镍促进EB病毒转化人B淋巴细胞的研究

本文报道１０－４０μｇ／ｍｌＮｉＳＯ４６Ｈ２Ｏ（Ｎｉ）在试管中能使ＦＡ细胞株的ＥＢ病毒核抗原表达增强１０．９９－３９％、２９μｇ／ｍｌＮｉ有明显促进ＥＢＶ转化人脐血Ｂ淋细胞的作用，当多次加Ｎｉ时促进效应更，前者转化促进率为１３．３１－４６．６１，后者达２２．７０－５７．０４％。最佳浓度为１０μｇ／ｍｌ。     

IgM诱导人B淋巴瘤Daudi细胞凋亡

探讨ＢＣＲ介导Ｂ淋巴细胞凋亡的作用机制。方法光镜观察细胞形态。＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法检测细胞生长。应用ＦＡＣＳ：（１）ＡｎｎｅｘｉｎＶ法检测细胞凋亡，（２）ＰＩ染色分析细胞周期。     

EB病毒在SCID小鼠体内诱发人B淋巴细胞肿瘤

目的:通过动物体内试验研究EB病毒(EBV)对人正常细胞的致瘤性,并检测我国正常人群对EBV的易感性,试图建立EBV诱发人淋巴细胞肿瘤模型。方法:在严重联合免疫缺陷动物即SCID小鼠体内移植健康成人外周血淋巴细胞(PBL),每鼠腹腔接种1×108个PBL。对接种VCA/IgA阴性献血员PBL的动物,移植后1周内经腹腔注射B95-8标准株EBV悬液作为实验感染,而接种VCA/IgA阳性献血员PBL的动物不再进行实验感染。结果:在接受12名健康成人PBL移植并感染EBV的19只SCID小鼠中,肿瘤诱发率分别为91.7%(11/12名)和84.2%(16/19只鼠)。诱发瘤常见于小鼠腹腔后壁和纵隔,具有侵袭性和致死性,患瘤小鼠平均存活时间65.5天。EBV诱发瘤是结节状实体瘤,显微镜下观察肿瘤细胞呈大裂—无裂混合细胞。组织病理学和免疫病理学研究表明,肿瘤类型是人源B细胞性恶性淋巴瘤。诱发瘤原位分子杂交显示肿瘤细胞核内存在EB病毒小核酸分子EBER-1和人类基因组Alu序列。电子显微镜观察肿瘤细胞核内存在EB病毒颗粒。肿瘤细胞表达EB病毒BZLF1蛋白阳性。结论:SCID/人淋巴细胞嵌合体是研究EBV感染和致瘤性的敏感动物模型,且获得了EBV引起人类正常细胞在体内发生肿瘤的直接依据。因而证实了EBV对人类细胞的致瘤作用,进一步明确机体免疫缺陷因素在肿瘤发生中起重要作     

NGX6基因联用5-Fu对人结肠癌细胞凋亡的影响

目的:探讨候选抑瘤基因NGX6联用5-Fu对结肠癌细胞凋亡的影响.方法:以稳定转染并表达NGX6基因的HT-29细胞与5-Fu联用作为实验组.以PDTC与5-Fu联用的HT-29细胞作为对照组.通过EMSA检测各组结肠癌HT-29细胞核转录因子-κB(NF-κB)的激活情况,利用MTT比色法检测各组细胞增殖的情况.吖啶橙(AO)/溴化乙啶(EB)双染法显微镜观测以及PI/Annexin-V双染流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况.结果:稳定转染并表达NGX6基因的HT-29细胞以及应用了PDTC的HT-29细胞NF-κB的激活均明显受到抑制;与5-Fu作用的HT-29细胞组比较,5-Fu联合PDTC作用于HT-29细胞后,HT-29细胞增殖受到明显抑制,5-Fu诱导HT-29细胞凋亡作用增强;与5-Fu联合PDTC作用于HT-29细胞的对照组比较,在诱导细胞凋亡以及抑制细胞增殖方面,稳定转染并表达NGX6基因的HT-29细胞与5-Fu联用组和对照组所取得一致的效果,NGX6基因增强5-Fu对HT-29细胞增殖抑制的能力及诱导HT-29细胞凋亡的能力.结论:NGX6基因抑制了肿瘤细胞NF-κB的激活,具有增强5-Fu诱导结肠癌细胞凋亡的能力,其机制可能是抑制肿瘤细胞NF-κB的激活,NGX6基因对肿瘤的治疗及预后起积极作用.     

