长期低剂量锰染毒对子代大鼠睾丸生精细胞线粒体状态和细胞凋亡的影响

目的 探讨长期低剂量氯化锰染毒对子代大鼠睾丸生精细胞线粒体形态和凋亡的影响.方法 健康雌性SD大鼠32只分为对照组、低、中、高剂量组.腹腔注射2、4和8 mg/kg MnCl2·4H2O或生理盐水,1次/天,5天/周,共8周,并在妊娠期和哺乳期继续染毒.每组8只12周龄子代大鼠断头处死后,观察睾丸生精小管结构和生精细胞线粒体形态、视神经萎缩蛋白1(Opa1)、动力相关蛋白1(Drp1)、半胱氨酸蛋白酶9(Caspase9)表达和细胞凋亡情况.结果 随锰染毒剂量增加,生精细胞层数逐渐减少,细胞排列紊乱、数量减少;中、高剂量组可见线粒体分离、肿胀等表现;中、高剂量组Opa1显著降低(P＜0.05,P＜0.01),Drp1、Caspase9则随锰染毒剂量增加而递增(P＜0.05,P＜0.01);锰染毒组生精细胞凋亡指数随锰染毒剂量增加而上升(P＜0.05).结论 长期低剂量锰染毒可调节Opa1/Drp1基因表达而影响线粒体功能,导致子代大鼠生精细胞凋亡.     

VEGF、VEGFR2 在慢性砷中毒大鼠 生精小管中的表达及其意义

目的 研究血管内皮生长因子（VEGF）及其受体2（VEGFR2）在慢性砷中毒大鼠生精小管中 的表达,探讨其与男性不育的关系及致男性不育的机制。方法 健康清洁雄性SD 大鼠40 只,体重160 ～ 200 g,随机分为高（60.0 mg/L）、中（12.0 mg/L）、低（2.4 mg/L）剂量染毒组和对照组（蒸馏水）,采用经 口自由饮水方式染毒,连续染毒6 个月。染毒结束后,采用免疫组织化学法测定VEGF、VEGFR2 的表达,末 端标记法（TUNEL）测定大鼠睾丸生精上皮凋亡细胞灰度值,并观察精子形态,测定精子活力。结果 免疫 组织化学法结果显示,与对照组比较,各染毒组VEGF、VEGFR2 表达水平较低（P <0.05）。TUNEL 法结果 显示,各染毒组大鼠生精上皮凋亡细胞灰度值较对照组低（P <0.05）;随着砷染毒剂量的增加,大鼠睾丸生精 上皮凋亡细胞灰度值呈降低趋势。与对照组比较,各染毒组正常精子数量减少,畸形精子比例逐渐升高,精子 活力下降（P <0.05）。结论 慢性砷中毒可影响大鼠睾丸中VEGF、VEGFR2 的表达,引起生精上皮细胞凋亡, 导致男性不育。     

壬基酚对断乳期子代雄性SD大鼠睾丸组织发育及凋亡的影响

目的研究壬基酚（NP）对断乳期子代雄性SD大鼠睾丸组织发育及凋亡影响的机制。方法对母鼠孕期第7d直至产后断乳期染毒NP（50、100、200mg／kg）,每个剂量组处死F1雄性子代大鼠10只,股动脉取血,测定NP浓度,取雄性子代睾丸进行组织病理学观察,并对睾丸进行Bax、Bcl-2和Caspase-3免疫组织化学分析。结果F1子代大鼠断乳期血清NP浓度在100、200mg／kgNP剂量组高于对照组（P〈0．05）,组织病理学观察可见200mg／kgNP组睾丸生精小管与对照组相比显著缩小。免疫组化结果显示,NP组睾丸生精小管Bax和Caspase-3的表达增强,Bel-2表达减弱。结论母鼠孕期和哺乳期染毒NP能够影响断乳期子代雄性SD大鼠睾丸的正常发育。     

