API0134对氧自由基诱导内皮细胞表达c-sis mRNA和血小板源性生长因子B链的影响

本文应用免疫组织化学和原位杂交方法，观察中药穿心莲成分ＡＰＩ０１３４对氧自由基诱导猪主动脉内皮细胞表达癌基因ｃ-ｓｉｓｍＲＮＡ和血小板源性生长因子Ｂ链的影响。结果是，氧自由基能诱导内皮细胞ｃｓｉｓｍＲＮＡ的转录和促血小板源性生长因子Ｂ链表达。ＡＰＩ０１３４能显著抑制氧自由基的上述诱导作用，抑制效应与药物浓度呈正相关。因此提示，ＡＰＩ０１３４的这一作用可能是其抗动脉粥样硬化的机制之一。     

API0134对血管平滑肌细胞增殖和血小板源生长因子B链、碱性纤维母细胞生长因子及相关癌基因表达的影响

为探讨ＡＰＩ０１３４防治冠状动脉继样硬化和腔内成形术后再狭窄的作用机制，采用内皮素诱导建立培养的血管平滑肌细胞增殖模型，用氚标胸腺嘧啶脱氧核苷掺入法，流式细胞术、免疫细胞化学检测及Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ方法，观察了ＡＰＩ０１３４对血管平滑肌细胞增殖的作用及对血小板源生长因子Ｂ链、碱性纤维母细胞生长因子及其相关癌基因ｃ－ｓｉｓ和ｃ－ｍｙｃ表达的影响。结果发现，ＡＰＩ０１３４能逆转内皮素所致的氚标胸     

API0134对血管平滑肌细胞增殖和血小板源生长因子B链、碱性纤维母细胞生长因子及相关癌基因表达的影响

为探讨API0134防治冠状动脉粥样硬化和腔内成形术后再狭窄的作用机制，采用内皮素诱导建立培养的血管平滑肌细胞增殖模型，用氚标胸腺嘧啶脱氧核苷掺入法、流式细胞术、免疫细胞化学检测及Northernblot方法，观察了API0134对血管平滑肌细胞增殖的作用及对血小板源生长因子B链、碱性纤维母细胞生长因子及其相关癌基因C－sis和C－mpc表达的影响。结果发现，API0134能逆转内皮素所致的氚标胸腺嘧啶脱氧核苷掺入量增多（对照组为499±92，内皮素组为617±98，API0134组为506±102），阻止血管平滑肌细胞由静止期（G0／G1期；对照组为72％，内皮素组为50％，API0134组为60％）进入DNA合成期（S期；三组分别为26％、36％和30％）和有丝分裂期（G2／M期，三组分别为2％、14％和4％），并能逆转内皮素引起的血小板源生长因子B链、碱性纤维母细胞生长因子抗原、c－sis和c－mpc的mRNA表达增强。提示API0134有抑制血管平滑肌细胞增殖的作用，这种作用与生长因子及癌基因调控的分子生物学机制有关。     

API0134对实验性动脉粥样硬化家兔血液凝固性和血栓弹力图的影响

为探讨穿心莲抗动脉粥样硬化的可能机制，用血小板聚集仪，血栓弹力描记仪和ＡＣＬ－２００型凝血仪分别观察了穿心莲成份ＡＰＩ０１３４对实验性动脉粥样硬化家兔血小板聚集率，血栓弹力图和血液凝固性改变的影响，结果发现：动脉粥样硬化模型家兔的血液呈高凝和低纤溶状态，表现为血小板活化因子诱导的血小板聚集显著增强，血栓弹力图的反应时间和凝固时间显著缩短，血栓最大幅度和血栓弹力度显著增大，部分凝固活酶时间明显缩短。     

