PCNA和bcl-2在翼状胬肉成纤维细胞中的表达及蝮蛇抗栓酶的影响

目的研究增殖细胞核杭原(PCNA)和bcl-2在人翼状胬肉成纤维细胞(HPF)中的表达以及蝮蛇抗栓酶(AF)对二者表达的影响。方法应用免疫组织化学方法检测体外培养的第3~6代人翼状胬肉成纤维细胞的PCNA和bcl-2表达情况以及用AF处理HPF后PCNA和bcl-1的表达情况。结果未经任何处理的HPF的PCNA阳性表达率为(60·28±0·37)%;bcl-2阳性表达率为(83·33±1·56)%。用不同含量AF(0·016、0·04和0·1U/ml)处理HPF48h后,HPF的PCNA和bcl-2均有不同程度下降,以PCNA阳性表达率下降为明显,经统计学分析,均有显著统计学意义(P<0·01)。结论体外培养的HPF有较高的PCNA阳性表达及bcl-2阳性表达。AF能抑制PCNA和bcl-2在HPF上的表达。     

Avastin对翼状胬肉成纤维细胞增殖的影响

目的　评价Ａｖａｓｔｉｎ（贝伐单抗）在体外对翼状胬肉成纤维细胞的增殖抑制作用以及细胞毒性。方法　通过不同浓度Ａｖａｓｔｉｎ（０．２５ｇ?Ｌ－１、０．５０ｇ?Ｌ－１、１．００ｇ?Ｌ－１、１．５０ｇ?Ｌ－１、２．５０ｇ?Ｌ－１）处理人翼状胬肉成纤维细胞１２ｈ、２４ｈ、４８ｈ、７２ｈ,观察成纤维细胞的增殖抑制、药物细胞毒性以及凋亡蛋白的表达。ＷＳＴ-１试剂检测细胞增殖,ＬＤＨ试剂盒检测细胞毒性,Ｗｅｓｔ-ｅｒｎｂｌｏｔ方法检测增殖蛋白以及凋亡蛋白的表达。结果　４８ｈ及７２ｈＡｖａｓｔｉｎ组与正常组相比光密度（ＯＤ）值差异有统计学意义（Ｐ＝０．０３４、Ｐ＝０．０１６）。与１２ｈ相比,０．２５ｇ?Ｌ－１Ａｖａｓｔｉｎ组及０．５０ｇ?Ｌ－１Ａｖａｓｔｉｎ组作用２４ｈ、４８ｈ、７２ｈ后细胞增殖抑制率均无明显提高（均为Ｐ＞０．０５）,１．５０ｇ?Ｌ－１Ａｖａｓｔｉｎ组及２．５０ｇ?Ｌ－１Ａｖａｓｔｉｎ组作用４８ｈ、７２ｈ后细胞增殖抑制率均明显提高（均为Ｐ＜０．０５）。与０．２５ｇ?Ｌ－１Ａｖａｓｔｉｎ组相比,０．５０ｇ?Ｌ－１Ａｖａｓｔｉｎ组在各个时间点（除１２ｈ外）细胞增殖抑制率均无明显提高（均为Ｐ＞０．０５）,１．５０ｇ?Ｌ－１Ａｖａｓｔｉｎ组、２．５０ｇ?Ｌ－１Ａｖａｓｔｉｎ组在各个时间点抑制率均明显提高（均为Ｐ＜０．０５）。Ａｖａｓｔｉｎ各浓度组与ＬＤＨ最大释放组（加入裂解酶）对翼状胬肉成纤维细胞ＬＤＨ释放率差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）,各浓度组之间差异均无统计学意义（均为Ｐ＞０．０５）。Ａｖａｓｔｉｎ可抑制ｐ-ＣｙｃｌｉｎＤ１表达,促进Ｃａｓｐａｓｅ３的表达,与细胞对照组相比差异均具有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。结论　Ａｖａｓｔｉｎ可以通过抑制ｐ-ＣｙｃｌｉｎＤ１以及促进Ｃａｓｐａｓｅ３的表达抑制翼状胬肉成纤维细胞的增殖,但无细胞毒性,进一步证实了该药物的安全有效性。     

