鼠疫耶尔森菌对抗生素的耐药机制研究进展

鼠疫是由鼠疫耶尔森菌引起的人畜共患病。随着抗生素的发现和使用，人类的死亡率大幅降低，研究发现在多个国家地区出现对抗生素有不同程度耐药的变异菌株，这些变异菌株通过不同的耐药机制抵抗抗生素的作用，产生耐药性。鼠疫耶尔森菌不仅可以通过从其他细菌中获得耐药质粒的接合转移，也可以通过基因点突变抵制抗生素。本文从鼠疫耶尔森菌可感染人和多种动物、治疗鼠疫的抗生素、鼠疫耶尔森菌对抗生素的耐药机制等方面进行综述。     

耶尔森菌中IS100研究概况

IS100是特异性地出现在鼠疫菌和假结核耶尔森菌中的插入序列，它在鼠疫耶尔森菌的染色体中有多个拷贝，在质粒中也有分布。它的转座活性较高，致使鼠疫菌中出现多个假基因，同向IS100之间的同源重组可以导致鼠疫菌发生基因的水平转移。     

鼠疫菌pMT质粒的模块结构及其连接方式

鼠疫的致病菌鼠疫耶尔森菌有3个常见的质粒，编码一系列的毒力因子；其中最大的质粒pMT编码F1抗原和鼠毒素，是鼠疫菌两个比较重要的毒力因子。     

河北省鼠疫自然疫源地鼠疫耶尔森菌变异性研究进展

在河北省鼠疫自然疫源地流行初期分离的鼠疫耶尔森菌(鼠疫菌)毒力较强,脱氮能力稳定,质粒种类丰富,但在流行末期分离的鼠疫菌往往毒力较弱,脱氮能力不稳定,质粒易缺失。鼠疫菌的形态学在自然界中存在较大差异。该文通过探讨河北省鼠疫菌的生物学、生化、质粒和毒力变异情况,揭示鼠疫静息期存在的机制。     

鼠疫耶尔森菌TaqMan探针实时荧光定量PCR快速检测

目的 建立一种快速检测鼠疫耶尔森菌的方法.方法 以编码F1抗原的基因caf1为靶序列,人工合成基因序列,制备重组质粒作为鼠疫耶尔森菌检测的标准样品;用实时荧光定量聚合酶链反应(fluorescent quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)技术,针对pMT1质粒上的caf1基因设计引物和TaqMan荧光探针,进行实时FQ-PCR检验,评价该方法的准确性、敏感性及特异性.建立鼠疫耶尔森菌TaqMan探针实时FQ-PCR检测方法.结果 本研究成功构建了质粒pUC57-caf1,引物、探针特异性良好,标准曲线在5.03×102～5.03×107拷贝数之间,具有较好的线性关系,相关系数1.0.实时FQ-PCR检验最低可检测出5.03×102拷贝数的重组质粒,灵敏度比普通PCR高100倍.特异性检测试验可选择性检测出鼠疫耶尔森菌,与其他细菌无交叉反应,结果与普通PCR一致.对同一浓度的重组质粒进行15个平行样品的重复性试验,Ct值标准差为0.28.结论 建立TaqMan探针实时FQ-PCR检测技术,能够快速、准确、特异的检测鼠疫耶尔森菌,为鼠疫监控、诊断提供技术支持.     

鼠疫耶尔森氏菌外膜蛋白研究进展

耶尔森氏菌属包括 11个菌种 ,其中只有鼠疫耶尔森氏菌、假结核耶尔森氏菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌对人致病 ,而其余 8个菌种只对动物致病。致病性耶尔森氏菌的外膜蛋白(yersiniaouter -membranceproteins ,Yops)一直是研究的热点。现将其研究进展综述如下。1　外膜蛋白的种类与基因定位3种对人致病的耶尔森氏菌在对外环境刺激作用反应时分泌一系列毒力因子和毒力辅助因子。现已证实这一系列毒力因子和毒力辅助因子均由大小为 70kb的毒力质粒编码(包括 11种外膜蛋白和V抗原 )。该编码质粒保守且对耶尔森氏菌毒力的发挥至关重要。鼠疫耶尔森氏…     

