肿瘤内神经新生在口腔鳞状细胞癌进展中的作用及机制

目的 探讨肿瘤内神经新生在口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma, OSCC）进展中的作用及其机制。方法 利用免疫组化方法在167例人OSCC组织检测泛神经标记物蛋白基因产物（PGP）9.5表达;采用Transwell小室实验检测神经递质降钙素基因相关肽（CGRP）对人舌鳞癌细胞株TSCCA细胞迁移和侵袭的影响;利用免疫印迹方法观察CGRP对TSCCA细胞中细胞外调节蛋白激酶（ERK）、p38、c-Jun氨基末端激酶（JNK）磷酸化的影响;进而观察ERK/p38/JNK抑制剂对CGRP诱导TSCCA细胞迁移和侵袭的影响。结果 88%的OSCC组织中表达PGP9.5,主要分布在肿瘤间质中;PGP9.5中/强阳性表达与肿瘤的分级（r=0.425,P<0.001）、神经浸润（r=0.166,P<0.05）及患者短生存期（r=0.186,P<0.05）呈正相关。CGRP引起TSCCA细胞的迁移数目增加（CGRP： 165.4±14.2,对照： 110.2±5.3,P<0.001）,侵袭数目也增加（CGRP： 68.3±23.5,对照： 12.8±2.8,P<0.001）;CGRP处理TSCCA细胞后,1h引起p-ERK的表达上调（P<0.001）,6h引起p-p38的表达上调（P<0.05）,24h引起p-JNK的表达上调（P<0.05）;与对照组相比,JNK抑制剂SP600125引起的TSCCA细胞的迁移数目减少（SP600125： 94.5±15.5,对照： 142.5±20.8,P<0.05）,侵袭数目也减少（SP600125： 52.5±16.5,对照： 118.4±38.1,P<0.05）。结论 OSCC神经新生与疾病的进展密切相关,神经递质CGRP可能通过磷酸化JNK促进OSCC细胞的迁移和侵袭,从而促进OSCC的进展。     

MIF基因沉默对肝癌细胞系增殖凋亡及ERK/RSK2信号通路的影响

目的探讨RNA 干扰介导的巨噬细胞移动抑制因子（MIF）基因沉默对肝癌细胞系SMMC-7721与HepG2 凋亡的影响及可能的作用机制。方法将MIF-siRNA 干扰序列转染SMMC-7721 与HepG2 细胞,以Con-siRNA序列转染的细胞作为对照。采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）及Western blot检测MIF沉默效果,CCK-8 法测定细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡率。采用Western blot检测MIF 沉默后凋亡相关基因BCL-2、BAX、P53 的蛋白水平及细胞外信号调节激酶（ERK）、P90 核糖体s6 激酶2（RSK2）、糖原合成激酶3β（GSK3β）、Bad 蛋白水平及其磷酸化水平。结果沉默组细胞中MIF mRNA 及蛋白表达水平与对照组比较,差异有统计学意义（p <0.05）,沉默组低于对照组;两组细胞增殖能力比较,差异有统计学意义（p < 0.05）,MIF沉默组细胞增殖能力低于对照组;两组凋亡率比较,差异有统计学意义（p <0.05）,MIF沉默组细胞凋亡率高于对照组;两组细胞BAX、P53、BCL-2 蛋白水平比较,差异有统计学意义（p <0.05）,MIF 沉默组细胞BAX、P53 的蛋白表达水平高于对照组,而BCL-2 蛋白水平低于对照组;沉默组与对照组细胞中ERK、RSK2 及Bad 蛋白水平比较,差异均无统计学意义（p >0.05）,而沉默组与对照组细胞中GSK3β、p-GSK3β、p-ERK、p-RSK2 及p-Bad 蛋白水平比较,差异均具有统计学意义（p <0.05）。结论MIF 基因沉默抑制SMMC-7721与HepG2细胞的增殖能力并促进细胞凋亡可能是通过调节ERK/RSK2信号通路实现的。     

