Cyscope~荧光显微镜技术用于结核病检测的临床应用评价

目的评价Cyscope荧光显微镜技术用于结核病检测的临床诊断价值。方法收集拟诊肺结核病人痰标本,分别用金胺-罗丹明染色发光二极管Cyscope荧光显微镜涂片检查(LED荧光法)、萋尼氏抗酸染色明场显微镜涂片检查(萋尼法)、改良罗氏培养基培养(罗氏培养法)和BACTEC MGIT960快速培养系统培养(BACTEC MGIT960法)进行检测。将LED荧光法与其他3种方法的检测结果进行比较。结果本研究共收集、检测拟诊肺结核病病人痰标本106份。LED荧光法、萋尼法、罗氏培养法和BACTECMGIT960法的阳性检出率分别为31.13%、26.42%、39.62%和45.28%。以罗氏法为金标准,LED荧光法与萋尼法的灵敏度分别为69.05%和64.29%,χ2值为0.17,P值为0.687,差异无统计学意义,而特异性分别为95.08%和100.00%。以BACTEC MGIT960法为金标准,LED荧光法与萋尼法的灵敏度分别为60.42%和54.17%,特异性分别为93.10%和96.55%,χ2值分别为0.80和0.17,P值分别为0.375和0.687,差异均无统计学意义。LED荧光法与罗氏培养法和BACTEC MGIT960法的一致率分别为84.47%和78.30%。结论 Cyscope荧光法较准确,并且镜检敏感、快速,是目前诊断结核病的一种较为理想的检测方法。     

发光二极管荧光适配器在基层实验室中检测分杆菌的效果评价

目的 评价发光二极管荧光适配器(LEDa)在基层实验室中的检测分枝杆菌的效果.方法 收集来北京朝阳结核病门诊部初次就诊的疑似肺结核病患者痰标本,每份标本涂3张片,分别使用萋-尼法染色镜检(Z-N法)及金胺O法染色发光二极管荧光显微镜(LED)镜检和LEDa镜检.比较3种镜检方法在阳性检出率、敏感度、特异度及读片时间等方面的差异.结果 LEDa法的阳性涂片检出率、敏感度和特异度分别为30.54％、61.42％和97.85％,阳性检出率和敏感度较Z-N法(26.22％,53.46％)分别提高4.32％、7.96％,差异有统计学意义(P＜0.05),特异度较Z-N法(98.84％)降低0.99％,差异无统计学意义(P＞0.05).不同结果读片时间LEDa,差异均有统计学意义(P均＜0.05).结论 基层实验室使用LEDa较Z-N法能够提高分枝杆菌涂片镜检的检出率,且读片时间明显缩短,具有较好的诊断效能.     

荧光定量PCR在结核分枝杆菌检测中的应用价值

目的比较荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)与抗酸染色、改良罗氏培养法检测结核分枝杆菌的灵敏度和特异性,探讨FQ-PCR检测痰标本中结核分枝杆菌的应用价值。方法对311例临床确诊的肺结核病患者和40例非结核呼吸系统疾病患者的痰标本应用FQ-PCR法、痰涂片抗酸染色法、改良罗氏培养法检测结核分枝杆菌。结果FQ-PCR、抗酸染色法、改良罗氏培养法检测结核分枝杆菌的阳性率分别为47.0%(146/311)、28.3%(88/311)、35.4%(110/311),特异性分别为100.0%、100.0%、95.2%,以FQ-PCR检测的阳性率最高。结论FQ-PCR是一种快速、敏感性高、特异性强的结核分枝杆菌辅助诊断方法,在临床上有重要应用价值。     

实时荧光定量PCR技术在结核分枝杆菌研究中的应用

<正>核酸扩增技术特别是聚合酶链式反应(polymerase chainreaction,PCR)可对不同来源的核酸进行定性检测,但需在PCR反应终止后对PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳,这不仅无法准确定量,而且还容易发生交叉污染,产生假阳性。     

结核分枝杆菌荧光判读药敏试验的方法

目的 探讨结核分枝杆菌荧光判读药敏试验的方法,为临床提供有效检测手段.方法 采用MGIT液体培养结核分枝杆菌,利用结核分枝杆菌阳性的MGIT液体培养管作为原始管,进行一线抗结核药物利福平、异烟肼的药敏检测,与传统L-J培养比例法药敏检测结果比较.结果 148份标本结核分枝杆菌固体罗氏培养阳性检出率41.8％,MGIT液体培养阳性检出率48.0％,液体培养阳性检出率比固体培养高6.2％;45例液体药敏与比例法检测的药敏结果基本一致,平均8.4d报告药敏检测结果,与传统L-J培养比例法药敏检测28 d报告结果比较,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 荧光判读药敏试验法检测结核分枝杆菌药敏试验,具有快速、准确、方便等优点,可应用于临床的一种有效检测手段,值得推广.     