鼠疫菌最大质粒的研究进展

鼠疫 ( plague)是全世界普遍存在的自然疫源性疾病 ,曾引起 3次世界大流行。其病原体为鼠疫耶尔森菌 (Yersiniapestis ,简称鼠疫菌 ) ,是一种对人和动物都有强大毒力的细菌。世界各地大部分的鼠疫菌都有 3个质粒 ,分别命名为鼠毒素质粒、低钙反应质粒和鼠疫菌素质粒。其中鼠疫菌素质粒和低钙反应质粒目前研究的比较清楚 ,而鼠疫菌最大的质粒———鼠毒素质粒是目前功能最不清楚的。鼠疫菌的毒力基因在这 3个质粒中都有分布。此外 ,还有一些其他类型的质粒 ,如 2 3× 10 6质粒等。质粒的发现是 2 0世纪 80年代鼠疫研究领域中的重要突破之一 …     

鼠疫耶尔森氏菌三色荧光定量PCR检测方法的建立

目的建立一种三色荧光定量PCR检测鼠疫耶尔森氏菌的方法。方法根据鼠疫耶尔森氏菌pPCP1质粒上的pla基因、编码F1抗原在pMT1质粒上的ca f1基因以及菌体染色体上的3a基因序列,设计特异性的引物和不同荧光标记的Taqman荧光探针,优化反应体系和扩增条件,考察该方法检测的敏感度、特异性、重复性和稳定性,最终建立三色荧光定量PCR检测方法。结果本研究所建立的方法对鼠疫耶尔森氏菌DNA的扩增效率高,最低检出限为1×102copies/ml,特异性高,重复性的变异系数在合理范围内,稳定性好。结论建立了一种同时检测鼠疫耶尔森氏菌pla、ca f1和3a基因的三色荧光定量PCR方法,该方法敏感度和特异性高,能够实现快速检测的目的。     

复合探针荧光定量PCR法检测鼠疫耶尔森氏菌的实验研究

目的建立用复合探针荧光定量PCR快速检测鼠疫耶尔森氏菌的方法。方法研究根据鼠疫耶尔森氏菌pla基因的核苷酸序列设计特异引物,通过PCR法的特异性、灵敏度和重复性研究,建立了复合探针荧光定量PCR检测鼠疫耶尔森氏菌的方法,用于鼠疫的筛选和诊断。结果该检测方法的特异性为100%,最低可检出10个拷贝的质粒DNA分子,可对1×101~1×106拷贝范围内的模板进行定量,最低可检测至1×102cfu/ml细菌。该方法的精密度好,阳性质控品和阴性质控品不同时间测定3次及同一时间5次重复实验结果Cv值均<5%。结论本研究建立的复合探针实时荧光定量PCR检测鼠疫耶尔森氏菌的方法,可对鼠疫耶尔森氏菌进行快速检测、准确辨别和早期诊断,对鼠疫的早期快速诊断具有重要意义。     

鼠疫耶尔森菌外膜蛋白的克隆与表达

目的克隆并表达鼠疫耶尔森菌的多种外膜蛋白或外膜蛋白的定位、表达调控蛋白。方法通过PCR技术对目的基因进行扩增，其PCR产物经纯化、酶切处理后，再分别导入原核表达载体pET32a中，然后转化大肠埃希菌BL21(DE3)，IPTG诱导后，进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析和蛋白质芯片分析。结果获得了23个表达鼠疫耶尔森菌外膜蛋白或外膜蛋白的定位、表达调控蛋白的克隆子。全部重组蛋白质的纯度均在85％以上。结论构建了一系列重组表达质粒，为进一步研究鼠疫耶尔森菌外膜蛋白的结构与功能奠定了基础。     

青藏高原鼠疫自然疫源地鼠疫耶尔森菌病原学研究

目的:了解青藏高原鼠疫自然疫源地鼠疫耶尔森菌（简称鼠疫菌）病原学特征。方法:以青藏高原1954-2016年不同地区及宿主、媒介体内分离的1 378株鼠疫菌作为实验对象,采用常规技术与分子生物学技术对其进行表型特征、质粒谱、基因组分型等研究,并对青藏高原鼠疫菌病原学、地理分布等特征进行探讨。结果:青藏高原鼠疫菌含6个生化...     

