IL-12协同B7-1转基因细胞增强C57BL/6小鼠的抗肿瘤免疫

目的：应用逆转录病毒构建IL－12、B7－1表达载体,以研究基因修饰的肿瘤细胞的癌疫苗作用。方法：将两种表达载体分别转染EL－4胸腺瘤细胞,使该细胞能表达分泌B7－1或IL－12,并研究了该基因导入细胞的抗肿瘤免疫效果。结果：当接种了EL－4／IL－12转染细胞后,在C57BL／6同系鼠中其基因导入细胞的肿瘤原性比较EL－4／Wt和EL－4／Neo组明显减少（P＜0．01）,在EL－4／IL－12组的肿瘤被排斥后,实验动物体内诱发了抗EL－4／Wt的全身性、保护性免疫,用51Cr释放测定法证明有一个较强的抗EL－4／Wt和一个较弱的抗同系Lewis肿瘤细胞的CTL活性,体内淋巴细胞消除分析的结果提示减少的肿瘤原性主要与CD4＋、CD8＋和NK细胞有关。用EL－4／IL－12基因转染的瘤细胞进行疫苗治疗比较用EL－4／Neo瘤细胞作疫苗治疗能更加有效地延缓已建立的EL－4／Wt肿瘤的生长（P＜0．005）,EL－4／IL－12和EL－4／B7－1基因联合转染组比用单一的转基因细胞增强了治疗效果（P＜0．005）。结论：研究结果提示应用IL－12进行血液肿瘤的治疗是有效的,IL－12和B7－1联合使用在未来人类癌症的治疗中有一定的应用前景。     

IL—12协同B7—1转基因细胞增强C57BL／6小鼠的抗肿瘤免疫

目的应用逆转录病毒构建IL-12、B7-1表达载体,以研究基因修饰的肿瘤细胞的癌疫苗作用.方法将两种表达载体分别转染EL-4胸腺瘤细胞,使该细胞能表达分泌B7-1或IL-12,并研究了该基因导入细胞的抗肿瘤免疫效果.结果当接种了EL-4/IL-12转染细胞后,在C57BL/6同系鼠中其基因导入细胞的肿瘤原性比较EL-4/Wt和EL-4/Neo组明显减少(P＜0.01),在EL-4/IL-12组的肿瘤被排斥后,实验动物体内诱发了抗EL-4/Wt的全身性、保护性免疫,用51Cr释放测定法证明有一个较强的抗EL-4/Wt和一个较弱的抗同系Lewis肿瘤细胞的CTL活性,体内淋巴细胞消除分析的结果提示减少的肿瘤原性主要与CD4+、CD8+和NK细胞有关.用EL-4/IL-12基因转染的瘤细胞进行疫苗治疗比较用EL-4/Neo瘤细胞作疫苗治疗能更加有效地延缓已建立的EL-4/Wt肿瘤的生长(P＜0.005),EL-4/IL-12和EL-4/B7-1基因联合转染组比用单一的转基因细胞增强了治疗效果(P＜0.005).结论研究结果提示应用IL-12进行血液肿瘤的治疗是有效的,IL-12和B7-1联合使用在未来人类癌症的治疗中有一定的应用前景.     

IL-12协同B7-1诱导机体抗肿瘤免疫的实验研究

目的研究白细胞介素-12(Interleukin-12,IL-12)协同共刺激分子B7-1,联合诱导机体抗肿瘤免疫对大鼠卵巢上皮癌的治疗作用并探讨其机理.方法用携带有小鼠IL-12和B7-1的逆转录病毒表达载体感染大鼠卵巢癌细胞株NuTu-19,建立高表达细胞株NuTu-19/IL-12、NuTu-19/B7-1及双基因共表达细胞株NuTu-19/IL-12-B7-1,并以转染空载体pLXSN的细胞NuTu-19/Neo为对照.用经丝裂霉素C处理的各种基因修饰的肿瘤细胞免疫动物,观察卵巢癌腹腔转移模型动物生存期,及其诱导细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic lymphocyte,CTL)杀伤活性的作用.结果经各种基因修饰的肿瘤细胞免疫后,大鼠脾淋巴细胞增殖能力有不同程度的提高,CTL杀伤同源肿瘤细胞的活性明显增强,IL-12和B7-1基因联合修饰的肿瘤细胞免疫动物对模型动物生存期的延长具有显著意义(P＜0.05).结论IL-12和B7-1基因联合修饰的肿瘤细胞可以刺激机体CTL增殖、成熟,增强CTL对肿瘤细胞的识别和杀伤活性等,两者联合具有明显的协同效应.联合免疫基因治疗作为一种新的卵巢癌治疗方法,值得深入研究.     

