miRNA-451表达质粒的构建及对人A549肺癌细胞侵袭转移及凋亡的影响

目的:探讨miRNA-451对人A549肺癌细胞侵袭转移及凋亡的影响.方法:Hsa-miRNA-451序列通过miRBase数据库查找,根据此序列设计出2条寡核苷酸片段,将目的基因经过退火处理后克隆至真核表达载体pGenesil-1.1质粒中,从而构建成为miRNA-451真核表达载体(pGenesil-1.1-miRNA-451质粒).将pGenesil-1.1-miRN A-451及pGenesil-1.1-control质粒分别转染人A549肺癌细胞,经过G418的筛选,建立pGenesil-1.1-miRNA-451及pGenesil-1.1-control稳定表达的细胞株.流式细胞术     

miR-106b靶向调控TGF-β/Smad通路对结肠癌细胞侵袭和迁移的促进作用

目的:探讨miR-106b靶向转化生长因子β受体1(TGF-βR1)对结肠癌细胞侵袭和迁移的影响,阐明miR-106b与TGF-βR1基因的靶向关系及其可能作用机制.方法:选取30例结肠癌患者癌组织和癌旁正常结肠组织、结肠癌SW-480细胞及正常结肠上皮NCM460细胞为研究对象;采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR...     

癌细胞侵袭和转移分子基础研究进展

恶性肿瘤细胞的侵袭与转移是其重要的生物行为之一，这种特异性是癌细胞与靶器官微环境相互作用的结果，是一个多步骤、多因素、多基因突变的逐渐演化过程。本文从细胞分子水平综述了癌细胞侵袭转移的相关分子基础，以及各阶段的分子表达关系的研究进展，从而探讨癌细胞侵袭、转移相关机制，并对阻抑癌细胞侵袭、转移药物的设计，开发和利用提供一定的理论基础。     

miRNA-449b在胃癌组织中的表达及与淋巴结转移的关系

目的:通过对胃癌组织及癌旁组织中miRNA-449b表达的比较,分析miRNA-449b与胃癌发生及淋巴结转移的关系,为进一步探讨其在胃癌中的作用机制提供依据。方法:收集30例胃癌及癌旁组织标本,提取组织总RNA;茎环法反转录成c DNA;用实时荧光定量PCR方法检测miRNA-449b在组织中的表达水平。结果:相比于癌旁组织,miRNA-449b在胃癌组织中有23例(76.67%)表达下调,7例(23.33%)表达上调,其平均表达水平低于癌旁组织,差异有统计学意义(t=2.395,P=0.023,P<0.05)。miRNA-449b在17例有淋巴结转移的样本中16例表达下调(94.12%),13例无淋巴结转移的样本只有7例表达下调(53.85%),淋巴结转移组与无淋巴结转移组miRNA-449b的下调比例,经卡方检验,差异有统计学意义(P=0.025,P<0.05)。结论:miRNA-449b与胃癌的发生及淋巴结转移相关。     

miRNA-30b对抑制胃癌细胞增殖及侵袭的作用研究

目的研究miRNA-30b在胃癌癌组织中的表达水平及对癌细胞增殖侵袭的影响,探讨miRNA-30b在胃癌中的临床意义及可能的分子机制。方法实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miRNA-30b在胃癌及癌旁组织中的表达情况;用miRNA-30b模拟物及抑制物转染人胃癌HGC-27细胞,CCK-8法检测细胞增殖的情况,Transwell 小室法检测细胞侵袭情况,Western blot 检测RAB22A 和USP47 蛋白表达。结果miRNA-30b在胃癌组织中表达水平低于对应癌旁组织（P <0.05）,且miRNA-30b 低表达与胃癌分期及肿瘤大小有关（P <0.05）;与转染阴性对照细胞比较,转染miRNA-30b模拟物的HGC-27细胞增殖水平和侵袭能力均受到抑制（P <0.05）,RAB22A和USP47 蛋白表达水平降低（P <0.05）;而转染miRNA-30b 抑制物的HGC-27细胞增殖水平和侵袭能力则增强（P <0.05）,RAB22A 和USP47 蛋白表达水平升高（P <0.05）。结论miRNA-30b 在胃癌组织中表达下调,且miRNA-30b 可能通过调节RAB22A 和USP47 的表达从而影响胃癌细胞的增殖及侵袭。     

miR-10b与乳腺癌转移相关性的研究进展

乳腺癌在女性癌症死亡中占有重要地位,侵袭转移是目前乳腺癌治疗的一大难点.近年来,多种miRNAs已被证明涉及乳腺癌的发生发展.其中miR- 10b在转移性乳腺癌中高度表达,通过TwistmiR- 10b-HOXD 10-RhoC信号通路在乳腺癌的侵袭和远处转移中发挥重要作用,这使它成为针对乳腺癌转移治疗的新靶点.     

