急性移植物抗宿主病的诊断性生物学标记物研究进展

急性移植物抗宿主病(aGVHD)是异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后影响移植总体疗效的主要并发症之一。目前,aGVHD的诊断主要依靠临床表现及靶器官组织的活检。近年来,aGVHD的诊断性生物学标记物成为造血干细胞移植后相关并发症的研究热点,已发现多种miRNA、细胞因子及免疫调节细胞与aGVHD的早期诊断及预后相关。本文从基因水平、蛋白质水平及细胞水平3个层面对aGVHD相关生物学标记物的研究进展作一综述。     

儿童异基因造血干细胞移植后早期调节性T细胞及iNKT细胞重建与aGVHD的关系

本研究旨在探讨儿童患者异基因造血干细胞移植后90d内调节性T细胞及iNKT细胞重建与急性移植物抗宿主病（aGVHD）的关系。对29例进行异基因造血干细胞移植的儿童患者分别于移植术后15d、30d、60d、90daGVHD发生时、糖皮质激素治疗后2周测定外周血淋巴细胞中CD4＋CD25＋CD127low Treg细胞、CD3＋TCRVα24＋iNKT细胞的比例。根据是否发生aGVHD将患者分为non-aGVHD组和aGVHD组,比较两组患者移植后90d内（15d、30d、60d、90d）外周血淋巴细胞中Treg细胞和iNKT细胞的比例有无差异;根据aGVHD患者对于糖皮质激素的治疗反应分为糖皮质激素治疗有效组和糖皮质激素治疗抵抗组,比较两组患者aGVHD发生时和糖皮质激素治疗后2周外周血淋巴细胞中Treg细胞、iNKT细胞的比例有无差异。结果显示：non—aGVHD组患者移植后15dTreg细胞比例显著高于aGVHD组患者（P=0．040）;non-aGVHD组患者与aGVHD组患者移植后90d内（15d、30d、60d、90d）外周血淋巴细胞中iNKT细胞比例无显著差异,但是non—aGVHD组患者15diNKT／T细胞的比值显著高于aGVHD组患者（P=0．025）。结论：对儿童异基因造血干细胞移植患者移植后早期联合监测Treg细胞和iNKT细胞的恢复情况,可能有助于aGVHD的早期发现和治疗。     

免疫抑制剂联合脐带间充质干细胞输注治疗单倍型相合造血干细胞移植后急性移植物抗宿主病的初步观察

急性移植物抗宿主病(aGVHD)是异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)尤其是单倍型相合造血干细胞移植的严重并发症之一,约半数患者对激素等一线治疗耐药.重度aGVHD患者病死率较高,成为影响造血干细胞移植总体疗效的重要因素.间充质干细胞( MSC)为中胚层发育的早期细胞,是一类多能干细胞.近年来的研究显示[1],MSC具有促进造血和减轻GVHD作用.我院2008年1月以来应用体外扩增的人脐带组织源间充质干细胞( hUC-MSC)治疗9例单倍型相合HSCT后激素耐药aGVHD患者,获得较好疗效,现将结果报告如下.     

急性白血病半相合外周血造血干细胞移植后发生单纯肠道aGVHD的影响因素及治疗转归

目的:观察急性白血病半相合外周血造血干细胞移植后影响单纯肠道aGVHD发生的危险因素及治疗转归。方法:回顾性分析我院2010年1月至2016年12月期间行半相合外周血造血干细胞移植的19例急性白血病患者的临床资料,探究发生与未发生肠道aGVHD患者的临床特征差异,单因素分析患者性别、供受者性别差异、供者年龄、预处理方案、兔抗人胸腺细胞免疫球蛋白用量、回输的单个核细胞计数及CD34~+细胞计数对肠道aGVHD发生的影响。观察发生肠道aGVHD患者治疗后的临床转归。结果:19例患者中5例于移植后发生肠道aGVHD(Ⅱ级1例,Ⅲ级3例,Ⅳ级1例),发生时间分别为移植后7,22,27,70和154 d。单因素分析显示,患者性别、供受者性别差异、供者年龄、兔抗人胸腺细胞免疫球蛋白用量、回输的单个核细胞计数及CD34~+细胞计数与肠道aGVHD的发生无相关性,BuCy预处理方案同肠道aGVHD的发生可能相关(P0.05)。5例患者中2例经甲强龙1 mg/(kg·d)治疗后好转,1例患者应用甲强龙联合他克莫司治疗后好转,其余2例患者对激素耐药,应用含CD25单克隆抗体的免疫抑制方案治疗后好转。结论:半相合外周血造血干细胞移植中BuCy预处理方案可能对移植后肠道aGVHD的发生有一定的影响,需要扩大病例数进一步观察确定。     