PDGF对哮喘大鼠气道平滑肌细胞中ERK通路的影响研究

目的：研究血小板源性生长因子（PDGF）对哮喘大鼠气道平滑肌细胞（ASMC）中ERK信号通路的调控作用。方法建立哮喘大鼠模型,原代分离培养ASMC,设未干预组（A组）、ERK阻断剂组（B组）、PDGF组（C组）和PDGF＋ERK阻断剂组（D组）。A组不加干预;B组又分为B1、B2、B3、B4组,分别加入浓度为0.1、1、5、10μmol/L的ERK阻断剂U0126;C组又分为C1、C2、C3、C4组,分别加入浓度为1、10、25、50μg/L的PDGF同二聚体PDGF- BB;D组加入10μmol/L的U0126和50μg/L的PDGF- BB。以RT- PCR法检测各组ERK1和TGF-β1的mRNA表达,免疫组化法检测A、B4、C4和D组中以上蛋白的表达。结果 RT- PCR提示B1、B2、B3、B4组ERK1 mRNA表达均显著低于A组（均P＜0.01）,U0126以浓度依赖的方式抑制PDGF诱导的ASMC中ERK的活化,C1、C2、C3、C4组ERK1 mRNA表达均显著高于A组（均P＜0.01）,ERK1 mRNA的表达与PDGF- BB存在明显的浓度依赖关系,D组与A组比较无统计学差异（P＞0.05）。免疫组化提示B4组ASMC中ERK1蛋白表达显著低于A组,C4组显著高于A组（均P＜0.01）,D组与A组相比无统计学差异（P＞0.05）;B4组TGF-β1蛋白表达显著低于A组,C4组显著高于A组,同时C4组显著高于B4组（均P＜0.01）,D组与A组相比无统计学差异（P＞0.05）。结论 PDGF可剂量依赖性激活哮喘大鼠ASMC内的ERK通路,同时伴随TGF-β1信号通路的活化。ERK通路参与了ASMC增殖的细胞内信号转导过程,PDGF可能经ERK环节促进TGF-β1通路活化。     

哮喘大鼠气道平滑肌细胞ERK信号通路调控Smad6/7的研究

目的探讨在哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)中ERK信号通路对Smad6/7蛋白的调控。方法复制哮喘大鼠模型,原代培养ASMC,实验设未干预组(A组)、细胞外调节激酶(ERK)阻断剂(U0126)组(B组)、血小板源性生长因子(PDGF)组(C组)、PDGF+ERK阻断剂组(D组)。免疫组化法测定Smad6/7蛋白的表达,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定Smad6/7 mRNA表达。结果哮喘大鼠ASMC中Smad 6/7蛋白B组显著高于A组(P<0.01),C组显著低于A组(P<0.01),D组与A组比较无统计学差异(P>0.05);各组哮喘大鼠ASMC中Smad6/7 mRNA表达无统计学差异。结论哮喘大鼠ASMC中ERK信号通路调控Smad6/7的作用发生在蛋白水平,不发生于基因水平。     

shRNA干扰基膜聚糖调控肝癌细胞侵袭和迁移能力的实验研究

目的 本研究旨在探索沉默基膜聚糖(lumican)对肝癌细胞侵袭和迁移的影响及其分子机制。方法 通过shRNA沉默肝癌细胞HepG2和MHCC97H中的lumican。通过实时定量PCR（qRT-PCR)检测细胞中lumican的mRNA水平,Transwell检测细胞侵袭,划痕实验分析细胞迁移。蛋白印记检测lumican、MMP-9、VEGF、ERK1、JNK、p-ERK1和p-JNK蛋白水平。结果 肝癌细胞HepG2和MHCC97H中lumican的mRNA水平和蛋白质水平高于正常肝细胞L02 (P<0.01)。HepG2和MHCC97H细胞中lumican shRNA组mRNA水平和蛋白质水平低于对照组(P<0.01)。与scramble组相比,HepG2和MHCC97H细胞中lumican shRNA组细胞侵袭和迁移显著降低(P<0.01)。HepG2和MHCC97H细胞中lumican shRNA组MMP-9和VEGF表达低于scramble组(P<0.01)。与scramble组相比,HepG2和MHCC97H细胞中lumican shRNA组p-ERK1和p-JNK蛋白水平下降(P<0.01)。结论 shRNA干扰lumican通过抑制ERK1/JNK通路激活减弱肝癌细胞侵袭和迁移。     

