BCR/ABL基因转录水平与慢性粒细胞性白血病病程关系的探讨

应用细胞原位杂交方法,对29例处于不同病期的慢性粒细胞性白血病(慢粒)患者肿瘤细胞中BCR/ABL融合基因的转录水平进行研究。结果发现,急变期组(n=5)和加速期组(n=7)患者的白血病细胞中该融合基因的转录水平明显高于慢性期患者组(n=17)(P<0.01),而急变期组和加速期组之间该mRNA的水平无显著差异。结果提示,白血病细胞中BCR/ABL融合基因的转录水平与病程进展关系密切,采用细胞原位杂交的方法检测白血病细胞中BCR/ABL融合mRNA的水平,不仅可用于慢粒及慢粒急变的辅助诊断,而且可早期预测急变的发生。     

应用改良的多聚酶链反应诊断慢性粒细胞性白血病BCR／ABL融合基因

应用改良的多聚酶链反应诊断慢性粒细胞性白血病ＢＣＲ／ＡＢＬ融合基因生化教研室伞德忠，张乃忠，王莉琳，宋磊二院于军，武宝珍，夏丽娟海拉尔地区医院刘昌勋慢性粒细胞性白血病（ＣＭＬ）是首先被发现的细胞染色体异常的疾病，此异常染色体称ｐｈ染色体。研究表明这种...     

BCR／ABL基因转录水平与慢性粒细胞性白血病病程关系的探讨

应用细胞原位杂交方法，对２９例处于不同病期的慢性粒细胞性白血病（慢性）患者肿瘤细胞中ＢＣＲ／ＡＢＬ融合基因的转录水平进行研究。结果发现，急变期组（ｎ＝５）和加速期组（ｎ＝７）患者的白血病细胞中该融合基因的转录水平明显高于慢性期患者组（ｎ＝１７）（Ｐ〈０．０１），而急变期组和加速期组之间该ｍＲＮＡ的水平无显著差异。结果提示，白血病细胞中ＢＣＲ／ＡＢＬ融合基因的转录水平与病程进展关系密切，采用细胞原位     

BCR/ABL融合基因和转录因子FoxO3a在初发和急变慢性粒细胞白血病患者中的表达变化

目的:观察慢性粒细胞白血病(CML)初发和急变患者外周血BCR/ABL融合基因和转录因子FoxO3a的表达变化及其意义.方法:利用EVA Green建立实时荧光RT-PCR检测BCR/ABL、FoxO3a和GAPDH的方法,检测25例CML初发和25例CML急变患者的外周血样本中BCR/ABL融合基因和FoxO3a的表达,以及30例正常人外周血样本中FoxO3a的表达,以GAPDH为内参基因,各组基因表达水平的差异采用△△CT相对定量法.结果:CML急变患者外周血BCR/ABL融合基因的表达水平是初发患者的4.72倍,正常人外周血样本中FoxO3a的表达水平分别是CML初发和急变患者的143.39倍和8.18倍.结论:BCR/ABL融合基因的高表达与转录因子FoxO3a的低表达可能与CML不同阶段的病理过程相关联.     

BCR/ABL融合基因表达检测技术建立及其初步应用

目的建立BCR/ABL融合基因表达定量分析的双色荧光定量PCR技术;探讨所建立的双色荧光定量PCR技术在CML早期诊断中的临床应用特点。方法据BCR/ABL融合基因序列,设计合成BCR/ABL融合基因及ABL基因特异的引物TaqM an探针。提取患者骨髓细胞标本总RNA,逆转录成cNDA;在同一PCR反应管中同时进行两种基因的双色荧光定量PCR反应,分别定量测BCR/ABL融合基因和ABL基因的表达量,并计算两种基因表达的比值。检测标本中两种基因的表达量,计算检测的阳性率,所得结果与临床诊断结果对比,以判断该技术在CML检测诊断中的价值。结果成功地建立了BCR/ABL融合基因检测的双色荧光定量PCR技术方法;在35例临床CML患者中,33例检出融合基因阳性,检测阳性率94.3%;12例正常人cDNA均未检出融合基因阳性。结论所建立的BCR/ABL融合基因检测的双色荧光定量PCR是一种快速、准确、高通量而费用又较为低廉的基因检测技术,该技术检测CML具有临床可行性。     

