白血病患者骨髓CYR61、CTGF、VEGF-C、VEGFR-2 mRNA的表达及其临床意义

本研究检测白血病患者骨髓中CYR61、CTGF、VEGF-C、VEGFR-2 mRNA的表达水平,探讨白血病发生、发展、浸润、转移中CYR61、CTGF、VEGF-C、VEGFR-2蛋白的相互作用及其临床意义,寻找新的肿瘤标记物,为白血病的诊治提供新的思路。白血病74例,男38例,女36例,年龄6-77岁,中位年龄45岁。对照组12例,男7例,女5例。年龄16-78岁,中位年龄46岁。采用半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法测定CYR61、CTGF、VEGF-C、VEGFR-2 mRNA的水平。结果表明,各组初发急性和慢性白血病患者骨髓中CYR61、CTGF、VEGF-C、VEGFR-2 mRNA的表达与对照组相比均显著升高（p〈0.05）。急性白血病缓解后CYR61和CTGF mRNA的表达高于对照组（p=0.039,0.025）。CTGF mRNA的表达在B-ALL组表达最高,高于AML、CML、CLL、T-ALL组（p=0.002,0.034,0.002,0.010）。AML组CYR61与CTGF、CYR61与VEGF-C、CTGF与VEGFR-2 mRNA的表达均呈正相关（r=0.452,0.466,0.464;p=0.045,0.038,0.039）,CML组CYR61与VEGF-C mRNA的表达呈正相关（r=0.882,p=0.000）。急性白血病伴有髓外浸润者VEGF-C和VEGFR-2 mRNA的表达高于不伴有髓外浸润者（p=0.028,0.047）。AML组VEGF-C mRNA的表达与原始细胞数呈正相关（r=0.418,p=0.034）。结论：CYR61、CTGF及VEGF-C、VEGFR-2在白血病发病中相互作用,促进白血病发展、转移及浸润;且这些因子在不同类型白血病及髓外浸润中的作用存在差异。它们可能成为检测白血病的肿瘤标记物;阻断上述因子有可能阻断肿瘤的生长和转移。     

CYR61和血管内皮生长因子在结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤中的表达及其意义

目的 研究血管诱导生成因子61（CYR61）和血管内皮生长因子（VEGF）在结外鼻型NK／T细胞淋巴瘤中的表达及其意义。方法 应用实时荧光定量PCR和免疫组化技术分别检测结外鼻型NK／T细胞淋巴瘤中CYR61 mRNA、VEGF mRNA及其蛋白水平表达。结果 ①经实时荧光定量PCR检测，20例中有19例（95．0％）CYR61 mRNA表达上调，15例（75．0％）VEGF mRNA表达上调。②经免疫组织化学染色，40例中有38例（95．0％）肿瘤细胞CYR61蛋白阳性，25例（62．5％）VEGF蛋白阳性，与对照组比较差异均无统计学意义；CYR61和VEGF在mRNA和蛋白水平表达的一致率分别为95．0％和65．0％；8例患者CYR61 mRNA、VEGF mRNA及其蛋白表达一致。③通过生存分析显示CYR61 mRNA和VEGF mRNA表达上调者预后较差，CYR61和VEGF表达水平与结外鼻型NK／T细胞淋巴瘤的预后相关。结论 CYR61和VEGF在结外鼻型NK／T细胞淋巴瘤中的表达水平有变化，并与该肿瘤的预后可能有一定的关系。     

血管内皮生长因子及其受体在急性髓系白血病动物模型中表达的动态分析

本研究旨在探讨血管内皮生长因子（VEGF）及其受体（VEGFR）在急性髓系白血病（AML）发生和发展中的作用。建立急性髓系白血病（AML）SCID小鼠模型,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）和逆转录PCR（RT—PCR）动态检测不同时间点正常小鼠和白血病小鼠外周血清VEGF及其受体VEGFR-2mRNA表达水平的变化。结果表明：正常小鼠和白血病小鼠均表达VEGF及VEGFR-2mRNA,白血病组外周血清VEGF浓度和VEGFR-2mRNA的表达均显著高于正常组小鼠（P〈0．05）,而且随着病程的进展而逐渐升高。结论：VEGF及VEGFR-2在急性髓系白血病中存在有异常表达,对AML的发生和发展可能起一定的作用。     