栀子苷对Treg细胞分化和功能的影响及其机制研究

目的 考察栀子苷对初始T细胞（Nave T）向Treg定向分化的影响和机制。方法 通过磁珠分选小鼠脾脏CD4+CD62L+T,诱导其向Treg分化,单独使用栀子苷以及与ERK通路阻断剂、JNK阻断剂合用,流式细胞术检测Treg细胞比例,Western blot法检测转录因子Foxp3、ERK、p-ERK、JNK、p-JNK等表达,ELISA法检测细胞上清IL-10含量。结果 与Control组比较,栀子苷组Treg细胞比例,Foxp3、p-ERK、p-JNK表达,IL-10含量显著增高（P<0.05~0.01）;单纯诱导的基础上先加入ERK通路阻断剂再加入栀子苷,其Treg细胞比例、Foxp3表达水平、IL-10含量显著低于栀子苷组（P<0.05~0.01）,但高于Control组（P<0.01）;单纯诱导的基础上先加入JNK阻断剂再加入栀子苷,其Treg细胞比例、Foxp3表达水平、IL-10含量显著低于栀子苷组（P<0.05~0.01）,但高于Control组（P<0.01）。结论 栀子苷可以显著促进Nave T向Treg定向分化,同时增强其功能,ERK、JNK可能和其发挥作用有一定关系。      

高磷诱导内皮细胞凋亡的代谢组学以及MAPK通路研究

目的研究高磷对血管内皮细胞代谢影响并观察MAPK通路变化情况。方法体外培养人脐静脉血管内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVEC）24 h,分为正常浓度组（1.0 mmol/L）、高磷浓度组（3.0 mmol/L）。通过气相色谱/质谱（gas chromatography/mass spectrometry,GC/MS）方法分析代谢物图谱,并采用正交信号校正和偏最小二乘判别分析方法（OSC-PLS-DA）。根据OSC-PLS-DA模型的变量权重（variable importance for projection,VIP）〉1及显著性差异检验结果筛选出差异性代谢物。同时用AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;Western印记法检测MAPK通路ERK1/2、p-ERK1/2、p38 M APK、p-p38 M APK、JNK、p-JNK蛋白表达。结果鉴别出16个显著差异物质,涉及碳水化合物、氨基酸以及脂质代谢通路紊乱;与1.0 mmol/L Pi组相比,3.0 mmol/L Pi组细胞凋亡率明显升高（P〈0.05）,p-ERK1/2蛋白表达明显升高（P〈0.05）,p-p38 M APK蛋白表达明显下降（P〈0.05）,ERK1/2、p38 M APK、JNK和p-JNK蛋白表达无明显改变。结论高磷诱导内皮细胞凋亡是通过上调p-ERK信号通路及下调p-p38MAPK信号通路的活性来实现的。     

