尿道下裂患儿包皮组织p53和p21waf/cip1mRNA的表达

目的:探讨包皮组织中肿瘤抑制蛋白p53和细胞周期调节基因p21 waf/cip1的表达与尿道下裂发病的关系.方法:采用RT-PCR技术检测30例尿道下裂患儿和30例对照组患儿包皮组织p53和p21 waf/cip1 mRNA表达水平.结果:与对照组比较,尿道下裂组p53 mRNA的表达降低(t=11.431,P=0.0...     

沉默ATG5及ATG7可抑制顺铂介导的耐顺铂睾丸癌细胞的自噬和增殖

Objective To observe the changes in autophagy of cisplatin-resistant I-10 testicular cancer cells (I-10/DDP cells) in response to cisplatin treatment and the effect of silencing ATG5 and ATG7 on autophagy and proliferation of cisplatin-treated cells. Methods I- 10/DDP cells treated with 15 μmol/L cisplatin for 12 h were examined for expressions of LC3 and p62 by Western blotting and for autophagy level through transmission electron microscopy and mCherry-GFP-LC3B. I-10/DDP cells were transfected with short hairpin RNAs shRNA-ATG5 or shRNA-ATG7 via Lipfectamine2000, the empty vector (NC group), or Lipfectamine2000 alone (blank control group), and the cellular expressions of ATG5 and ATG7 were detected with Western blotting. The transfected cells were treated with 15 μmol/L cisplatin for 12 h, after that the expressions of LC3 and p62 were detected with Western blotting. Transmission electron microscopy and mCherry-GFP-LC3B were used to detect autophagy level in the cells. MTT assay and colony-forming assay were performed to assess the cell survival fraction and colony formation ability of the treated cells, respectively. Results After cisplatin treatmert, the expression level of LC3 II increased significantly (P<0.001), the expression level of p62 decreased (P<0.05), and the number of autophagosomes increased in I-10/DDP cells. The cells transfected with shRNA-ATG5 or shRNA-ATG7 showed significantly decreased expressions of ATG5 or ATG7 (P=0.005 or P<0.001). Cisplatin treatment of the transfected cells obviously reduced the cellular expression of LC3 II (P< 0.001), increased the expression of p62 (P<0.001), and decreased the number of autophagosomes, cell survival fraction and colony formation ability of the cells (P<0.001). Conclusion Silencing ATG5 and ATG7 inhibits cisplatin-mediated autophagy and enhances the inhibitory effect of cisplatin on inhibiting cell proliferation.     

特发性矮小患儿血中 p53及 p21 waf／cip1的表达

目的：观察特发性矮小（ISS）患儿血中p53及细胞周期调节基因p21waf／cip1的表达,探讨二者与ISS发病机制之间的关系。方法：采用实时荧光定量PCR及ELISA法检测30例ISS患儿（ ISS组）和30名正常儿童（对照组）外周血中p53和p21 waf／cip1 mRNA的表达水平及血清中P53和P21 waf／cip1蛋白的含量。结果：ISS组患儿外周血中p53 mRNA的表达水平及血清P53的浓度与对照组相比,差异无统计学意义（ t＝1．044和0．701,P均＞0．05）,ISS组p21waf／cip1 mRNA的表达水平较对照组升高（t＝4．606,P＜0．001）。结论：p21waf／cip1可能通过非依赖p53途径参与ISS的发生。     

PGA2诱导的G1阻滞中P21—E2F间的作用

前列腺素A2(PGA2)具有强的体内、外抗增殖活性,引起细胞周期阻滞,同时可诱导cdk抑制物p21蛋白的表达,后者亦可介导多种细胞的G1阻滞。提示p21~(wafl/cipl)在PGA2诱导的细胞周期阻滞中具有重要作用。本文主要从近两年来有关p21~(wafl/cipl)与转录因子E2F间的相互作用的研究阐述p21~(wafl/cipl)在PGA2介导的细胞周期阻滞中的作用机制。     

