耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌产金属β-内酰胺酶相关基因型的分布

目的 研究本地区患者对碳青霉烯类抗生素耐药的铜绿假单胞菌产金属酶检出情况及基因型分布特征.方法 本研究收集2012年2月～2013年2月共151株铜绿假单胞菌,分离出对碳青霉烯类抗生素耐药的铜绿假单胞菌47株.使用IMP/EDTA纸片法筛选产金属酶的耐药表型,PCR技术检测编码金属酶的IMP、VIM、SPM和GIM 4种基因型.PCR反应产物进行纯化后,进行核酸电泳.结果 47株对碳青霉烯类抗生素耐药的铜绿假单胞菌中,IMP/EDTA纸片法检测金属酶表型阳性21株,占44.6％.PCR检测金属酶基因型阳性14株,占29.8％,其中IMP型阳性11株,占78.6％,VIM型阳性3株,占21.4％.未检测出SPM和GIM型金属酶.结论 池州地区产生的金属酶同时存在IMP和VIM两种基因型,其中以IMP亚型为主,少部分为VIM亚型,分布科室主要为ICU,其次为神经外科.产金属酶是本地区对碳青霉烯类抗生素耐药的铜绿假单胞菌的重要耐药机制,对碳青霉烯类耐药的铜绿假单胞菌产金属酶的监测十分重要.     

儿童患者中对碳青霉烯类耐药的绿脓假单胞菌产金属酶基因型研究

目的研究儿童患者中对碳青霉烯类抗生素耐药的绿脓假单胞菌产金属酶的基因型。方法本研究收集了2003年12月至2005年11月我院住院患儿中分离出的对碳青霉烯类抗生素耐药的绿脓假单胞菌59株。使用E试验法检测产金属酶的耐药表型，PCR技术检测编码金属酶的IMP、VIM、SPM和GIM4种基因型。PCR反应产物进行纯化后，使用双脱氧末端终止法进行DNA测序。将得到的拼接序列与GenBank中Blast进行同源分析，确定其基因亚型。结果59株对碳青霉烯类抗生素耐药的绿脓假单胞菌中，纸片法检测金属酶表型结果阳性29株，占49．2％。PCR检测金属酶基因型阳性39株，占66．1％，其中IMP型阳性35株，占89．7％，VIM型阳性4株，占10．3％。未检测出SPM和GIM型金属酶。测序结果显示，IMP型测序结果均为产IMP．1亚型金属酶的绿脓假单胞菌。VIM型测序结果均为产VIM-2亚型金属酶的绿脓假单胞菌。结论儿童患者中对碳青霉烯类抗生素耐药的绿脓假单胞菌，产金属酶率高于成人报道。产生的金属酶同时存在IMP-1和VIM-2两种基因型，其中以IMP-1亚型为主，少部分为VIM-2亚型。产金属酶是儿童患者对碳青霉烯类抗生素耐药的绿脓假单胞菌的重要耐药机制。在儿科进行对碳青霉烯类耐药的绿脓假单胞菌产金属酶的监测十分重要。     

胸腔积液分离的耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌的耐药机制研究

目的分析该院近3年来感染患者胸腔积液培养所分离的铜绿假单胞菌的耐药表型,并检测相关耐药基因,为临床抗感染治疗提供依据。方法采用法国梅里埃Bact/ALERT 3D120型血培养仪培养胸腔积液标本。西门子MicroScan WalkAway 96微生物鉴定系统和进行药敏试验。亚胺培南-EDTA双纸片法检测金属酶。PCR检测耐药基因(OprD、VIM和IMP)。结果 38株铜绿假单胞菌中14株对亚胺培南耐药,其中有2株为多重耐药株,4株产金属酶。14株耐药株中OprD基因PCR检测发现两株缺失,而IMP、VIM金属酶基因检测结果有2株为阳性。结论胸腔积液分离的铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药率较高,耐药机制包括产金属酶(VIM和IMP基因)和OprD缺失。     

耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌金属酶的筛选及分型研究

目的 了解我院耐碳青霉烯类抗生素铜绿假单胞菌的金属酶(MBL)携带情况及型别特点,并探讨进行金属酶筛选的简便方法 .方法 采用K-B法进行药物敏感性试验.采用2一巯基乙醇纸片与EDTA纸片协同试验筛选产MBL菌株,并对MBL基因进行PCR和序列分析.结果 45株碳青霉烯类抗生素耐药菌株用2-巯基乙醇纸片协同试验阳性3株,EDTA纸片协同试验阳性4株,经PCR验证均为阳性.除此之外,还有1株PCR阳性而2种纸片协同法都没有筛选出来.其中2-巯基乙醇纸片协同试验筛选的灵敏度为60%,特异度为95%,准确率为95%,EDTA纸片协同试验的灵敏度为80%.特异度为97%,准确率为97%.引物IMP扩增阳性4株,VIM扩增阳性1株,PCR产物纯化测序后发现IMP均为IMP-1型而VIM为VIM-2型.结论 用EDTA协同试验法对碳青霉烯类抗生素耐药铜绿假单胞菌进行MBL的筛选简单有效,可用来在临床微生物实验室作为产MBL铜绿假单胞菌的初筛试验.分型研究表明我院流行的铜绿假单胞菌以产IMP-1型为主.     

产金属β内酰胺酶铜绿假单胞菌的筛选及基因型研究

目的 研究本院临床分离铜绿假单胞菌产金属β内酰胺酶的基因型、耐药性及同源性.方法 用2-巯基丙酸或 EDTA 协同试验筛选临床分离的亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌.协同试验阳性菌株用PCR法检测金属酶基因型,脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析产金属酶菌株同源性.结果 31株亚胺培南耐药铜绿假单胞菌协同试验阳性5株,PCR扩增有4株阳性,为金属酶IMP-9型,均分离自神经科重症监护病房,PFGE结果显示为同一克隆株.产酶株对阿米卡星敏感或中介,对其他临床常用抗生素均高度耐药.结论 本院神经科重症监护病房有产IMP-9型金属酶铜绿假单胞菌流行,应注意进行临床检测和监控.     

对碳青霉烯类抗生素耐药铜绿假单胞菌耐药机制及耐药性的研究

目的了解目前儿科临床分离对碳青霉烯类抗生素耐药铜绿假单胞菌外膜孔蛋白OprD2缺失和金属β内酰胺酶（MBI．）产生的情况，及具有不同耐药机制菌株的耐药特点。方法收集2004年1月--2006年12月从我院住院患儿中分离出的75株对碳青霉烯类抗生素耐药铜绿假单胞菌。用PCR方法进行oprD2基因、金属酶IMP、VIM、SPMT和GIM基因检测。用琼脂稀释法进行药敏试验，按照2006年CLSI推荐标准判断结果。使用WHONET5．3和SPSS13．0软件进行数据分析。结果检测75株对碳青霉烯类抗生素耐药的铜绿假单胞菌中外膜孔蛋白OprD2缺失者50株，占66．7％；产金属酶的46株．占61、3％，其中IMP阳性38株（82．6％），VIM阳性8株（17．4％）。外膜孔蛋白OprD2缺失同时产金属酶的34株，占45．3％，其对口内酰胺类抗生素的耐药率、MIC50和MIC90均高于其他菌株。结论目前从儿科临床分离对碳青霉烯类抗生素耐药铜绿假单胞菌外膜孔蛋白OprD2缺失和产生金属酶都十分严重，菌株的耐药性也很高，并且产MBI．菌株存在IMP和VIM2种基因型。     

