结核分枝杆菌/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术在肺结核快速诊断中的应用价值

目的探讨Xpert MTB/RIF检测肺结核及利福平耐药性的应用价值。方法收集200例疑似肺结核患者的痰标本,进行痰涂片抗酸染色显微镜镜检、改良罗氏固体培养、比例法药敏试验和Xpert MTB/RIF检测,分析Xpert MTB/RIF检测结核分枝杆菌及其利福平耐药性的敏感度和特异度,与"金标准"进行一致性检验。结果以改良罗氏固体培养为"金标准",Xpert MTB/RIF检测痰标本MTB的敏感度和特异度分别为88.30%和87.74%;以痰涂片抗酸染色法为"金标准",Xpert MTB/RIF检测痰标本MTB的敏感度和特异度分别为88.18%和100.00%;以比例法药敏试验为"金标准",Xpert MTB/RIF检测利福平耐药的敏感度和特异度分别为83.33%和100.00%;Xpert MTB/RIF法和改良罗氏固体培养、痰涂片抗酸染色法、比例法药敏试验均具有较好的一致性(K值分别为0.76、0.87、0.77)。结论 Xpert MTB/RIF在肺结核快速诊断中具有较高的诊断效能,在我国结核病实验室中具有较好的应用前景。     

抗酸涂片与利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测在耐药肺结核诊断中的应用价值

目的 探讨抗酸涂片与利福平耐药实时荧光定量核酸扩增（Xpert MTB/RIF检测在耐药肺结核（PTB）诊断中的应用价值。方法 选取2020年3月至2022年3月福建省漳州市龙海区疾病预防控制中心收治的95例疑似耐药PTB患者作为研究对象。采集患者的纤维支气管镜肺泡灌洗液进行病原菌分离鉴定（阳性标本进行药敏试验）及抗酸涂片与Xpert MTB/RIF检测。比较病原菌分离鉴定和药敏试验、抗酸涂片及Xpert MTB/RIF检测的阳性率,并以病原菌分离鉴定和药敏试验结果为金标准,比较抗酸涂片、Xpert MTB/RIF检测对耐药PTB的诊断价值及与金标准的一致性。结果 95例疑似耐药PTB患者病原菌分离鉴定和药敏试验阳性率为36.84%(35/95),抗酸涂片阳性率为29.47%(28/95),Xpert MTB/RIF检测阳性率为42.11%(40/95),差异有统计学意义（P<0.05）。以病原菌分离鉴定和药敏试验结果为金标准,Xpert MTB/RIF检测的诊断灵敏度、特异度、准确度均高于抗酸涂片,且与金标准的一致性高于抗酸涂片,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 ...     

液体分枝杆菌培养管与利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术检测结核杆菌的阳性检出率及检出时间比较

目的比较采用液体分枝杆菌培养管(MGIT)培养法与利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(XpertMTB/RIF)检测结核杆菌的阳性检出率及检出时间的差异。方法收集2016年7月-2017年4月本院就诊的疑似和治疗后复诊的肺结核患者痰标本共1 146例,其中疑似新发患者痰标本616例,治疗后复诊患者痰标本530例。分别采用液体MGIT培养法和XpertMTB/RIF检测法对所有痰标本进行检测,对2种方法的阳性检出率、检出时间及利福平耐药情况进行比较。结果疑似新发患者痰标本液体MGIT培养法阳性检出率明显低于XpertMTB/RIF检测法,差异有统计学意义(P0.05);疑似新发患者痰标本液体MGIT培养法阳性检出时间大于XpertMTB/RIF检测法;治疗后复诊患者痰标本液体MGIT培养法阳性检出时间亦大于XpertMTB/RIF检测法,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 XpertMTB/RIF较MGIT能够提高结核杆菌的阳性检出率,缩短阳性检出时间,值得在临床检测中使用并推广。     