IL-12协同B7-1增强实验小鼠的抗肿瘤免疫 *

目的：探讨分叉双歧杆菌的完整肽聚糖对巨噬细胞功能的调节作用。方法：以完整肽聚糖注射于源鼠腹腔,用习胸腺细胞增殖法、１９２９细胞体外杀伤法及Ｇｒｉｅｓｓ试剂分别测定裸鼠腹腔巨噬细胞产生的ＩＬ－１,ＴＮＦ－α及ＮＯ的水平;同时也观察了巨噬细胞体外杀瘤活性的变化。结果：完整肽聚糖一裸鼠腹腔巨噬细胞产生的ＩＬ－１,ＴＮＦ－α及ＮＯ含量均显著高于对照组,体外杀瘤活性也明显增强（Ｐ〈０．０１）。结论：分叉双歧     

GM-CSF及B7-1基因修饰的肿瘤细胞疫苗抗肿瘤的研究

目的：研究ＧＭ－ＣＳＦ及Ｂ７－１基因修饰的肿瘤细胞作为瘤苗的有效性。方法：我们将小鼠ＧＭ－ＣＳＦ及ＣＤ８０基因通过逆转录病毒载体分别导入ＥＬ－４淋巴瘤细胞中,进而研究了ＥＬ－４／ＧＭ－ＣＳＦ及ＥＬ－４／Ｂ７－１在同系Ｃ５７Ｂ习中的成瘤性及其诱导抗肿瘤免疫的效果。结果：转Ｂ７－１基因的肿瘤细胞诱发了ＣＤ８０的高表达。转基因的肿瘤细胞在同源小鼠中的成瘤性下降,免疫原笥增强。在肿瘤生长的早期对实验性荷瘤     

小鼠肺癌B7疫苗细胞FLB2C诱导的抗肿瘤免疫应答

目的：研究小鼠肺癌细胞与活化B淋巴细胞融合的疫苗细胞FLB2c诱导细胞免疫反应情况。方法：用母本细胞LA795作对照，采用体外混合淋巴细胞培养，观察FLB2c细胞刺激T细胞增殖情况，通过CTLL细胞MTT法测定FLB2c刺激T细胞产生分泌IL－2的作用，用FLB2c免疫小鼠，观察疫苗体内诱导小鼠CTL活性的能力。结果：FLB2c细胞在体外刺激T细胞增殖的作用明显比LA795强；FLB2c能刺激T细胞分泌IL－2，而LA795则不能；FLB2c细胞在体内能诱导CTL活性，其诱导CTL在体外对FLB2c细胞和LA795的杀伤率分别为34％－25．3％，而LA795诱导的CTL对FLB2c和LA795杀伤率分别为10．5％和12．25％，两者的杀伤率有显著性差异。结论：FLB2c细胞在体内外均能刺激T细胞免疫应答，其以能力明显强于未融合的LA795小鼠肺癌细胞，将其作为疫苗细胞将有可能通过提高机体免疫应答而达到治疗肺癌的效果。本研究为进一步探讨该疫苗的应用价值奠定了免疫学基础。     

bcr-ab1和白介素-7共表达基因疫苗诱导小鼠免疫保护作用

目的探讨小鼠白介素-7(IL-7)基因对bcr-abl融合基因疫苗诱导机体免疫应答的影响。方法采用pVbcr-abl/mIL-7质粒免疫BALB/c小鼠,检测小鼠血清中bcr-abl特异性抗体水平。以转染bcr-abl融合基因片段的SP2/0细胞为靶细胞,用LDH释放实验检测免疫小鼠脾细胞特异性细胞毒活性。结果pVbcr-abl/mlL-7质粒能诱导小鼠产生血清特异性抗bcr-abl抗体,pVbcr-abl/mIL-7免疫组的血清特异性抗体滴度高于pVbcr-abl免疫组,脾细胞杀伤SP2/0/bcr-abl靶细胞的细胞毒活性明显增强。结论共表达bcr-abl和mIL-7的基因疫苗能在小鼠体内诱导较高的特异性体液免疫和细胞免疫水平,为慢性粒细胞白血病基因疫苗的临床前实验研究提供了依据。     