丝裂霉素C抗人翼状胬肉成纤维细胞增殖的实验研究

目的：评价丝裂霉素C（MMC）对人翼状胬肉成纤维细胞（HPF）增殖的影响。方法：体外培养HPF并传5－8代,分别加入10^5,10^4,10^3,10^2,10和1μg/L不同质量浓度的MMC,对照组加入磷酸盐缓冲液（PBS）,48h后用噻唑兰（MTT）比色法在酶标仪上测吸光度A, 计算各质量浓度下HPF的净抑制率。结果：实验组与对照组A值比较有显著性差异（P＜0.05）,质量浓度在10^2μg／L以上尤甚（P＜0.01）。MMC对HPF增殖的抑制率与其药液质量浓度呈正相关。结论：MMC具有明显抗HPF增殖作用,并与用药质量浓度呈良好的量效关系。     

重组人干扰素α1b滴眼液对体外培养翼状胬肉成纤维细胞增殖的影响

目的：观察重组人干扰素α1b滴眼液对体外培养翼状胬肉（初发、复发）成纤维细胞增殖的影响，寻找辅助治疗翼状胬肉和预防翼状胬肉复发的药物。方法：将初发、复发翼状胬肉成纤维细胞行原代和传代培养；用MTT比色法测定重组人干扰素α1b滴眼液对体外培养初发、复发翼状胬肉成纤维细胞增殖的作用；采用免疫组化法检测重组人干扰素α1b滴眼液对体外培养初、复发翼状胬肉成纤维细胞的增殖细胞核抗原（PCNA）表达的影响。结果：重组人干扰素α1b滴眼液与对照组相比，对初、复翼状胬肉成纤维细胞的增殖影响具有统计上的差异，对细胞的增殖具有抑制作用，同时重组人干扰素α1b滴眼液对初、复发翼状胬肉成纤维细胞PCNA的表达具有抑制作用。结论；重组人干扰素α1b滴眼液作为一种成品滴眼液对初、复发翼状胬肉成纤维细胞的增殖具有明显的抑制作用，可望用于临床上对该疾病治疗。     

丁酸钠对翼状胬肉成纤维细胞增殖的抑制作用

目的 探讨丁酸钠（sodium butyrate．NaB）对体外培养的人翼状胬肉成纤维细胞（human pterygium fibroblasts，HPFs）的抗增殖作用。方法 翼状胬肉成纤维细胞原代、传代培养，取3-5代细胞进行实验。分别加入1．25、2．5、5．0和10．0mmol／L的NaB溶液各作用12、24、48、72h，同时以DMEM培养液为对照．以噻唑蓝比色法（MTT）在酶标仪上检测吸光度．计算出各时间段各浓度NaB对HPFs的增殖抑制影响；分别加入0、1．25、2．5、5．0和10．0mmol／L的NaB溶液作用48h，用细胞凋亡检测试剂盒（POD）检测凋亡细胞：流式细胞仪检测NaB对HPFs细胞周期及细胞凋亡的影响。结果 MTT结果显示．NaB为1．25mmol／L组各时间段对HPFs的增殖无明显抑制作用（P〉0．05），NaB≥2．5mmol／L作用12h后开始抑制HPFs生长（P〈0．05），10．0mmol／L组抑制率可达41．35％．随着时间的延长．各浓度组的抑制作用明显增强，至72h，各组的抑制率分别为31．67％、47．96％、63．20％；POD法检测显示．经不同浓度NaB作用48h后HPFs产生凋亡形态学变化．对照组及1．25mmol／L实验组未见明显凋亡细胞：2．5mmol／L组可以观察到少量凋亡细胞．5mmol／L组可见明显凋亡细胞．10mmol／L可见凋亡细胞及少量坏死细胞；流式细胞仪检测发现，HPFs经1．25、2．5、5．0和10．0mmol／L的NaB处理48h后．G0／G1期细胞群比例增加，S期细胞群比例明显减少，2．5、5．0、10．0mmol／L NaB的DNA直方图G0／G1峰前出现了较明显的亚二倍体峰．计算得凋亡率分别为6．97％、8．58％及12．38％（P〈0．05）。结论 NaB≥2．5mmol／L时能有效抑制HPFs的增殖．     

全反式维甲酸对翼状胬肉成纤维细胞增殖的影响

目的:观察全反式维甲酸(ATRA)对体外培养人翼状胬肉成纤维细胞(HPF)增殖的影响,寻找治疗和预防翼状胬肉复发的新途径。方法:体外培养翼状胬肉患者成纤维细胞;将不同浓度的ATRA作用于成纤维细胞分别达24,48h和72h后,MTT法检测ATRA对HPF的影响,免疫组织化学染色增生细胞核抗原(PCNA)检测细胞生长活性。结果:MTT法显示10-8mmol/LATRA作用24h后能抑制HPF的增殖(P<0.05),呈剂量和时间依赖性。ATRA能浓度依赖性地抑制细胞表达PCNA(P<0.05)。结论:ATRA能够显著抑制HPF的增殖。     