实时荧光定量核酸扩增技术在结核筛查诊断中的临床应用研究

目的评价实时荧光定量核酸扩增(GeneXpert MTB/RIF)技术对呼吸道标本、组织标本、无菌体液标本等临床常见标本中结核菌和利福平耐药结核菌的筛查诊断效果。方法收集2016年1月-2017年12月解放军总医院的1 015份(来自961例患者)呼吸道标本、组织标本或无菌体液标本等,采用GeneXpert MTB/RIF技术进行结核菌鉴定和耐利福平基因的检测。结果在1 015份标本中,结核菌阳性82份,阳性率为8.08%,痰、肺泡灌洗液、脑脊液、胸腹水、尿、组织等标本中结核菌均有检出;82份结核菌阳性标本中利福平耐药7份,耐药率为8.54%,其中6份探针E未检出,1份探针B未检出。共有515份标本同时送检GeneXpert MTB/RIF和抗酸涂片染色两种方法,其中GeneXpert MTB/RIF阳性率9.51%,抗酸涂片检测阳性率2.72%(P<0.05)。结论 GeneXpert MTB/RIF技术可用于临床常见标本中结核菌和利福平耐药结核菌的筛查诊断,且该方法快速、简便、自动化程度高,有较好的临床应用和推广价值。     

TaqMan-MGB荧光定量PCR快速检测痰结核分枝杆菌异烟肼耐药效果的评价

目的评价通过检测结核分枝杆菌katG基因突变以诊断异烟肼耐药并检测结核分枝杆菌的TaqMan-MGB荧光定量PCR方法。方法收集临床诊断为肺结核病的患者痰样本,用已建立的荧光PCR方法进行检测,与常规痰涂片抗酸染色、分枝杆菌培养和传统比例法药敏试验比较,评价检测结核分枝杆菌敏感性和特异性及异烟肼耐药的特异性和敏感性。统计学分析采用χ2检验,P值<0.05为差异有统计学意义。结果荧光定量PCR共检测186份痰液样本,敏感性为84.47%,特异性为100.00%。在确诊病人的痰液中阳性检出率84.47%,明显高于痰涂片40.99%(χ2=46.44,P<0.01),痰培养40.37%(χ2=47.89,P<0.01),且差异有统计学意义。其中荧光PCR在菌阳痰液中检出率94.44%,涂阴培阴的痰液中检出率75.28%。与常规药敏试验结果比较,培养阳性的61份痰样本的药敏符合率96.72%(59/61),敏感性33.33%(1/3),特异性100.00%(58/58)。结论 TaqMan-MGB荧光定量PCR的方法能特异、灵敏、快速诊断痰液中的结核分枝杆菌及其异烟肼耐药性。     

多色荧光探针的滚环扩增技术检测结核分枝杆菌耐药基因

本研究旨在构建基于核酸滚环扩增（RCA）的简便快速、超灵敏的光学生物传感技术,并将其运用于结核杆菌耐药相关基因的多重检测。本研究在2020年2月至2021年5月期间,于陆军军医大学第一附属医院检验科,针对异烟肼、利福平和链霉素耐药的高频基因突变位点katG315（AGC?ACC）、rpoB531（CAC?TAC）和rp...     

实时荧光定量PCR检测耐药结核分枝杆菌中耐药相关基因whiB7的表达

目的探讨结核分枝杆菌耐药性与whiB7基因表达水平之间的关系。方法以耐受利福平、异烟肼、链霉素、乙胺丁醇和氟喹诺酮的结核分枝杆菌临床分离株为研究对象,利用实时定量PCR的方法,检测药物刺激结核分枝杆菌后whiB7基因表达水平的变化。结果除利福平刺激相应的菌株后,whiB7基因的表达水平变化不明显外,其余药物的刺激均会引起结核分枝杆菌耐药株的whiB7基因表达水平发生显著变化。结论结核分枝杆菌的whiB7基因是对多种抗生素刺激发生反应的基因,推测whiB7的表达参与结核分枝杆菌的耐药过程。     

实时荧光定量PCR技术快速检测麻疹病毒核酸的研究

目的建立以特异性荧光探针为特点的TaqMan荧光定量RT-PCR方法,对麻疹病毒的核酸进行检测.方法对设计的引物与探针进行了筛选与条件优化,克服了常规RT-PCR定性检测的不足.结果具有对麻疹病毒检测的高度特异性与准确性,检测的敏感度可达0.1 TCID50,从病毒核酸提取至检测完成仅需3个多小时,操作简便,而且大大减少了常规PCR扩增产物的污染机会.结论采用该方法对麻疹病毒与相关的临床样本进行了检测,均获得了满意的结果,为麻疹病毒的分子生物学检测,提供了一种新方法.     