甲醛对性成熟期雄性大鼠生殖毒性的作用研究

目的探讨甲醛对性成熟期雄性大鼠生殖的影响及其作用机制。方法选用性成熟期健康SD雄性大鼠40只,随机分为甲醛染毒高(10 m g/kg.d)、中(1 m g/kg.d)、低(0.1 m g/kg.d)剂量和对照组4组。腹腔注射染毒14 d后观察睾丸重量和形态学改变,精子数量和质量改变,血液中激素含量的改变;利用原位缺口末端标记法(TUNEL)检测睾丸细胞的凋亡;免疫组化方法检测睾丸F as基因的表达。结果①高剂量染毒组大鼠睾丸组织的质量明显低于对照组(P<0.05),中、高剂量染毒组睾丸曲细精管萎缩,生精上皮细胞层数减少,细胞排列紊乱;②中、高剂量染毒组大鼠精子的数量和精子活动度较对照组明显减少,精子畸形率明显增加(P<0.05);③染毒组与对照组相比,血清卵泡刺激素和黄体生成素含量轻度增高,而睾酮含量轻度下降,但差异没有统计学意义;④中、高剂量染毒组睾丸凋亡细胞较对照组明显增多(P<0.05),F as基因表达明显增加(P<0.05),且F as基因阳性表达与睾丸的凋亡指数呈正相关(r=0.8832,P<0.05)。结论甲醛对性成熟期雄性大鼠生殖系统有较明显的损伤,这种损伤可能与F as介导的睾丸生精细胞凋亡机制有关。     

视黄酸对隐睾生精细胞增殖分化及减数分裂的 作用及其机制研究

目的 探讨视黄酸对隐睾生精细胞增殖分化及减数分裂的作用及其机制。方法 将30 只SD 孕 鼠随机分为3 组,每组10 只,取子代雄鼠进行研究。对照组常规饲养不给任何药物或试剂;模型组采用雄激 素拮抗剂氟他胺（Flu）复制隐睾大鼠模型;干预组在模型组基础上,在子代雄鼠生精细胞发育时期予以视黄 酸干预。采用TUNEL 法检测生精细胞的凋亡,免疫组织化学法观察睾丸组织中c-Kit、Stra8、Scp3 蛋白的 表达,qRT-PCR 检测睾丸组织中Stra8、c-Kit、Scp3 mRNA 的表达,Western blotting 检测睾丸组织中Stra8、 Scp3、c-Kit 和PLZF 蛋白的表达。结果 免疫组织化学结果显示,对照组和干预组中可见大量精子细胞排列 整齐;而模型组睾丸各级生精细胞数目减少、排列紊乱,且曲细精管管腔缩窄。TUNEL 检测结果显示,与对 照组和干预组比较,模型组可见大量生精细胞凋亡。对照组和干预组凋亡指数低于模型组（P <0.05）。对照 组和干预组Stra8、c-Kit、Scp3 mRNA 和蛋白相对表达量高于模型组（P <0.05）。对照组和干预组PLZF 蛋 白相对表达量高于模型组（P <0.05）。结论 视黄酸促进生精细胞发育的作用机制可能与调控隐睾生精细胞 增殖分化及减数分裂有关,可一定程度上恢复隐睾大鼠的生殖功能。     