人B细胞成熟抗原的克隆、表达及纯化

目的构建人B细胞成熟抗原（BCMA）原核表达质粒,表达BCMA融合蛋白。方法通过RT—PCR方法从人B淋巴瘤Raji总RNA中扩增BCMA的全长cDNA,并插入原核表达载体PGEX4T-1的BamHI和NotⅠ酶切位点,构建原核表达载体PGEX4T-1-BCMA,利用酶切和序列分析方法验证所构建质粒的正确性。在大肠杆菌中表达BCMA融合蛋白,并经谷胱甘肽-S-转移酶（GST）亲和柱纯化。纯化后的产物经过SDS—PAGE、Westernblot检测目的蛋白的表达情况。结果Bam HI／Notl双酶切证明重组质粒中含有目的大小的BCMA基因片段,序列分析证明重组质粒中插入片段的碱基序列均完全正确。将所构建的PGEX4T-1-BCMA质粒转染感受态DH5ct,IPTG诱导表达后超声裂解菌体,上清经GST亲和纯化,经SDS—PAGE、抗GST和BCMA抗体Westernblot分析,证实融合表达蛋白为GST—BCMA融合蛋白。结论成功构建了BCMA原核表达载体,重组质粒能够在原核表达系统中可溶性表达GST—BCMA融合蛋白,为进一步研究BCMA的生物学功能奠定了基础。     

人肺癌细胞株中hnRNP A2/B1表达的研究

目的 研究人肺癌细胞株中核内不均一核糖核蛋白(hnRNP)A2/B1及hnRNP B1的表达。方法 采用特异性hnRNP A2／B2及hnRNP B1引物,应用RT-PCR方法研究肺癌细胞株hnRNP A2／B1 mRNA的表达,以抗hnRNP B1单克隆抗体免疫细胞化学染色方法研究肺癌细胞hnRNP A2/B1蛋白的亚细胞定位。结果 RT—PCR显示人肺腺癌细胞株SPC-A1及Y-90,小细胞肺癌细胞株NCI-H446及鳞癌细胞株A431均表达hnRNP A2／B1及hnRNP B1,其PCR产物分子量分别在661及1039bp左右,与预期大小的hnRNP A2/B1 cDNA片断相符。免疫细胞化学研究发现,肺腺癌细胞株SPC—A1及Y-90．小细胞肺癌细胞株NCI—H446及鳞癌A431的细胞浆及细胞核内均可见特异的hnRNP B1染色,鳞癌A43l及小细胞肺癌NCI—H446 hnRNP B1染色较肺腺癌细胞株SPC—A1及Y-90明显。结论 肺癌细胞株hnRNP A2／B1及hnRNP B1表达明显增高。     

人外周血CD56+NK细胞亚群表型和生物学特征

目的 探讨人CD56^＋NK细胞亚群、表型和生物学特征。方法 分离正常人外周血单个核细胞,利用多种抗体进行细胞表面和细胞内细胞毒效应分子（颗粒酶B和穿孔素）染色,通过流式细胞仪,在单个细胞水平上分析CD56^＋NK细胞亚群的表型及其生物学特征。结果 根据CD56分子表达密度的不同,将人外周血中NK细胞分为CD56^bright出和CD56^dim两大亚群。CD56^bright和CD56^dim细胞均表达CD95,CD56^bright细胞亚群中,CD95^bright和CD95^dim表达百分率分别为21．4％和77．0％;CD56^dim细胞亚群中,CD95^bright和CD95^dim表达百分率分别为23．1％和75．6％。与CD56^bright出细胞亚群相比,CD56^bright细胞表达CD8、颗粒酶B和穿孔素细胞的阳性率较高,分别为9．1％、6．2％和8．O％。在CD56^bright和CD56^bright亚群中,CD95^brightCD8^＋亚群高表达颗粒酶B和穿孔素。结论 人外周血CD56^＋NK细胞由不同表型和生物学特征的细胞亚群组成,CD56^dim”和CD56^dimCD8^＋NK细胞亚群在杀伤破坏靶细胞中发挥重要作用。     