TGF-β1、TβRⅡ、c-myc在急性白血病中的表达及其意义

为了探讨转化生长因子β（transforming growth factor—beta，TGF-β）信号转导途径失活与急性白血病的关系，用S—P免疫细胞化学法检测急性白血病患者骨髓单个核细胞中TGF—β1及其Ⅱ型受体（TβRⅡ）和信号下游靶基因蛋白C-myc的表达。结果发现，白血病患者骨髓单个核细胞中TGF—β1的表达水平与正常对照无显著性差异（P〉0．05），TβRⅡ的表达水平明显低于正常对照（P〈0．05），c-myc的表达水平明显高于正常对照（P〈0．05），但以上各指标在急性淋巴细胞白血病与急性非淋巴细胞白血病之间无显著性差异（P〉0．05），TβRⅡ和c-myc表达率有负相关关系（r=-0．474，P〈0．01）。结论：TGF-β信号转导途径失活使细胞逃逸了TGF-β的生长抑制，TGF-β信号转导途径失活的一个重要机制就是通过TGF-βⅡ型受体的下调使c-myc失去抑制而高表达，促进白血病发生。     

VEGF—C及VEGFR-3在非小细胞肺癌中的临床意义

目的研究VEGF-C和VEGFR-3的表达在非小细胞肺癌中的临床意义。方法对78例病理分期为Ⅰ～Ⅲ。期非小细胞肺癌患者术后组织标本中癌组织、癌旁组织及正常组织共计234份进行半定量PCR研究。同时对VEGF-C和VEGFR-3mRNA的表达与其不同的病理类型、分期、分化程度及其他临床特性进行分析。结果VEGF—C mRNA的表达水平在癌组织及癌旁组织的相对含量明显高于正常组织（P〈0．05）,VEGFR-3mRNA的表达在癌组织中的相对含量明显高于正常组织（P〈0．05）。VEGF-C和VEGFR-3mRNA的表达与临床病理特性相互之间的关系显示,在淋巴结转移组及病理分期组,VEGF-C或VEGFR-3mRNA的表达水平无论是在癌组织中,还是在癌旁组织中均有明显统计学意义（P〈0．001）。结论VEGF-C和VEGFR-3mRNA的表达与非小细胞肺癌的淋巴结转移有关,提示VEGF—C和VEGFR-3mRNA的表达的非小细胞肺癌预后不良：     

慢性粒细胞白血病患者血管内皮生长因子水平的研究

目的探讨慢性粒细胞白血病（CML）不同阶段外周血血管内皮生长因子（VEGF）的水平与CML病情、预后及疗效的关系。方法使用CBA技术对55例CML患者及30例正常人外周血VEGF的水平进行检测,同时计数骨髓原始细胞数量。结果慢性期、加速期和急变期VEGF水平均增高,明显高于健康对照组（P〈0．05或P〈0．01）;急变期升高最明显,显著高于慢性期和加速期（P〈0．01）,差异均有统计学意义。CML患者外周血VEGF水平与骨髓原始细胞比例变化基本一致。结论CML外周血VEGF水平与病情相关联,检测CML外周血VEGF水平对观察CML的病情发展、预后及疗效的判断具有重要的临床价值。     