多重及泛耐药铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌医院感染调查及产碳青霉烯酶表型研究

目的 了解铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌院内感染分布、耐药特点以及产碳青霉烯酶表型情况。方法 回顾性收集2012年7月到2013年7月该院分离非重复铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌医院感染菌株及病例。采用纸片扩散法(K-B法)进行药敏试验,改良Hodge试验进行碳青霉烯酶初筛,初筛阳性菌株应用2-巯基丙酸协同法进一步检测金属酶。结果 在研究期间,共纳入非重复铜绿假单胞菌250株,鲍曼不动杆菌132株。菌株标本类型以痰液(55.5%)为主,科室分布以重症监护病房(20.9%)为主。药敏试验显示:铜绿假单胞菌对测试药物敏感性较好,均大于70%以上,对IPM和MEM耐药率较低分别为8.5%、9.5%,然而鲍曼不动杆菌对测试药物耐药率较高达35.2%~77.4%,对IPM和MEM耐药率分别为35.2%、39.1%。多重耐药及泛耐药鲍曼不动杆菌医院感染发生率要高于铜绿假单胞菌分别为44.7%和24.0%;9.1%和2.8%。40株耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌,碳青霉烯酶初筛阳性11株占27.5%,金属酶表型阳性2株占18.2%;49株耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌,碳青霉烯酶初筛阳性37株占75.5%,金属酶表型阳性1株占2.7%。结论 该院铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌对常用抗菌药物呈现不同耐药性,应加强监测。产碳青霉烯酶是鲍曼不动杆菌耐碳青霉烯类药物主要机制之一。产金属酶铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌检出率较低。     

淮北地区耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药机制

目的探讨淮北地区铜绿假单胞菌（pseudomonas aeruginosa,Pa）对亚胺培南的耐药机制。方法采用K-B法和MIC法检测25株临床分离亚胺培南耐药铜绿假单胞菌对12种临床常用抗生素的敏感性;采用PCR法检测外膜蛋白OprD2和金属β-内酰胺酶（MBLs）耐药相关基因（IMP、VIM、SPM、GIM）。结果 25株亚胺培南耐药铜绿假单胞菌中15株外膜通道蛋白OprD2基因缺失,缺失率60%;5株产金属酶,检出率20%（4株产VIM-2,1株产IMP-1）;未检出SPM-2、GIM基因。结论淮北地区铜绿假单胞菌亚胺培南耐药,外膜通道蛋白OprD2缺失与产金属酶均起重要作用。     

铜绿假单胞菌金属酶及整合酶的检测

目的：了解哈尔滨医科大学附属第二医院铜绿假单胞菌（Pa）株中金属β-内酰胺酶及整合酶携带情况。方法采用改良 Hodge法、双纸片协同法、组合纸片法进行金属酶表型检测,PCR法检测金属酶基因型以及整合酶Ⅰ、整合酶Ⅱ和整合酶Ⅲ。将 IMP金属酶全基因PCR产物进行纯化,测序再进行Blast比对分析。结果62株 Pa经金属β-内酰胺酶改良 Hodge法检出3株、双纸片协同法检出4株,组合纸片法检出4株,PCR法检测出4株（6.45％,4／62）金属酶阳性菌株,经全基因测序结果为 IMP-1型,且全部为亚胺培南耐药菌株10％（4／40）;未检测出 VIM,SPM和 GIM型金属酶;PCR检测整合酶Ⅰ在亚胺培南耐药菌株中阳性率为40％（16／40）,在亚胺培南敏感菌株中检出率为22.73％（5／22）;所有菌株均未检出整合酶Ⅱ,Ⅲ。结论哈尔滨医科大学附属第二医院存在 IMP-1型金属酶阳性的Pa,这些菌株多为多重耐药细菌,且携带Ⅰ类整合子,该院应做好防范工作,防止金属酶和整合子的传播。     

耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌耐药机制研究

目的分析本院重症监护病房(ICU)中连续分离到的多重耐药铜绿假单胞菌的同源性,并检测其对碳青霉烯类抗生素的耐药机制。方法用纸片扩散法测定铜绿假单胞菌对14种抗菌药的敏感性并进行表型分析;通过重复序列引物聚合酶链反应(rep-PCR)对铜绿假单胞菌进行分型;使用亚胺培南EDTA(乙二胺四乙酸)酶抑制试验检测菌株是否产生金属酶,同时用PCR检测OprD、IMP、VIM基因。结果抗菌药物敏感试验显示23株铜绿假单胞菌中19株同时对亚胺培南和美罗培南耐药,并且都至少对5种以上抗菌药物耐药;rep-PCR电泳结果显示19株耐药株基因表型基本一致,并且与敏感株有明显区别;亚胺培南-EDTA双纸片法筛得5株产金属酶(MBL)的铜绿假单胞菌;用特异性OprD、IMP、VIM引物扩增相应基因时,检测到1株发生OprD缺失,23株都未检测到blaIMP及blaVIM。结论ICU中19株多重耐药铜绿假单胞菌均来自同一克隆;其中1株发生OprD缺失突变,5株金属酶筛选试验阳性,但需分子生物学方法进一步证实。     

耐碳青霉烯铜绿假单胞菌耐药表型及基因型分析

目的 了解深圳福田人民医院铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制,为临床合理使用抗生素提供参考依据.方法 用E-test试剂条检测铜绿假单胞菌对哌拉西林、头孢他啶、亚胺培南、美罗培南、庆大霉素、妥布霉素、环丙沙星7种抗生素的最小抑菌浓度,用三维实验对产AmpC、KPC酶菌株的耐药表型进行确认,金属酶的表型确证实验则采用EDTA双纸片扩散法.用PCR方法检测AmpC、VIM-1、VIM-2、IMP-1、SPM、KPC及OprD 7个基因型,并分析表型和基因型之间的关系,质粒接合实验用来证实耐药基因的传播性.结果 29例铜绿假单胞菌均为多重耐药菌株,且对亚胺培南、美罗培南及庆大霉素耐药率最高,3种药物最小抑菌浓度分别为32、32、256 μg/mL.26株携带有AmpC基因的铜绿假单胞菌仅有5株为持续高表达菌株,18株金属酶阳性菌中有15株与VIM-2基因型检测一致,其余3株VIM-2基因型阴性,并有1株为VIM-2基因型阳性但金属酶阴性.29株中检测出8株携带OprD基因,外膜蛋白缺失率为72%(21/29),其余基因型均阴性.结论 该院铜绿假单胞菌耐碳青霉烯类抗生素的耐药机制主要为产金属酶及外膜蛋白缺失,碳青霉烯类抗生素的不合理使用将加剧该类药物的耐药性.     

烧伤患者亚胺培南耐药铜绿假单胞菌耐药情况和耐药基因研究

目的探讨烧伤患者亚胺培南耐药铜绿假单胞菌耐药情况和耐药基因。方法选取2015年2月至2017年2月该院烧伤科收集的31株亚胺培南耐药铜绿假单胞菌,采用纸片扩散法进行药敏试验,聚合酶链反应(PCR)检测铜绿假单胞菌亚胺培南耐药相关基因及外膜蛋白基因OprD2,琼脂稀释法检测氰氯苯腙对亚胺培南最小抑菌浓度(MIC)的影响。结果亚胺培南耐药铜绿假单胞菌对庆大霉素、头孢哌酮、头孢吡肟、氨曲南耐药率较高,耐药率均大于60.00%;31株亚胺培南耐药铜绿假单胞菌中,IMP基因阳性6株,阳性率为19.35%;VIM基因阳性3株,阳性率为9.68%;OprD2基因缺失5株,阳性率为16.13%。OXA-10和GES耐药基因未检测到;16.13%的菌株存在主动外排的耐药机制。结论亚胺培南耐药铜绿假单胞菌对大部分抗菌药物耐药率较高,其耐药机制与细菌膜微孔蛋白基因OprD2缺失、细菌产IMP型金属-内酰胺酶及细胞主动外排机制有关;临床上应加强细菌耐药的监测以及抗菌药物的合理应用,减少耐药菌株的产生。     

