海洛因成瘾大鼠硫化氢/胱硫醚β-合酶体系的变化

目的观察海洛因成瘾对大鼠硫化氢(hydrogen sulfide,H2 S)/胱硫醚β-合酶(cystathionine-β-synthase,CBS)体系产生的影响。方法实验大鼠分成健康对照组、heroin组、heroin+硫氢化钠(NaHS)组,每组10只。heroin组、heroin+NaHS组按剂量递增原则皮下注射海洛因9 d,对照组按同样方式注射等量生理盐水,heroin+NaHS组在每次注射海洛因前30 min腹腔注射NaHS,第10天纳洛酮腹腔注射观察戒断症状。采用亚甲基蓝比色法测定大鼠血浆及海马组织H2S含量,Real-time PCR检测海马组织CBS mRNA表达量。结果 heroin组与健康对照组比较,血浆及海马H2 S含量均明显降低(P<0.05),CBS mRNA表达量显著增高(P<0.05);heroin+NaHS组与健康对照组比较,海马H2S含量明显降低(P<0.05);heroin+NaHS组与heroin组比较,血浆及海马H2S含量明显增高(P<0.05),CBS mRNA表达量明显降低(P<0.05)。结论海洛因依赖可导致大鼠体内H2S水平下降,内源性H2S与CBS之间存在负反馈调节作用,使内源性H2S维持在生理浓度水平。     

反复热性惊厥前后硫化氢/胱硫醚-β-合成酶体系表达的改变

目的:研究反复热性惊厥(febrile seizures,FS)对发育期大鼠脑内硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)/胱硫醚-β-合成酶(cystathionine-β-synthase,CBS)体系表达的影响.方法:采用热水浴诱导大鼠反复热性惊厥.隔日诱导惊厥1次,共诱导10次.发育期大鼠随机分为对照组(N组, n=8)及10次热性处理组(n=22).10次热性处理组依其是否出现惊厥又分为10次高热组(H组, n=9)及10次热性惊厥组(FS组,n=8).10次热性处理组中虽出现惊厥但不足10次者用于其他实验.用亚甲基蓝法测定大鼠血浆H2S含量;用原位杂交和免疫组化法分别观察CBS基因和蛋白表达情况.结果:FS组大鼠血浆H2S含量明显高于对照组和高热组,FS组大鼠海马CBS基因和蛋白表达明显高于对照组和高热组.结论:反复热性惊厥可使大鼠血浆H2S含量升高,并可使大鼠海马CBS基因和蛋白表达增强.     

浒苔多糖对非酒精性脂肪肝大鼠脂质代谢及多器官H2S生成的影响

目的 探讨浒苔多糖(EP)对高脂饲料诱导非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠脂质代谢及多器官内源性硫化氢(H2S)生成的影响.方法 50只成年雌性SD大鼠随机分为5组,每组10只.空白对照组(Normal diet+H2O)、EP对照组[Normal diet+200 mg/(kg·bw·d)EP]、模型组(High-fat diet+ H2O)、EP干预组[High-fat diet+200 mg/(kg·bw·d)EP]、硫氢化钠组[High fat diet+56 μmol/(kg·bw·d)NaHS],持续干预35 d.比较各组大鼠体重、肝脏以及血脂、H2S、CSE、CBS的差异.结果 与模型组比较,EP可显著改善NAFLD大鼠肝细胞脂肪变,降低高脂饲料喂养大鼠血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平(P＜0.05),升高血清H2S水平(P＜0.05),增加多个脏器中胱硫醚-β-合成酶(CBS)/胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)活性(P＜0.05).Western blot分析显示,与模型组比较,EP干预后,NAFLD大鼠大脑中CBS和CSE蛋白表达水平、脾脏和肝脏中CBS蛋白表达水平、心脏和肾脏中CSE蛋白表达水平增高(P＜0.05).结论 EP可能通过促进大鼠多器官生成内源性H2S,改善脂质代谢.     