MicroRNA-129-5p通过抑制心肌细胞自噬改善心力衰竭大鼠心功能的作用机制研究

目的 探讨miR-129-5p通过抑制心肌细胞自噬改善心力衰竭（HF）大鼠心功能的作用机制。方法 将40只健康雄性Wistar大鼠作为研究对象,并分为空白对照组、模型组、空载病毒组和miR-129-5p组,每组10只。模型组腹腔注射阿霉素溶液复制慢性HF模型;空白对照组腹腔注射等量0.9%生理盐水;空载病毒组、miR-129-5p组分别通过尾静脉注射空载体病毒、miR-129-5p载体复制HF模型。各组大鼠连续给药6周后,采用心脏彩色多普勒超声仪检测大鼠左室射血分数（LVEF）、左室舒张末期内径（LVEDd）和左室收缩末期内径（LVEDs）。实时荧光定量聚合酶链反应检测大鼠心肌组织miR-129-5p表达,HE染色观察心肌组织病理形态,Western blotting检测心肌细胞自噬相关蛋白表达。结果 模型组、空载病毒组EF较空白对照组降低（P <0.05）,LVEDd、LVEDs较空白对照组增大（P <0.05）;模型组与空载病毒组EF、LVEDd、LVEDs比较,差异无统计学意义（P>0.05）;miR-129-5p组EF较模型组升高（P <0.05）,LV...     

曲古霉素A对人肾细胞癌Caki-1细胞体外生长的影响

目的:观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古霉素A(trichostatin A,TSA)体外对人肾细胞癌Caki-1细胞生长情况、乙酰化组蛋白H3的水平以及基因P21cip1/waf1 mRNA表达的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测TSA对Caki-1细胞生长的影响;蛋白质印迹法检测TS...     

miR-424通过调控ATG14的表达抑制肝癌细胞的自噬和增殖

目的 研究miR-424通过调控ATG14表达影响自噬和肝癌细胞增殖。方法 收集肝癌患者因手术切除的肝癌组织及其癌旁组织,采用 qRT-PCR 法检测肝癌组织中 miR-424-5p,ATG14 的表达。培养人肝癌细胞系 HepG2、SMMC-7721、Huh-7、MHCC97H、HCCLM3和人正常肝细胞LO2,qRT-PCR法检测上述各细胞系的miR-424-5p表达,选取表达量较高的Huh-7和表达量较低的HCCLM3肝癌细胞为研究对象,Huh-7细胞实验分组（n=3）：干扰miR-424-5p表达阴性对照组（in-NC组）,干扰miR-424-5p表达组（in-miR-424-5p组）;HCCLM3细胞实验分组（n=3）：过表达miR-424-5p组（mi-miR-424-5p组）,另设过表达miR-424-5p阴性对照组（mi-NC组）;过表达miR-424-5p阴性对照+过表达ATG14阴性对照组（mi-NC+NC组）;过表达miR-424-5p阴性对照+过表达ATG14组（mi-NC+ ATG14组）;过表达miR-424-5p +过表达ATG14阴性对照组（mi-miR-424-5p+NC组）;过表达miR-424-5p +过表达ATG14组（mi-miR-424-5p +ATG14组）。qRT-PCR法及Western blot法验证各组miR-424-5p和ATG14的转染情况。采用MTT法检测各组细胞的细胞增殖,流式细胞术检测各组细胞的细胞凋亡水平,Western blot检测各组细胞的ATG14和自噬相关蛋白LC3、Beclin1和P62的表达水平,双荧光素酶报告基因实验检测miR-424-5p和ATG14之间的相互作用。结果 在肝癌组织和细胞中ATG14高表达,miR-424-5p低表达。与相应对照组相比,过表达miR-424-5p抑制肝癌细胞增殖和促进凋亡（P<0.05）;干扰miR-424-5p表达及过表达ATG14促进肝癌细胞增殖和抑制凋亡（P<0.05）;miR-424可能通过靶向ATG14发挥抑癌的作用。干扰miR-424-5p表达及过表达ATG14均能提高肝癌细胞自噬体标志蛋白LC3-ΙΙ/LC3-Ι、Beclin1的表达水平（P<0.05）,降低自噬受体蛋白P62的表达水平（P<0.05）;过表达miR-424-5p则降低肝癌细胞自噬体标志蛋白LC3-ΙΙ/LC3-Ι、Beclin1的表达水平（P<0.05）,提高自噬受体蛋白P62的表达水平（P<0.05）。结论 miR-424调控ATG14表达影响自噬,从而抑制肝癌细胞增殖。     