IL-2、IFN-α和IFN-γ上调肾透明细胞癌786-0细胞B7-H1的表达

目的： 研究IL-2、IFN-α和IFN-γ对人肾透明细胞癌786-0细胞上B7-H1表达的影响。 方法： IL-2、IFN-α和IFN-γ刺激786-0细胞,RT-PCR检测刺激后786-0细胞B7-H1 mRNA的表达,免疫细胞化学、免疫荧光染色和流式细胞术检测刺激后786-0细胞中B7-H1蛋白的表达。 结果： RT-PCR检测结果显示,IL-2、IFN-α和IFN-γ组786-0细胞的B7-H1 mRNA表达量明显高于未经刺激的786-0细胞（0.75±0.06、0.68±0.05、0.95±0.08 vs 0.30±0.03,P﹤0.05或P<0.01）;免疫细胞化学和免疫荧光检测结果显示,B7-H1蛋白主要表达在786-0细胞的细胞膜上,IL-2、IFN-α和IFN-γ刺激后B7-H1表达明显上调;流式细胞术检测结果显示,IL-2、IFN-α和IFN-γ组786-0细胞的B7-H1分子表达阳性率明显高于未经刺激的786-0细胞\[（6570±326）%、（56.52±1.75）%、（84.05±3.52）% vs（20.49±1.03）%,P<0.01\]。 结论： IL-2、IFN-α和IFN-γ均上调786-0细胞B7-H1 mRNA和蛋白的表达,其中IFN-γ上调程度最高,IFN-α上调程度最低。     

B7-1基因转染对骨肉瘤细胞生物学行为的影响

目的:研究B7-1真核表达载体pcDNA3-B7-1转染对骨肉瘤细胞株LM8的生物学行为的影响。方法:用脂质体(lipofectamine)介导B7-1基因和空载体pcDNA3转染LM8细胞,G418筛选得到抗性克隆,分别命名为LM8/B7-1和LM8/pcDNA3,用聚合酶链反应(RT-PCR)和流式细胞仪(FCM)鉴定转染基因的表达,采用四甲基偶氮唑蓝微量酶反应比色法(MTT)和FCM检测细胞体外增殖活性,并观察转染细胞在C3h小鼠体内致瘤能力。结果:RT-PCR和FCM显示B7-1基因在骨肉瘤细胞株LM8中呈高表达,LM8/B7-1体外增殖活性与LM8/pcDNA3和LM8细胞差异并无显著性(P>0.05),但LM8/B7-1的致瘤能力显著下降(P<0.01)。结论:B7-1基因对骨肉瘤细胞的体内增殖能力产生明显抑制作用,可以作为骨肉瘤基因治疗的理想目的基因之一。     

ANTITUMOR IMMUNITY AND VACCINE EFFECT INDUCED BY IL—12 SYNERGIZES B7—1 GENE TRANSFECTED CELLS

Cytokines play an crucial role in the induction of antitumor immunity. It have been demonstrated that cytokines such as IL-2, IL-4, IL-12 could stimulate immunity response in many basic and clinical experiment[1-3]. Interleukin 12 (IL-12) is a heterodimeric cytokine which consists of p40 and p35 subunits. It stimulates the proliferation and activation of T lymphocyte and other killer cells and induces the production of IFN-g by these cells[4, 5]. IL-12 promotes T helper type 1 responses.…     

树突状细胞与髓性白血病的免疫治疗 *

目的：我们应用逆转录病毒构建了ＩＬ－１２,Ｂ－７和ＧＭ－ＣＳＦ表达载体,以研究基因修的肿瘤细胞的癌疫苗作用。方法：将３种表达载体分别转染ＥＬ－４胞腺瘤细胞并研究了该基因导入细胞的抗肿瘤免疫效果。结果：当接种子ＥＬ４／ＩＬ－１２细胞后,在Ｃ５７ＰＬ／６同系鼠中其基因导入细胞的肿瘤原性比较ＥＬ４／Ｗｔ和ＥＬ－４／Ｎｅｏ组明显减少（Ｐ〈０．０１）。在ＥＬ４／ＩＬ－１２被排斥后,体内试验中诱发了实验动物抗     