人B淋巴瘤裸鼠腹腔内移植模型

目的：建立人 Ｂ淋巴瘤裸鼠移植瘤腹腔模型,主要是为了研究抗 ＣＤ２０／ＣＤ３双功能抗体对人 Ｂ淋巴瘤的治疗作用。方法：采用５周龄左右的雌性ＢＡＬＢ／ｃ－ｎｕ,腹腔注射ｐｒｉｓｔａｎｅ ０．２ｍｌ／只 ２次,经６０Ｃｏ照射,３天后腹腔接种人Ｂ淋巴瘤细胞株（Ｒａｊｉ）１×１０～７／只,并于第 ２天随机分组用预先激活的Ｔ细胞加入双功能抗体进行治疗,每周腹腔给药 １次,共４次。结果：人Ｂ淋巴瘤细胞株（Ｒａｊｉ）裸鼠腹腔移植,接种３８只均获成功,成瘤率１００％。染色体检查证明为人类染色体特征,病理形态学观察,瘤块主要分布于腹腔、肠系膜、淋巴结、贴近肠壁处,并且ＣＤ１９、ＣＤ２０,ＨＬＡ—ＤＲ阳性率达９５％以上,对照组４０天时全部死亡,治疗组存活至１００天处死。结论：成功地建立了人类Ｂ淋巴瘤裸鼠移植瘤腹腔模型,经过实验证明,抗ＣＤ３／抗 ＣＤ２０。双功能抗体有很好地抑癌作用。     

Rit uximab 对紫杉醇诱导人B 淋巴瘤细胞株 凋亡的增敏作用

 目的　基于对CHOP(环磷酰胺、阿霉素、长春新碱和强的松) 联合化疗方案治疗侵袭性淋巴瘤疗 效的不尽人意,本文研究利妥昔单抗(Rituximab) 对新一代化疗药物Paclitaxel 的化疗增敏作用,并探讨其 可能的作用机制。方法　(1) 体外培养Daudi、Ramos、Namalwa 和Raji 细胞,采用XTT 法测定细胞增殖抑 制率:以药物浓度为横坐标,抑制率为纵坐标绘出细胞增殖抑制曲线,比较单药和两药协同作用曲线,若联 合作用曲线左移表示有协同作用,右移表示有拮抗作用。(2) Western blot 测定:Daudi、Ramos、Raji 和Na2 malwa 细胞经Rituximab 20μg/ ml 作用24 小时后检测抗凋亡蛋白Bcl22 的表达情况。结果　(1) XTT 法 测定Paclitaxel 单药及与Rituximab 联合作用对各细胞株增殖抑制率:对Daudi、Namalwa、Ramos 和Raji 细 胞株,Rituximab 对Paclitaxel 的细胞毒作用有明显的增敏作用; (2) Western blot 测定:在Namalwa 和Raji 细胞株中,经Rituximab 作用24 小时后,可见Bcl22 蛋白表达下调。结论　(1) 单药Rituximab 对Paclitaxel 有明显的化疗增敏作用。(2) 在Namalwa 和 Raji 细胞株,经Rituximab 作用24 小时后可 见Bcl22 表达下调,可能是Rituximab 增敏的 机制之一。     

重组人肿瘤坏死因子抗肿瘤作用的初步研究

目的： 了解ｒｈ Ｔ Ｎ Ｆα Ｄｂ５０ Ｇ 体内体外抗肿瘤活性。方法： 体外采用 Ｍ Ｔ Ｔ 法测ｒｈ Ｔ Ｎ Ｆα Ｄｂ５０ Ｇ 对 Ｍ Ｋ Ｎ４５ 细胞的 Ｉ Ｃ５０ , 体内采用动物移植性肿瘤检测其抗肿瘤活性。结果： Ｍ Ｔ Ｔ法测定结果表明ｒｈ Ｔ Ｎ Ｆα Ｄｂ５０ Ｇ 对一定浓度的人胃癌细胞株 Ｍ Ｋ Ｎ４５ 有较强的抑制增殖作用, 其 Ｉ Ｃ５０ 为４ ．４６１ ×１０ － ２μｇ／ ｍｌ（ 相关系数γ＝ ０ ．９５４６） 。体内研究表明ｒｈ Ｔ Ｎ Ｆα Ｄｂ５０ Ｇ 对小鼠 Ｓ１８０ 实体瘤和小鼠 Ｅｈｒｌｉｃｈ 氏实体瘤有较强的抑制作用,其抑制率分别为２９ ．３ ％ （ｉｖ） 和４０ ．０７ ％ （ｉｖ） 。ｒｈ Ｔ Ｎ Ｆα Ｄｂ５０ Ｇ 对小鼠黑色素瘤 Ｂ１６ 的肺转移有很强的抑制作用, 其抑制率为６０ ．４１ ％ （ｉｖ） 。结论： 人重组肿瘤坏死因子ｒｈ Ｔ Ｎ Ｆα Ｄｂ５０ Ｇ 在体内体外均有一定的抗肿瘤作用。     