慢性髓系白血病BCR/ABL融合基因的异质性及其与临床表现的关系

慢性髓系白血病(CML)是一组异质性疾病群，其基本特征是具有Ph染色体和由此形成的BCR／ABL融合基因。不同患者可有不同结构的BCR／ABL融合基因，并可引起患者不同的临床血液学表现，作者对此作一综述。     

双标记原位杂交法检测间期细胞BCR/ABL融合基因

目的 :应用双标记原位杂交方法检测 BCR/ ABL融合基因。方法 :BCR基因探针用地高辛标记 ,碱性磷酸酶显色 ;ABL基因用3 H- d ATP标记 ,核子乳胶放射自显影。结果 :检测 9例初治的慢性粒细胞白血病 ( CML)病人均为阳性 ,阳性细胞比例为 93% ;检测 CML来源的 K5 62细胞株阳性细胞占 98.8% ;正常人假阳性率为 0 .75 %。结论 :该方法简便、快速 ,适用于 CML微小残留病的检测     

FISH在儿童急性淋巴细胞白血病MLL基因重排及BCR/ABL融合基因检测中的应用

目的探讨荧光原位杂交技术(FISH)检测儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)MLL基因重排及BCR/ABL融合基因的临床价值。方法利用荧光原位杂交技术和常规染色体核型分析技术对57例初诊ALL患儿MLL[t(11q;v)]和BCR/ABL[t(9;22)]进行检测,并且追踪其临床预后。结果 57例初诊ALL患儿中,MLL基因重排的阳性率为24.6%(14/57),BCR/ABL阳性率为8.8%(5/57),染色体核型分析未检出t(11q;v)和t(9;22)异常,阳性组总的缓解率较阴性组低。结论 MLL基因重排和BCR/ABL融合基因是儿童ALL预后不良的危险因素,常规染色体分析检出率较低,FISH技术可以显著提高检出率,在协助临床制定儿童ALL治疗方案及判断预后中具有重要价值。     

急性混合细胞白血病伴BCR/ABL融合基因阳性的临床分析

目的分析伴BCR/ABL融合基因阳性的急性混合细胞白血病（MPAL）临床特点、生物学特性、临床疗效及预后。方法对1例伴BCR/ABL融合基因阳性的MPAL患者临床及实验室资料进行分析,结合细胞形态学、免疫分型及融合基因定性检测进行诊断,并予以多次不同化疗方案治疗。结果患者在治疗期间反复出现严重肺部感染,最终死于多脏器衰竭。结论 MPAL病例罕见,且无统一的治疗方案,预后差。年龄和Ph染色体阳性与患者预后紧密相关。     

慢性粒细胞白血病中相关融合基因的研究进展

研究证实,慢性粒细胞白血病(CML)中BCR/ABL融合基因具有极高的酪氨酸激酶活性,通过改变作为BCR/ABL催化底物的一些关键调节蛋白的磷酸化状况,激活多种信号转导途径,可致疾病的发生。除此之外,NUP98-HOXA9及RUNX1-EVI1等融合基因在CML病程中亦发挥重要作用,但具体机制尚未明了。本文就CML中相关融合基因的研究进展作一综述。     

稳定表达BCR/ABL的小鼠BaF3-P210细胞株的建立及其生物学特性的研究

目的构建能稳定表达BCR／ABL的小鼠转化细胞株BaF3-P210,并初步探讨BCR／ABL对BaF3细胞生物学特性的影响。方法将含有bcr／abl基因的逆转录病毒载体转染到包装细胞,收集病毒感染BaF3细胞,经筛选和亚克隆,获得稳定表达BCR／ABL的转基因BaF3-P210细胞。用PCR、DNA测序、RT-PCR和Western blot检测bcr／abl基因在靶细胞中的整合和表达;用台盼蓝细胞计数法、流式细胞仪（FCM）和MTT法研究BCR／ABL对BaF3细胞生物学特性的影响。结果bcr／abl基因整合在BaF3细胞基因组中,BaF3-P210细胞能稳定表达bcr／abl基因及其蛋白。与对照组相比,BaF3-P210细胞增殖速度增快（P〈0．05）;G0／G1期细胞比例下降,S期和G2／M期细胞比例增高（P〈0．05）;经STI571处理后的细胞增殖抑制率为（54．08&#177;1．90）％（P〈0．05）,早期凋亡率为（12．35&#177;2．04）％（P〈0．05）。结论成功构建的能稳定表达BCR／ABL的小鼠BaF3-P210转化细胞株具有增殖能力增强、细胞周期进程加速和对STI571敏感的恶性表型特征。     