内源性硫化氢在糖尿病大鼠肾脏的变化及作用（英文）

新型内源性气体信号分子-硫化氢(内源性H_2S)具有类似氧化亚氮(nitric oxide,NO)的某些特征,如松弛血管、抑制血管平滑肌细胞增生、调节血管平滑肌细胞张力等作用。本系列研究观察了糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠肾脏内源性H2S的变化以及与H2S合成酶-半胱氨酸胱硫醚2β2合成酶(cystathionine 2β2 synthase,CBS)、胱硫醚2γ2裂解酶(cystathionine 2γ2 lyase,CSE)的关系,对DN大鼠肾脏病理改变的影响,对成肌纤维细胞特征性标志物-a平滑肌肌动蛋白(asmooth muscle actin,α-SMA)和细胞外基质成分-纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)在大鼠肾组织分布和表达的影响,来探讨内源性H_2S在糖尿病肾病发病机制中的作用。结果显示:①DN大鼠内源性H_2S量明显减少,肾脏CSE的表达亦明显减少。②内源性H_2S的减少与DN大鼠临床表现和肾脏病理改变密切相关。③DN组大鼠肾组织中α-SMA和肾小球基质中FN均增加,分布增多,补充外源性H_2S后,α-SMA和FN明显下降。DN大鼠肾脏内源性H_2S降低。肾脏CSE的减少可能是导致DN大鼠肾脏内源性H_22S降低的直接因素。外源性补充H_2S可抑制糖尿病肾病大鼠肾脏中成肌纤维细胞的生成和细胞外基质的过度积聚。提示,内源性H_2S的减少与糖尿病肾病的发生有关。     

早产、足月胎兔动脉导管平滑肌细胞中胱硫醚-γ-裂解酶mRNA表达及意义

目的:研究早产和足月胎兔动脉导管平滑肌细胞胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase,CSE)mRNA的表达情况。方法:选取日本大耳白胎兔早产组(孕25 d)、足月组(孕30 d)各10只,分离动脉导管平滑肌组织,采用组织块改良贴壁法进行胎兔动脉导管平滑肌细胞的体外培养,半定量逆转录集合酶链(RT-PCR)检测胱硫醚-γ-裂解酶mRNA的表达。结果:经10～15 d培养后,倒置显微镜下观察,动脉导管平滑肌细胞呈梭形或放射状生长,高低起伏形成典型的"峰-谷"样,早产组和足月组CSE mRNA的表达值分别为(29.67±6.7)和(10.35±4.5),两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:早产及足月胎兔动脉导管平滑肌细胞均表达CSE mRNA,表达量可能与胎龄有关,提示动脉导管组织可能内源性生成H2S气体,且在宫内低氧环境中H2S可能是维持动脉导管开放状态的一个重要因素。     

胱硫醚-β-合成酶在年轻和老年大鼠海马中的表达分布

目的探讨硫化氢（H2S）合成酶胱硫醚-β-合成酶（CBS）在海马中的分布和表达是否受年龄因素的影响。方法用免疫组化和免疫印迹方法观察年轻（3月龄）和老年（24月龄）大鼠海马中CBS的分布和含量。结果 CBS在年轻和老年大鼠海马中主要分布在颗粒细胞层和锥体细胞层,呈区域性分布,其中CA1区表达最多,CA3区、DG区表达较少;CBS在老年大鼠和年轻大鼠海马中的表达和分布没有变化。结论 CBS在大鼠海马中呈区域性分布,CA1区表达最多,年龄不影响CBS的分布和表达。     

内源性硫化氢与阴茎勃起

内源性硫化氢(H2S)是继一氧化氮(NO)和一氧化碳(CO)之后发现的第3种气体信号分子,通过胱硫醚-β-合成酶(CBS)和胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)途径合成或产生。它通过直接作用于KATP通道、减少细胞外Ca2+的内流及与睾酮、NO、CO协同作用等方式来舒张阴茎海绵体血管平滑肌,改善血管舒张功能;还可抑制血管平滑肌细胞增殖,促进其凋亡,改善血管重构。因此,深入研究H2S在阴茎勃起调节中的作用,可为治疗勃起功能障碍(ED)提供新的途径。     