B7-H1蛋白在人胰腺癌组织中的表达及临床意义

背景与目的：恶性肿瘤细胞表达共刺激分子B7-H1来抑制T细胞功能,逃避机体的抗肿瘤免疫反应。本研究通过检测人胰腺癌组织中B7-H1蛋白的表达,探讨其与胰腺癌患者临床病理指标及预后之间的关系。方法：采用免疫组化法检测B7-H1在40例胰腺癌组织和10例癌旁正常胰腺组织中的表达情况,用卡方检验或确切概率法分析B7-H1的表达与胰腺癌患者各临床病理指标以及生存时间的关系。结果：40例胰腺癌组织中B7-H1阳性率为45.00%（18/40）,高于癌旁正常胰腺组织（P〈0.05）;B7-H1表达与患者肿瘤分期、术前CA19-9有关（P〈0.05）。多因素Cox回归模型显示,B7-H1表达是胰腺癌患者无复发生存期、总生存期的独立危险因素。结论：人胰腺癌组织中存在B7-H1蛋白表达,B7-H1表达与胰腺癌患者的预后有关。     

DHA 联合葫芦素B对人胃癌BGC -823细胞增殖及凋亡的影响

目的：研究二十二碳六烯酸（docosahexaenoicacid，DHA）联合葫芦素 B（cucurbitacin B）体外对人胃癌BGC -823细胞增殖及凋亡的影响。方法：利用 NADH 酶染色、吉姆萨染色显微镜下观察人胃癌 BGC -823细胞经 DHA 联合葫芦素 B 作用后细胞形态学上的变化。采用 MTT 法、流式细胞仪检测细胞增殖、周期及凋亡的情况。结果：根据 MTT 法 DHA 联合葫芦素 B 作用于胃癌细胞比分别利用 DHA、葫芦素 B 直接作用细胞增殖抑制更为明显，更有效降低细胞的存活率，且在相同时间随着药物浓度的提高，作用效果也随之提高。NADH 酶染色法、吉姆萨染色法在显微镜下明显可见细胞凋亡现象。流式细胞仪检测肿瘤细胞，药物联合干预 G0/ G1期细胞明显增多，G2/ M 期和 S 期细胞明显减少。结论：DHA 联合葫芦素 B 可抑制人胃癌 BGC -823细胞增殖、诱导细胞凋亡，其联合具有协同作用。     

伏马菌素B1对人结肠腺癌细胞培养倍增时间的影响

 目的　观测伏马菌素B1(FB1)对培养细胞倍增时间的影响 ，探讨FB1诱发肿瘤的可能机理。方法　利用荧光分光光度法测定原位溶解 的人结肠腺癌培养细胞的DNA，以DNA总量的倍增作为培养细胞数目的倍增，通过比较对照组 和FB1处理组DNA倍增的时间，判断出FB1对该细胞株细胞倍增时间的影响。结果　对照组结肠腺癌细胞的倍增时间在39～42小时，FB1处理组细胞的倍增时间为34～36小 时。结论　伏马菌素B1可明显缩短人结肠腺癌细胞株的倍增时间。     