辛伐他汀对高糖诱导下人腹膜间皮细胞TGF—β1和CTGF表达的影响

【目的】探讨辛伐他汀对在高糖诱导下体外培养的人腹膜间皮细胞转化细胞因子-β1（TGF-β1）和结缔组织生长因子（CTGF）表达的影响。【方法】胰蛋白酶消化法从人腹膜组织中分离间皮细胞进行原代培养并传代;采用半定量反转录多聚酶链反应法（Semi—QuantitativeRT—PCR）检测细胞内TGF-β1和CTGFmRNA表达;酶联免疫双抗夹心法（ELISA）检测细胞上清液中TGF—β1和CTGF蛋白质水平,细胞沉淀用BCA蛋白检测方法测定细胞蛋白质含量,用以校正ELISA结果。【结果】辛伐他汀能显著降低高糖所致的腹膜间皮细胞TGF-β1和CTGF蛋白质水平（TGF—β1,P〈0．05;CTGF,P〈0．01）,并下调其mRNA表达（TGF-β1,P〈0.01;CTGF,P〈0．05）,两者在蛋白质和基因水平均呈量效关系。【结论】辛伐他汀能抑制高糖诱导下腹膜间皮细胞致纤维化细胞生长因子TGF-β1和CTGF的过度表达。     

骨髓移植小鼠骨髓基质细胞内皮抑制素(endostatin)及血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)表达相关性研究

本研究探讨内皮抑制素（endostatin）及血管细胞黏附分子-1（VCAM-1）在骨髓移植（BMT）小鼠骨髓基质细胞中表达的相关性及川芎嗪对其表达的影响。取健康BALB／c小鼠，随机分为3组：正常组（不做处理），骨髓移植对照组（简称生理盐水组）和骨髓移植＋川芎嗪治疗组（简称川芎嗪组）。生理盐水组和川芎嗪组分别胃饲生理盐水0．2毫升／只和川芎嗪注射液每次2毫影只，2次／天。在BMT后第7、14、21、28天处死小鼠，用间接免疫荧光法和RT—PCR法检测骨髓基质细胞endostatin mRNA及其蛋白、VCAM-1 mRNA及其蛋白的表达情况，并探讨二者表达的相关性。结果表明：endostatin蛋白主要表达于骨髓基质细胞核内，VCAM-1蛋白主要表达于细胞浆内。BMT后第7、14、21天川芎嗪组和生理盐水组endostatin mRNA和蛋白的表达水平显著低于正常组（P〈0．01或P〈0．05），且川芎嗪组低于生理盐水组（P〈0．01或P〈0．05）；到第28天生理盐水组已基本恢复正常，而川芎嗪组仍未恢复正常水平。BMT后第7、14、21天川芎嗪组和生理盐水组VCAM-1 mRNA和蛋白的表达均明显低于正常组（P〈0．01或P〈0．05），且川芎嗪组明显高于生理盐水组（P〈0．01或P〈0．05），到第28天，川芎嗪组VCAM-1的表达已基本恢复正常，而生理盐水组仍未恢复正常，两组之间有显著性差异（P〈0．01）。相关分析显示，生理盐水组骨髓基质细胞endostatin和VCAM-1 mRNA及其蛋白表达呈负相关（P〈0.01或P〈0．05），而川芎嗪组endostatin和VCAM-1 mRNA及其蛋白表达呈正相关（P〈0．01或P〈O．05）。结论：内皮抑制素可通过影响骨髓基质细胞表面VCAM-1的表达水平，阻碍基质细胞与造血细胞之间和细胞外基质与造血细胞之间的联系而影响骨髓造血；川芎嗪能提高BMT小鼠骨髓基质细胞表面黏附分子的表达，加快BMT后HSPC的归巢及在骨髓中的增殖，并通过反馈调节BMT小鼠骨髓基质细胞新血管生成抑制因子内皮抑制素的表达，促进骨髓微环境的修复，加速移植后骨髓的造血重建。     

二烯丙基二硫化物对HL-60白血病细胞株VEGF表达及分泌的影响

为了研究二烯丙基二硫化物（diallyl disulfide，DADS）对白血病HL-60细胞株VEGF mRNA的表达及VEGF蛋白分泌的作用，并从影响VEGF生成的角度探讨DADS的抗白血病机制，应用ELISA法检测药物作用前后白血病HL-60细胞培养上清液中VEGF蛋白的含量；RT-PCR法检测药物作用前后白血病HL-60细胞VEGF mRNA的相对含量。结果表明：HL-60细胞中均有VEGF mRNA的表达和VEGF蛋白的分泌；与空白对照相比，DADS3个浓度组（0，625，1，25，2，5μg／ml）作用HL-60细胞48小时和72小时均能下调HL-60细胞VEGF mRNA的表达及VEGF蛋白的分泌（P〈0.01）。3个浓度组间差异显著（P〈0．01），其下调HL-60细胞VEGF mRNA的表达及VEGF蛋白的分泌效果与浓度相关（r〉0.9，P〈0．01）。结论：DADS可能通过抑制VEGF mRNA的表达及VEGF蛋白的分泌发挥抗白血病效应。     