应用Taq Man荧光定量聚合酶链反应技术检测鼠疫耶尔森菌

目的发展一种快速、敏感、特异的检测鼠疫耶尔森菌方法。方法应用荧光定量聚合酶链反应（PCR）技术，针对pMT1质粒上的caf1基因，pPCP1质粒上的pla基因，染色体上的与色素沉着相关的hms基因和侵袭素inv基因设计TaqMan引物探针，进行荧光定量PCR检验，评价方法的特异性、敏感性；构造并应用上述引物探针的外标对照定量；构造pla的内标对照，采用多重荧光定量PCR（FAM，VIC荧光检测），发现假阴性；采用UDG抗污染、ROX参照荧光染料矫正背景噪音，提高检验能力；检验模拟鼠疫耶尔森菌强毒株和EV菌感染的动物脾脏器样本，评价该法在实际工作的应用。结果设计的引物、探针特异性良好，pla、f1、hms指标的敏感性分别是最低检出10拷贝、1拷贝、1拷贝。结论该方法能快速、灵敏、特异检出鼠疫耶尔森菌，对鼠疫监测、预防生物恐怖等方面具有重要意义。     

鼠疫耶尔森菌检测方法的研究进展

鼠疫（Plague）是由鼠疫耶尔森菌（Yersinia Pestis）引起的人畜共患的烈性传染病之一。自1894年耶尔森和北里2位学者成功分离和鉴定出鼠疫耶尔森菌以来，人们己成功地建立起常规的病原学和血清学检测方法。随着分子生物学技术的飞跃发展，鼠疫菌检测技术正发生着日新月异的变化。现就近年来鼠疫耶尔森氏菌检测的研究进展作一综述。     

鼠疫耶尔森菌EV76免疫蛋白质组学初步分析

目的建立鼠疫耶尔森菌的免疫蛋白质组学研究方法 ,初步筛选鼠疫耶尔森菌特异性抗原。方法利用双向电泳技术对37℃培养的鼠疫耶尔森菌EV76株全菌蛋白进行分离,结合免疫印迹技术寻找能与鼠疫耶尔森菌免疫兔血清发生免疫反应的蛋白质,并用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对阳性蛋白点进行鉴定。结果与鼠疫耶尔森菌免疫兔血清反应的鼠疫EV76株蛋白点共472个,经基质辅助激光解析电离飞行时间质谱鉴定出277个,对应于159种蛋白,其中,35种蛋白为耶尔森菌特有,5种蛋白[F1荚膜抗原(F1 capsule antigen)、鼠毒素(murine toxin)、鼠疫菌素(pesticin)、纤维蛋白溶解酶原激活因子(Pla)、F1抗原伴侣蛋白(F1 chaperone protein)]为鼠疫耶尔森菌特有。结论初步完成鼠疫耶尔森菌EV76株的免疫蛋白质组学分析,筛选出具有抗原活性的鼠疫耶尔森菌特有蛋白,为后续特异性诊断技术的建立和疫苗研究奠定良好的基础。     

丽江市古城区家犬致病性耶尔森菌携带状况调查

目的 初步了解丽江市古城区 3 种致病性耶尔森菌在家犬中的携带情况,补充该疫源地家犬致病性耶尔森菌带菌状况的相关数据。 方法 采集丽江市古城区鼠疫疫源地家犬肛拭子样本并进行冷增菌培养,通过聚合酶链反应和细菌分离纯化对致病性耶尔森菌进行检测与分析。结果 在丽江市古城区七河镇、大东乡、金安镇、束河街道、文华街道、开南街道等地共采集了 164 份家犬肛拭子,从 1 份样本中检出鼠疫耶尔森菌、4 份样本中检出小肠结肠炎耶尔森菌,未检测到假结核耶尔森菌。 结论 丽江市古城区家犬携带鼠疫耶尔森菌和小肠结肠炎耶尔森菌,增加了当地居民感染鼠疫及相关疾病的风险,须加强对该地家犬致病性耶尔森菌携带情况的监测。     