miRNA-125b对舌鳞状细胞癌的增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响

目的 研究miRNA-125b对舌鳞状细胞癌的增殖、凋亡、侵袭及迁移产生影响。方法 采用RT-qPCR检测手术切除的舌鳞癌组织及癌旁正常组织中miRNA-125b的表达,构建细胞实验,CCK-8法细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞的凋亡,Transwell检测细胞侵袭能力,划痕试验检测细胞迁移能力。结果 TSCC组织中miRNA-125b的表达明显低于癌旁正常组织(P<0.05);miRNA-125b过表达组中细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显降低,凋亡率明显升高(P<0.05);而miRNA-125b干扰组上述结果相反(P<0.05)。结论 miRNA-125b在TSCC组织中低表达,低表达的miRNA-125b促进舌鳞状细胞癌的增殖,减少细胞凋亡,增强其侵袭及迁移能力。     

ox-LDL对巨噬细胞表达miRNA-155和miRNA-146a／b的影响

目的：探讨氧化低密度脂蛋白（ox—LDL）刺激对巨噬细胞表达miRNA-155和miRNA-146a／b的影响。方法：培养人巨噬细胞,随机分为三组：空白对照组、ox-LDL（10μg／mL）组和OX—LDL（20μg／mL）组,刺激6h后,收集细胞,实时定量PCR方法检测miRNA-155和miRNA—146a／b的表达。结果：OX—LDL刺激可以增加巨噬细胞表达miRNA-155和miRNA-146a／b,且呈浓度依赖性。结论：miRNA-155和miRNA-146a／b可能参与ox-LDL致动脉粥样硬化过程。     

miR-135b通过靶向FOXO1促进子宫内膜癌细胞的增殖

目的探讨miR-135b在子宫内膜癌中的表达及对子宫内膜癌细胞增殖的作用的机制。方法运用RT-PCR的方法检测22 对子宫内膜癌组织及相应的癌旁组织中的miR-135b 和FOXO1 的表达;运用RT-PCR 的方法检测JEC、Ishikawa、HEC-1-B、 RL-952这4种子宫内膜癌细胞株中miR-135b和FOXO1的表达。分别转染miR-135b的模拟物抑制物于子宫内膜癌细胞株,通 过RT-PCR检测转染的效果,通过MTT增殖试验检测对子宫内膜癌细胞增殖的影响。通过RT-PCR的方法检测FOXO1 mRNA 的变化,Western blotting 检测在FOXO1 蛋白的变化。结果miR-135b 在子宫内膜癌组织中较对应的癌旁组织表达增高（P< 0.05）, FOXO1在子宫内膜癌组织中较对应的癌旁组织表达降低（P<0.05）。荧光定量PCR显示子宫内膜癌细胞中miR-135b与 FOXO1表达趋势成负相关。miR-135b能促进子宫内膜癌细胞增殖（P<0.05）。上调miR-135b能够降低FOXO1 mRNA和蛋白 的表达（P<0.05）,下调miR-135b能够提高FOXO1 mRNA和蛋白的表达（P<0.05）。结论miR-135b在子宫内膜癌的发生发展 中发挥重要的作用,其部分分子机制可能是通过调控靶基因FOXO1而发挥作用。     

沉默circROBO1通过下调KRAS抑制鼻咽癌CNE2细胞侵袭与肺转移

目的探讨沉默环状RNA hsa_circ_0124696(circROBO1)对鼻咽癌CNE2细胞侵袭与肺转移的影响机制。 方法qRT-PCR检测鼻咽癌及癌旁组织中circROBO1表达。采用干扰小RNA(siRNA)沉默鼻咽癌CNE2细胞中circROBO1的表达,Transwell及HE染色检测circROBO1对CNE2细胞迁移能力和体内肺转移的影响。TargetScan在线软件预测circROBO1下游miR-217与下游靶基因KRAS的靶向结合位点,双荧光素酶报告基因实验验证两者之间的靶向调控关系。蛋白免疫印迹检测siRNA沉默CNE2细胞中circROBO1表达对KRAS的影响。 结果鼻咽癌组织中circROBO1表达高于癌旁组织(P＜0.05)。与转染si-circNC的对照组相比,si-circROBO1组鼻咽癌CNE2细胞侵袭与体内肺转移能力均显著降低(P＜0.05)。circROBO1下游miR-217与KRAS之间存在靶向结合位点,并且circROBO1可影响KRAS的蛋白和mRNA表达量。 结论沉默circROBO1通过miR-217下调KRAS抑制鼻咽癌CNE2细胞侵袭与肺转移。     