磷脂酰肌醇3激酶和细胞外调节蛋白激酶信号通路对支气管哮喘大鼠气管平滑肌细胞增殖的协同调控作用

目的 探讨磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）和细胞外调节蛋白激酶（ERK）信号通路对支气管哮喘（简称哮喘）大鼠气管平滑肌细胞（ASMC）增殖的协同调控作用。方法 6～8周龄SPF级雄性SD 大鼠,复制大鼠慢性哮喘模型,离体培养大鼠气管ASMC,将细胞分为正常组、哮喘组、转化生长因子β1（TGF-β1）组、TGF-β1+PD98059组、TGF-β1+渥曼青霉素（wortmannin）组、TGF-β1+PD98059+wortmannin组。采用CCK-8法检测各组细胞增殖情况及Western blotting法检测磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）和磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2（p-ERK1/2）表达情况。结果 CCK-8法检测各组大鼠ASMC OD 值,TGF-β1组高于正常组和哮喘组,TGF-β1+ PD98059组、TGF-β1+wortmannin组和TGF-β1+PD98059+wortmannin组低于TGF-β1组,TGF-β1+ PD98059+wortmannin组低于TGF-β1+ PD98059组和TGF-β1+wortmannin组（P＜0.01）。Western blotting法检测ASMC中p-Akt的表达,哮喘组高于正常组,TGF-β1组高于哮喘组,TGF-β1+wortmannin组低于TGF-β1组（P＜0.01）。Western blotting法检测ASMC中p-ERK1/2的表达,哮喘组高于正常组,TGF-β1组高于哮喘组,TGF-β1+ PD98059组低于TGF-β1组（P＜0.01）。结论 PI3K和ERK信号通路协同调控了TGF-β1刺激哮喘大鼠ASMC增殖过程。     

依布硒啉通过调节MAPK通路发挥心肌缺血再灌注保护作用的研究

目的 研究依布硒啉对心肌缺血再灌注的保护作用及与MAPK通路的相关性。 方法 将36只雄性Wistar大鼠随机分为4组,分别为假手术组(Sham)、缺血再灌注对照组(IR-Control)、依布硒啉+缺血再灌注组(Ebselen+IR)和依布硒啉组(Ebselen)。建立心肌缺血再灌注模型。通过HE染色观察及组织学损伤评分评价各组心肌凋亡坏死情况,Elisa法测定血清TNF-α、IL-6、组织TGFβ1表达情况,蛋白免疫印迹法测定各组MAPK通路相关蛋白表达情况。 结果 相较于缺血再灌注对照组,依布硒啉预处理后显著降低了再灌注所导致的心肌坏死、炎症和水肿,在组织学损伤评分上分值更低,依布硒啉预处理显著降低了缺血再灌注所造成的TNF-α上升(P<0.05)及IL-6、TGFβ1的上升(均P<0.01)。缺血再灌注损伤组的JNK和p38的磷酸化水平较假手术组显著增加,p-JNK上升了0.34±0.06,p-p38上升了0.42±0.10,p-ERK1/2下降了0.35±0.07,均P<0.001。缺血再灌注+依布硒啉组则减轻了由缺血再灌注所造成的磷酸化JNK和p38的上升与ERK1/2水平的降低,p-JNK下降了0.17±0.05(P<0.001),p-p38下降了0.16±0.03(P<0.01),p-ERK1/2提高了0.09±0.02(P<0.05)。 结论 依布硒啉处理可有效发挥心肌缺血再灌注保护作用,其具体机制可能与MAPK通路调节相关。      