穿心莲成分API0134对猪主动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用

采用体外培养的猪主动脉平滑肌细胞（ＳＭＣ）为模型。在高脂血清（ＨＬＳ）造成ＳＭＣ增殖条件下，观察穿心莲成分ＡＰＩ０１３４对ＳＭＣ增殖的作用及其机制，并与Ｉｌｏｐｒｏｓｔ进行比较。结果发现：ＨＬＳ培养促进ＳＭＣ增殖。加用ＡＰＩ０１３４后，可以使氚－胸腺嘧啶核苷（＾３Ｈ－ＴｄＲ）掺入量减少，拮抗ＳＭＣ的ＤＮＡ合成，增殖及ＨＬＳ造成的形态学改变。这些作用可能与降低脂质过氧化物（ＬＰＯ），使前 列     

API0134对高脂血症家兔血栓形成及血小板信号转导物质的影响

建立高脂血症家兔动脉血小板依赖性血栓模型，应用流式细胞术、放射免疫法及^3H-肌醇掺合等检测方法观察穿心莲成分API0134对闭塞性血栓形成时间、血小板聚集功能、血小板胞浆游离Ca^2 和Mg^2 浓度以及血小板内环磷酸腺苷、环磷酸鸟苷和三磷酸肌醇含量的影响。结果发现，API0134能够显著延长闭塞性血栓形成时间和抑制血小板聚集。50mg/kgAPI0134的药理作用明显强于5mg/kgAPI0134。API0134可显著抑制血栓形成所诱导的血小板内[Ca^2 ]I、[Mg^2 ]I和三磷酸肌醇浓度升高，显著抑制血小板内环磷酸腺苷浓度降低。抑制作用与用药剂量有关。结果提示，API0134具有较强的抗血栓形成和抗血小板聚集作用。抗血小板聚集的作用机制与调节血小板信号转导物质[Ca^2 ]I、[Mg^2 ]I、环磷酸腺苷和三磷酸肌醇的平衡有关。     

氨氯地平对氧化型低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞血小板源性生长因子B mRNA表达的影响

目的 观察氨氯地平对氧化型低密度脂蛋白诱导的HUVEC-12内皮细胞中血小板源性生长因子B mRNA表达的影响,从一个新的角度探讨氨氯地平的抗动脉粥样硬化作用机制.方法 预实验筛选出氧化型低密度脂蛋白对血小板源性生长因子B表达适宜的处理浓度(50 mg/L)与时间(24 h).实验分为5组:对照组、氧化型低密度脂蛋白组和三个不同剂量(0.1、1.0和10.0 μmol/L)氨氯地平组,用RT-PCR检测血小板源性生长因子B mRNA的表达.结果 以50 mg/L氧化型低密度脂蛋白刺激HUVEC-12内皮细胞24 h.随着预处理氨氯地平浓度增加,细胞血小板源性生长因子B mRNA的表达逐渐降低,并呈现浓度依赖性,当浓度为10.0 μmol/L时作用更明显.结论 氧化型低密度脂蛋白可影响HUVEC-12内皮细胞中血小板源性生长因子B mRNA的表达,氨氯地平可下调氧化型低密度脂蛋白诱导的HUVEC-12内皮细胞中血小板源性生长因子B mRNA的表达.     

脂质过氧化对血管内皮细胞源性生长因子合成和基因表达的影响

本研究以氢过氧化枯烯作为脂质过氧化反应的引发剂，作用于培养的牛主动脉内皮细胞，制备内皮细胞条件培养液，测定基对Ｓｗｉｓｓ３Ｔ３细胞ＤＮＡ合成的影响；并以抗血小板源性生长因子抗体中和实验和Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析测定了脂质过氧化作用对内皮细胞ＰＤＧＦ产生的影响。     