橙皮苷对翼状胬肉成纤维细胞增殖及cyclin D表达的影响

目的：评价橙皮苷对体外培养的人翼状胬肉成纤维细胞(HPF)增殖的抑制作用及对周期蛋白D(cyclin D)表达的影响。

方法：将人翼状胬肉新鲜组织进行体外贴壁细胞常规培养,并采用免疫荧光染色法进行鉴定。通过MTT法检测不同浓度丝裂霉素C(MMC)(1.5、7.5、30.0μmol/L)和橙皮苷(24、48、64、72、96、120μmol/L)作用不同时间(24、48、72h)对细胞增殖的抑制,筛选适宜的作用浓度和时间。采用Western blot法检测cyclin D在HPF细胞中的相对表达量。

结果：分别采用48、72μmol/L橙皮苷和7.5μmol/L MMC作用于HPF细胞48h,Western blot检测结果显示,空白对照组(正常培养)、MMC组、48μmol/L橙皮苷组、72μmol/L橙皮苷组细胞cyclin D蛋白相对表达量分别为1.20±0.02、0.60±0.03、0.54±0.02、0.45±0.07(F=73.025,P=0.001),MMC组和橙皮苷组细胞cyclin D蛋白相对表达量均低于空白对照组(P<0.05),但MMC组和橙皮苷组(48、72μmol/L)细胞cyclin D蛋白相对表达量均无差异(P>0.05)。

结论：橙皮苷能抑制翼状胬肉HPF细胞增殖,该过程与其降低cyclin D的表达有关。     

姜黄素对人翼状胬肉成纤维细胞增殖和凋亡及迁移的影响

目的:探讨姜黄素对体外培养的人翼状胬肉成纤维(HPF)细胞增殖和凋亡及迁移的影响。方法:收集我院2021-11-24/12-16手术切除的翼状胬肉组织7例,进行原代成纤维细胞体外培养,并采用免疫荧光染色法进行细胞鉴定。采用含等量二甲基亚砜的0、10、20、40、80、160μmol/L姜黄素处理HPF细胞24h后,用CCK8法检测细胞增殖情况。根据CCK8检测结果将细胞分为对照组(不含姜黄素)、20μmol/L姜黄素组、40μmol/L姜黄素组,每组分别处理HPF细胞24h。采用流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell迁移实验检测细胞迁移,实时荧光定量PCR法和Western blot法检测Bax、Bcl-2、Cyclin D1及MMP2的mRNA与蛋白表达。结果:与对照组相比,20μmol/L姜黄素组和40μmol/L姜黄素组均能抑制HPF细胞的增殖和迁移,并诱导其凋亡(均P<0.05)。与对照组相比,20μmol/L姜黄素组能下调Cyclin D1及MMP2,上调Bax的mRNA表达,下调Bcl-2的蛋白表达(均P<0.05)。与对照组相比,40μmol/L姜黄素组能...     

银杏叶提取物对体外培养翼状胬肉成纤维细胞增殖的抑制作用

目的：研究不同浓度的银杏叶提取物（ginkgo biloba extract,GBE）对体外培养人翼状胬肉成纤维细胞(human pterygium fibroblasts,HPFs)增殖和凋亡的影响。 方法：用噻唑蓝比色法(MTT)检测不同浓度(12.5,25.0,50.0,100.0mg/L) GBE在不同作用时间(24,48,72h)对体外培养的HPFs增殖的影响。用流式细胞仪检测HPFs的细胞周期及凋亡率。 结果：MTT结果显示,GBE浓度为12.5mg/L组作用24h后对HPFs的增殖无明显抑制作用（P>0.05）,其余各时间段各组均可见明显抑制HPFs的增殖,且各组间比较差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞仪检测发现GBE作用48h后G₀/G₁期细胞比例增加,S期细胞比例下降,计算不同浓度GBE作用下凋亡率分别为4.37%,8.14%,11.09%,15.18%,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。 结论：GBE对HPFs的增殖有明显抑制作用,并与用药剂量和持续时间有关。     

