急性脑梗死患者血小板膜糖蛋白与血小板参数的研究

目的：探讨血小板功能指标与急性脑梗死（ACI）的关系,寻找精确判断血小板功能状态的方法。方法：采用流式细胞仪（FCM）检测51例ACI患者（病例组）和29例健康体检者（对照组）全血活化血小板膜糖蛋白GP b/a复合物单克隆抗体（PAC-1）、血小板α-颗粒膜蛋白抗P-选择素单克隆抗体（CD62P）的阳性率;应用全自动血球分析仪检测血小板的参数。结果：病例组PAC-1、CD62P的阳性率和血小板平均体积（MPV）均明显高于对照组,差异均有显著性（P〈0.05或P〈0.01）;而血小板计数（PC）、血小板分布宽度（PDW）和大血小板比率（LPR）有增高趋势,但两组间比较差异均无显著性（P均〉0.05）。直线相关分析显示：PAC-1与MPV（r=0.322,P=0.004）及PAC-1与LPR（r=0.224,P=0.046）之间存在正相关关系,CD62P与MPV间亦存在正相关关系（r=0.240,P=0.032）,PC、PDW与膜糖蛋白之间无相关关系（P〉0.05）。结论：ACI患者体内存在血小板活化,血小板膜糖蛋白和血小板参数共同参与这一过程;活化GP b-a与MPV有非常显著的正相关关系。     

脑梗死患者活化血小板的检测及其临床意义

目的探讨脑梗死患者全血血小板膜糖蛋白Ⅱb／Ⅲa（PAC-1）、血小板颗粒膜糖蛋白140（CD6p）的变化及其临床意义。方法用全血流式细胞术测定76例脑梗死患者急性期和恢复期、30例高血压病患者和28例糖尿病患者外周血中血小板PAC-1、CD62P的表达水平，并与20例健康对照者比较。结果脑梗死组急性期、恢复期、高血压病组、糖尿病组PAC-1、CD62p的表达均明显高于正常对照组（均P〈0．01）。脑梗死患者急性期PAC-1、CD62P的表达大梗死灶组〉中梗死灶组〉小梗死灶组，各组之间比较有显著性差异（P〈0．01～0．05）。脑梗死患者急性期PAC-1、CD62P的表达重型〉中型〉轻型，各组之间比较有显著性差异（P〈0．01～0．05）。结论脑梗死急性期、恢复期、高血压病患者、糖尿病患者均存在血小板活化；脑梗死病人血小板活化与病情及梗死灶大小有关，PAC-1、CD62p可作为判断病情的指标。     

急性脑梗死患者活化血小板的检测及临床价值

目的通过检测急性脑梗死患者血小板膜糖蛋白（CD62p）及血小板激活复合物（PAC-1）,探讨脑梗死患者血小板活化的临床意义。方法采用流式细胞仪测定45例急性脑梗死患者在发病48 h、6～8 d、3周时及35名正常对照者的血浆CD62p及PAC-1阳性百分率。结果脑梗死患者48 h内血浆CD62p（25.1%±7.4%）和PAC-1（65.2%±9.9%）阳性率明显高于正常对照组（4.0%±1.3%;8.2%±2.2%）（P〈0.01）。此后至3周逐渐下降,但仍高于正常对照组（P〈0.01）。结论急性脑梗死患者血小板处于高度活化状态,监测血小板活化程度对病情轻重的预测及指导临床用药有重要价值。     