氧化低密度和极低密度脂蛋白对单核细胞血小板源性生长因子B链表达的影响

在单核细胞的培养基中分别加入２５ｍｇ·Ｌ￣（－１）低密度脂蛋白（ｌｏｗｄｅｎｓｉｔｙｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ，ＬＤＬ）、氧化ＬＤＬ（ｏｘｉｄｉｚｅｄＬＤＬ，ＯＬＤＬ）、极低密度脂蛋白（ｖｅｒｙｌｏｗｄｅｎｓｉｙｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ，ＶＬＤＬ）和氧化极低密度脂蛋白（ｏｘｉｄｉｚｅｄＶＬＤＬ，ＯＶＬＤＬ），培养２４ｈ后再用无血浆脂蛋白培养基收集条件培养基，并观察此条件培养基对￣３Ｈ－ＴｄＲ投入血管壁平滑肌细胞ＤＮＡ的影响。用抗血小板源性生长因子Ｂ链抗体（抗ＰＤＧＦ－Ｂ抗体）作疫组织化学染色。结果表明，单核细胞能表达ＰＤＧＦＢ，ＯＬＤＬ和ＯＶＬＤＬ能明显地促进单核细胞ＰＤＧＦ－Ｂ的表达，其条件培养基亦能促进￣３Ｈ－ＴｄＲ掺入平滑肌细胞ＤＮＡ内。上述结果提示，ＯＬＤＬ和ＯＶＬＤＬ通过加强单核细胞分泌ＰＤＧＦ－Ｂ并促进平滑肌细胞增殖而在动脉粥样硬化的发病过程中起作用。     

API0134对实验性动脉粥样硬化家兔血液凝固性和血栓弹力图的影响

为探讨穿心莲抗动脉粥样硬化的可能机制，用血小板聚集仪、血栓弹力描记仪和ACL－200型凝血仅分别观察了穿心莲成份API0134对实验性动脉粥样硬化家兔血小板聚集率、血栓弹力图和血液凝固性改变的影响。结果发现，动脉粥样硬化模型家兔的血液呈高凝和低纤溶状态，表现为血小板活化因子诱导的血小板聚集显著增强；血栓弹力图的反应时间和凝固时间显著缩短，血栓最大幅度和血栓弹力度显著增大；部分凝血活酶时间明显缩短，优球蛋白溶解时间显著延长。经API0134治疗3天后，上述异常的血凝和纤溶参数显著改善，基本恢复至正常水平。提示，API0134具有抗血小板聚集、抗血栓形成和促进纤溶活性的作用，这种作用可能是其抗动脉粥样硬化的机理之一。     

动脉壁正常区与脂斑区血小板源性生长因子及其受体基因表达的比较

应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹分析技术测定了正常人主动脉平滑肌细胞血小板源性生长因子及其受体ｍＲＮＡ的表达，以探其与动脉样硬化发生的关系，结果显示，正常动脉壁及有脂纹脂斑动脉的正常区ＰＤＧＦ链ｍＲＮＡ仅有微量表达，未检出ＰＤＧＦ受体ｍＲＮＡ的表达；而脂纹脂斑区的ＰＤＧＦＡ链ｍＲＮＡ及ＰＤＧＦβ－受体ｍＲＮＡ表达则显著增高，提示动脉壁ＰＤＧＦＡ链及受体ｍＲＮＡ表达增高与Ａｓ的发生有关。     

槲皮素、三七总皂甙对动脉粥样硬化大鼠主动脉PDGF-B链mRNA表达的影响

目的 探讨槲皮素（Que）、三七总皂甙（tPNS）及二者不同比例的益气活血组方对实验性动脉粥样硬化（AS）大鼠主动脉血小板衍生生长因子B链（PDGF-B）mRNA表达的影响，以阐明其治疗AS的作用机制。方法 以高脂饲料复制AS大鼠模型，造模成功后分别以Que、tPNS及二者2：1、3：1组方灌胃干预4周后，用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法测定主动脉PDGF-BmRNA的表达。结果 各干预组PDGF-BmRNA的表达与模型组比较，均有统计学意义（P〈0．01），其中以3：1组治疗效果最佳，而3：1组与正常对照组、模型组、川芎嗪对照组的PDGF-BmRNA的表达相比，有统计学意义（P〈0．01）。结论 Que、tPNS及二者2：1、3：1益气活血组方都可以下调主动脉PDGF-BmRNA的表达.     