中期因子及血管内皮生长因子在多发性骨髓瘤患者骨髓中的表达及意义

本研究旨在探讨多发性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）患者中期因子（midkine,MK）、血管内皮生长因子（Yascula Fendothelial growth factor,VEGF）的表达水平及其与血管新生、临床预后的关系。应用实时荧光定量PCR检测31例MM患者和20例对照组骨髓单个核细胞MK和VEGF mRNA的表达。结果表明：MM患者骨髓MNC中MK和VEGF表达量均明显高于对照组（P〈0．05,P〈0．01）,且MK和VEGF的表达之间有显著相关性（r=0．692,P〈0．01）。MK和VEGF的表达在Ⅰ期和Ⅱ期患者之间无显著差异（P〉0．05）,而Ⅲ期患者MK、VEGF表达均较Ⅰ期和Ⅱ期显著升高（p〈0．05,P〈0．01）,治疗前后骨髓MNC中MK、VEGFmRNA表达水平存在显著差异（P〈0．05,P〈0．01）。结论：MK、VEGF高表达可能与MM血管新生、病情进展有关,且二者存在一定的协同作用,因此监测MK和VEGF表达水平可能对指导MM治疗和估计预后有一定意义。     

磷酸化STAT5、FOXP3在急性白血病患者骨髓中的表达及意义

目的观察急性白血病患者骨髓中单个核细胞磷酸化STAT5及FOXP3的表达水平及其临床意义。方法采用蛋白磷酸化流式细胞术分别检测45例急性白血病患者（AL）[急性髓系白血病（AML）29例,急性淋巴细胞白血病（ALL）16例]及12名对照组骨髓单个核细胞磷酸化STAT5（P-STAT5）及FOXP3阳性细胞的百分率。结果 AL患者组骨髓单个核细胞PSTAT5表达（2.35±0.82）%较对照组（0.58±0.16）%增高,差异具有统计学意义（P〈0.05）;AL患者组FOXP3（3.98±1.17）%高于对照组（0.96±0.45）,差异具有统计学意义（P〈0.05）;AML组P-STAT5及FOXP3水平（2.51±0.91）%,（3.72±1.12）%和ALL组（2.27±0.78）%,（4.03±1.18）%比较无显著差异（P〉0.05）。AL患者P-STAT5及FOXP3表达水平显著正相关（r=0.81,P〈0.05）。结论磷酸化STAT5及Foxp3可能共同参与了急性白血病的发生过程,同时检测可以提供有临床意义的实验依据。     