实时荧光核酸恒温扩增技术在淋球菌检测中的应用评价

目的评价实时核酸恒温扩增检测技术(SAT)在淋球菌检测中的应用价值。方法对204例疑似淋球菌感染患者的生殖道拭子分别进行SAT、PCR法及培养法检测,同时对其尿液标本进行SAT检测。分别对生殖道拭子和尿液标本SAT检测结果与生殖道拭子PCR法和培养法检测结果进行比较分析。结果 204例疑似患者拭子标本中,SAT法检出阳性90例,高于培养法而略低于PCR法,但阳性率差异均无统计学意义(P0.05)。其中有3例患者拭子标本SAT检测阳性而尿液标本检测为阴性,符合率为98.53%,两者阳性率差异无统计学意义(P0.05)。以淋球菌培养为金标准,SAT检测拭子标本的敏感度为100%,特异度为91.94%;SAT检测尿液的敏感度为98.77%,特异度为94.31%。结论SAT技术检测拭子及尿液标本中的淋球菌与生殖道拭子PCR法和培养法效果相当,且尿液标本SAT检测作为一种非侵入性采样方法有望替代生殖道拭子标本检测。     

2种快速检测技术在结核分枝杆菌利福平耐药性检测中的应用评价

目的探讨噬菌体扩增技术和基因芯片技术在结核分枝杆菌(MTB)利福平耐药性检测中的应用价值。方法应用噬菌体法和基因芯片法直接检测380份痰样本,分析MTB对利福平的耐药性,同时对痰样本进行BACTEC MGIT 960培养,并用培养法对培养菌株做药敏试验,对3种方法检测的药敏结果进行比较。涂片阴性培养阳性样本,用临床分离株进行以上3种方法利福平耐药性检测并比较结果。对与培养法结果不一致的样本进行DNA测序。结果以培养法为参考方法,噬菌体法的综合灵敏度、特异度、准确度分别为87.8%(36/41)、94.1%(95/101)、92.3%(131/142);基因芯片法的综合灵敏度、特异度、准确度分别为82.9%(34/41)、96.0%(97/101)、92.3%(131/142),2种检测方法的综合灵敏度、特异度和准确度差异均无统计学意义(χ2=0.391、χ2=0.421、χ2=0,P0.05)。结论本次研究显示噬菌体法和基因芯片法检测结核分枝杆菌利福平耐药性均有较高的灵敏度、特异度和准确度,具有准确、快速的特点,在结核病快速诊疗领域有较好的应用前景。     

结核分枝杆菌利福平耐药基因突变的研究

目的评价检测rpoB基因突变在结核分枝杆菌耐利福平（I肝）耐药性测定中的应用价值。方法采用DNA序列分析法和聚合酶链反应-单链构象多态性（PER—SSCP）法对91株结核分枝杆菌临床分离株（其中药物敏感株35株，耐RFP或含耐RFP耐多药株56株）rpoB基因核心区域的突变情况进行检测。结果以结核分枝杆菌H37RV为对照，所有35株药物敏感株的rpoB基因均无突变，用DNA序列分析方法检测56株耐药株中53株发生突变，敏感性为94．6％（53／56），其中最常见的突变位点是531位丝氨酸和526位组氨酸。PER—SSCP检测56株耐RFP分离株中，52株rpoB基因SSCP图谱异常，其敏感性为92．9％（52／56）。结论DNA序列分析对判断结核分枝杆菌耐利福平非常有价值。PER—SSCP可初步筛选结核分枝杆菌RFP耐药性。     