人支气管上皮细胞恶性转化过程中FHIT蛋白表达的研究

背景与目的目前大多数研究者分别研究了正常支气管上皮、癌前病变及肺癌组织（吸烟或不吸烟者）标本FHIT蛋白表达，而没有在肺癌发生发展过程中研究其表达及意义。本研究的目的是在烟草特异性亚硝胺（NNK）诱发人支气管上皮细胞（BEAS-2B）恶性转化过程中，探讨FHIT蛋白表达的变化及其意义。方法用500mg／LNNK诱发BEAS-2B细胞（对照组）恶性转化为BEAS-2BNNK细胞（实验组），并在此过程中用免疫细胞化学方法动态观察FHIT蛋白表达的情况。结果㈠NNK诱发BEAS-2B细胞恶性转化模型的建立：①第5代BEAS-2BNNK细胞血清抗性显著增强；②第15代BEAS-2BNNK细胞具有锚着独立性生长特性（软琼脂克隆形成）；③第20代BEAS-2BNNK细胞超微结构出现明显异型性；④第25代BEAS-2BNNK细胞在裸鼠体内成瘤，病理类型为高分化鳞癌。㈡FHIT蛋白表达：BEAS-2B细胞FHIT蛋白表达稳定，在各代之间的差异无统计学意义（P〉0．05）；第5代BEAS-2BNNK细胞FHIT蛋白表达即有所降低，并随传代次数增加而进行性下降，但第25代细胞FHIT蛋白却呈高表达。结论①500mg／LNNK能成功诱发BEAS-2B细胞恶性转化，为进一步探讨肺癌尤其是吸烟致肺癌的发生机制提供了理想模型。②FHIT蛋白表达减弱在肺癌发生过程中可能属早期事件，但FHIT蛋白在细胞恶性转化晚期上调表达值得进一步研究。     

人肿瘤组织中B7.1和MHC抗原表达及其意义

肿瘤免疫主要由细胞免疫介导，研究证实抗原特异性Ｔ细胞的活化需要共刺激信号的参与，缺乏共刺激信号将导致受抗原刺激的Ｔ细胞发生免疫无能，耐受甚至凋亡。Ｂ７．１是目前研究最多也是最重要的共刺激分子，已有的动物实验证明肿瘤细胞缺乏Ｂ７．１表达是其逃逸免疫监视...     

核因子-κB及P糖蛋白在人骨肉瘤中的表达及意义

目的探讨核因子-κB(NF-κB)及P糖蛋白(P-gp)在骨肉瘤组织中的表达及其临床意义。方法选取2009年1月至2016年12月间武汉大学人民医院收治的经术前穿刺组织学病理诊断的26例骨肉瘤患者的肿瘤组织标本,采用免疫组化法(S-P法)及West Blot法测定NF-κB及P-gp在诱导化疗后骨肉瘤组织中的表达。比较化疗原发耐药组(6例)和化疗有效组(20例)中NF-κB及P-gp表达的差异,并分析其与化疗耐药的相关性。结果化疗耐药组骨肉瘤组织的p-gp阳性表达率为83.3%,显著高于化疗有效组p-gp的阳性表达率35.0%,差异有统计学意义(P<0.01)。化疗耐药组骨肉瘤组织NF-κB阳性表达率为83.3%,显著高于化疗有效组45.0%,差异有统计学意义(P<0.01)。相关因素分析表明,NF-κB及P-gp在骨肉瘤组织中的表达与其耐药有高度相关性,NF-κB P65的表达与P-gp表达呈正相关,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 NF-κB及P-gp在骨肉瘤原发耐药组中高表达,可能是骨肉瘤原发耐药的发生机制之一。     

丙酮酸乙酯通过下调蛋白激酶B通路抑制人胃癌细胞侵袭转移的研究

目的探讨丙酮酸乙酯（EP）对人胃癌SGC-7901细胞侵袭转移的抑制效果及机制。方法噻唑蓝比色分析法 (MTT法)测定EP在胃癌SGC-7901细胞中的半数抑制浓度(IC50)。不同浓度EP加入到胃癌细胞后,实时定量PCR检测蛋白激酶B（Akt）的mRNA表达水平;Western blot检测Akt、p-Akt、基质金属蛋白酶-2 (MMP-2)和MMP-9的蛋白表达水平。划痕和Transwell实验评价胃癌细胞侵袭转移的能力。通过建立裸鼠皮下移植瘤模型,免疫组织化学进一步验证以上蛋白的表达水平。结果EP在胃癌SGC-7901细胞中的IC50为36.73 mmol/L。EP抑制Akt mRNA的表达及下调Akt、p-Akt、MMP-2和MMP-9的蛋白表达。划痕实验显示EP可抑制胃癌细胞的迁移运动能力;Transwell显示,与对照组（93.33±4.16）相比,EP 10 mmol/L组（75.34±4.73）、EP 20 mmol/L组（61.34±3.06）及EP 40 mmol/L组（39.00±3.00）的侵袭转移细胞数明显减少 (P均<0.001)。免疫组组织化学进一步证实了Western blot的检测结果。结论EP通过下调Akt通路抑制人胃癌细胞的侵袭和转移,对癌症具有一定的治疗效果。