结核分枝杆菌实验室耐药诊断技术进展

结核病是由结核分枝杆菌感染引起的一种严重危害人类健康的传染病,随着抗结核药物的不断使用,耐药菌株不断增多,使得结核病流行的控制变得越来越严峻。耐药结核患者治疗方案的制定和改变依赖于实验室药敏检测的数据。传统的检测方法由于报告时间太长,无法及时给临床提供可靠的信息。因此,对于快速准确检测技术的需求正越来越迫切,新型的结核菌药敏快速检测技术将有很大的发展前景。     

显微镜观察药物敏感性技术快速检测结核分枝杆菌研究

目的 建立显微镜观察药物敏感性(MODS)技术并应用其进行结核分枝杆菌(MTB)的快速检测.方法 用24孔细胞培养板液体培养方法建立MODS技术,并对其方法学进行探讨和用于MTB及非结核分枝杆菌(NMT)的检测,同时与传统罗氏培养和鉴定法结果进行比较.结果 菌液浓度为3×10~3 CFU/ml时运用MODS技术检测判读结果时间为7 d;4种NMT标准株(草分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌、龟分枝杆菌、海分枝杆菌)在液体培养基中观察到卫索状结构生长,镜下难于和MTB形成的特征索状结构区分;以对硝基苯甲酸800μg/ml、噻吩-2-羧酸肼2.5μg/ml为检测条件,能提高检测的正确率;临床分离株检测结果表明,该法与传统罗氏培养和鉴定法结果符合率为97.0%,如以罗氏培养、鉴定法为判断标准,则MODS检测MTB的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值、正确性分别为95.7%,100.0%、100.0%、99.9%、97.0%.结论 MODS技术检测MTB与传统罗氏培养和鉴定法结果符合率较高,且具有快速、操作简便、价廉等优点,可作为MTB快速检测的新方法之一.     

结核分枝杆菌的临床和实验室诊断

结核病是危及我国人民健康的重大传染病之一,由于临床表现不典型,加之潜伏性结核感染以及结核耐药问题,导致我国结核病疫情防控形势依然严峻。对结核病及时准确的早期诊断是降低结核病发病率的有效措施。近年来,随着生物技术、分子生物学和免疫学的快速发展,极大地缩短了细菌学检查和结核菌药敏试验的时间,在此,阐述结核分枝杆菌的临床和实验室诊断最新研究进展,以提高临床诊断的敏感度和特异度,以更大范围地确定统一的诊断标准。     

结核分枝杆菌实验室诊断技术及其研究进展

结核病是严重危害人类健康的全球性重大传染病,早期、快速和准确的诊断是结核病传染得到有效控制的关键。本文从传统的细菌学检测、免疫学检测、分子生物学检测和耐药性诊断等方面对结核分枝杆菌的实验室诊断技术及其最新进展作以概述。     

结核分枝杆菌的实验室检查

<正>结核病是目前严重威胁人类健康的重大传染性疾病之一,但如果能早期诊断和合理用药,绝大多数结核病是可以治愈的。早期发现结核病患者,既有利于及早控制传染源,切断传播途径,又有利于早期治疗感染者,提     

不同发光二极管对青蒜苗营养品质的影响

<正>大蒜(Allium sativum L.)属百合科葱属2年生草本植物,以鳞茎、蒜薹、嫩叶为主要产品。其产品营养丰富,味道鲜美,能增进食欲,并有杀菌作用。青蒜苗鲜嫩可口,兼可调味,深受消费者青睐,生长时间短,可提高土地利用率。随     

荧光定量PCR技术检测结核杆菌临床应用分析

目的 探讨荧光定量PCR技术在检测结核杆菌的临床应用价值. 方法 将本院临床诊断确诊为肺结核的68例患者为研究对象,采用荧光PCR技术测定两组痰液及外周血中的结核杆菌,以临床诊断结果为金标准,采用x2检验对结果进行分析比较. 结果 68例结核病患者中痰涂片、痰定量PCR、外周血定量PCR检测的阳性率为14.7％、41.2％、44.1％,定量PCR检测的阳性率显著高于痰涂片(P＜0.05).痰涂片阴性的58例患者中痰及外周血定量PCR检测阳性率为31.0％、41.3％.痰及外周血定量PCR配对检测两种标本同时检测的符合率为44.1％. 结论 荧光PCR技术检测结核杆菌的效果要显著优于传统涂片,其可证实、鉴定涂片阳性结果,同时对痰和外周血进行定量PCR检测,可.增强互补作用,提高检测的准确率.     