miRN A-125b在鼻咽癌中的表达及与顺铂化疗敏感性研究

目的：探讨微小RNA‐125b（miRNA‐125b）在鼻咽癌组织、血清中的表达及与顺铂化疗敏感性的相关性。方法收集34例临床确诊鼻咽癌完整病例资料及组织和血清标本,另取患者癌旁组织为组织对照,同时收集34例健康体检者血清标本为血清对照,运用实时荧光定量聚合酶链反应（real‐time qPCR）法检测miRNA‐125b在癌组织、癌旁组织、血清中的表达,并进行统计学分析。结果 miRNA‐125b在癌组织的表达显著低于癌旁组织（P＝0．006）,在鼻咽癌患者血清中的表达显著低于健康体检者（P＝0．000）;miRNA‐125b在患者癌组织与血清中的表达无相关性（r＝0．112,P＝0．528）。miRNA‐125b在癌组织中的表达与病理分型、T分期、N分期有关（P＜0．05）,在患者血清中的表达仅与N分期相关（P＜0．05）。miRNA‐125b在癌组织中表达与顺铂化疗敏感性呈负性相关（P＜0．05）,在患者血清中的表达与顺铂化疗敏感性无明显相关性（P＞0．05）。结论 miRNA‐125b的低表达可能参与了鼻咽癌的发生、发展,对鼻咽癌诊断、分型、分级有一定意义,在癌组织中的表达水平可作为筛选顺铂化疗方案的指标之一。     

鼻咽癌放疗后多发肺转移治疗效果分析

目的回顾性分析单纯化疗、全肺放疗联合化疗治疗鼻咽癌放疗后多发肺转移患者的治疗效果,探讨较为合理的治疗方案。方法分析46例鼻咽癌放疗后多发肺转移患者的治疗方式及不同治疗方式对治疗效果的影响,其中单纯化疗27例,全肺放疗联合化疗19例,化疗方案主要是:顺铂加5-氟尿嘧啶、紫杉醇加顺铂;全肺放疗单次剂量120～150cGy,总剂量(DT)1 800～2 100cGy,均是未校正剂量。结果单纯化疗组与全肺放疗联合化疗组的有效率分别是44.44%和73.68%(P<0.05);单纯化疗组和全肺放疗联合化疗组6、12、18个月生存率分别是81.48%、29.63%、7.41%和89.47%、63.16%、42.11%,其中12个月和18个月生存率两组比较差异有显著性(P<0.05)。结论全肺放疗联合化疗治疗鼻咽癌多发肺转移的治疗效果优于单纯化疗。     

Association of E-cadherin and β-catenin with metastasis in nasopharyngeal carcinoma

Background This study was designed to detect methylation of E-cadherin gene promoter and gene mutation of β-catenin in exon 3 and their expression of protein and mRNA in primary tumor and lymph node metastatic tumor of nasopharyngeal carcinoma (NPC), and investigate the mechanism of invasion and metastasis of neoplastic cells in NPC. Methods Fourty-two fresh biopsy samples were taken from untreated NPC patients at the Affiliated Hospital of Sun Yat-sen Medical College, Sun Yat-sen University, Guangzhou, China during the period of 1999 -2002. Among them 21 were taken from primary tumors and the other 21 from lymph node metastatic tumors. The gene promoter methylation of E-cadherin was detected by methylation-specific PCR (MSP). The mutation in exon 3 of β-catenin was detected by direct sequencing analysis. RT-PCR, Western blot and immunohistochemical staining were used to detect the mRNA and protein expression patterns in both primary and metastatic tumors of NPC. Results Down-regulated expression of E-cadherin in metastatic tumor was compared with that in primary tumor. Reduced expression of E-cadherin was found to be correlated with lymph node metastatic tumor of NPC ( P = 0. 004) ; but there was no obvious correlation between primary and metastatic tumors in the expression of β-catenin (P = 0. 698). The mRNA expression level of Ecadherin in metastatic tumors decreased significantly compared with that in primary tumors. However, little change was observed in the mRNA level of β-catenin in different tumor tissues. Only 4 samples (19. 1%) displayed gene promoter methylation of E-cadherin in primary tumor and 10 samples (47. 6%) showed methylated form of E-cadherin. The gene promoter methylation of E-cadherin was more common in metastatic tumor than in primary tumor of NPC ( P =0. 024). Only 2 (4. 76% ) of the 42 samples showed mutations in exon 3 of β-catenin at 41 (T41A, ACC→GCC) and codon 47(S47T, AGT→ACT). The cytoplasmic and nuclear expression of β-catenin in tumor was not found in any samples of NPC. Conclusions The results suggest that the downregulation of E-cadherin results from the gene promoter aberrant methylation of E-cadherin and that the methylation of E-cadherin plays an important role in invasion and metastasis of tumor cells in NPC. However, β-catenin mutation is an infrequent event in NPC, and β-catenin is not a critical factor influencing the invasion and metastasis of tumor cells in NPC.     