应用荧光定量PCR检测环境样品中鼠疫耶尔森菌

目的应用荧光定量聚合酶链反应（PCR）法检测土壤和动物脏器中鼠疫耶尔森菌，评价并优选环境样品目标核酸的纯化方法。方法应用TaqMan荧光定量PCR技术，以鼠疫耶尔森菌pla、caf1、hms引物、探针为指标，比较不同种从土壤和脏器中纯化鼠疫耶尔森菌核酸的方法。结果应用NaI—Glassmilk方法及荧光定量PCR检测土壤中的鼠疫菌，检出底限为10^4拷贝／g土壤（pla），从染疫动物脾脏、肝脏标本中也能敏感检出鼠疫菌。结论荧光定量PCR方法和Nal裂解Glassmilk制备模板联合应用可灵敏特异地从土壤和动物脏器中检测鼠疫耶尔森菌。     

鼠疫耶尔森菌遗传学研究进展

染色体、质粒作为鼠疫耶尔森菌(鼠疫菌)的遗传基础,决定着鼠疫菌的生物学特征及致病力.在现有的鼠疫菌全基因组序列中,各型菌株基因组都表现出G+C含量偏差、存在丰富的插入序列、大量的假基因及频繁的基因重组等特征,这些都是鼠疫菌迅速进化的关键.鼠疫菌遗传学通过基因组学、比较和进化基因组学的研究,确定鼠疫菌对人体的毒力因子和致病机制,探索鼠疫菌致病性和进化的遗传学机制,从而为鼠疫的流行监测及疫苗研制等防治工作提供科学的理论依据.     

用多引物聚合酶链反应检测鼠疫耶尔森菌

目的建立多引物检测鼠疫耶尔森菌（鼠疫菌）的PCR（M-PCR）方法.方法合成4对引物,分别来源于质粒和染色体DNA上F1、pla、Hms、Inv基因,对164株鼠疫菌进行扩增.结果在164株鼠疫菌中,有152株菌4种基因扩增均阳性,仅云南省12株Hms基因扩增为阴性.结论采用M-PCR方法检测鼠疫菌DNA具有较好的敏感性、特异性和稳定性,其可作为检测与鉴别鼠疫菌和疫情监测方面快速诊断的方法.     

浙江省义乌市鼠类中耶尔森菌调查与分析

目的 调查浙江省义乌市鼠疫疫源地啮齿动物中致病性耶尔森菌的分布情况,并分析菌株的生物学特征.方法 采集鼠粪便进行耶尔森菌分离,对分离获得的菌株进行生物分型、血清分型和毒力基因鉴定.结果 2005-2013年共检测3623份标本,分离到小肠结肠炎耶尔森菌74株,假结核耶尔森菌11株;耶尔森菌的检出率以春季最高(5.72％).68株小肠结肠炎耶尔森菌有生物1A型(55株)、生物3型(1株)2个型别;血清分型O∶5血清型有8株、O∶8血清型有2株;毒力基因检测有29株菌检出stB基因.结论 义乌市鼠疫疫源地内未检出鼠疫菌,但分离出假结核菌和小肠结肠炎菌;在鼠疫监测同时也对其他两种致病性耶尔森菌开展监测和相关研究,对鼠疫的监测有指导意义.     

随机扩增多态性DNA技术用于鼠疫耶尔森氏菌基因分型的研究

目的 对来自全国不同疫源地、不同生态型的１０３株鼠疫耶尔森氏菌进行基因分型研究。方法 用随机扩增多态性ＤＮＡ技术（ＲＡＰＤ）。结果 将鼠疫耶尔森氏菌分成两种基因型别：全国大部分菌株为ＲＡＰＤ－１型,青海省境内的大部分菌株为ＲＡＰＤ－２型。结论 不同生态型的鼠疫耶尔森氏菌基因结构存在差异,为鼠疫耶尔森氏菌的基础研究和防治提供依据。