丙烯酰胺对大鼠睾丸的毒性作用及其对增殖细胞核抗原蛋白表达的影响

目的 观察丙烯酰胺(AA)对大鼠睾丸的毒性作用及其对增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达的影响.方法 将40只雄性SD大鼠随机分为对照组(双蒸水)、4 mg/kg AA染毒组、12 mg/kg AA染毒组和36 mg/kg AA染毒组.连续灌胃30 d后,取睾丸行苏木精-伊红染色,观察睾丸组织形态学变化;TUNEL法检测睾丸细胞凋亡情况;化学发光法检测血清中睾酮和雌二醇含量;反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测睾丸组织PCNA mRNA表达;免疫组织化学法和Western blotting技术检测睾丸组织PCNA蛋白表达.结果 12 mg/kg和36 mg/kg AA染毒组大鼠体质量明显低于对照组(P＜0.05).12 mg/kg和36 mg/kg AA染毒组大鼠睾丸组织生精细胞减少,生精上皮萎缩,管腔出现空泡,凋亡细胞显著增多.各染毒组大鼠血清睾酮水平均显著低于对照组(P＜0.05);12 mg/kg和36 mg/kg AA染毒组大鼠血清雌二醇水平显著低于对照组(P＜0.05).与对照组比较,12 mg/kg和36 mg/kg AA染毒组大鼠睾丸组织PCNA mRNA和蛋白表达均明显降低(P＜0.05).结论 AA染毒可引起雄性大鼠性激素分泌减少,睾丸组织发生病理学改变,凋亡细胞增多,PCNA蛋白表达减少,打乱生精细胞增殖与凋亡的动态平衡,导致生殖系统发生不同程度的功能障碍.     

邻苯二甲酸二丁酯对大鼠生精细胞凋亡的影响

目的：观察不同剂量的邻苯二甲酸二丁酯（DBP）对成年大鼠生精细胞凋亡的影响。方法：32只健康雄性sD大鼠随机分成4组,分别为每天250mg／kg、500mg／kg、1000mg／kg3个染毒组和对照组,灌胃法连续给药4周后对各组大鼠进行睾丸脏器系数、精子头计数,并计算每日精子生成量（DSP）。采用TUNEL原位细胞杂交方法检测大鼠生精细胞凋亡情况。结果：①中剂量组（500mg／kg）和高剂量组（1000mg／kg）睾丸精子头计数和DSP均低于对照组（P〈0．05）;②与对照组相比,中剂量组和高剂量组生精细胞凋亡指数（AI）均显著升高（P〈0．01）;③生精细胞凋亡指数与每日精子生成量呈负相关（r=-0．542,P〈0．01）。结论：一定剂量的DBP可通过促进生精细胞凋亡而导致精子生成量的减少,产生生殖毒性。     

砷中毒大鼠生精细胞凋亡的变化

【目的】观察不同剂量的三氧化二砷（As2O3）对成年大鼠生精细胞凋亡的影响。【方法】40只健康雄性SD大鼠随机分成对照组、低剂量组（0.0375g/L）、中剂量组（0.075g/L）、高剂量组（0.15g/L）4组,灌胃法连续给药16周后对各组大鼠睾丸取材进行精子头计数,并计算睾丸脏器系数、每日精子生成量（DSP）。采用甲基绿-派诺宁染色法和TUNEL法检测大鼠生精细胞凋亡情况。【结果】①中、高剂量组睾丸精子头计数和DSP均低于对照组（P〈0.05）;②与对照组相比,中、高剂量组生精细胞凋亡指数（AI）均显著升高（P〈0.01）;③生精细胞AI与DSP呈负相关（r=-0.563,P〈0.01）。【结论】一定剂量As2O3可通过促进生精细胞凋亡而导致精子生成量的减少,从而产生雄性生殖毒性。     

染氟大鼠生精细胞端粒酶逆转录酶表达的测定

目的:探讨氟对大鼠生精细胞端粒酶表达的影响。方法:30只雄性SD大鼠随机等分为对照组、高剂量染毒组、低剂量染毒组,分别腹腔注射蒸馏水、20mg/kgNaF和10mg/kgNaF溶液39d后,采用放射免疫法检测血清中雌二醇水平,原位杂交法检测端粒酶逆转录酶(TERT)表达情况,同时观察成熟精子质量和睾丸病理学的变化情况。结果:低剂量染毒组、高剂量染毒组雌二醇水平、TERT表达水平、精子计数和活动率均低于对照组(P均<0.05),精子畸形率高于对照组(P<0.05)。高剂量染毒组精子计数、精子畸形率和活动率与低剂量染毒组比较,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论:氟可降低TERT表达水平从而对生殖系统造成损害。     