滋肾活血法联合低分子肝素改善小鼠复发性流产及对VEGF/VEGFR-2/p-ERK/ERK信号通路的影响

目的 通过观察滋肾活血法联合低分子肝素对复发性流产小鼠流产率及蜕膜中血管内皮生长因子/血管内皮生长因子受体2/磷酸化的细胞外调节蛋白激酶/细胞外调节蛋白激酶（VEGF/VEGFR-2/p-ERK/ERK）信号通路的影响,以探讨其作用机制。方法 68只未孕CBA/J雌鼠,26只DBA/2雄鼠,8只BALB/c雄鼠,按雌：雄=2：1,建立CBA/J×DBA/2习惯性流产小鼠模型50只,随机数字法分为模型组（蒸馏水）、LMWH组（1000U/kg）、滋肾活血方低剂量（3.9g/kg）+LMWH（1000U/kg）组、滋肾活血方中剂量（11.7g/kg）+LMWH（1000U/kg）组、滋肾活血方高剂量（35.1g/kg）+LMWH（1000U/kg）组,每组10只;建立CBA/J×BALB/c正常妊娠小鼠模型10只作为正常对照组（蒸馏水）。按照人鼠体表面积换算每日滋肾活血方灌胃药量和LMWH注射量,给药干预2周。计算各组小鼠胚胎丢失率;免疫组化法测定小鼠蜕膜中VEGF蛋白的表达;蛋白质印迹法（Western blot）测定小鼠蜕膜中VEGF、VEGFR-2、p-ERK、ERK表达。结果 与正常对照组比较,模型组胚胎丢失率上升（38.38%比7.29%,P<0.05）,该组免疫组化VEGF蛋白平均光密度值降低[（0.22±0.07）比（0.23±0.01）,P<0.01],该组WB结果显示VEGF、VEGFR-2蛋白表达下降[VEGF：（2.01±0.08）比（2.90±0.06）;VEGFR-2：（2.62±0.01）比（3.15±0.08）,P均<0.05]。与模型组比较,LMWH组、滋肾活血方低剂量+LMWH组、滋肾活血方中剂量+LMWH组和滋肾活血方高剂量+LMWH组胚胎丢失率下降（23.76%、16.83%、12.75%、10.10%比38.38%,P均<0.05）,免疫组化结果显示上述4组的VEGF蛋白平均光密度值上升[（0.24±0.04）、（0.29±0.02）、（0.32±0.06）、（0.33±0.10）比（0.22±0.07）,P均<0.05],WB结果显示上述4组的VEGF、VEGFR-2、p-ERK、ERK蛋白表达上升[VEGF：（3.13±0.09）、（2.93±0.73）、（3.31±0.18）、（3.38±0.15）比（2.01±0.08）;VEGFR-2：（3.19±0.02）、（3.53±0.10）、（3.77±0.12）、（3.83±0.09）比（2.62±0.01）;p-ERK：（1.57±0.35）、（1.79±0.06）、（1.73±0.07）、（1.75±0.06）比（1.39±0.04）;ERK：（3.82±0.08）、（4.22±0.09）、（4.24±0.04）、（4.19±0.27）比（3.42±0.14）,P均<0.05]。与LMWH组比较,滋肾活血方低剂量+LMWH组胚胎丢失率无明显差异（P＞0.05）,滋肾活血方中剂量+LMWH组、滋肾活血方高剂量+LMWH组胚胎丢失率降低更显著（P均<0.05）;免疫组化结果显示VEGF蛋白平均光密度值在滋肾活血方低剂量+LMWH组、滋肾活血方中剂量+LMWH组、滋肾活血方高剂量+LMWH组上升（P均<0.05）;WB结果显示上述3组的VEGFR-2、p-ERK、ERK蛋白表达上升（P均<0.05）,VEGF蛋白表达无明显差异（P均>0.05）。结论 滋肾活血法联合LMWH能够改善复发性流产小鼠妊娠结局,其机制可能与激活VEGF/VEGFR-2/p-ERK/ERK信号通路有关。     

