水平及矿化结节的形成，作用随红曲剂量的增加而增加。结论：成功地运用血清药理学的方法，模拟了体内的药理环境；证实了红曲含药血清可以呈剂量依赖性地促进成骨细胞增殖。     

芦丁与槲皮素对成骨细胞代谢影响的比较研究

目的:对比研究芦丁(Rutin)与其苷元槲皮素(Quercetin)对成骨细胞形成的影响,以探讨二者防治骨质疏松的作用机理。方法:新生大鼠颅骨分离培养成骨(ROB)细胞,MTT法测定细胞增殖,比色法测定碱性磷酸酶(ALP)活性,茜素红(AR-S)染色法测定矿化结节数,以观察Rutin与Quercetin对ROB细胞骨形成过程中增殖、分化和矿化作用的影响。结果:Quercetin可明显促进ROB细胞的增殖与矿化,故能增强ROB细胞形成活性;Rutin仅能促进ROB细胞增殖,而对矿化作用无影响,却能抑制ROB细胞分化,因而无明显促进骨形成活性。结论:Querce- tin中3-OH形成糖苷(Rutin)后可引起体外培养的成骨细胞活性降低,故含有Rutin的食物或中药防治骨质疏症的机理可能是通过其体内代谢物Quercetin刺激成骨细胞形成而发挥作用的。     

补骨脂提取物对体外培养新生大鼠颅骨成骨细胞的影响

目的观察补骨脂提取物对体外培养新生大鼠颅骨成骨细胞增殖、分化的影响。方法在新生大鼠颅骨成骨细胞体系中加入不同浓度的补骨脂提取物,检测细胞内碱性磷酸酶(ALP)含量,并用MTT法检测细胞增殖。结果补骨脂乙酸乙酯提取物和乙醇提取物能促进大鼠颅骨成骨细胞ALP活性及其增殖,最佳浓度为2.0×10-3mg/mL。结论补骨脂乙酸乙酯提取物和乙醇提取物均可促进成骨细胞分化、增殖。     

甘蔗叶提取物的体外抗肿瘤活性研究

目的:探讨甘蔗叶不同提取物对体外培养的肿瘤细胞株的生长抑制作用。方法:采用系统溶剂法对甘蔗叶提取分离,得到石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和95%乙醇4个提取部位。运用MTT法和集落形成法观察4个提取部位对人胃癌细胞株SGC7901、宫颈癌细胞株Hela、肝癌细胞株BEL7404的生长抑制情况。结果:4个提取部位对3种肿瘤细胞均有一定的抑制作用,其中乙酸乙酯部位的抑制作用最为明显,并在测定浓度范围内呈现良好的剂量依赖性。结论:首次确定了甘蔗叶的体外抗肿瘤作用,乙酸乙酯部位是其主要的活性部位。     

青蒿琥酯对体外培养角质形成细胞的影响

目的:了解青蒿琥酯(artesunate,ART)对角质形成细胞生长的抑制作用及机制。方法:用不同浓度ART处理人角质形成细胞株HaCat,MTT法检测ART对HaCat增殖情况的影响,流式细胞仪分析ART处理后的HaCat的趋化因子CXCR2表达的改变。对正常人表皮角质形成细胞进行原代培养,观察ART处理后,培养液中TGF-β1含量的变化。结果:0·01～0·5mg/mlART可抑制HaCat细胞的增殖,干预24小时后即可见到明显的抑制作用,但CXCR2的表达稍高于正常对照组。同时,正常原代的角质形成细胞的培养上清中TGF-β1分泌增加。结论:0·01～0·5mg/ml青蒿琥酯可促进角质形成细胞TGF-β1分泌,抑制角质形成细胞的增殖。     

复方杜仲片的质量标准研究

目的：完善复方杜仲片的质量标准。方法：建立益母草、夏枯草、钩藤的薄层色谱鉴别法,对黄芩采用高效液相色谱法定量,色谱条件为十八烷基硅烷键合硅胶,甲醇-0.2％磷酸溶液（44：56）为流动相;柱温30％;检测波长为315nm;流速为0．8ml／min。结果定性方法能检出益母草、夏枯草、钩藤,且阴性对照无干扰;黄芩苷在0．29—2．9μg范围内具有良好的线性关系,其回归方程为y=40．912z＋2．8627,r=0．9993。平均回收率为96．62％,RSD=2．64％．结论该法操作简便、结果准确、重现性好,适用于复方杜仲降压片的质量控制。     

增骨Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号对体外培养成骨细胞影响的实验研究

目的：观察增骨Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号对体外培养成骨细胞增殖和成骨功能的影响。方法：利用分段酶消化法从胎鼠颅骨中分离出成骨细胞，倒置相差显微镜观察其形态，碱性磷酸酶（ALP）染色来鉴定细胞。然后用不同浓度的增骨Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号作用于成骨细胞，使用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色分析、骨钙素（BGP）含量放免测定、ALP含量测定、细胞钙含量测定来检测其对成骨细胞增殖和成骨能力的影响。结果：增骨Ⅲ号以剂量依赖方式促进各项指标的表达，促进成骨细胞的增殖及骨形成，增骨Ⅰ、Ⅱ号对体外培养成骨细胞无影响。结论：增骨Ⅲ号促进成骨细胞的增殖，促进骨形成，增骨Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号序贯疗法可有效防治骨质疏松症和促进骨形成。