急性GVHD的治疗研究新进展

急性移植物抗宿主病(aGVHD)是异基因造血干细胞移植后常见并发症。尽管对于移植免疫的认识在不断进步,但aGVHD仍然是异基因造血干细胞移植后病人死亡的主要原因之一。以前认为全身应用激素是治疗aGVHD的标准首要治疗方法,但一旦出现激素耐药,就没有标准的治疗方案了。在过去的10多年中,单克隆抗体、生物工程制品及免疫制剂的化学疗法成为了治疗这种疾病的新方法。许多药物如麦考酚酸乙酯、抗肿瘤坏死因子抗体、人源化抗CD25(白介素2受体α链)对治疗激素耐药性aGVHD显示出了较好的疗效,但因为感染率高,aGVHD患者的长期生存率仍然较低。提高aGVHD的治愈率关键在于成功的初始治疗以及适时的减低激素用量以促进免疫重建。临床上已经出现治疗药物与全身性激素应用相结合的尝试。在本文中,对于aGVHD的治疗方法,诸如aGVHD的首选治疗,aGVHD的二线治疗进行了综述。     

巴利昔单抗治疗糖皮质激素耐药/依赖急性移植物抗宿主病87例疗效分析

目的:分析巴利昔单抗治疗异基因造血干细胞移植后糖皮质激素耐药/依赖急性移植物抗宿主病（aGVHD）患者的疗效。方法:对2015年1月至2018年12月期间于中国医学科学院血液病医院行异基因造血干细胞移植后发生皮肤、肠道、肝脏aGVHD并应用巴利昔单抗治疗的87例血液病患者进行回顾性分析。巴利昔单抗用药方案：成人及体重≥...     

异基因造血干细胞移植后血清可溶性白介素-2受体对急性移植物抗宿主病的预测研究

目的探究异基因造血干细胞移植后血清可溶性白介素-2受体(soluble interleukin-2receptor,sIL-2R)对急性移植物抗宿主病(acute graft-versus-host disease,aGVHD)的预测价值。方法回顾分析我院接受异基因造血干细胞移植患者12例,其中6例发生aGVHD,6例未发生aGVHD。移植前、移植后+14天、+28天、+42天、+60天、+90天通过ELISA试剂盒检测患者外周血sIL-2R水平,并分析其与aGVHD发生的相关性。结果本组患者血清sIL-2R水平为986-6957pg/ml。发生aGVHD与未发生aGVHD的患者移植前、移植后+14天及+90天血清sIL-2R有明显差别(均P0.05)。移植后第+14天血清sIL-2R预测aGVHD的cutoff值为3658pg/ml,ROC曲线下面积为0.95,敏感性100%,特异性80%(P=0.027)。结论异基因造血干细胞移植后早期sIL-2R水平的升高与移植后aGVHD的发生相关,移植后+14天sIL-2R水平可能作为预测临床aGVHD发生的重要指标之一。     