半巢式全自动实时荧光定量核酸扩增检测技术质量控制结果分析

目的通过开展Xpert MTB/RIF技术质量控制,分析存在的问题,提高检测水平。方法向各县级实验室发放质控品,每套测试样品含10份人工痰样本,每个实验室依照标准化操作程序检测一套样本,汇总质控结果并与标准结果比对。结果连续3年各实验室测试成功率为99.8%,结核杆菌(MTB)检测阳性符合率为99.8%,阴性符合率为98.4%,总符合率为99.5%;利福平(RIF)检测敏感符合率为99.3%,耐药符合率为99.7%,总符合率为99.5%。结论各地Xpert MTB/RIF检测质控结果良好,检测能力保持在较高水平。     

2种核酸扩增荧光方法用于临床痰标本的结核分枝杆菌检测

目的 评价核酸恒温扩增实时荧光法与荧光定量PCR法检测临床痰标本结核分枝杆菌的效果.方法 收集疑似结核病患者的痰标本,分别进行痰标本染色显微镜检查、分离培养菌株鉴定、核酸恒温扩增实时荧光法及荧光定量PCR检测,以培养为金标准获得2种方法的灵敏度和特异性,并比较2种方法的检测效能.结果 收集322例疑似结核病患者样本,经...     

实时荧光定量PCR技术在结核分枝杆菌研究中的应用

<正>核酸扩增技术特别是聚合酶链式反应(polymerase chainreaction,PCR)可对不同来源的核酸进行定性检测,但需在PCR反应终止后对PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳,这不仅无法准确定量,而且还容易发生交叉污染,产生假阳性。     

青海地区结核分枝杆菌快速检测及耐药特征研究

目的探讨青海地区耐药结核分枝杆菌(MTB)的相关基因型特点,为开展耐药结核病快速诊断提供依据。方法选择2011年6月-2012年12月西宁市区、农村和农牧区结核病患者的MTB标本各300份,采用MTB微量最低抑菌浓度(MIC)法对耐药结核病进行快速诊断,同时用传统的罗氏药敏法作为对照,采用测序方法分析耐药MTB在不同人群中的分布率,了解青海地区MTB耐药的基因突变特征,基因突变分布和主要流行突变位点。结果西宁市区与农牧区单一耐药及多耐药MTB耐药率比较,牧区明显高于西宁市区和农村,差异有统计学意义(P<0.05);rpoB、katG、gyrA突变率西宁市区分别为52.83%、52.83%、37.74%,农村分别为70.97%、62.90%、45.16%,牧区分别为92.55%、86.17%、81.91%,牧区的基因突变率与西宁市区、农村比较,差异有统计学意义(P<0.05);利福平最常见的突变位点为drpoB(531)占43.66%,异烟肼最常见的突变位点为katG(315),占61.27%;氧氟沙星最常见的突变位点为gyrA占59.52%。结论对青海地区耐药结核分枝杆菌的耐药特征有了进一步了解,为临床医师治疗结核病合理选药提供了依据。     

GeneXpertMTB/RIF实时荧光定量PCR系统在肺结核诊断及利福平耐药检测中的应用

目的探讨GeneXpertMTB/RIF系统在肺结核的诊断及利福平耐药检测中的价值。方法选取246例肺结核患者痰标本,分别进行GeneXpertMTB/RIF系统、BACTEC MGIT 320全自动分枝杆菌快速培养及药敏试验和涂片抗酸染色镜检,对比分析结果。结果 246例肺结核患者中,GeneXpertMTB/RIF系统、MGIT 320培养和涂片抗酸染色镜检的阳性率分别为49.6%、43.1%和28.5%;在106例肺结核确诊患者中,3者阳性率分别为100.0%、100.0%和66.0%;在140例肺结核临床诊断患者中,3者阳性率分别为11.4%、0.0%和0.0%。在106例GeneXpertMTB/RIF系统检测阳性且MGIT 320培养阳性并鉴定为MTB的菌株中,GeneXpertMTB/RIF系统检测利福平耐药27例,MGIT 320液体药敏检测利福平耐药28例。结论 GeneXpertMTB/RIF系统在结核病的早期诊断和治疗、疗效观察等方面具有重要价值。     