慢性粒细胞白血病Ph1染色体和bcr/abl融合基因检测的意义

目的：探讨Ph¹染色体和bcr/abl融合基因检测在慢性粒细胞白血病诊断中的意义。 方法：选择95例慢性粒细胞白血病患者和20例缺铁性贫血患者作为研究对象,采用骨髓细胞短期培养法制备染色体、采用RT-PCR法分析bcr/abl融合基因。 结果：95例慢性粒细胞白血病患者中,Ph¹染色体阳性者83例（87.4%）,bcr/abl阳性阳性者90例（94.7%）,Ph¹和bcr/abl均阳性83例（94.7%）,Ph¹阴性、bcr/abl阳性7例（7.4%）,Ph¹和bcr/abl均阴性5例（5.3%）。20例缺铁性贫血患者Ph¹和bcr/abl均阴性。 结论：Ph¹染色体、bcr/abl融合基因的检测有助于慢性粒细胞白血病的诊断和鉴别诊断。     

双色ES探针检测慢性粒细胞白血病bcr/abl融合基因的应用研究

目的:探讨使用bcr/abl双色ES探针的荧光原位杂交(fluorescence in-situ hybridization,FISH)应用于慢性粒细胞白血病bcr/abl融合基因检测的意义.方法:使用荧光原位杂交方法对2005年1月至2006年2月本院收治的12例慢性粒细胞白血病患者之骨髓细胞进行检测分析.结果:12例CML均检出bcr/abl基因的存在,其中2例伴ASS基因缺失.结论:使用bcr/abl双色ES探针进行荧光原位杂交能为bcr/abl融合基因的检测提供准确直观的依据.     

筑巢式PCR检测慢性粒细胞白血病bcr/ablm RNA

目的：观察慢性粒细胞性白血病（CML）患者bcr／ablmRNA的表达情况。方法：应用逆转录筑巢式聚合酶链反应（NestedPCR）检测了32例CML患者的bcr／ablmRNA。结果：30例检测到bcr／ablmRNA;其中19例检测到bcrexon3／ablexon2mRNA,7M表达bcrexon2／abl。exon2mRNA．4例同时表达这两种mRNA。结论：NestedPCR是检测CML患者bcr／ablmRNA有效而敏感的方法。     

Ph1染色体及bcr/abl融合基因检测在慢性粒细胞白血病中的诊断意义

目的 探讨Ph1染色体和bcr/abl融合基因检测在慢性粒细胞白血病诊断中的意义.方法 选择28例慢性粒细胞白血病患者和20例缺铁性贫血患者作为研究对象,采用骨髓细胞短期培养法制备染色体、采用RT-PCR法分析bcr/abl融合基因.结果 28例慢性粒细胞白血病患者中,Ph1染色体阳性者25例(89.3%),bcr/abl阳性者26例(92.9%),Ph1和bcr/abl均阳性25例(89.3%),Ph1阴性、bcr/abl阳性1例(3.6%),Ph1和bcr/abl均阴性2例(7.1%).20例缺铁性贫血患者Ph1和bcr/abl均阴性.结论 Ph1染色体、bcr/abl融合基因的检测有助于慢性粒细胞白血病的诊断和鉴别诊断.     

非血缘异基因外周血干细胞移植治疗慢性粒细胞白血病的临床研究

目的确保重庆市首例非血缘异基因外周血干细胞移植(URD-PBSCT)治疗慢性粒细胞白血病成功.方法对接受URD-PBSCT的慢性粒细胞白血病患者移植过程进行总结分析.结果患者造血重建迅速,中性粒细胞>0.5×109/L,血小板>20×109/L的时间分别为 13d、 16d, 17d患者的血型由O型转变为供者的B型,并经STR复检证实患者的性染色体由XY转为供者型的性染色体XX;移植过程中未见GVHD、VOD等严重并发症,骨髓细胞bcr/abl融合基因于 27d检查完全消失, 100d再次复查仍为阴性.结论重庆市首例URD-PBSCT治疗慢性粒细胞白血病患者获得圆满成功,URD-PBSCT可成为某些白血病得以根治的重要手段.     