胱硫醚-γ-裂解酶在过敏性休克死亡小鼠心肌组织中的死后变化

目的：探讨胱硫醚-γ-裂解酶（ cystathionine-γ-lyase,CSE）在过敏性休克小鼠心肌组织中的表达和意义。方法：通过注射卵蛋白（ OVA）制作小鼠过敏性休克模型。将昆明种小鼠60只随机分为4组,即：PBS对照组、OVA模型组、OVA模型﹢炔丙基甘氨酸（ PPG）组、OVA模型﹢硫氢化钠（ NahS）组。各组小鼠致敏第3周诱发过敏性休克致死,未死亡小鼠1 h后颈椎脱臼处死动物。分别于死亡后即时（T1）、死亡后冷冻2 d（T2）和冷冻7 d（T3）三个时间点取心肌组织行免疫组织化学染色检测心肌组织CSE蛋白的表达。结果：对照组小鼠心肌组织中CSE呈弱阳性表达,OVA诱导的过敏性休克模型心肌组织中CSE呈阳性表达。给予外源性NahS后CSE在心肌组织中表达增强,而给予h2 S抑制剂PPG后,CSE在心肌组织中表达减弱较为明显。各组小鼠心肌组织在T1、T2、T3三个时间点CSE的表达变化不明显。结论：过敏性休克小鼠心肌细胞中CSE的表达增强,应用免疫组化染色检查心肌组织中CSE的表达可为过敏性休克死亡的法医学鉴定提供形态学参考指标。     

高原肺动脉高压大鼠硫化氢／胱硫醚-γ-裂解酶体系的变化

目的探讨气体信号分子H2S及其生成酶胱硫醚-γ-裂解酶（CSE）在大鼠高原性肺动脉高压形成中的作用及其动态变化规律。方法60只雄性Wister大鼠,随机抽取10只大鼠作为低海拔对照组,其余50只为高原组。高原组大鼠在到达海拔4617m的第1、3、7、15、30d不同时间采集血浆及肺组织标本,采用右心导管法测定肺动脉压、敏感硫电极法测定血浆H,S浓度、酶促反应法测定肺组织CSE转化率、Western blot方法检测CSE在蛋白中的表达。结果大鼠第1d到达高原时,各项观察指标无明显变化;到达高原第3d时肺动脉压（18．12±3．34mmHg）无明显变化,而血浆H2S和CSE转化率明显增高;大鼠在高原7d时可形成肺动脉高压[（30．31±4．05）mmHg];随着高原低压低氧和大鼠肺动脉高压的持续,血浆H2S浓度、肺组织CSE转化率及蛋白表达逐渐下降,15d组和30d组与其他各组比较差异均有统计学意义。结论在高原暴露早期,内源性H2S／CSE体系上调而肺动脉压不增高,而在后期H2S／CSE体系下调且肺动脉压增高,提示内源性H2S体系可能与高原性肺动脉高压形成有关,并起着保护作用。     

玉米须水提物对2型糖尿病肾病大鼠转化生长因子-β1和纤维连接蛋白表达的影响

目的 研究玉米须水提物对2型糖尿病肾病大鼠肾组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)和纤维连接蛋白(FN)表达的影响,探讨其可能的作用机制.方法 采用高糖高脂饲养加小剂量链脲佐菌素(STZ)诱导2型糖尿病肾病大鼠模型,将实验动物分为正常对照组、模型对照组和玉米须水提物低、中和高剂量组,共5组.给药8周后,测定各组大鼠空腹血糖、体重、肾重、血清尿素氮、血肌酐和24 h尿蛋白;免疫组化法分析TGF-β1表达水平;实时定量RT-PCR定量检测肾组织TGF-β1和FN的表达水平.结果 与模型对照组比较,中和高剂量组的玉米须水提物可显著降低糖尿病肾病大鼠血糖、肾指数、血清尿素氮、血肌酐和24 h尿蛋白(P ＜0.05或P＜0.01),明显降低肾组织中TGF-β1和FN mRNA的表达量(P＜0.05或P＜0.01).结论 玉米须水提物能够降低糖尿病大鼠血糖、肾指数、血清尿素氮、血肌酐和24 h尿蛋白的水平,下调肾病大鼠肾组织中TGF-β1和FN的表达,调节细胞外基质的生成和降解,从而减轻糖尿病肾病大鼠肾脏的病理损害,发挥其肾脏保护作用.     