用蛋白质组学技术探讨补肾生精法对老龄大鼠睾丸生精功能影响的机制

目的：应用蛋白质组学技术研究补肾生精法对老龄大鼠睾丸生精功能影响的机制。方法：20只22月龄老龄雄性SD大鼠随机分为2组，每组10只，分别为老龄组（SC）和补’肾生精组（KT）。KT组灌胃给药补肾生精颗粒，连续用药60d。取附睾尾精子应用精子运动CASA分析技术，研究补肾生精法对衰老大鼠精子运动能力的影响。应用流式细胞仪检测技术，观察补肾生精颗粒对老龄大鼠睾丸生殖细胞凋亡率的影响。取大鼠右侧睾丸，应用双向凝胶电泳分析老龄组和补肾生精组大鼠睾丸表达差异蛋白。结果：与老龄组相比，补肾生精组大鼠精子密度明显增加（P〈0．05）；活动率和直线活动率显著上升（P〈0．001）；补肾生精组生殖细胞凋亡率明显下降（P〈0．05）。与老龄组相比，补肾生精组大鼠睾丸中有7种蛋白表达发生了显著变化，其中4种蛋白表达上调，3种下调。对7种差异表达蛋白点胶内酶切后进行质谱分析，其中5种蛋白分别鉴定为磷脂酰乙醇胺结合蛋白（PEBP），热休克蛋白8（HSP7C），磷酸丙糖异构酶（Triose-phosphate isomerase，TPIS），3-磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH），谷胱苷肽转移酶1（GSTM1-1）。结论：补肾生精法对老龄大鼠睾丸功能具有提高精子运动能力及减少其生殖细胞凋亡的作用。运用蛋白质组学技术，研究补肾生精法对衰老过程睾丸蛋白表达的影响，有助于在蛋白质组水平阐释中医肾主生殖，延缓睾丸衰老，改善睾丸生精功能的机制。     

锰对大鼠生精功能的影响及机理研究

目的研究锰对大鼠生精功能的影响,探讨锰对大鼠生精功能抑制作用的机理。方法雄性SD大鼠,体重(120±10)g,随机分为6组:空白对照组,低剂量(15mg/kg MnCl2)和高剂量(30mg/kg MnCl2)组,8只/组。空白对照组给予等容NS,给药途径均为腹腔注射,5d/周,1次/d。空白对照组和MnCl2组分别于第4周末和第6周末处死,观察睾丸形态学改变并检测精子质量相关指标。结果与空白对照组比较,各组生精小管呈不同程度变性,生精细胞和精子数量减少,缺如。高剂量4周组睾丸脏器系数和各染锰组精子数量、活动度显著降低,畸形率显著升高(P<0.01)。染锰剂量相同,6周组与4周组比较,精子数量和精子活动度显著降低(P<0.01)。染锰时间相同,高剂量组与低剂量组比较,精子数量和精子活动度显著降低,畸形率显著升高(P<0.01)。结论染锰15mg/kg 4周即可对雄性大鼠生精功能产生抑制作用。     

铬污染区地下水对大鼠肝脏功能及Caspase-3和PARP表达的影响*

目的 研究铬污染区地下水对大鼠肝功能、Caspase-3和聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶（PARP）表达的影响。方法 将10只健康SD孕鼠随机分成空白组、地下水组、低铬组、中铬组及高铬组，每组2只。分别灌胃蒸馏水、铬含量为28.64?mg/L的铬污染区地下水，以及剂量为0.8、4.0和20.0?mg/kg的重铬酸钾溶液。21?d后小鼠断奶，按母鼠分组直接灌胃，灌胃剂量不变（0.5?ml/100?g），1次/d，连续灌胃21周。解剖子代大鼠后取血液及肝组织，用原子吸收光谱仪（石墨炉法）检测肝组织中的铬含量及血清中TP、ALB、GLB的含量，以及AST、ALT、ALP的活力，用苏木精-伊红（HE）染色法制作切片，观察肝脏的病理变化，并用免疫组织化学法检测Caspase-3和PARP的表达情况。结果 与空白组比较，地下水组与各剂量重铬酸钾染毒组肝脏中铬的含量均升高，且随着染毒剂量的升高，子代大鼠肝脏中铬含量呈上升趋势，差异有统计学意义（P?<0.05）。地下水组与各剂量重铬酸钾染毒组血清中TP、ALB、GLB的含量均升高，中铬组和高铬组与空白组间的差异有统计学意义（P?<0.05）。地下水组与各剂量重铬酸钾染毒组血清中的AST、ALT、ALP活力均高于空白组，各剂量重铬酸钾染毒组与空白组间的差异有统计学意义（P?<0.05）。HE染色结果显示地下水组与重铬酸钾染毒剂量组的肝细胞表现为不同程度的嗜酸性样变，排列紊乱，细胞质间隙加大及空泡性样变。免疫组织化学结果显示，地下水组Caspase-3和PARP阳性表达率与低铬组相仿，各剂量重铬酸钾染毒组随着重铬酸钾浓度升高，肝细胞阳性率升高。结论 六价铬长期暴露对大鼠的肝功能造成一定损伤，且使肝细胞Caspase-3和PARP表达增强。     