急性淋巴细胞白血病患者骨髓细胞中CCL2 mRNA的表达

背景：临床工作中希望能够根据骨髓CCL2表达对急性淋巴细胞白血病患者进行危险分层和预后判断。目的：观察急性淋巴细胞白血病患者骨髓细胞中CCL2 mRNA的表达情况。方法：初诊50例急性淋巴细胞白血病患者为实验组,30例非血液肿瘤患者为对照组。初诊急性淋巴细胞白血病患者化疗2个疗程后按疗效分为完全缓解组43例,未完全缓解组7例。实验抽取研究对象骨髓5mL,采用半定量聚合酶链反应法检测CCL2 mRNA表达。结果与结论：①初诊急性淋巴细胞白血病组CCL2 mRNA表达水平明显高于对照组（P〈0.05）;完全缓解组CCL2 mRNA水平明显低于未完全缓解组（P〈0.01）;完全缓解组治疗后CCL2 mRNA表达水平明显低于治疗前（P〈0.01）。未完全缓解组治疗2个疗程后CCL2 mRNA表达水平无明显下降（P〉0.05）。②前B-急性淋巴细胞白血病患者骨髓CCL2 mRNA表达水平明显高于普通B及T系急性淋巴细胞白血病患者（P〈0.05）。初诊时白细胞≥50×10^9L^-1急性淋巴细胞白血病患者CCL2 mRNA表达水平明显高于白细胞〈10×10^9L^-1及10×10^9L^-1≤白细胞〈50×10^9L^-1组（P〈0.05）,10×10^9L^-1≤白细胞〈50×10^9L^-1组明显高于白细胞〈10×10^9L^-1组（P〈0.01）。结果表明急性淋巴细胞白血病患者骨髓细胞能分泌CCL2,骨髓CCL2 mRNA表达水平与患者初诊时的白细胞计数及免疫分型有一定的关系,在一定程度上能反映患者的近期疗效。     

急性白血病患者骨髓细胞LIMD1，VEGF-C，CTGF和Survivin的mRNA异常表达及相关性研究

目的研究LIM结构域蛋白1抗体在急性白血病患者的异常表达及相关性。方法选择首次确诊且未接受过治疗的急性白血病患者纳入初治组、接受化疗并达到完全缓解的白血病患者纳入缓解组、骨髓象正常的非恶性血液疾病患者纳入对照组,分离培养骨髓细胞,检测细胞中LIMD1,VEGF-C,CTGF和Survivin的mRNA含量及细胞增殖能力。结果LIMD1的mRNA含量在三组中从小到大顺序为初治组(14.52±1.96)mg,缓解组(76.67±9.56)mg和对照组(111.27±16.45)mg,差异均有统计学意义(P<0.05);MTT值在三组中从小到大顺序为对照组(100±15.34),缓解组(151.77±19.34)和初治组(314.45±52.28),差异均有统计学意义(P<0.05);VEGF-C的mRNA含量在三组中从小到大顺序为对照组(104.78±15.14)mg,缓解组(146.63±18.84)mg和初治组(259.34±31.45)mg,差异均有统计学意义(P<0.05);CTGF的mRNA含量在三组中从小到大顺序为对照组(99.27±16.67)mg,缓解组(162.15±19.34)mg和初治组(325.56±36.72)mg,差异均有统计学意义(P<0.05);Survivin的mRNA含量在三组中从小到大顺序为对照组(109.44±15.78)mg,缓解组(134.39±16.67)mg和初治组(277.74±29.34)mg,差异均有统计学意义(P<0.05);LIMD1与增殖能力以及VEGF-C,CTGF,Survivin的mRNA含量呈负相关(β=0.679~0.795,P<0.05)。结论LIMD1在急性白血病患者骨髓细胞中的表达减少,且与细胞增殖以及恶性生物学分子VEGF-C,CTGF和Survivin的表达具有相关性。     

CIAPIN1基因在白血病患者骨髓单个核细胞中表达的研究

本研究旨在检测CIAPIN1基因在白血病患者中的表达,探讨其在白血病中的作用。收集112例初治白血病患者的新鲜骨髓,用TRIzoL一步法提取细胞总RNA、合成cDNA、以β-actin为内参,应用实时定量PCR方法检测CIAPIN1mRNA的表达;实验中选择10例正常人的骨髓作为对照。结果表明:骨髓单个核细胞(MNC)中CIAPIN1mRNA在急性髓系白血病(AML)、急性淋巴细胞白血病(ALL)和慢性髓系白血病(CML)患者中的表达均高于正常人(p<0.05);在慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者中的表达与正常人相比差异无统计学意义(p>0.05)。结论 :CIAPIN1基因在初治白血病患者MNC中表达升高,其表达上调在白血病的发病中可能有一定的作用。     