胰岛素样生长因子1对PC12细胞胱硫醚-β-合成酶和硫化氢的影响及机制

\[摘要\]目的观察胰岛素样生长因子1(IGF-1)对大鼠嗜铬细胞瘤细胞(PC12)胱硫醚-β-合成酶(CBS)及硫化氢(H2S)表达的影响以及可能的细胞信号通路机制。方法用不同剂量IGF-1(20、 40、80 ng/ml)作用体外培养的PC12细胞24 h,荧光定量PCR检测CBS基因表达,蛋白质印迹分析检测CBS、细胞外信号调节激酶/丝裂原活化蛋白激酶(ERK/MAPK)相关蛋白表达,敏感硫电极法检测H2S气体含量。之后选取最佳剂量的IGF-1(80 ng/ml) 作用于30 min前已加入ERK/MAPK抑制剂PD98059的PC12细胞再次检测CBS、ERK/MAPK相关蛋白及H2S气体表达水平。结果IGF-1增加CBS的表达和H2S的含量,上调pERK1/2的表达;而PD98059能够抑制IGF-1的上述作用。结论IGF-1及其调控的ERK/MAPK信号通路参与调节CBS及H2S的表达。     

同型半胱氨酸和胱硫醚-β合成酶基因多态性与Alzheimer病的关系

目的探讨同型半胱氨酸(Hcy)和胱硫醚-β合成酶基因CBS844ins68基因多态性与阿尔茨海默病(alzheimerdisease,AD)的关系。方法运用多聚酶链反应技术和荧光偏振法(FPIA)检测66例阿尔茨海默病及143例正常人CBS844ins68基因多态性和血浆总Hcy水平。结果AD组CBS844ins68D/D、D/I、I/I基因型频率(%)分别为78.79、19.69、1.52,对照组分别为78.32、18.88、2.8,CBS844ins68各种基因型频率在患者组与正常对照组之间的差异无显著性(P>0.05)。AD病例组与对照组血浆Hcy分别为(14.72±6.2)μmol/L和(10.9±2.4)μmol/L,两者差异有显著性(P<0.05)。AD患者血浆总Hcy水平显著高于正常组。结论胱硫醚-β合成酶多态性与AD无明显相关,高同型半胱氨酸血症与Alzheimer病发生有一定关系。     

胱硫醚-γ-裂解酶在小鼠肺脏中的表达与血中H2S含量研究

目的 探讨外源性硫化氢(H2S)对小鼠肺脏胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)和血H2S的影响.方法 取4周龄健康昆明小鼠20只,随机分为生理盐水对照组,NaHS作用24h,72h,5d实验组,每组5只,均采用腹腔注射给药.在3个不同时间点处死小鼠,生理盐水对照组与24h组一并处死,取肺脏进行免疫组织化学染色与图像分析,敏感硫电极检测循环血中H2S含量.结果 ①免疫组织化学见CSE主要表达在支气管上皮细胞和肺泡隔中毛细血管内皮细胞浆及核膜上,与对照组比较,24h实验组表达最强,图像分析相对含量显著升高(P<0.01),72h实验组也有升高(P<0.05);实验组之间比较,5d实验组与72h,24h实验组比较差异非常显著(P<0.01),而5d实验组与对照组间差异无统计学意义(P>0.05).②各实验组小鼠外周血中H2S含量均高于对照组(P<0.01),其含量随时间延长而降低,5d实验组最低.结论 小鼠肺脏中确有CSE表达.外源性H2S可提高小鼠肺脏CSE表达及循环血中H2S的含量,随时间延长,CSE表达和H2S含量逐渐减少.     