视黄酸对培养的鸡巩膜成纤维细胞增殖及超微结构的影响

目的:研究视黄酸(retinoic acid,RA)对体外培养的鸡巩膜成纤维细胞的生长及其超微结构的影响。方法:取第2～3代鸡巩膜成纤维细胞于96孔板中培养24h至贴壁后,分为A组(对照组)和各种终浓度梯度的RA实验组:B组(6×10~7mol/L)、C组(6×10~6mol/L)、D组(6×10~5mol/L)和E组(6×10~(-4)mol/L)分别作用24,48,72h,以MTT比色法检测RA对鸡巩膜成纤维细胞增殖的影响。另分别取对照组及6×10~5mol/LRA组对数生长期2代细胞铺片采用透射电镜观察其超微结构的改变。结果:与对照组相比,6×10~7mol/LRA对鸡巩膜成纤维细胞增殖没有明显的抑制作用(P >0.05);6×10~5mol/L及作用24h以上6×10~6mol/LRA明显抑制体外培养的鸡巩膜成纤维细胞的增殖(P<0.01)。6×10~4mol/LRA组细胞普遍变性崩解,抑制作用最强。与对照组比较,RA组细胞生长明显受抑制,胞质水肿,部分线粒体水肿空泡变,内质网扩张,细胞器呈变性改变。结论:RA对体外培养的鸡巩膜成纤维细胞的增殖有明显的抑制作用,并引起其超微结构的改变。可能是近视发生机制中的一个重要成分。     

层黏连蛋白对人翼状胬肉成纤维细胞生长的抑制作用

目的:探讨层黏连蛋白对体外培养的人翼状胬肉成纤维细胞增殖的影响.方法:体外培养的第3代翼状胬肉成纤维细胞,接种于层黏连蛋白包被培养皿(Ln组)和空白培养皿(对照组)中,倒置显微镜观察细胞生长状态,MTT法检测细胞增殖状态,作出生长曲线;免疫荧光法检测α-SMA在细胞内的表达;RT-PCR法检测TGF-β1和cytokeratin mRNA的表达水平.结果:Ln组成纤维细胞数量少于对照组;3～7 d,Ln组A570明显低于对照组(0.20 vs 0.28,0.22 vs 0.30,0.28 vs0.34,0.31 vs0.36,0.33 vs 0.36,P＜0.05);α-SMA在对照组细胞内表达良好,在Ln组的表达受到抑制;与对照组相比,Ln组TGF-β1 mRNA的表达下降,cytokeratin mRNA表达增加.结论:层黏连蛋白能抑制翼状胬肉中成纤维细胞的增殖.     

核心蛋白多糖抑制翼状胬肉成纤维细胞增生的实验研究

目的　观察核心蛋白多糖对体外培养人翼状胬肉成纤维细胞（ｈｕｍａｎｐｔｅｒｙｇｉｕｍｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ,ＨＰＦ）增生和凋亡的影响,寻找辅助治疗和预防翼状胬肉切除术后复发的新方法。方法　采用组织块法体外培养ＨＰＦ,将处于对数生长期的细胞用于实验。将０．１ｍｇ?Ｌ－１、１．０ｍｇ?Ｌ－１、１０．０ｍｇ?Ｌ－１的Ｄｅｃｏｒｉｎ分别加入细胞培养基中培养２４ｈ、４８ｈ、７２ｈ。ＭＴＴ比色法分别测定不同浓度的Ｄｅｃｏｒｉｎ作用于ＨＰＦ不同时间后的细胞生长抑制率,流式细胞仪测定细胞周期时相变化,免疫组织化学法染色ＰＣ-ＮＡ检测细胞生长活性。结果　ＭＴＴ结果显示不同浓度组Ｄｅｃｏｒｉｎ作用ＨＰＦ２４ｈ细胞生长抑制率分别为（７．８１±１２６）％、（１９５２±２．１４）％、（４２．６９±１．６２）％,作用４８ｈ分别为（１０．１９±２．７４）％、（２２．２８±０．９７）％、（４５．７３±０．８２）％,作用７２ｈ分别为（２０．４９±１．３９）％、（２９．５０±２．４７）％、（５９．４１±１．７１）％。随着药物浓度的逐渐增高和作用时间的延长,细胞生长抑制率逐渐增加,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。流式细胞仪检测各浓度Ｄｅｃｏｒｉｎ组ＨＰＦ中Ｇ０／Ｇ１期细胞比率均较空白对照组高,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。当Ｄｅｃｏｒｉｎ浓度在０．１～１０．０ｍｇ?Ｌ－１范围内作用ＨＰＦ７２ｈ,均能够明显抑制细胞表达ＰＣＮＡ（均为Ｐ＜０．０５）。结论　Ｄｅｃｏｒｉｎ可以抑制ＨＰＦ的增生,诱导其凋亡,且呈明显的剂量和时间依赖性,有望成为防治翼状胬肉的药物之一。     