二甲亚砜对血小板冻存中功能保护作用的实验研究

本研究探讨二甲亚砜（DMSO）对血小板冻干保存中激活的抑制作用。以CD62p和PAC-1表达作为血小板的激活标志，CD62p和PAC-1再表达和血小板最大聚集率作为评价血小板功能的指标。对血小板经离心、洗涤及海藻糖负载等顸处理过程中加与不加DMSO的实验组，分别进行血小板膜表面糖蛋白CD62p和PAC-1表达及再表达的流式细胞术（FCMs）分析，血小板最大聚集率和血小板平均体积（MPV）的测定，研究DMSO对血小板激活抑制作用的可逆性。结果显示，血小板经预处理后，不含DMSO组的CD62p和PAC-1表达率显著增高，分别达30．37％和15．01％；含DMSO的组，CD62p表达率为10．72％，PAC．1几乎不表达（0．11％），显著低于不含DMSO组（P〈0．01）。DMSO稀释后，血小板CD62p再表达为54．39％，显著低于对照组（71．69％）和高于不含DMSO组（35．98％）（P均〈0．01）；PAC-1再表达率为49．28％，与对照组（54．48％）无显著差异，显著高于不含DMSO组（P〈0．叭）。在含DMSO组，血小板用原血浆稀释后，血小板聚集功能恢复，对restocetin，thrombin和propylgallate诱导的血小板聚集率分别为92．76％，91．24％和89．66％，与对照组和无DMSO组比无显著性差异，对ADP诱导的聚集率有34．33％，显著高于无DMSO组（P〈0．01），但仍显著低于对照组（P〈0．01）。结论：DMSO对体外处理所致的血小板膜表面CD62p和PAC-1表达具有抑制作用，且该抑制作用是可逆的，DMSO稀释后血小板仍具有CD62p和PAC．1表达能力和聚集反应功能，提示DMSO具有抑制激活损伤和低温保护的双重功能，这一生物学特性使DMSO在血小板的冻干保存中发挥重要作用。     

深低温保存新鲜富含血小板血浆质量分析

为了评价批量制备的深低温保存富含血小板血浆(cryo-FPRP)的效率和效果,在优化建立的无偿献血者血小板的批量分离和制备cryo-FPRP过程中测定了ACD抗凝的200ml全血、FPRP、含5%DMSO的FPRP(DM-SO-PRP)和-80℃冰箱然冰冻保存后复温的FPRP(Cryo-FPRP)的血小板计数(Plt)、血小板平均体积(MPV)、血小板分布宽度(PDW)、血浆内pH、血浆乳酸(LA)浓度和乳酸脱氢酶(LDH)浓度、细菌培养、血小板CD62p阳性率、PAC-1阳性率及抗GPIb-Ⅸ-Ⅴ荧光强度,也测定了FPRP和cryo-FPRP的促凝血活性.结果表明①血小板的总平均得率为70%;FPRP中残余的红细胞≤1×109/袋;白细胞≤1×107/袋.②血浆pH、LA浓度和PAC-1阳性率在整个制备和保存过程中没有明显变化.③血浆内LDH、血小板CD62p阳性率和血小板抗GPIb-Ⅸ-Ⅴ荧光强度在血小板冰冻保存后出现明显升高.④与FPRP比较,cryo-FPRP诱导的血浆凝固时间明显缩短.结论①本研究选择的离心分离制备FPRP条件可高效分离无偿献血者的血小板,同时不会导致血小板激活率增加.②深低温保存无偿献血者的新鲜富含血小板血浆可有效防止代谢产物的积累和pH下降,并且可以高效预防血小板GPⅡb/Ⅲa的激活.③冰冻保存后部分血小板胞膜受到明显损害.④血小板胞膜表面GpIb-Ⅸ-Ⅴ复合物的数量增加,促凝血活性明显增强.     

冠心病患者血小板参数的变化及临床意义

【目的】分析冠心病患者血小板参数的变化及临床意义。【方法】对100例冠心病患者[61例急性心肌梗死（AMI）和39例心绞痛（AP）]及50例健康人（正常对照组）的血小板四项参数：血小板比容（PCT）、血小板数量（PLT）、血小板体积分布宽度（PDW）、血小板平均体积（MPV）、血小板最大聚集率（PAGM）及血小板活化（CD62p）进行测定,分析其与冠心病之间的联系。【结果】三组间PCT差异无显著性。冠心病患者PLT明显要低于对照组（P〈0．01）,而PDW、MPV、PAGM明显高于对照组（P〈0．05）。AMI患者的PDW、MPV、PAGM相对AP组明显偏高（P〈0．05）,PLT明显降低（P〈0．05）。CD62p在冠心病患者中的阳性表达明显高于对照组（P〈0．05）,AMI患者的CD62p阳性表达明显高于AP组（P〈0．05）,Pearson,s相关分析结果显示冠心病患者的CD62p与PAGM、MPV之间具有正相关的关系（r=0．602、0．487,P〈0．05）。【结论】临床上监测血小板参数的变化对冠心痛患者的诊治及预防具有重要意义。     