脑缺血再灌注损伤中FKBP51对JNK通路的影响

目的 探讨脑缺血再灌注损伤中FK506结合蛋白51（FKBP51）对c-Jun氨基末端激酶（JNK）信号通路的影响.方法 采用四血管阻塞制作大鼠全脑缺血模型.将体质量220 ～ 250 g健康雄性清洁级SD大鼠按随机数字表法进行分组：假手术组、缺血再灌注组、FKBP51反义寡核苷酸组、FKBP51错义寡核苷酸组、溶剂对照组.假手术组仅电凝双侧椎动脉,不夹闭双侧颈总动脉;缺血再灌注组电凝双侧椎动脉,夹闭双侧颈总动脉;FKBP51反义寡核苷酸组在电凝双侧椎动脉时侧脑室注射反义寡核苷酸进行干预,连续注射3d,第4天夹闭双侧颈总动脉;FKBP51错义寡核苷酸组和溶剂对照组侧脑室分别注射等体积错义寡核苷酸和TE buffer.除假手术组外,其余各组均缺血15 min后复灌不同时间点,然后分别断头取海马用于免疫印迹和免疫沉淀,检测各组中FKBP51蛋白表达;检测FKBP51反义寡核苷酸对FKBP51蛋白表达和JNK、c-Jun磷酸化的影响.结果 （1）FKBP51反义寡核苷酸组的FKBP51蛋白表达量明显减少,与假手术组差异有统计学意义（P＜0.05）.（2）各组之间JNK总蛋白的表达差异均无统计学意义（P＞0.05）.假手术组p-JNK的表达量明显少于其他组,差异有统计学意义（P＜0.05）;缺血再灌注3h组、溶剂对照组、FKBP51错义寡核苷酸组p-JNK的表达较高,三组之间的差异无统计学意义（P＞0.05）;与FKBP51错义寡核苷酸组比较,FKBP51反义寡核苷酸组p-JNK的表达量较少,差异具有统计学意义（P＜0.05）.（3）各组之间c-Jun总蛋白的表达差异均无统计学意义（P＞0.05）.假手术组p-c-Jun的表达量明显少于其他各组,差异有统计学意义（P＜0.05）;缺血再灌注6h组、溶剂对照组、FKBP51错义寡核苷酸组p-c-Jun的表达量较高,三组之间的差异无统计学意义（P＞0.05）;与FKBP51错义寡核苷酸组比较,FKBP51反义寡核苷酸组p-c-Jun的表达量较少,差异具有统计学意义（P?     

激活蛋白-1对香烟烟雾提取物诱导气道 黏蛋白5AC基因表达的调控作用

目的：了解激活蛋白-1（AP-1）参与调控香烟烟雾诱导的气道黏蛋白（MUC）5AC表达的作用机制,探讨此过程中AP-1活化的可能信号途径。 方法：体外培养人气道上皮细胞BEAS-2B,给予香烟烟雾提取物（CSE）刺激,干预实验用c-Jun 的显性负性突变体TAM67转染细胞阻断AP-1的DNA结合活性;用SP600125和PD98059预处理分别阻断c-Jun氨基端激酶（JNK）和细胞外信号调节激酶（ERK）的活性。以ELISA法检测MUC5AC蛋白含量,Western印迹检测磷酸化JNK（p-JNK）、磷酸化ERK（ p-ERK）和磷酸化P38（ p-P38）含量,RT-PCR检测MUC5AC mRNA 表达水平, EMSA测定AP-1的 DNA结合活性。 结果：CSE（1 g/L）刺激后MUC5AC mRNA表达水平和蛋白含量明显高于对照组（均P＜0.01）,AP-1 的DNA结合活性也明显强于对照组（P＜0.01）,伴随p-ERK和p-JNK蛋白含量显著增加,与对照组相比,差异有统计学意义（均P＜0.01）,而P38含量无明显变化(P＞0.05);与CSE组相比,TAM67转染细胞后MUC5AC mRNA表达水平和蛋白含量均显著降低 (P＜0.01);与CSE组相比,用SP600125或PD98059处理细胞后可明显抑制AP-1的 DNA结合活性 (均P＜0.05),并下调MUC5AC蛋白含量和mRNA的表达（均P＜0.05）。 结论：AP-1参与调控CSE诱导的气道MUC5AC基因表达的过程,此过程是由JNK和ERK信号转导通路激活AP-1,再由AP-1与MUC5AC启动子上AP-1 DNA反应元件结合后在转录水平上调MUC5AC的表达而实现的。     

Effect of pharmaceutical intervention on AT1R, AT2R, ERK and JNK activity in chronic hibernating myocardium in rabbits