整合素蛋白连接激酶和蛋白激酶B在急性白血病中的表达及意义

本研究探讨整合素蛋白连接激酶（ILK）和蛋白激酶B（PKB／Akt）在不同类型和疾病阶段的急性白血病（AL）患者中的表达,研究ILK／Akt通路在AL发病中的可能作用。应用RT-PCR法检测不同类型初治、复发及完全缓解AL患者和正常对照者骨髓单个核细胞中ILK mRNA和AktmRNA的表达。结果表明,ILK和Akt在初治AL患者中的表达高于完全缓解组和正常对照组（P〈0．05）,在初治纽与复发组中的表达差异无统计学意义（P〉0．05）。ILK和Akt的表达在AL中呈正相关性。结论：ILK和Akt在AL中异常高表达,而ILK／Akt信号通路可能参与了AL的发生发展,有可能成为AL治疗的新靶点。     

VEGF-C和VEGFR-3在大肠癌中的表达及意义

目的探讨血管内皮生长因子-C(VEGF-C)和血管内皮生长因子受体-3(VEGFR-3)在大肠癌中的表达,分析表达结果与肿瘤淋巴结转移及临床分期的关系。方法采用免疫组化SP法检测65例大肠癌及20例正常大肠黏膜中的VEGF-C和VEGFR-3的表达。结果65例大肠癌组织中VEGF-C和VEGFR-3阳性表达率分别为41.5%(27/65)和27.7%(18/65),正常黏膜表达率分别为15%(3/20)和0(0/20),肿瘤与正常黏膜比较,差异有统计学意义(P0.05和P0.01)。VEGF-C和VEGFR-3阳性表达率在有、无淋巴结转移组之间差异有统计学意义(P0.01和P0.05);两者的表达随临床分期升高而增多,其中VEGF-C的表达在不同临床分期组间差异有统计学意义(P0.05);微淋巴管计数在VEGF-C表达阳性组和阴性组之间的差异有统计学意义(P0.01)。结论VEGF-C和VEGFR-3在大肠癌中的表达与肿瘤淋巴结转移及临床分期的关系密切。     

结肠癌血管内皮生长因子-C及血管内皮细胞生长因子受体-3的表达与淋巴结转移的关系

目的探讨血管内皮生长因子-C(VEGF-C)及血管内皮细胞生长因子受体-3(VEGFR-3)的表达与结肠癌淋巴结转移的关系。方法收集经病理证实的结肠癌手术标本45例(研究组,淋巴结转移23例,未转移22例)和同期良性结肠黏膜息肉标本20例(对照组)。均采用免疫组织化学SP法检测结肠癌组织及良性结肠黏膜息肉组织中VEGF-C及VEGFR-3的表达水平,分析VEGF-C、VEGFR-3表达与淋巴结转移的关系。结果研究组VEGF-C阳性率及VEGFR-3表达均高于对照组(均P<0.01)。淋巴结转移组的VEGF-C阳性率及VEGFR-3阳性表达(LVD)均明显高于淋巴结未转移组[(91.3%比40.9%),(21.07±5.14比10.56±5.01),均P<0.01]。结论结肠癌存在VEGF-C及VEGFR-3的高表达,可能与促进淋巴结转移有关。     

阿托伐他汀对高血压大鼠血管纤维化及结缔组织生长因子的影响

目的:探究阿托伐他汀(atorvastatin)对肾血管性高血压血管纤维化及结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响。方法:24只SD大鼠随机分为假手术组(N组)、高血压组(RH组)、阿托伐他汀组(他汀组)各8只;将RH组及他汀组大鼠建立二肾一夹肾血管性高血压(2K1C-RH)大鼠模型。术后4周末,他汀组开始以阿托伐他汀(10mg.Kg-1.d-1)灌胃,共8周。治疗前后RT-PCR法检测各组大鼠收缩压、胸主动脉CTGF、纤维连接蛋白(FN)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)的表达,并用免疫组化显示CTGF的表达。结果:与N组比较,RH组大鼠胸主动脉CTG-FmRNA、FNmRNA、ColⅢmRNA显著增加(P0.01);他汀组与RH组比较则3项指标明显下调(P0.05)。结论:阿托伐他汀能抑制高血压血管纤维化,可能与下调CTGF的表达有关。