锰对大鼠睾丸毒性效应的研究

目的研究氯化锰对大鼠睾丸形态学及精子的毒性效应,探讨锰对大鼠生精功能损伤作用的机理。方法雄性SD大鼠48只,随机分为6组：空白对照组,15mg／kg和30mg／kgMnCl2组,8只／组。15mg／kgMnCl2组和30mg／kgMnCl2组分别染锰（MnCl2·4H2O）4wk和6wk,空白对照组给予等容生理盐水,给锰与生理盐水途径均为腹腔注射,5d／wk,1次,d,大鼠分别于第4wk末和第6wk术处死,取睾丸作以下检测：①观察睾丸形态学改变;②检测睾丸脏器系数;③精子数量。结果①与空白对照组比较,染锰15mg／kg、4wk即可对大鼠生精小管形态结构造成损伤,且随染锰剂量和时间的增加生精小管损伤越严重;染锰4w30mg／kgMnCl2组睾丸脏器系数显著降低（P〈0．01）,各染锰组精子数量均显著降低（P〈0．01）;②染锰剂量相同,染锰6wk组与染锰4wk组比较,精子数量均显著降低（P〈0.01）;③染锰时间相同,30mg／kgMnCl2组与15mg／kgMnCl2组比较,精于数量均显著降低（P〈0．01）。结论染锰15mg／kg、4wk即可对大鼠睾丸形态学和精子生成造成损伤,并存在一定的剂量-效应和时间-效应关系,证实了过量锰对雄性大鼠睾丸具有明冠毒性效应。     

氯化锰对小鼠睾丸组织形态学的影响

目的研究锰对小鼠睾丸组织形态学的影响,探讨其时间-效应关系和剂量-效应关系。方法将雄性小鼠随机分为3个染锰组和1个对照组,分别给予腹腔注射7.5、15.0、30.0mg/kg氯化锰和生理盐水,于染锰第3、7、14、28、56天处死小鼠5只/组。观察小鼠睾丸组织学的变化和染锰56d各计量组曲细精管横截面积及生精上皮细胞数量。结果与对照组比较睾丸组织的损伤随染锰剂量的增加和时间的延长而逐渐加重;染锰56d与对照组比较,曲细精管横截面积和生精上皮细胞数差异均有统计学意义(P<0.01)。结论各剂量的MnCl2对雄性小鼠睾丸组织形态结构均有损害作用,以染锰56d,30mg/kg对小鼠的损害最为严重,染锰56d,7.5mg/kg对小鼠睾丸曲细精管横截面积和生精上皮细胞明显减少,证实7.5mg/kg的锰对小鼠睾丸曲细精管横截面积和生精上皮细胞有明显的损害。     