BCR/ABL癌蛋白片段的表达、纯化及其抗血清的制备

目的　克隆并表达 bcr/ abl融合基因片段 ,并制备其抗血清 .方法　 PCR扩增包含蛋白融合点的 bcr/ abl癌基因片段 ,序列测定后克隆入带有 His标签的原核表达载体 p ET-16 b,转化宿主菌 BL2 1,IPTG诱导表达 ,SDS- PAGE分析表达结果 ,Ni- NTA树脂亲和纯化 ,皮下多点注射免疫小鼠 ,EL ISA确认抗血清的滴度 .结果　 PCR扩增得到大小约 5 2 3bp的目的片段 ,序列测定表明与发表序列完全一致 ;得到了一种新的癌基因 bcr/ abl片段的原核表达载体 p ET- 16 b- bcr/abl,在 BL 2 1中表达可见于 Mr 2 1× 10 3处有一蛋白新生带 ,表达的 BCR/ ABL蛋白免疫小鼠后 ,EL ESA确认抗血清的滴度 >1∶ 2 0 0 0 .结论　成功的克隆、表达了 bcr/ abl融合基因片段 ,并制备了相应的抗血清 .     

伊马替尼治疗慢性粒细胞白血病各期疗效比较及影响因素分析

目的 对比伊马替尼治疗慢性粒细胞白血病(CML)慢性期与进展期的临床疗效及生存情况,探讨相关影响因素.方法 85例CML慢性期、24例加速期及19例急变期患者口服伊马替尼,检测血液学、细胞遗传学及分子学疗效,评估总生存及疾病进展情况并分析相关影响因素,观察其副作用.结果 ①CML慢性期完全血液学缓解率、完全细胞遗传学缓解率、完全分子学缓解率分别为100%、82.4%和21.2%,预计5年总生存率、无疾病进展生存率(PFS)分别为92.1%、84.7%,均明显高于加速期及急变期患者(P＜0.0001).②CML慢性期中初治42例患者完全细胞遗传学缓解率、完全分子学缓解率、5年总生存率及无疾病进展生存率分别为92.9%、26.3%、100%和95.2%,与干扰素治疗失败组比较差异有统计学意义(P＜0.001).③CML慢性期严重血细胞减少明显少于加速期及急变期(P＜0.0001),非血液学副作用均少见且轻微.④多因素分析显示伊马替尼治疗前有干扰索等其他治疗及停药时间长为影响CML慢性期患者获得细胞遗传学缓解、PFS的独立不利因素.结论 CML早期应用伊马替尼疗效佳、安全性好,伊马替尼应作为其一线治疗药物.     

初发慢性髓系白血病bcr/abl融合基因转录子与临床关系的观察

目的　研究初发慢性髓系白血病bcr/abl融合基因转录子类型与临床关系。方法　使用RT PCR对 5 1例初发CML患者进行bcr/abl融合基因转录子检测。结果　b3a2型患者血小板数高于b2a2型患者 ,但b3a2型患者WBC数低于b2a2型患者 (P <0 .0 5 ) ;血红蛋白浓度与b2a2型患者比较无差异 (P >0 .0 5 ) ;b3a2型和b2a2型患者比较AKP和Ph1染色体比例无差异 (P >0 .0 5 ) ;M bcr/abl阳性患者伴m bcr/abl阳性率为 47 0 % ,其中b3a2型患者有m bcr/abl融合基因转录子 14例 ,b2a2型患者有 10例。结论　b3a2型CML患者初发时更易有血小板升高表现 ,但b2a2型患者更易有WBC数升高的表现 ,较多的初发CML患者同时伴有m bcr/abl阳性。     

α干扰素联合化疗治疗CML的分子水平疗效观察

目的：分析ｂｅｒ／ａｂｌ融合基因表达与α干扰素（ＩＦＮα）治疗慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）疗效及预后的关系。方法：应用半定量ＲＴ－ＰＣＲ方法，分析６例α干扰素的ＣＭＬ患者不同时期骨髓细胞ｂｅｒ／ａｂｌ融合基因表达水平。结果；５例患者ｂｅｒ／ａｂｌ融合基因表达水平减低，临床获得持久完全血９液学缓解。结论：半定量ＲＴ－ＰＣＲ有助于α干扰素治疗ＣＭＬ的疗效观察及预后判断。