Objective： To investigate in chronic hibernating myocardium in rabbits and the influence and significance of captopril, betaloc, valsartan in angiotensin Ⅱ subtype 1 receptor（AT1R）, angiotensin Ⅱ subtype 2 receptor（AT2R）, extracellular signal regulated kinase 1/2 （ERK1/2）, c-Jun N-terminal kinase（JNK）. Methods： The model of chronic hibernating myocardium（CHM） was established. The changes of AT1R, AT2R, ERK1/2, JNK in different groups were assessed by western blotting and immunohistochemistry. Results： The amount of AT1R decreased while AT2R increased in the CON group compared with in sham group, and both AT1R and AT2R decreased in drug groups compared with the CON group. The content of ERK had no change in each group, while that of ＂expression＂ p-ERK increased in CON group compared with in sham group, and was lower in drug intervention groups than in CON and sham groups. The contents of JNK and p-JNK decreased in CON and drug intervention groups compared with in sham group. The protein levels of JNK, p-JNK in drug intervention groups were lower than in the CON group. Three drugs can inhibit interstitial fibrosis and reduce apoptotic cells. The expression levels in the groups（with different doses） had statistical difference as well as between groups of captopril and other drugs; however the results between betaloc and valsartan had no significant difference. Conclusion： AT1R, AT2R may be the upper stream receptor of ERK and JNK and may participate in generation and evolution of CHM. Captopril, valsartan and betaloc may preserve CHM by inhibiting ATIR, AT2R and JNK activity.     

JNK信号通路在老年大鼠耳蜗细胞凋亡中的作用

目的探讨c-Jun氨基末端激酶(c-Juna mino-terminal kinase,JNK)信号通路在老年大鼠耳蜗细胞凋亡中的作用,为老年性聋的预防和治疗提供更多的切入点。方法Wistar大鼠24只,其中12只为对照组(3～4月龄),12只为自然衰老组(22～24月龄);听性脑干反应(auditory brainstem response,ABR)检测听力学改变;采用透射电镜观察老年大鼠耳蜗的超微病理变化;用免疫组化及Western blotting方法检测p-JNK和p-c-Jun蛋白的表达。结果老年组大鼠听力〔(72.083±13.345)dBSPL〕较对照组〔(32.083±3.878)dBSPL〕明显下降,差异具有统计学意义(P<0.01);透射电镜下可见外毛细胞有凋亡样改变,螺旋神经节细胞内大量脂褐素沉着;在耳蜗石蜡切片中可观察到p-JNK和p-c-Jun免疫反应阳性细胞,定位于细胞核,老年组与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05);Western blotting结果显示老年组内耳组织p-JNK和p-c-Jun的蛋白表达明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在大鼠老年性聋的发生过程中,各种损伤因素可能通过激活JNK信号通路而促使耳蜗细胞的凋亡。     

宁泌泰胶囊改善慢性前列腺炎引发疼痛的研究

目的 研究宁泌泰(NMT)胶囊改善慢性前列腺炎引发疼痛的作用及潜在机制。方法 将50只雄性C57BL/6小鼠随机分为空白组、模型组、NMT低剂量组、NMT中剂量组、NMT高剂量组,每组10只。造模后低、中、高剂量组分别灌胃给药6、12、18 g·kg^-1NMT溶液,空白组、模型组灌胃等量的生理盐水。采用热辐射甩尾法和热板法进行行为学检测;免疫组化法检测各组前列腺神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)以及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量;qPCR法检测前列腺组织中TNF-α、IL-6和IL-1β mRNA的相对表达量;ELISA法检测前列腺组织中IL-6、IL-1β、TNF-α表达水平;Western blot法检测p-ERK/ERK、p-JNK/JNK、p-p38MAPK/p38MAPK蛋白表达水平。结果 与模型组比较,NMT低、中、高3个剂量组小鼠的热板法和甩尾法所测定痛阈值均显著提高(P<0.01,P<0.001),前列腺组织中GFAP和TNF-α表达量明显降低(P<0.05),TNF-α、IL-6和IL-1β的mRNA水平均显著降低(P<...     