铜绿假单胞菌IMP型金属β-内酰胺酶的基因研究

目的研究铜绿假单胞菌产金属β-内酰胺酶(metallo-β-lactamases，简称金属酶)的编码基因及亚型。方法临床分离的铜绿假单胞菌用全自动微生物分析系统鉴定，纸片扩散法进行抗生素敏感试验，采用纸片协同法检测金属酶表型，PCR法扩增金属酶基因，并对PCR产物进行序列测定，确定亚型。结果24株耐亚胺培南铜绿假单胞菌共检出产金属酶菌株7株。该7株细菌均扩增出IMP型金属酶，其扩增片段含500个核苷酸。核苷酸及氨基酸序列经GenBank分析，为IMP-1型金属酶(注册号：AY386702)，但有3个位点的同义突变。结论7株临床分离的铜绿假单胞菌产生的金属酶为IMP-1亚型。     

铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药机制分析

目的铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药机制分析研究。方法采用K-B法检测100株耐亚胺培南铜绿假单胞菌(IRPA),并用聚合酶链式反应(PCR)法检测分析耐亚胺培南铜绿假单胞菌相关金属酶IMP、VIM基因以及外膜通道蛋白OprD2基因。结果 70株耐亚胺培南铜绿假单胞菌为多重耐药菌,对阿米卡星、头孢哌酮/舒巴坦的敏感性较高。金属酶IMP基因阳性率为24.29%(17/70),vIM型金属酶基因阳性率为7.14%(5/70),外膜蛋白通道OprD2基因阳性率为68.57%(48/70),其中外膜蛋白通道OprD2基因缺失率为58.33%。结论 IRPA耐药情况严重。外膜蛋白通道OprD2基因缺失突变是本组铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的重要机制之一。     

亚胺培南耐药铜绿假单胞菌产金属β-内酰胺酶基因的流行病学研究

目的明确我院临床分离的铜绿假单胞菌耐亚胺培南基因型。方法收集临床分离的铜绿假单胞菌219株,筛选亚胺培南耐药株;采用双纸片协同试验对临床分离的35株耐亚胺培南铜绿假单胞菌进行金属β-内酰胺酶(MBL)表型检测;用聚合酶链反应(PCR)检测MBL基因型别,并对PCR扩增阳性株进行测序。结果 219株铜绿假单胞菌中35株为耐亚胺培南铜绿假单胞菌,35株耐亚胺培南铜绿假单胞菌共检出14株MBL表型阳性,占40%。其中IMP-1型阳性7株、VIM-2型阳性2株。结论产金属β-内酰胺酶是铜绿假单胞菌对β-内酰胺类抗菌药物耐药的主要机制之一,临床应根据药敏结果及产酶情况综合考虑合理用药,以减少耐药菌株的产生。     

耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌的耐药机制

目的探讨该院耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌的耐药机制。方法采用ATB Expression进行细菌鉴定和药物敏感试验。应用PCR法对耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌耐药基因IMP、VIM和外膜孔蛋白基因OprD2进行检测。结果 70株耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌对多黏菌素、阿米卡星、庆大霉素耐药率分别为1.4%、47.1%、65.7%,对头孢他啶、头孢吡肟、环丙沙星的耐药率分别为64.3%、60.3%、71.4%;70株耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌中,IMP阳性30株(42.9%)、VIM阳性13株(17.6%),膜微孔蛋白OprD2缺失70株(100.0%)。结论耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌多重耐药情况严重。外膜孔蛋白基因OprD2的缺失是该院铜绿假单胞菌耐碳青霉烯类抗菌药物的主要机制。     