胱硫醚-γ-裂解酶在过敏性休克小鼠肺组织中的表达

探讨过敏性休克小鼠肺组织中胱硫醚-γ-裂解酶（CSE）的表达。方法：取健康昆明种小鼠36只,随机分为过敏性休克模型组和磷酸盐缓冲液（PBS）对照组,每组再分为死亡即时组、冷冻48 h组和冷冻7 d组,每组6只,模型组通过注射卵蛋白（OVA）制作过敏性休克模型,致敏第3周诱发过敏性休克致死或颈椎脱臼处死动物。对照组采用PBS代替OVA,第3周与模型组小鼠一并处死。各组小鼠分别在3个时间点取肺组织,福尔马林固定,制作石蜡切片,并行免疫组织化学染色检查观察CSE在肺组织中的表达情况。结果：模型组各时间点肺组织中见胱硫醚-γ-裂解酶主要表达在肺泡上皮细胞胞浆,对照组肺泡上皮细胞呈弱阳性。结论：过敏性休克小鼠肺组织中有胱硫醚-γ-裂解酶表达,死后冷冻7 d之内,肺组织中胱硫醚-γ-裂解酶表达随着时间的延长呈下降趋势,应用免疫组化染色检查肺组织中胱硫醚-γ-裂解酶的表达可为过敏性休克死亡提供一定的法医病理学诊断依据。     

糖尿病大鼠阴茎海绵体硫化氢含量及其合成酶表达的变化

目的 观察糖尿病大鼠及非糖尿病大鼠阴茎海绵体组织中硫化氢(H₂S)含量及胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)表达的差异。 方法 将Wistar大鼠随机平均分为两组,一组高脂饲料喂养8周后,注射链脲佐菌素(STZ)制备2型糖尿病大鼠模型(糖尿病组),另一组普通饲料喂养(对照组)。继续喂养12周后分离两组大鼠海绵体组织,检测海绵体组织内源性H₂S的生成;采用RT- PCR法检测两组海绵体组织中CSE mRNA的表达;采用Western blotting法检测两组CSE蛋白的表达。 结果 糖尿病组内源性H₂S浓度较对照组显著降低(P<0.01);糖尿病组海绵体组织中CSE mRNA和CSE蛋白的表达量均较对照组显著降低(P<0.01)。 结论 糖尿病大鼠阴茎海绵体H₂S含量显著降低,其机制可能与CSE mRNA及蛋白水平表达减少有关。     

硫化氢和胱硫醚β合酶在脑室周围白质软化新生大鼠脑组织中的表达

目的探讨缺氧缺血对3日龄大鼠脑白质细胞硫化氢(H2S)及胱硫醚β合酶(CBS)表达的影响,以及其在3日龄大鼠脑白质损伤(WMD)发病过程中的作用。方法将3日龄大鼠按照随机数字表法分为实验组和对照组,建立新生大鼠WMD模型,分别在缺氧缺血后第12、24、48、72 h和7 d处死大鼠,脑组织取材后行苏木精-伊红(HE)染色,并观察其病理变化。采取免疫组织化学法检测脑组织CBS的表达水平;用分光光度计法测大鼠血浆中H2S水平。结果在新生大鼠脑白质中,缺氧缺血后实验组大鼠脑组织CBS的表达和血浆H2S水平在12 h开始增强,24 h达高峰,7 d仍可见表达;实验组大鼠脑组织CBS的表达和血浆H2S水平在缺氧缺血后12、24、48、72 h和7 d均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论新生大鼠脑组织CBS和血浆H2S表达水平于缺氧缺血后显著增强,二者可能与新生大鼠WMD的病理生理过程有关。     