血浆炎性趋化因子CXCL9/Mig水平与急性移植物抗宿主病关系的研究

研究血浆炎性趋化因子CXCL9／Mig在异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）前后的水平变化，以探讨该因子在急性移植物抗宿主病（aGVHD）发病中的作用。以35例异基因造血干细胞移植患者为研究对象，其中包括发生0-Ⅰ度aGVHD者13例，Ⅱ度aGVHD者12例，Ⅲ-Ⅳ度aGVHD者10例。采用固相双抗体夹心ELISA方法分别测定造血干细胞移植前、临床aGVHD发生前1周、aGVHD高峰时、aGVHD完全控制后血浆CXCL9／Mig水平。结果表明：中、重度aGVHD（Ⅱ-Ⅳ度）发生时血浆CXCL9／Mig水平明显升高（P〈0．001），且随aGVHD严重程度加重而增加；临床aGVHD表现出现前1周，血浆CXCL9／Mig水平已明显升高（P〈0．001）。血浆CXCL9／Mig水平与巨细胞病毒（CMV）感染等感染并发症无明显相关性（P〉0．05）。结论：CXCL9／Mig血浆水平与aGVHD的发生明显相关，表明该因子在aGVHD发生中发挥重要作用。异基因造血干细胞移植后动态观察血浆CXCL9／Mig水平变化可作为aGVHD早期诊断的有价值的指标，进而达到早期干预aGVHD提高异基因造血干细胞移植效果的目的。     

CD3+T细胞嵌合率与急性移植物抗宿主病关系的研究

急性移植物抗宿主病(aGVHD)是目前异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)术后,尤其是移植后患者早期死亡的主要原因之一.     

急性移植物抗宿主病病人血清IL-2、IL-8、IL-10及TNF-α水平变化的研究

为了探讨细胞因子IL-2、TNF—α、IL-10、IL-8在异基因造血干细胞移植后aGVHD发病中的作用，观察33例Allo-HSCT患者aGVHD的发病情况。aGVHD的诊断主要依据临床表现，部分病例还依据皮肤、肠粘膜活检的病理学变化。移植前后定期采集患者血清，采用放射免疫法检测细胞因子IL-2、TNF—α、IL-10、IL-8的浓度的变化。结果发现，异基因造血干细胞移植后33例患者均获得造血功能重建，13例发生aGVHD，其中8例Ⅰ度aGVHD，5例Ⅱ-Ⅳ度aGVHD。IL-2、TNF—α水平在aGVHD阳性组明显高于aGVHD阴性组，而IL-10的水平在aGVHD阳性组明显低于aGVHD阴性组，IL-8水平的变化无统计学意义。结论：细胞因子IL-2、TNF—α在临床aGVHD的发病中起重要的正向调节作用，定期检测患者血清的IL-2、TNF—α水平有助于预测aGVHD的发生。     

100例异基因造血干细胞移植后移植物抗宿主病的发生及其对患者复发和生存的影响

本研究探讨异基因造血干细胞移植（allo—HSCT）后急性移植物抗宿主病（aGVHD）和慢性移植物抗宿主病（cGVHD）的危险因素及其与预后的关系。对我院100例行allo—HSCT患者的临床资料进行了总结,对aGVHD、cGVHD的发生率和危险因素及其对复发和生存的影响进行了分析。结果表明：31例患者发生Ⅱ-Ⅳ度aGVHD,累积发生率为34．4％;14例发生Ⅲ-Ⅳ度aGVHD,累积发生率为17．7％。HLA相合程度与aGVHD的发生无显著相关性（P〉0．05）。曾发生的Ⅱ-Ⅳ度aGVHD是发生cGVHD的危险因素（HR=2．303,P=0．088）,女性因素为保护性因素（HR=0．401,P=0．055）。发生cGVHD者复发率较低。发生Ⅱ-Ⅳ度aGVHD为影响总生存率（OS）的危险因素（P〈0．05）,重度（Ⅲ-Ⅳ）aGVHD患者的死亡率极高（81．0％）,与0-Ⅰ度患者的死亡率（35．7％）相比有显著性差异（P=0．000）。结论：GVHD和移植物抗肿瘤效应（GVL）尚不能分离,但GVL的益处可能被GVHD相关死亡因素抵消,因此需积极防治重度aGVHD。局限型cGVHD可能是长期生存的有益因素。     