我国28家医院中铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素的耐药性及同源性分析

目的 调查中国16个城市28家医院铜绿假单胞菌碳青霉烯类抗牛素耐药情况、产金属酶情况及同源性.方法 收集中国16个城市28家医院2006年7月到2007年7月临床分离的我国医院内病原菌耐药监测(NPRS)所保留的铜绿假单胞菌菌株654株.采用琼脂稀释法测定亚胺培南、美罗培南的MIC,脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析碳青霉烯类耐药菌株同源性;Etest法进行金属酶表型筛选;PCR扩增及克隆测序分析金属酶基因型,实时荧光定量逆转录PCR(real time RT-PCR)检测金属酶的转录水平.结果 共筛选出275株碳青霉烯类抗生素不敏感株,其中259株为耐药株,亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为37.5%(245/654)和28.0%(183/654).275株碳青霉烯类抗生素不敏感菌株中金属酶表型阳性率6.55%(18/275),金属酶基因型阳性率8.73%(24/275).6株金属酶基因型阳性而表型阴性菌株的金属酶相对表达量显著低于18株金属酶表型阳性菌株(Z=-2.335,P＜0.05).259株碳青霉烯类抗生素耐药菌株PFGE分属89个型,24株金属酶基因型阳性菌株来自6个城市,分为9个PFGE克隆型.结论 我国铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素耐药率高;未发现铜绿假单胞菌大范围单克隆株流行.产金属酶不是铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素耐药的主要机制.     

CARB-8型β内酰胺酶基因在多重耐药铜绿假单胞菌中的分布

目的了解淮北地区分离的多重耐药铜绿假单胞菌中羧苄西林酶(CARB)基因携带情况及其基因检测。方法用法国生物梅里埃公司VITEK-32全自动微生物分析仪鉴定临床分离的铜绿假单胞菌并作药敏试验;采用PCR法筛检出铜绿假单胞菌CARB基因,用DNA测序法对阳性扩增产物测序分型。结果通过药敏试验筛检出36株多重耐药铜绿假单胞菌,其中9株携带CARB基因,检出率为25.0%。经DNA测序并进行BLAST比对,确定基因型为CARB-8型。结论淮北地区临床样本中分离的多重耐药铜绿假单胞菌携带CARB-8型β内酰胺酶基因,携带率为25.0%,应引起临床重视。     

铜绿假单胞菌β-内酰胺类药敏表型及耐药基因的研究

目的了解该院铜绿假单胞菌对β-内酰胺类制剂的耐药情况以及相关耐药基因的携带现况。方法自临床分离的119株铜绿假单胞菌均采用PCR检测耐药基因(TEM、SHV、CTX-M、DHA-1、OXA、CARB、VEB-1、PER-1、GES-2、AmpC、VIM-1、VIM-2、IMP-1、SPM、OprD和IntⅠ)并对检出的耐药基因进行DNA测序。结果 119株铜绿假单胞菌中TEM阳性103株(86.6%),AmpC阳性77株(64.7%),IntⅠ阳性54株(45.4%),OprD缺失54株(45.4%),VIM-2阳性19株(16.0%),CARB阳性14株(11.8%),SHV阳性2株(1.7%),OXA阳性2株(1.7%),DHA-1阳性1株(0.8%),其余基因均为阴性。结论该院铜绿假单胞菌TEM、AmpC、IntⅠ、VIM-2等耐药基因的携带率及OprD缺失均较高,多重耐药严重。     

北京地区五家医院获得性铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药机制研究

目的 研究北京地区5家教学医院临床分离的亚胺培南耐药铜绿假单胞菌(IRPA)对碳青霉烯类抗菌药物耐药的分子机制.方法 收集2004年6月-2005年12月北京地区5家教学医院临床分离的非重复性213株IRPA,采用琼脂稀释法测定美罗培南、亚胺培南等抗菌药物对这些菌株的MIC值;采用纸片法初筛产金属酶菌株;对金属酶IMP-、VIM-基因以及孔道蛋白OprD2基因进行PCR及序列分析.结果 5家教学医院分离的213株IRPA中84株存在孔道蛋白OprD2缺失,其中有6株还同时产IMP-1型金属酶.另有13株IRPA单独产IMP-1型金属酶,2株单独产VIM-2型金属酶.结论 孔道蛋白OprD2缺失、产金属酶是北京地区铜绿假单胞菌(PA)对碳青霉烯类抗菌药物耐药的部分机制.