紫杉醇对体外人翼状胬肉成纤维细胞的抑制作用

目的:观察紫杉醇(PA)对体外培养人翼状胬肉成纤维细胞(HPF)增生,凋亡的影响。方法:用0～1000nmol/LPA作用于体外培养HPF的24～96h后观察不同浓度的PA对HPF的影响。MTT法检测细胞的增殖情况,流式细胞仪测定细胞的周期时相。结果:在1～1000nmol/LPA对HPF的抑制作用呈时间和剂量依赖性(P<0.05)。1,10,1000,10000nmol/L的PA作用HPF24h后,流式检测发现低浓度药物组(1～10nmol/L)主要阻止细胞在G0～G1,高浓度组(100～1000nmol/L)主要阻止细胞在G2～M期,并可见细胞凋亡。结论:PA可显著抑制HPF的增殖,使细胞周期停止在G2～M期和细胞的凋亡。     

Effect of Tetrandrine on proliferation of human pterygium fibroblasts

AIM: To investigate the effect of Tetrandrine (Tet) on proliferation of human pterygium fibroblasts (HPF) in vitro and to search for a new method to prevent the recurrence after pterygium surgery. METHODS: With different concentrations (0 to 160μmol/L) of Tet acting on HPF cultured in vitro , the impact was observed at 24, 48, 72 hours respectively after Tet intervention. The MTT method was used to assay the biologic activities of Tet and inhibitive rate of cell growth. The expression of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) in each group was detected by immunohistochemistry before and after Tet intervention. RESULTS: With different concentrations of 20, 40, 80 and 160μmol/L and acting for 24 to 72 hours, Tet could inhibit the proliferation of HPF in a dose- and time-dependent manner (P <0.05). After the intervention of Tet, the expression of PCNA protein declined. When the concentration of Tet was in the range of 20 to 160μmol/L, it was able to inhibit the expression of PCNA in a concentration-dependent manner (P <0.05). CONCLUSION: Tet can significantly inhibit the proliferation of pterygium fibroblasts, and the inhibitive action is in a dose- and time-dependent manner within a certain range of concentration. But in high concentration (>160μmol/L), Tet will have cytotoxity.     

粉防己碱对翼状胬肉成纤维细胞增生作用的研究

目的:观察粉防己碱(tetrandrine,Tet)对体外培养人翼状胬肉成纤维细胞(human pterygium fibroblast,HPF)增殖的影响,研究粉防己碱对翼状胬肉成纤维细胞增殖的作用,寻找辅助治疗翼状胬肉的新方法。方法:用不同浓度(0 ～160μmol/L)Tet作用体外培养的HPF,观察24 ～96h Tet对HPF的影响。MTT法检测细胞生长抑制率,免疫细胞化学法检测Tet干预前后HPF增殖细胞核抗原(PCNA)的表达情况。结果:在Tet20, 40, 80, 160μmol/L浓度作用24 ～72h范围内,可剂量和时间依赖性的抑制HPF增生(P<0.05)。Tet干预后PCNA蛋白表达下降,当Tet的浓度在20 ～160μmol/L范围内能浓度依赖性地抑制细胞表达PCNA(P<0.05)结论:Tet可显著抑制翼状胬肉成纤维细胞增生,在一定浓度和时间范围内抑制作用呈剂量与时间依赖性。但在高浓度时( >160μmol/L)可能存在细胞毒性作用。     

姜黄素抑制翼状胬肉成纤维细胞增生的研究

目的观察姜黄素对体外培养人翼状胬肉成纤维细胞(HPF)增生和凋亡的影响,寻找辅助治疗和预防翼状胬肉复发的新方法。方法用0～160μmol/L姜黄素作用体外培养的HPF,24～96h后观察不同浓度姜黄素对HPF的影响。MTT法及免疫组织化学染色增生细胞核抗原(PCNA)检测细胞生长活性,流式细胞仪测定细胞周期时相变化。结果在20～160μmol/L浓度作用24～72h范围内,姜黄素可剂量和时间依赖性的抑制HPF增生(P<0.05)。20,40,80,160μmol/L姜黄素作用24h后,流式细胞仪检测结果发现,姜黄素作用组均出现典型的亚二倍体凋亡峰,G0/G1期细胞百分比上升(P<0.05),S期细胞百分比下降(P<0.05),说明细胞阻滞于G0/G1期。当姜黄素的浓度在20～160μmol/L范围内能浓度依赖性地抑制细胞表达PCNA(P<0.05)。结论姜黄素可显著抑制翼状胬肉成纤维细胞增生,使细胞周期停滞于G0/G1期,并诱导其凋亡,作用呈时间和剂量依赖性。