GVHD患者外周血Th17/Treg细胞相关的细胞因子检测与临床意义

本研究旨在探讨急性移植物抗宿主病(aGVHD)、慢性GVHD(cGVHD)患者外周血中Th17/Treg细胞相关的细胞因子的水平与临床意义。外周血样品采集自造血干细胞移植术后患者和健康人,其中aGVHD组10例、cGVHD组13例、无GVHD组16例,健康人20名。采用酶联免疫吸附方法(ELISA)检测各组外周血血浆中细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-6、IL-10、TGF-β1、IL-17、IL-23的表达水平。结果表明:a/cGVHD组IFN-γ、IL-4、IL-6、IL-17及IL-23水平显著高于无GVHD组和健康人(p<0.05),而IL-10、TGF-β1水平显著低于无GVHD组和健康人(p<0.05)。aGVHD和cGVHD组患者治疗有效后,外周血中IL-6、IL-17及IL-23水平较治疗前明显降低;IL-10、TGF-β1水平明显升高,而IFN-γ、IL-4无明显变化。各组患者血浆中TGF-β1与IL-6、TGF-β1与IL-17、TGF-β1与IL-23水平呈负相关(r分别等于-0.36、-0.51和-0.44,p均<0.05),IL-6与IL-17、IL-6与IL-23、IL-17与IL-23水平呈正相关(r分别等于0.62、0.71和0.93,p均<0.05)。结论:Th17/Treg细胞相关的细胞因子可能在aGVHD和cGVHD的发生、发展中具有重要作用,对它们的研究有助于寻找治疗a/cGVHD的新靶点。     

Th17细胞和白介素-17在异基因造血干细胞移植aGVHD中的免疫调控分析

目的探讨Th17细胞和白介素-17(IL-17)在异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)aGVHD中的免疫调控。方法采用野生型(WT)C57BL/6(H-2b)小鼠与C57BL/6(H-2b)IL-17基因敲除(IL-17-/-)小鼠作为供体,采用BALB/C(H-2b)小鼠作为受体,小鼠给予全身照射8.5 Gy进行清髓性预处理,移植野生型(WT)小鼠1×107个去除T细胞骨髓细胞(TCD-BMCs)以及WT小鼠1×106个CD4+IL-17-/-T细胞。移植之后每天对小鼠生存状况进行观察1~2次,每隔5 d对aGVHD进行临床评估。收集实验小鼠肝脏、肺、肠以及皮肤,并进行HE染色并进行病理组织学分析,并对移植后Th17细胞组、CD4+IL-17-/-T细胞组、IL-17-/-BMCs+IL-17-/-SCs组(KK组)、WT BMCs+IL-17-/-SCs组(WK组)及WT BMSCs+WTSCs组(WW组)小鼠的aGVHD积分进行评估。结果 1Th17细胞组移植后5 d、10 d、15 d、20 d aGVHD积分均显著高于IL-17-/-CDD4+T细胞组(P0.05),且Th17细胞组小鼠平均生存时间显著小于IL-17-/-CDD4+T细胞组(P0.05);2KK组、WK组及WW组移植后5 d、10 d、15 d、20 d aGVHD积分差异均具有统计学意义(P0.05),且三组平均生存时间方面的差异也均具有统计学意义(P0.05)。结论 Th17细胞与IL-17在异基因造血干细胞移植aGVHD中具有较好的免疫调控作用。     

改良预处理方案单倍体相合造血干细胞联合脐带间充质干细胞移植治疗高危难治恶性血液病的临床分析

本研究旨在观察应用单倍体相合造血干细胞（hi-HSCT）联合脐带间充质干细胞（脐带MSC）移植治疗高危难治恶性血液病的疗效.对30例难治、复发或高危恶性血液病患者自愿接受单倍体相合造血干细胞联合脐带MSC移植的疗效进行分析,其中复发4例,高危26例.病种包括急性髓性白血病15例,急性淋巴细胞白血病9例,前T淋巴母细胞淋巴瘤/白血病3例,脾边缘带淋巴瘤ⅣB1例,NK/T细胞淋巴瘤1例,Burkitt淋巴瘤ⅣB1例.结果表明,30例全部获得了顺利植入,发生急性移植物抗宿主病（aGVHD） 19例（63％）,其中Ⅲ-Ⅳ6例（20％）;发生慢性移植物抗宿主病（cGVHD） 8/25 （32％）,其中广泛型1例,局限型7例;复发3例,复发时间在移植后中位数300 d（128-455 d）;死亡8例,其中1例死于复发,2例死于Ⅳ aGVHD并同时复发,5例死于感染、脏器衰竭.结论：应用脐带MSC联合单倍体相合造血干细胞移植治疗高危难治恶性血液病可取得良好疗效.     