C57BL/6小鼠微小残留白血病模型的建立

目的 探讨构建C57BL/6小鼠FBL-3微小残留白血病(MRL)模型的方法.方法 将5×106个FBL-3红白血病细胞经尾静脉接种至C57 BL/6小鼠,接种后第3天经尾静脉注射不同剂量环磷酰胺(CTX),观察小鼠生存时间与药物剂量间的关系;根据白血病小鼠生存时间与CTX剂量和与接种FBL-3细胞数量的关系,确定构建小鼠MRL模型所需的化疗药物剂量.结果 C57BL/6白血病小鼠对CTX敏感,随CTX剂量增加白血病小鼠的生存时间逐渐延长,药物剂量与生存时间有较好的回归关系.移植生物试验显示,接种500个FBL-3细胞的小鼠生存时间与接受100 mg·kg-1 CTX化疗白血病小鼠相当.结论每只C57BL/6小鼠经尾静脉接种5×106个FBL-3细胞3d后给予100 mg·kg-1 CTX化疗可以建立MRL动物模型.     

Kojic Acid Protects C57BL/6 Mice from Gamma-irradiation Induced Damage

The radioprotective effects of a single administration of kojic acid (KA) against ionizing radiation wereevaluated via assessment of 30-day survival and alterations of peripheral blood parameters of adult C57BL/6male mice. The 30-day survival rate of mice pretreated with KA (75 or 300 mg/kg body weight, KA75 or KA300)subcutaneously 27 h prior to a lethal dose (8 Gy, 153.52 cGy/min) of gamma irradiation was higher than that ofmice irradiated alone (40% or 60% vs 0%). It was observed that the white blood cell (WBC) count/the red bloodcell (RBC) count, haemoglobin content, haematocrit and platelet count of mice with or without KA pretreatmentas exposed to a sub-lethal dose (4 Gy, 148.14 cGy/min) of gamma irradiation decreased maximally at day 4/day8 post-irradiation. Although the initial WBC values were low in KA300 or WR-2721 (amifostine) groups, theysignificantly recovered to normal at day 19, whereas in the control group they did not. The results from thecytotoxicity and cell viability assays demonstrated that KA could highly protect Chinese hamster ovary (CHO)cells against ionizing radiation with low toxicity. In summary, KA provides marked radioprotective effects bothin vivo and in vitro.     

基因枪介导的neu基因DNA疫苗抗肿瘤作用的实验研究

目的 探讨DNA疫苗pWRG-neu的皮内免疫,对高表达neu基因的小鼠移植瘤生长和转移的抑制作用。方法 向小鼠黑色素瘤B16F10细胞系转染pcDNA-neu,用有限稀释法筛选一株高表达neu基因的细胞株B16F10-neu。在基因枪介导下,向C57BL／6小鼠导入DNA疫苗pWRG-neu,通过观察免疫动物的生存期,评价DNA疫苗的抗肿瘤作用。分离免疫动物脾细胞,经自体淋巴细胞混合培养实验,分析DNA疫苗体内免疫后机体的CTL应答。结果 筛选到一株高表达neu基因的B16F10-neu细胞株,转基因过程和外源基因的表达没有改变细胞系的增殖特性。用基因枪轰击,进行DNA疫苗pWRG-neu皮内免疫,对小鼠黑色素瘤B16F10-neu进行预防、治疗和抗转移的实验研究,结果表明,DNA疫苗的免疫能够明显推迟移植瘤的生长,延长小鼠生存期,获得明显的抗肿瘤效果。DNA疫苗免疫后可诱导小鼠脾淋巴细胞CTL活性。结论 基因枪介导的DNA疫苗pWRG-neu经皮内免疫,能够有效的诱导机体的细胞免疫应答,预防和治疗小鼠移植瘤的发生,并有一定的预防肿瘤肺转移的作用。     

Ras mutations in methyiclofenapate-induced B6C3F1 and C57BL/1OJ mouse liver tumours