荧光判读仪快速培养结核分枝杆菌方法的应用效果评价

目的评价荧光判读仪对结核分枝杆菌快速培养法在结核病诊断中的应用价值。探讨建立一种经济、快速、有效的结核菌的培养方法。方法对43例活动性肺结核确诊病人的痰液进行快速结核分枝杆菌培养,同时以改良的罗氏培养基对其进行结核分杆杆菌慢速培养作对照。对这2种方法所用时间、培养阳性率进行比较。结果采用荧光判读仪快速培养法比罗氏培养法出结果提前15d左右,培养阳性率高8.7%。结论荧光判读仪测定法比常规结核分支杆菌培养方法用时短,阳性率高,相对于其他快速培养经济实用,适合基层结核病院使用推广,应用。     

痰模型涂片法检测抗酸杆菌的结果分析

[目的]评价初诊活动性肺结核患者痰模型涂片法检测抗酸杆菌的应用效果。[方法]2010年1月至2012年6月,在泰安市的宁阳县、新泰市和泰山区,分别收集初诊活动性肺结核患者（每例当日即时痰、夜间痰、次日晨痰各1份）的痰标本780份（应用一组）、816份（应用二组）、1089份（研究组）,应用模型法涂片后镜检抗酸杆菌。[结果]痰标本涂片抗酸杆菌阳性检出率,应用一组、应用二组、研究组分别为29．74％、28．92％、31．68％（P〉0．05）;涂片痰细胞合格率分别为94．10％、94．98％、94．21％,痰膜大小合格率分别为98．72％、99．14％、98．99％,厚薄合格率分别为95．64％、95．22％、96．14％、染色合格率分别为93．72％、95．10％、94．49％,痰膜脱落合格率分别为97．18％、98．28％、97．43％,差异均无统计学意义（P〉0．05）。从3组分别抽检50、55、80张痰涂片,原始结果与复检结果的阳性符合率、阴性符合率均为100．00％。[结论]肺结核病人痰模型法涂片后检测抗酸杆菌,制片质量较高,检查结果较为准确。     

反向斑点杂交技术在结核分枝杆菌耐药性检测中的应用研究

目的利用反向斑点杂交技术，建立结核分枝杆菌对利福平（RFP）、异烟肼（INH）、链霉素（SM）和乙胺丁醇（EMB）耐药相关基因突变的快速检测方法。方法根据结核分枝杆菌标准株H37Rv序列，自行设计针对rpoB、katG、inhA、rpsL和embB基因中常见耐药突变区的系列寡核苷酸探针，制成膜芯片，并对64例结核分枝杆菌临床株的基因突变情况进行检测。结果在36株RFP耐药菌中，有32株被检出在rpoB基因上发生突变，突变检出率为88．89％（32／36）；在39株INH耐药菌中，有30株被检出在katG或inhA基因上发生基因突变或缺失，检出率为76．92％（30／39）；在34株SM耐药菌中，有25株被检出在rpsL基因分析部位发生突变，检出率为73．5％（25／34）；在32株EMB耐’药菌中，有19株在embB基因分析部位发生突变，检出率为59．4％（19／32）。膜芯片检出的突变与基因测序结果一致。结论用膜芯片检测结核分枝杆菌对利福平（RFP）、异烟肼（INH）、链霉素（SM）和乙胺丁醇（EMB）四种主要一线抗结核药的耐药性，具有较高的特异性和敏感性，可作为常规药敏方法的补充，用于指导开展早期、有效的临床化疗。     