上皮性卵巢癌组织中ATG5、Beclin1与P53的表达及相关性研究

目的检测自噬相关基因ATG5、Beclin1与凋亡相关基因P53在上皮性卵巢癌、良性卵巢肿瘤及正常卵巢组织的表达情况,探讨其与卵巢癌发生、发展的相关性及意义。方法应用免疫组化SP法和RT-PCR技术检测25例正常卵巢、25例良性卵巢肿瘤及34例上皮性卵巢癌组织中ATG5、Beclin1、P53蛋白及mRNA的表达,并结合临床病理因素进行分析。结果 1ATG5、Beclin1的表达主要在细胞质内,P53主要表达在胞核内。ATG5、Beclin1在正常卵巢组织、良性卵巢肿瘤组织及卵巢癌组织中的表达阳性率两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。P53在卵巢癌组织中的表达阳性率与良性卵巢组织、正常卵巢组织相比,差异有统计学意义(P<0.01),而良性卵巢组织与正常卵巢组织表达阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。不同临床分期、病理分期的卵巢癌组织中ATG5、Beclin1及P53的表达比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。Spearman相关性分析显示,上皮性卵巢癌组织中ATG5与Beclin1蛋白表达呈正相关,ATG5与P53、Beclin1与P53蛋白表达均呈负相关(P<0.05)。2经RT-PCR检测,上皮性卵巢癌组织中ATG5、Beclin1的表达低于良性卵巢肿瘤组织及正常卵巢组织,良性卵巢组织低于正常卵巢组织,差异均具有统计学意义(P<0.05)。上皮性卵巢癌组织中P53的表达高于良性卵巢组织及正常组织(P<0.05),但良性卵巢组织与正常卵巢组织相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论上皮性卵巢癌的发病、进展可能与自噬相关基因Beclin1和ATG5自噬活性的抑制有关;自噬相关基因ATG5、Beclin1与凋亡相关基因P53在上皮性卵巢癌的发生发展中起拮抗作用,对其联合检测有利于了解和判断上皮性卵巢癌的进展程度、预后情况及指导治疗。     

食管癌细胞中沉默Survivin基因对ATG16L1表达的影响

目的 探讨食管癌Eca109细胞中沉默生存素(Survivin, SVV)基因的表达对自噬相关蛋白ATG16L1表达的影响。方法 使用雷帕霉素(rapamycin, RAPA)在Eca109细胞中诱导建立自噬模型;使用Survivin抑制剂YM155和Survivin-siRNA作用于自噬模型,采用免疫荧光法观察自噬体数量变化,采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)检测Survivin和ATG16L1的mRNA表达水平,Western blot法检测LC3-Ⅱ、p62、Survivin、ATG16L1的蛋白表达水平,双荧光素酶报告基因检测Survivin与p62的作用关系。结果 RAPA诱导Eca109细胞后,自噬标志蛋白LC3-Ⅱ蛋白的表达水平升高,p62蛋白的表达水平降低,同时细胞内自噬体数目增多。在RAPA组中ATG16L1mRNA和蛋白表达水平均升高。在细胞自噬模型中沉默Survivin表达后,Survivin和ATG16L1的mRNA表达水平均降低。过表达Survivi...     

miR-let-7b-5p对急性胰腺炎AR42J细胞凋亡及自噬的作用研究

目的 探讨miR-let-7b-5p对急性胰腺炎AR42J细胞凋亡和自噬的影响。方法 以未处理的AR42J细胞作为正常对照组,1×10^-8 mol/L浓度的雨蛙素诱导大鼠胰腺腺泡细胞(AR42J)24h建立体外急性胰腺炎模型,慢病毒携带miR-let-7b-5p的模拟物(miRNA mimic)、抑制物(miRNA inhibitio)和空病毒转染急性胰腺炎模型细胞作为miR-let-7b-5p过表达组、低表达组和阴性对照组,RT-qPCR验证转染效果,检测凋亡基因Caspase-3 mRNA和自噬基因LC3ⅡmRNA的表达量;Western Blot检测Caspase-3及LC3Ⅱ的蛋白表达。结果 与正常对照组相比,阴性对照组的miRlet-7b-5p表达量显著降低(P <0.01),凋亡基因Caspase-3mRNA及蛋白表达显著增加(P <0.01),自噬基因LC3ⅡmRNA及蛋白表达增加(P <0.05)。与阴性对照组相比,过表达组miR-let-7b-5p表达量显著增加(P <0.01),凋亡基因Caspase-3mRNA及蛋白表...     