The majority of genotoxic carcinogen-induced liver tumours ofthe sensitive B6C3F1 mouse contain activated H-ras oncogenes.Such mutations also occur in hepatocarcinogenesis resistantstrains. In order to determine whether this is true of non-genotoxiccarcinogen-induced tumours, liver tumours induced in B6C3F1and C57BL/10J mice by methylclofena pate (MCP) were compared.Polymerase chain reaction (PCR) analysis revealed H-ras codon61 mutations in 11/46 B6C3F1 and 4/31 C57BL/10J liver tumours.The nude mouse tumorigenicity (NMT) assay was used to analysetumours without codon 61 mutations. Of the 12 B6C3F1 liver tumourDNAs subjected to this assay, one contained a H-ras codon 117mutation. Further PCR analysis on frozen tumour samples (46B6C3F1 and 15 C57BL/10J) revealed no codon 12 mutations; oneadditional codon 117 mutation was identified in a B6C3F1 tumour.Overall, then, H-ras codon 61 mutations were detected in MCP-inducedB6C3F1 tumours less frequently than in genotoxin-induced tumours.Two B6C3F1 tumours contained codon 117 mutations similar tothose previously found in tumours induced by ciprofibrate, furanand furfural, and in at least one spontaneous tumour. Ras mutationswere also detected in some C57BL/10J tumours, providing furtherevidence that ras oncogenes can participate in hepatocarcinogenesisin resistant mice.     

pCXN2-mIZUMO对C57BL/6小鼠生育能力的影响

背景与目的:精卵融合是发生在受精过程中的重要生物学事件,Izumo是位于顶体内膜上的I型免疫球蛋白,是一种具有精子特异性的膜蛋白,在精卵融合中起关键作用.我们研究pCXN2-mIZUMO在小鼠C57BL/6肌肉中的表达及对其生育能力的影响,为进一步研究免疫避孕手段提供实验依据.材料与方法:用重组质粒pCXN2-mIZUMO分别免疫雌和雄性C57BL/6小鼠.ELISA测定小鼠体内的抗Izumo抗体水平,检测小鼠抗血清在体外受精中对受精率的影响,被免疫的雌性、雄鼠分别与正常的雄、雌鼠交配,雌雄合笼比例为2:1,分娩完成后统计其产仔数.结果:pCXN2-mIZUMO可以在小鼠体内诱发抗Izumo特异性免疫应答.被pCXN2-mIZUMO免疫后的小鼠抗血清在体外能够降低其受精率;各组产仔数分别为:实验雌鼠组2.9±0.66;对照雌鼠组5.4±0.82;实验雄鼠组5.1±0.99;对照雄鼠组6.0±1.34.实验雌鼠组的生育能力比对照雌鼠组明显降低(P＜0.05).结论:重组质粒pCXN2-mIZUMO免疫雌性小鼠具有降低生育能力的作用.     

Inhibition of Metastatic Lung Cancer in C57BL/6 Mice byMarine Mangrove Rhizophora apiculata

Metastasis is one of the hallmarks of malignant neoplasms and is the leading cause of death in many cancerpatients. A major challenge in cancer treatment is to find better ways to specifically target tumor metastasis.In this study, the anti-metastatic potential of the methanolic extract of Rhizophora apiculata (R.apiculata) wasevaluated using the B16F-10 melanoma induced lung metastasis model in C57BL/6 mice. Metastasis was inducedin C57BL/6 mice by injecting highly metastatic B16F-10 melanoma cells through the lateral tail vein. Simultaneoustreatment with R.apiculata extract (10 mg/kg b.wt (intraperitoneal) significantly (p<0.01) inhibited pulmonarytumor nodule formation (41.1 %) and also increased the life span (survival rate) 107.3 % of metastatic tumorbearing animals. The administration of R.apiculata extract significantly (p<0.01) reduced biochemical parameterssuch as lung collagen hydroxyproline, hexosamine, uronic acid content, serum nitric oxide (NO), γ-glutamyltranspeptidase (GGT) and sialic acid levels when compared to metastasis controls. These results correlated withlung histopathology analysis of R.apiculata extract treated mice showing reduction in lung metastasis and tumormasses. Taken together, our findings support that R.apiculata extract could be used as a potential anti-metastasisagent against lung cancer.