用DNA芯片检测结核分枝杆菌耐利福平基因突变的初步研究

目的研制一种新型DNA芯片，用于快速检测结核分枝杆菌耐利福平rpoB基因突变。方法根据结核分枝杆菌rpoB基因序列设计探针并制作DNA芯片，PCR掺入法荧光标记根据结核分枝杆菌rpoB基因突变热点的目的片断，与DNA芯片杂交，同时以DNA测序法为对照。结果18株结核分枝杆菌临床分离株中，1株敏感株DNA芯片杂交结果与标准株完全相同；17株耐RFP临床分离株中有17株检测到rpoB基因突变，其中14株单位点突变，1株511和516位双位点突变，与测序结果完全一致。另有两株为517和518、526和517位双位点突变，因为芯片上未点517位突变的探针，所以只检测到518和526位的突变，该突变与测序结果完全一致、结论用DNA芯片可快速、特异地检测出大多数结核分枝杆菌耐利福平分离株的rpoB基因突变，可用于临床耐药性的检测，指导临床用药。     

金华地区结核分枝杆菌耐药谱变化分析

[目的]探讨金华地区1980—1986年(A年段)和1999--2003年(B年段)结核菌耐药谱的变化。[方法]对两个年段1300例住院病人按《全国结核病细菌学检验规程》的要求,用改良罗氏法进行痰结核菌培养、菌种鉴定和药物敏感性试验。[结果]两个年段结核菌耐药谱变化的特征：结核菌总耐药率下降,耐利福平跃居首位,耐多药率和中老年肺结核耐药率均呈上升趋势,其中以耐多药率升高为甚。[结论]我市B年段结核菌总耐药率比A年段呈下降态势,但与全国比较还处于较高水平,尤其值得警示的是耐多药现象相当严重。     

结核分枝杆菌PE35基因真核表达载体的构建及其表达

目的获得带FLAG标签的结核分枝杆菌PE35的真核表达载体,并在293T细胞中检测其表达。方法用PCR方法从质粒上获得PE35基因全长,克隆到pCDNA3-FLAG真核表达载体上;用脂质体介导的基因瞬时转染法,将构建正确的表达载体转染293T细胞;Western-blot法检测细胞中的FLAG融合蛋白的表达。结果酶切鉴定和DNA序列分析显示构建了正确的FLAG-PE35真核表达载体,并能在真核细胞中表达相对分子量大小相符的重组蛋白。结论成功构建了FLAG-PE35真核表达载体,并在真核细胞中得到表达。为研究PE35蛋白在结核分枝杆菌中的功能研究奠定了基础。     

应用MLVA技术对吉林省294株结核分枝杆菌分型分析

目的初步探讨利用VNTR（variable number of tandem repeat）技术对吉林省294株结核分枝杆菌分型的分布特征。方法采用多位点串联重复序列（MLVA）分型方法初步选取13个分型效果较好的VNTR基因位点,采用聚合酶链反应（PCR）和琼脂糖凝胶电泳,通过BioNumerics（Versiort3．0）软件进行处理,分析吉林省耐药结核分枝杆菌的DNA多态性。结果共对294株结核分枝杆菌的13个VNTR位点进行了检测,根据这些菌株的指纹多态性特征,主要分成13个型,其中占据主要的前三型分别为I型,占81．6％（240／294）,二型占2．1％（6／294）,三型占1．7％（5／294）,由此可以看出本次实验菌株除I型以外,其他菌株基本呈散在分布。结论分析表明吉林省结核分枝杆菌以I型菌株为主,应加强此型菌株流行的监控及研究。     

71株浙江省结核分枝杆菌临床分离株MLVA基因分型研究

目的初步探讨浙江省结核分枝杆菌的数目可变串联重复序列（VNTR）的分型及分布特征。方法随机选取浙江省结核分枝杆菌临床分离菌株，常规培养，收集菌体，提取基因组DNA，采用聚合酶链反应（PCR）分别对VNTR位点进行检测分析，基因分型聚类分析采用BioNumerics软件。结果对71株结核分枝杆菌临床分离株的15个VNTR位点进行检测。结果显示明显的基因多态性。经基因聚类分析，可分4个基因群（I群、Ⅱ群、Ⅲ群、Ⅳ群），58个基因型。分别为I群占8．5％，含5个基因型，Ⅱ群占18．3％，含13个基因型，Ⅲ群占70．4％，含38个基因型，Ⅳ群占2．8％，含2个基因型。结论初步证实浙江省结核分枝杆菌VNTRs基因存在明显的多态性，至少存在4个VNTR型，主要流行型为Ⅲ型。