P21/waf1/cip1在U937细胞分化过程中的表达

目的:探讨P21/waf1/cip1在U937细胞分化中表达情况.方法:用佛波脂(PMA)诱导U937细胞向单核-巨噬细胞分化,经流式细胞术测定细胞P21/waf1/cip1基因表达及细胞周期的变化.用倒置显微镜观察细胞分化的形态学变化.结果:U937细胞向单核-巨噬细胞分化过程中细胞由分散和悬浮转变为粘附和贴壁,呈现了P21/waf1/cip1高度表达,同时细胞周期停滞于G1和G2/M期,无细胞凋亡. 结论:P21/waf1/cip1在U937细胞分化过程中有高表达,并伴随细胞周期变化.     

转染p21^WAF1／CIP1对肾癌细胞系GRC—1促凋亡作用

研究转染ｐｗｑ＾２１ＷＡＦ１／ＣＩＰ１对肾癌失足 凋亡作用。方法：采用脂质体介导的逆录病毒载体将ｐ２１＾ＷＡＦ１／ＣＩＰ１转入无Ｐ２１蛋白表达的肾癌细胞ＧＲＣ－１中,通过是,流式细胞仪,ＤＮＡ梯电泳检测细胞凋亡。结果：电镜检测到凋亡细胞,ＤＮＡ电泳呈梯状。所检测细胞中１５．３％出现凋亡。结论：ｐ２１＾ＷＡＦ１／ＣＩＰ１过表达有促进ＧＲＣ－１细胞凋亡作用。     

胃癌Smad4、CyclinD1和p21^waf1表达意义及其与生存的关系

目的研究Smad4、CyclinD1及p21^waf1在胃癌组织中的表达状况,分析其与l临床病理特征及生存之间的关系。方法应用免疫组化S-P法,采用组织芯片技术,分析200例胃癌、56例癌旁组织中Smad4、CyclinD1和p21^waf1蛋白的表达。结果胃癌中Smad4、CyclinD1和p21^waf1蛋白的阳性表达率分别为67．0％、56．5％和59．5％。Smad4蛋白阳性表达率在低分化及弥漫型胃癌中较高分化及肠型胃癌降低（P〈0．01）;CyclinD1的表达水平在有淋巴结转移、低分化程度及弥漫型胃癌中高于无淋巴结转移、高分化及肠型胃癌者（P〈0．05）;p21^waf1n蛋白的阳性表达率在低分化及弥漫型胃癌中较高分化及肠型胃癌者下降（P〈O．05）。胃癌中Smad4与p21^waf1蛋白表达之间呈正相关性（r=0．179,P〈0．05）。用Kaplan—Meier生存曲线经Log-rank检验发现,Smad4阳性表达者预后优于阴性表达者。结论胃癌中存在TGF—Smad4信号通路的异常,Smad4蛋白的异常表达可能导致p21^waf1蛋白的低表达,进而使p21wan对细胞G1／S期的负性调控作用减弱,最终导致肿瘤的发生发展。Smad4蛋白高表达对胃癌患者是一个有利的预后因素,但尚不能作为一个独立的预后指标。     

脱氧核酶对cip1/waf1 mRNA的切割及对人绒毛膜癌细胞凋亡相关基因表达的影响

目的探讨脱氧核酶对cip1/waf1 mRNA的切割作用及对人绒毛膜癌细胞凋亡相关基因表达的影响.方法针对cip1/waf1基因的核苷酸序列,合成"10～23"型脱氧核酶及其类似物,提取总RNA在体外切割cip1/waf1 mRNA;转染绒毛膜癌细胞后,用RT-PCR扩增和荧光免疫方法测定cip1/waf1和凋亡相关基因bcl-2和bax的表达.结果未经修饰的脱氧核酶DzT和在DzT的3′末段添加倒位连接T碱基的脱氧核酶DzTi在体外能够有效地切割cip1/waf1 mRNA;在转染绒毛膜癌细胞后,DzTi比DzT对cip1/waf1 mRNA表现出更强的切割作用,能显著地降低细胞内cip1/waf1蛋白(p21cip1/waf1蛋白或p21蛋白)水平(P＜0.01),下调bax基因的表达(P＜0.05),但对bcl-2基因的表达和细胞的生长未表现出显著的影响(P＞0.05).DzT和DzTi的催化中心的一个碱基被替换后形成的脱氧寡核苷酸DzT′和DzTi′在胞外和胞内均不表现对cip1/waf1 mRNA的切割作用.结论人工合成的脱氧核酶确实能够高效特异地切割cip1/waf1 mRNA,并能上调凋亡促进基因bax的表达,表明脱氧核酶确实能够通过切割cip1/waf1 mRNA来参与细胞的凋亡过程.     