快速检测耐药结核分枝杆菌的方法学进展

一度被认为可以控制并在全球消失菌的结核病,近况不容乐观,甚至在全球部分地区出现了结核病危机,尤其是抗结核药的耐药问题日益严重,导致抗结核病治疗的有效率下降。目前快速的结核分枝杆菌耐药检测方法,改变了传统药敏检测方法耗时长、操作繁琐、不利于疾病快速诊断治疗的状况。其中重点发展了表型耐药检测和基因型耐药检测。每种检测方法各有特点,也存在着不同的缺陷。本综述将介绍几种快速结核分枝杆菌耐药检测技术。不同方法的选择和联合运用可能会提高耐药菌的检出率。     

结核分枝杆菌荧光定量PCR检测方法建立

目的 探讨结核分枝杆菌实时定量检测方法并进行评价.方法针对结核杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)16S rDNA基因设计引物,应用SYBR Green I建立荧光定量PCR( FQ-PCR)反应体系;提取Mtb基因组DNA,PCR扩增16S rDNA片段,构建重组质粒pMD-TB16S;检测11份肺结核患者痰标本;以甲型链球菌、大肠杆菌等基因组DNA作对照,检验方法特异性,对同一份Mtb DNA模板进行批内和批间检测,计算变异系数(CV).结果靶向Mtb 16S rDNA基因引物能够特异扩增Mtb 16S rDNA基因,对照组细菌基因未见扩增,灵敏度为(Mtb基因组DNA) 1.2 pg/μL,即(38.9 +3.54)拷贝/μL的16S rDNA基因,批内和批间Ct值变异系数分别为0.27％和1.26％.结论以16S rDNA为靶基因的FQ-PCR技术,能够对Mtb进行快速、敏感而特异的定量检测.     

线性探针检测技术对痰标本中耐药结核分枝杆菌快速检测的应用评价

目的 评价线性探针检测技术(LPAs)直接从痰标本中检测结核分枝杆菌复合群及其对耐多药结核病的快速检测。方法 连续收取193例临床涂片抗酸染色阳性的痰标本,直接用LPAs法从痰标本中进行结核分枝杆菌复合群及其对利福平和异烟肼耐药性的检测,结果与MGIT 960系统药物敏感性试验以及利福平、异烟肼耐药相关基因rpoB、katG、inhA和ahpC的基因测序结果进行比较,评价线性探针检测技术从痰标本中检测耐药结核分枝杆菌的灵敏度、特异度和符合率。统计学分析采用kappa检验。结果 LPAs法对涂阳痰标本结核分枝杆菌复合群检测的灵敏度为100.0%,耐利福平、耐异烟肼和耐多药结核分枝杆菌复合群检测的灵敏度分别为96.0%(48/50)、92.8%(64/69)和90.0%(45/50),特异度分别为99.3%(142/143)、100.0%(124/124)和99.3%(142/143),符合率分别为98.4%(190/193)、97.4%(188/193)和96.9%(187/193)。结论 LPAs法能够直接从涂阳痰标本中检测耐多药结核分枝杆菌,对耐利福平和耐异烟肼菌株具有较高的灵敏度和特异度,与MGIT 960系统药物敏感性试验结果的一致性较好,能够明显缩短从样本接收到得到药物敏感性试验结果的报告周期,为临床准确、快速地诊断耐多药结核病提供可靠的实验室依据,有利于耐药结核病的早期诊断。     

结核分枝杆菌实验室耐药诊断技术进展

结核病是由结核分枝杆菌感染引起的一种严重危害人类健康的传染病,随着抗结核药物的不断使用,耐药菌株不断增多,使得结核病流行的控制变得越来越严峻。耐药结核患者治疗方案的制定和改变依赖于实验室药敏检测的数据。传统的检测方法由于报告时间太长,无法及时给临床提供可靠的信息。因此,对于快速准确检测技术的需求正越来越迫切,新型的结核菌药敏快速检测技术将有很大的发展前景。