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞和细胞因子与异基因造血干细胞移植后aGVHD的相关性研究

本研究旨在研究异基因造血干细胞移植（allo—HSCT）后患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（Treg）、细胞因子IL-2、TGF—B水平与受者急性移植物抗宿主病（aGVHD）的相关性。采用流式细胞术检测13例allo—HSCT患者术后外周血Treg细胞在CD4^＋T细胞中的百分比;用ELISA法检测其血清IL-2和TGF—B水平。结果表明：13例患者均获造血重建,non—aGVHD4例,Ⅰ-Ⅱ度aGVHD5例,Ⅲ-Ⅳ度aGVHD4例。non-aGVHD组Treg在CD4^＋T细胞中所占的百分比高于aGVHD组,差异有显著性（P〈0．05）;non—aGVHD组血清IL-2水平低于aGVHD组,差异有显著性（P〈0．05）;non—aGVHD纽血清TGF—B水平高于aGVHD组,差异有显著性（P〈0．05）。结论：外周血Treg、IL-2、TGF—β水平与allo—HSCT后aGVHD的发生及严重程度有密切关系,因此可作为早期判断和监测aGVHD的指标。     

96例异基因造血干细胞移植后5年总生存率的危险因素分析

本研究探索96例异基因造血干细胞移植（allo—HSCT）后5年总生存的主要危险因素,以便早期采取积极有效的防治措施,更好地提高移植疗效。对96例allo—HSCT患者的资料进行回顾性分析。选择年龄、性别、移植时疾病状态、HLA配型、供者类型、供受者血型、预处理方案、急性移植物抗宿主病（aGVHD）、出血性膀胱炎（HC）、肝静脉闭塞（VOD）、间质性肺炎（IP）等11个临床参数,进行Cox单因素分析。将在单因素分析中P〈0．1作为有统计学意义的因素进行Cox多因素回归分析。aGVHD的累积发生率和患者的生存率采用Kaplan—Meier曲线计算。结果表明：除1例患者造血干细胞未植活外,其余95例患者均达到稳定植活,ANC≥0．5×10^9／L的中位时间为移植后13天。96例中有42例发生Ⅰ-Ⅳ度aGVHD（43．75％）,其中Ⅰ度11例（11．46％）,Ⅱ度19例（19．79％）;Ⅲ-Ⅳ度12例（12．50％）。96例接受移植的患者中复发10例,死亡38例,5年的总生存（OS）率为60．42％。Cox模型分析表明,aGVHD和移植前的疾病状态是影响患者长期生存率的主要因素,其相对危险度分别是2．996和2．619。结论：影响患者长期生存的主要危险因素是aGVHD和移植前的疾病状态,提高allo—HSCT疗效的关键是控制aGVHD,同时要把握好移植时机的选择,对于有高危复发因素的患者应争取在CRⅠ期进行allo—HSCT。     

脐带间充质干细胞治疗儿童异基因造血干细胞移植后急性移植物抗宿主病疗效观察

本研究观察人脐带间充质干细胞（MSC）治疗儿童急性移植物抗宿主病的疗效和安全性。用胶原酶消化法分离培养人脐带间充质干细胞,进行传代培养、扩增,培养至第3-5代用于临床治疗;5例急性白血病患儿经化疗达完全缓解。2例行亲缘HLA3/6位点相合的骨髓造血干细胞移植,1例行同胞HLA全相合骨髓与外周血造血干细胞联合移植,1例行无血缘关系HLA4/6位点相合双份脐血造血干细胞移植,1例行无血缘关系HLA5/6位点相合单份脐血造血干细胞移植。患儿发生Ⅲ-Ⅳ度急性移植物抗宿主病（aGVHD）,接受二线免疫抑制治疗无效后,行0.5×106/kg受者体重MSC治疗。结果表明,5例急性白血病患儿均获造血重建,并发生皮肤、肝脏和胃肠道Ⅲ-Ⅳ度aGVHD,经二线免疫抑制治疗无效,输注人脐带间充质干细胞治疗后,皮疹消退,肝功能恢复正常,胃肠道症状好转。患儿均未发生输注相关不良反应。目前患儿均无原发病的复发,均处于无病生存状态。结论：异基因造血干细胞移植是治疗儿童急性白血病的有效方法,脐带间充质干细胞治疗儿童急性移植物抗宿主病是安全有效的。     