内源性H_2S对糖尿病肾病细胞外基质积聚的作用

目的观察糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠肾组织中纤维黏连蛋白(fibronectin,FN)分布及含量变化,探讨内源性硫化氢(H2S)对糖尿病肾病细胞外基质积聚的作用。方法雄性SD大鼠28只用数字表法随机分为对照组、DN组、H2S干预组和胱硫醚-γ裂解酶(cystathionine-γ-lyase,CSE)阻断剂组,每组7只。用免疫组织化学法及Western blotting免疫印迹法检测各组大鼠肾组织中FN分布及含量。结果1)对照组大鼠FN主要分布于系膜基质和肾小囊壁;DN组和CSE阻断剂组大鼠肾小球基质中FN的分布增加;与DN组及CSE阻断剂组比较,H2S组大鼠FN的分布明显减少。2)与对照组比较,DN组大鼠FN的含量增加,Western blotting检测结果显示,DN组(48896±779)与对照组(38531±902)比较差异有统计学意义(P<0.01);与DN组、CSE阻断剂组比较,H2S组中FN的含量下降,Western blotting结果显示,H2S干预组(42737±1196)与DN组(48896±779)、CSE阻断剂组(48252±1068)比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论内源性H2S可抑制DN大鼠肾脏中细胞外基质的过度积聚,延缓糖尿病肾病的病理改变。     

脑血栓患者胱硫醚-β合成酶的基因多态性研究

目的 :探讨同型半胱氨酸 (Hcy)代谢过程的关键酶之一胱硫醚 -β合成酶 (CBS)基因多态性与脑血栓的关系及其家族遗传性。方法 :采用限制性内切酶片段长度多态性方法检测患者 CBS基因T2 7796 C位碱基突变。结果 :病例组与对照组 CBS基因分布频率和等位基因频数分布差异无显著性(P>0 .0 5 ) ;一级亲属和对照组 CBS基因分布频率差异有显著性 (P<0 .0 5 ) ,C纯合型与对照组差异无显著性 (P>0 .0 5 ) ,杂合型差异有显著性 (P<0 .0 5 ) ,杂合型比纯合型患脑血管病的危险度高 3.2倍。结论 :不能排除 CBS基因 T2 7796 C点突变是脑血管疾病发病的遗传因素     

脐血浆中硫化氢与羊水污染的相关性研究

目的 研究脐血浆中硫化氢(H2S)和羊水污染的相关性.方法 收集孕产妇脐血浆60份,根据分娩时羊水是否污染分为2组.用敏感硫电极检测脐血浆中硫离子的浓度,并换算出H2S的含量;免疫组织化学方法检测胎盘中胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)和胱硫醚-β-合成酶(CBS)的表达程度.结果 羊水污染组中H2S含量高于羊水清组,差异有显著性.免疫组化显示:CSE表达于胎盘绒毛的细胞滋养层胞浆中,羊水污染组CSE呈现高表达.CBS在任何组中均未见有表达.结论 胎盘绒毛的细胞滋养层胞浆中含有CSE,不舍CBS;脐血浆中H2S由细胞滋养层细胞参与调控生成;孕产妇脐血浆中H2S与羊水污染有密切关系.     

茶多酚对糖尿病肾病大鼠肾脏转化生长因子表达的影响

目的：探讨茶多酚防治糖尿病肾病的机制。方法：复制糖尿病肾病大鼠模型，随机分为5组：单侧肾切除组(C组)、糖尿病肾病模型对照组(DC组)、茶多酚提前治疗组(B组)、同时治疗组(I组)和滞后治疗组(A组)。分别于造模后0、2、4周，检测血糖、24h尿蛋白，观察肾皮质转化生长因子(TGF-β1)基因和蛋白的表达。结果：茶多酚有效降低了早期糖尿病肾病大鼠24h尿蛋白，抑制了肾皮质中TGF-β1mRNA和蛋白质表达的升高，尤以茶多酚提前治疗组效果最为明显。结论：在糖尿病肾病早期使用茶多酚治疗，可以通过降低肾皮质TGF-β1基因与蛋白的表达．有效延缓了糖尿病肾病的发牛和发展。