PCNA和Ki-67在染锰大鼠生精细胞中的表达及研究

目的研究氯化锰对生精细胞PCNA和Ki-67表达的影响,比较二者作为细胞增殖指标的差异。方法雄性sD大鼠（体重120±10g）48只,随机分为6组：空白对照组,低剂量（15mg／kgMnCl2）和高剂量（30mg／kgMnCl2）组,8只／组。MnCl2组分别染锰4周和6周,空白对照组给予等量NS,给药途径均为腹腔注射,5d／周,1次／d,分别于第4周末和第6周末处死,免疫组化（SABC法）法检测睾丸PCNA和Ki-67表达。结果与空白对照组比较,染锰4周PCNA阳性细胞率显著降低,染锰6周反而升高（P〈0．01）。各染锰组Ki-67总阳性细胞率显著降低,细胞核阳性细胞率显著升高（P〈0．01）。染锰剂量相同,6周与4周组比较,PCNA阳性细胞率显著升高,Ki-67总阳性细胞率显著降低,Ki-67细胞核阳性细胞率显著升高（P〈0．01）。染锰时间相同,高剂量组与低剂量组比较,PCNA阳性细胞率和Ki-67总阳性细胞率均显著降低（P〈0．01）,Ki-67细胞核阳性细胞率在4周组和6周组分别显著升高和显著降低（P〈0．01）。结论15mg／kg氯化锰即可抑制大鼠生精细胞的增殖能力,PCNA和Ki-67互相结合可以更加准确地反映细胞周期。     

生殖激素及LDH在染锰大鼠生精细胞凋亡蛋白表达中的作用

目的研究锰对大鼠体内生殖激素和乳酸脱氢酶（LDH）水平的影响,探讨锰对大鼠生精细胞caspase-3表达与生殖激素和LDH水平之间的关系。方法48只雄性SD大鼠,体质量（120-4-10）g随机分为6组：空白对照组,低剂量（15mg／kg MnCl2）和高剂量（30mg／kg MnCl2）组,8只／组。MnCl：组分别染锰4W和6W,空白对照组给予等量NS,给药途径均为腹腔注射,5d／w,1次／d。大鼠分别于第4w末和第6w末处死。免疫组化法检测睾丸组织中caspase．3表达,放射免疫法测定血清T、FSH和LH含量,化学比色法测定血清和睾丸LDH活性。结果与空白对照组比较,各染锰组caspase-3阳性细胞率均显著升高,血清T含量显著降低,FSH和LH含量显著升高,6W30mg／kg组血清LDH活性显著升高,各染锰组睾丸LDH活性显著降低（P〈0．01）。染锰剂量相同,6W与4W比较,caspase-3阳性细胞率和血清FSH、LH含量显著升高（P〈0．01）,血清和睾丸LDH活性分别显著升高和降低（P〈0．01）。染锰时间相同,高剂量组与低剂量组比较,caspase-3阳性细胞率和血清FSH、LH含量均显著升高（P〈0．01）,血清和睾丸LDH活性分别显著升高和降低（P〈0．01）。结论染锰15mg／kg4W即可诱发大鼠血清T含量降低,FSH和LH含量升高及睾丸LDH活性降低和血清LDH活性升高,可能是促进生精细胞caspase-3表达的重要原因。     

妊娠期染毒 PFOS 对子代成年雄性大鼠生殖系统的影响

目的：研究妊娠期染毒全氟辛烷磺酸盐（perfluorooctane sulfonate,PFOS）对子代成年雄性大鼠生殖系统的影响。方法：对妊娠第12天的SD大鼠采用灌胃方式染毒不同剂量PFOS（5、10mg／kg）。每天1次,连续8d。出生后第65（PDN56）天,检测子代成年雄性大鼠体质量及睾丸重量。采用实时荧光聚合酶链式反应检测睾丸间质细胞（adult Leydig cell,ALC）类固醇激素合成急性调节蛋白（steroidogenic acute regulatory protein,StAR）mRNA的相对表达量。结果：与对照组相比,5mg／kg剂量染毒组子体质量显著性降低（P〈0．001）,睾丸系数下降（P〈0．05）;睾丸组织中StAR mRNA的相对表达量下调（P〈0．05）。结论：妊娠期染毒PFOS可通过抑制ALC合成睾酮途径中StAR mRNA的表达水平,对子代成年雄性大鼠的生殖系统产生毒性作用。