动脉壁正常区与脂斑区血小板源性生长因子及其受体基因表达的比较

应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹分析技术测定了正常人主动脉平滑肌细胞血小板源性生长因子（ｐｌａｔｅｌｅｔｄｅｒｉｖｅｄｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ＰＤＧＦ）及其受体ｍＲＮＡ的表达，以探讨其与动脉粥样硬化（ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，Ａｓ）发生的关系。结果显示，正常动脉壁及有脂纹脂斑动脉的正常区ＰＤＧＦ链ｍＲＮＡ仅有微量表达，未检出ＰＤＧＦ受体ｍＲＮＡ的表达；而脂纹脂斑区的ＰＤＧＦＡ链ｍＲＮＡ及ＰＤＧＦβ－受体ｍＲＮＡ表达则显著增高。提示动脉壁ＰＤＧＦＡ链及ＰＤＧＦ受体ｍＲＮＡ表达增高与Ａｓ的发生有关。     

血小板源生长因子诱导血管平滑肌细胞迁移及机构

为探讨血小反源生长因子诱导血管平滑肌细胞迁移和细胞内信号传递机制。以体外培养的平滑肌细胞为对象，用血小板源生长因子ＢＢ二聚体作诱导刺激物，采用改良的Ｂｏｙｄｅｎ微孔膜双槽法进行细胞迁移实验，荧光染料Ｆｕｒａ－２法测定细胞内游离钙离子浓度。结果发现，血小板源生长因子ＢＢ二聚体能明显诱导体外培养的平滑肌细胞迁移，使细胞内游离钙离子浓度［Ｃａ＾２＋］ｉ明显升高（Ｐ〈０．０１），峰值浓度位于５μｇ／Ｌ。１     

抗纤软肝颗粒对血小板源生长因子诱导的肝星状细胞增殖的影响

目的:研究抗纤软肝颗粒(KXR)对血小板源生长因子(PDGF)诱导的肝星状细胞(HSC)增殖的影响.方法:采用无血清培养,不同浓度的KXR温育HSC 24 h后,PDGF-BB(10 ng/ml)刺激24 h,再加入上述浓度的KXR 3 h后,又加入PDGF-BB(10 ng/ml)作用5 min,然后收集细胞.采用细胞计数法及流式细胞仪测定细胞增殖及细胞周期.结果:无血清培养显示该方对于PDGF诱导的细胞增殖具有抑制作用,并呈剂量依赖性(P<0.01).流式细胞术分析提示KXR能抑制PDGF诱导的HSC DNA合成期及合成后期和分裂期DNA百分含量,阻断细胞由静止期/DNA合成前期向DNA合成期转化,呈剂量依赖性(5 mg/ml组作用最显著,P<0.01).结论:KXR能抑制PDGF诱导的HSC增殖.     

血小板衍生生长因子—BB对血管内皮细胞、平滑肌细胞及成纤维细胞增殖的影响

目的 观察血小板衍生生长因子—BB对培养的人血管内皮细胞、兔平滑肌细胞和人成纤维细胞增殖的影响。方法 采用培养的人脐静脉血管内皮细胞、兔动脉血管平滑肌细胞和人血管成纤维细胞，应用^3H—TdR掺入方法，观察血小板衍生生长因子—BB对三种细胞DNA合成的影响。结果 血小板衍生生长因子—BB可促进处于静止状态的三种细胞DNA的合成，并呈现出明显的浓度依赖关系，在30ng／ml的浓度时成纤维细胞DNA的合成达到高峰，在40ng／ml的浓度时内皮细胞、平滑肌细胞DNA的合成达到高峰。成纤维细胞、平滑肌细胞分别在PDCF-BB作用24h和36h年到DNA合成的高峰，内皮细胞在48h时DNA合成量最高。结论 血小板衍生生长因子—BB可明显促进培养的人脐静脉血管内皮细胞、兔动脉血管平滑肌细胞和人血管成纤维细胞的增殖。