p21~(waf1)-p27~(kip1)基因联合转染对乳腺癌细胞增殖和中心体复制的影响

目的 探讨外源性 p21~(waf1)-p27~(kip1)基因联合转染对人乳腺癌细胞细胞增殖及中心体复制的影响和意义.方法 应用脂质体介导法分别将构建的plRES-p27~(waf1)、p27~(kip1)、pIRES-p21~(waf1)-p27~(kip1)真核表达载体,转染入常规培养的人乳腺癌细胞系MCF-7,未转染组、转染空质粒组细胞做对照,Western免疫印迹法验证转染前后p21~(waf1)、p27~(kip1)基因蛋白表达情况;噻唑蓝(MTT)法绘制细胞生长曲线;流式细胞仪检测细胞周期DNA分布变化;免疫荧光技术检测转染前后中心体复制的变化情况.结果 Western免疫印迹法证实p27~(waf1)、p27~(kip1)、p27~(waf1)基因转染24 h后,其蛋白表达量明显增多(P<0.01),与对照组比较,各转染实验组细胞生长明显受抑制(P<0.01),细胞周期大部分停滞于G1期,各实验组G.期和S期细胞比例依次为:(69.52±3.21)%、(18.38±2.51)%,(60.83±3.02)%、(24.52±1.89)%,(78.37±2.83)%、(15.27±1.74)%,对照组则为(47.28±2.25)%、(33.52±1.97)%,中心体复制异常的乳腺癌细胞数较转染前(13.47±0.33)%明显减少:(5.07±0.38)%,(6.28±0.35)%,(3.47±23)%,两两比较差异有统计学意义(P<0.01).结论 外源性p21~(waf1)和p27~(kip1)基因转染可抑制人乳腺癌细胞的增殖及中心体的异常复制,二者联合转染时效果显著.提示,乳腺癌的发生、发展是多基因、多因素共同参与的过程,p21~(waf1)和p27~(kip1)在调控细胞增殖及中心体复制方面具有协同作用,对于p21~(waf1)、p27~(kip1)基因失活、低表达或不表达的乳腺癌,联合转染外源性p21~(waf1)、p27~(kip1)基因不失为一种有效的治疗手段.     

胃癌Smad4、CyclinDl和p21~(waf1)表达意义及其与生存的关系

目的研究Smad4、CyclinD1及p21~(waf1)在胃癌组织中的表达状况,分析其与临床病理特征及生存之间的关系。方法应用免疫组化S-P法,采用组织芯片技术,分析200例胃癌、56例癌旁组织中Smad4、CyclinD1和p21~(waf1)蛋白的表达。结果胃癌中Smad4、CyclinD1和p21~(waf1)蛋白的阳性表达率分别为67.0%、56.5%和59.5%。Smad4蛋白阳性表达率在低分化及弥漫型胃癌中较高分化及肠型胃癌降低(P<0.01);CyclinD1的表达水平在有淋巴结转移、低分化程度及弥漫型胃癌中高于无淋巴结转移、高分化及肠型胃癌者(P<0.05);p21~(waf1)蛋白的阳性表达率在低分化及弥漫型胃癌中较高分化及肠型胃癌者下降(P<0.05)。胃癌中Smad4与p21~(waf1)蛋白表达之间呈正相关性(r=0.179,P<0.05)。用Kaplan-Meier生存曲线经Log-rank检验发现,Smad4阳性表达者预后优于阴性表达者。结论胃癌中存在TGF-Smad4信号通路的异常,Smad4蛋白的异常表达可能导致p21~(waf1)蛋白的低表达,进而使p21~(waf1)对细...