波动性高糖诱导的内皮细胞凋亡与JNK信号转导途径

目的：观察波动性高糖对人血管内皮细胞凋亡的影响,并探讨其机制。 方法：波动性高糖（5.5或20 mmol/L）与恒定性高糖（20 mmol/L）作用于人脐静脉内皮细胞7 d,用Annexin V/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡率,Hoechst33258荧光染色观察凋亡形态学变化,比色法测定培养液中超氧化物岐化酶（SOD）活力和丙二醛（MDA）含量, Western 印迹测定磷酸化c-JunNH2-末端激酶（p-JNK）水平。结果：波动性高糖组的细胞凋亡率明显高于恒定性高糖组（P＜0.05）,且其培养液中SOD活力降低（P＜0.05）,MDA含量增加（P＜0.05）,细胞p-JNK水平增高（P＜0.05）。JNK特异性抑制剂SP600125应用后降低了波动性高糖诱导的细胞凋亡率（P＜0.05）。抗氧化剂维生素C应用后抑制了细胞内p-JNK水平的升高（P＜0.05）,降低了细胞凋亡率（P＜0.05）。结论：波动性高糖较恒定性高糖更易促发培养的人脐静脉内皮细胞凋亡,其机制可能与氧化应激水平增高,进而激活JNK信号转导途径有关。     

高氧诱导下新生大鼠脑损伤的发生机制和前列腺素E1的干预作用

目的：探讨高氧诱导下新生大鼠脑损伤的发生机制,阐明前列腺素E1（PGE-1）通过内质网应激（ERS）途径发挥保护作用的机制,为高氧所致新生儿脑损伤的治疗提供相关理论依据。方法：90只新生Wistar大鼠随机分为对照组、高氧组和高氧+PGE-1组,每组30只。高氧组和高氧+PGE-1组大鼠放于高氧箱内,对照组大鼠置于同一室内常压条件下。自造模第1天开始,高氧+PGE-1组大鼠腹腔注射PGE-1,另外2组大鼠以同等剂量生理盐水替代。在高氧暴露第1、3和7天,每组随机选取10只大鼠检测体质量和脑组织含水量;HE染色观察3组大鼠脑组织形态表现;TUNEL染色观察3组大鼠脑细胞凋亡情况,计算细胞凋亡指数;Western blotting法检测各组大鼠脑组织中氨基末端蛋白激酶（JNK）和磷酸化JNK （p-JNK）表达量。结果：实验第1、3和7天,与同时间对照组比较,高氧组大鼠体质量明显降低（P<0.05）,脑组织含水量增加（P<0.05）;与高氧组比较,高氧+PGE-1组新生大鼠体质量明显升高（P<0.05）,脑组织含水量降低（P<0.05）。HE染色,对照组大鼠大脑皮层细胞形态规则,排列有序,极少有炎性细胞的浸润、细胞的水肿;高氧组大鼠脑组织皮层细胞排列紊乱,大脑实质可见炎性细胞浸润,存在脑血管水肿;高氧+PGE-1组大鼠大脑皮层细胞排列整齐,细胞形态相对规则,脑实质炎性细胞数减少,水肿较高氧组减轻。TUNEL染色,对照组大鼠大脑组织以大脑皮层细胞为主,凋亡细胞少见,胞核呈均质蓝色;高氧组大鼠脑组织中胞核呈亮白色,为阳性凋亡细胞。与高氧组比较,同一时间高氧+PGE-1组凋亡细胞数明显减少;高氧组大鼠脑细胞凋亡指数高于高氧+PGE-1组和对照组（P<0.05）。高氧组大鼠脑组织中JNK和p-JNK表达量较对照组明显升高（P<0.05）,高氧+PGE-1组大鼠脑组织中JNK和p-JNK表达量较高氧组明显降低（P<0.05）。结论：高氧导致新生大鼠脑损伤的发病机制可能与下调ESR相关p-JNK和JNK蛋白表达有关,且PGE-1对其有保护作用。