异基因移植患者RQ-PCR监测巨细胞病毒感染并指导抢先治疗的临床研究

本研究旨在评价血浆巨细胞病毒（CMV）-DNA实时荧光定量PCR（RQ-PCR）用于异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）患者cMV感染的诊断监测和指导抢先治疗的I临床作用及特点。通过回顾性统计2008年1月至2010年6月在我院血液科行allo-HSCT的141例患者的病例资料及cMV检测数据并随访至移植后180d,分析患者特征、RQ-PCR检测结果、CMV感染及治疗情况和相关危险因素。结果显示,患者CMV感染和CMV肺炎发生率为81．5％和2．9％,主要发生在移植后2个月内。发生CMV感染后63例患者接受单药更昔洛韦、6例接受单药膦甲酸钠抢先抗病毒治疗,治疗的总有效率为87．8％,并表现出不同的疗效反应模式。女性、预处理中使用ATG或巴利昔单抗以及发生急性移植物抗宿主病（GVHD）的患者更容易感染CMV。使用ATG或巴利昔单抗以及发生急性GVHD的患者中CMV感染发生的时间更早（P〈0．05）。急性GVHD、病毒DNA最大负荷量、阳性次数及治疗疗程与疗效有关（P〈0．05）。结论：allo-HSCT患者的CMV感染发生率仍然很高,RQ-PCR检测血浆CMV-DNA与临床转归有很强的相关性,是监测allo-HSCT患者CMV感染情况并指导抢先抗病毒治疗的有效方式。     

非血缘异基因造血干细胞移植治疗高危难治急性髓系白血病的疗效分析

本研究探讨非血缘异基因造血干细胞移植（URD-HSCT）治疗高危急性髓系白血病（AML）的疗效。22例接受URD-HSCT的高危难治性AML患者纳入研究,采用改良马利兰＋环磷酰胺（20例）或全身放疗＋环磷酰胺（2例）的清髓性预处理方案行URD-HSCT,术后采用环孢素A（CsA）＋甲氨蝶呤（MTX）＋骁悉（MMF）＋ATG预防急性移植物抗宿主病（aGVHD）。结果表明：22例患者中21例（95.5%）获得植入,中性粒细胞和血小板植活的中位时间分别是12（10-19）d和14（5-22）d;中位随访时间18（3-135.5）月,2年的总体生存率（OS）和无白血病生存率（LFS）分别为（53.9±12.2）%和（49.1±10.7）%;移植后8例患者发生aGVHD,累积发生率为（39.1±10.6）%,其中6例为I-II度aGVHD,2例为III-IV度aGVHD;在19例可评估的患者中,慢性GVHD（cGVHD）6例（4例为局限型,2例广泛型）,累积发生率为（28.8±9.6）%;复发7例,2年的累积复发率为（35.8±11）%;死亡原因分析显示,9例死亡中1例死于败血症,1例死于肺部感染,6例死于复发,另外1例复发予化疗联合供体淋巴细胞输注（DLI）治疗缓解后发生IV度aGVHD而死亡;预后因素分析显示,复发是影响生存的主要因素（P〈0.001）,而性别、年龄、移植方式、aGVHD、感染等对生存无明显影响,cGVHD患者生存率高于未发生者（83.3%vs 37%,P=0.152）。结论：单中心样本研究结果显示,URD-HSCT是治疗无合适血缘供体高危AML患者的有效手段,cGVHD患者预后较好,复发是影响患者生存的主要因素,移植后通过过继免疫治疗如DLI可以预防复发并改善预后以获得长期生存。