MicroRNA-196a 在喉癌组织中的表达及其 对喉癌细胞侵袭和转移的影响

目的 探讨microRNA-196a（miR-196a）在喉癌组织中表达及其对喉癌细胞侵袭和转移的影响。 方法 选取2015 年1 月—2017 年12 月金华市中心医院70 例喉癌手术切除标本的喉癌组织和癌旁组织。将 人喉癌Hep-2 细胞分为空白对照组、阴性对照组及siRNA 组。siRNA 组细胞转染pcDNA/miR-196a,阴性 对照组细胞转染pcDNA/miR-NC,空白对照组不做处理。采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）测定癌旁 组织和喉癌细胞中miR-196a 水平;Transwell 小室测定喉癌细胞侵袭和迁移能力;Western blotting 检测喉癌 细胞磷脂酰肌醇-3- 激酶（PI3K）、磷酸化蛋白激酶B（p-PKB）、Bax 及Bcl-2 蛋白水平;RT-PCR 测定喉 癌细胞PI3K、p-PKB、Bax 及Bcl-2 mRNA 水平。结果 喉癌组织中miR-196a 水平高于癌旁组织（P <0.05）。 与空白对照组和阴性对照组比较,siRNA 组喉癌细胞中miR-196a 水平降低（P <0.05）,细胞侵袭和迁移能 力下降（P <0.05）,PI3K、p-PKB 及Bcl-2 蛋白和mRNA 水平降低（P <0.05）,Bax 蛋白和mRNA 水平升 高（P <0.05）;空白对照组与阴性对照组细胞各指标比较,差异无统计学意义（P >0.05）。结论 喉癌组织中 miR-196a 水平升高,沉默miR-196a 可降低喉癌细胞的侵袭和迁移能力,其机制可能与PI3K/PKB 信号通路 有关。     

miRNA-143对人鼻咽癌细胞CNE-2Z增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨miRNA-143对鼻咽癌细胞CNE-2Z增殖、迁移和侵袭的影响.方法 利用荧光定量PCR检测人永生化鼻咽上皮细胞(NP69)、高分化鼻咽癌细胞(CNE-1)、低分化鼻咽癌细胞(CNE-2Z)中miRNA-143的表达水平.利用感染慢病毒的方式建立稳定过表达miRNA-143的CNE-2Z细胞,并用荧光定量PCR法进行检测.通过CCK-8法检测过表达miRNA-143对CNE-2Z细胞增殖的影响,通过Transwell迁移和侵袭试验分析过表达miRNA-143对CNE-2Z细胞迁移和侵袭的影响.结果 低分化鼻咽癌细胞(CNE-2Z)中miRNA-143的表达水平显著低于CNE-1和NP69细胞(P<0.01).稳定过表达miRNA-143的CNE-2Z细胞(CNE-2Z/miR-143)中miRNA-143的表达水平显著高于CNE-2Z细胞(P<0.01)和慢病毒对照组细胞(CNE-2Z/miR-NC)(P<0.01).细胞增殖能力检测显示,与CNE-2Z组和CNE-2Z/miR-NC组相比,CNE-2Z/miR-143组在72 h和96 h时细胞活力显著降低(P<0.05,P<0.01).Transwell迁移和侵袭试验结果显示,CNE-2Z/miR-143组与CNE-2Z组和CNE-2Z/miR-NC组相比细胞迁移和侵袭能力显著下降(P<0.01).结论 miR-143能够抑制鼻咽癌细胞CNE-2Z的增殖、迁移和侵袭能力,提示其可能对鼻咽癌的诊断、治疗及预后评价有重要意义.