血小板活化在肺血栓栓塞症中的临床意义

目的:探讨P-选择素(PS)、血小板体积(MPV)、血小板分布宽度(PDW)在肺血栓栓塞症(PTE)患者中的临床意义。方法:采用酶联免疫吸附法分别测正常人群组、PTE组的血浆中可溶性PS,流式细胞术检测血小板膜上活化标记物P-选择素(CD62p),全自动血球分析仪检测MPV、PDW。比较两组人群中PS、CD62p、MPV、PDW的区别。结果:PTE患者的PS、CD62p、MPV、PDW均高于正常人群组(P<0.01)。结论:PTE发生后PS、CD62p、MPV、PDW水平升高,与对照组比较差异有统计学意义。     

PGE1对血小板的体外激活抑制作用

目的 研究前列腺素E1（PGE1）在血小板冻于前预处理过程中对血小板激活和功能的影响,为血小板冻干前处理过程筛选血小板激活损伤保护剂。方法 测定血小板平均体积（MPV）,采用流式细胞术（FCMs）分析血小板CD62p、PAC-1的表达。以反映血小板状态。测定血小板对凝血酶（thrombin）、二磷酸腺苷（ADP）和瑞斯托菌素（Restocetin）的最大聚集率,以反映血小板功能,研究血小板预处理前后的变化以及前列腺素的保护作用。结果预处理后,血小板平均体积（MPV）未发生明显改变,但血小板CD62p表达率显著增加,达20％。PGE1抑制血小板CD62p表达,这种抑制作用随PGE1浓度增加而递增。预处理过程对Restocetin和ADP诱导的血小板聚集有一定影响,聚集抑制率为10％和23％,对凝血酶诱导的聚集抑制不显著。PGE1不影响血小板对Restocetin的聚集反应,但PGE1≥1μmol／L可抑制血小板对ADP的聚集反应,PGE1≥5μmol／L时,显著抑制凝血酶诱导的血小板聚集。结论 前列腺索E1浓度为1μmol／L,可抑制血小板在预处理过程中的激活损伤,且保留血小板的聚集功能。     

术前急性自体血小板分离对心脏手术患者血小板活化功能的影响

目的探讨术前急性自体血小板分离对心脏手术患者不同阶段血小板活化状态及活化功能的影响。方法40名体外循环心血管外科手术患者,随机分为2组,每组20例。Ⅰ组:急性等容血液稀释(ANH)联合自体富血小板血浆(APRP)回输及术中自体血回收;Ⅱ组:ANH联合术中自体血回收,不进行APRP采集分离。于诱导前(T1)、采血后10min(T2)、自体血回输前10min(T3)、回输后10min(T4)、术后24h(T5)各时点测定Plt、血小板在静息状态及ADP激活后活化指标CD62P、PAC-1的表达量,并测定APRP分离初期和回输前CD62P、PAC-1的表达量,术后出血量及异体输血量。结果T4、T5时点PltⅠ组明显高于Ⅱ组对应时点(P<0.05),术后出血量及异体血输注量Ⅰ组明显减少。APRP分离和保存期间没有进一步激活血小板功能。结论术前急性等容血液稀释联合富血小板血浆回输更有效地保护血液,急性自体血小板分离不会进一步激活血小板。     

血小板糖蛋白与高血压、脑梗死关系的临床研究

目的通过测定高血压、脑梗死患者血小板糖蛋白（CD62，CD63，PAC-1）和纤维蛋白原（FIB）指标，旨在为临床治疗高血压、脑梗死提供有用的参考指标。方法采用流式细胞术（FCM），对85例高血压脑梗死患者，42例正常血压脑梗死患者、35例原发性高血压患者血小板糖蛋白CD62P，CD63，PAC-1进行检测。利用Acl-Advanee血凝仪测定了FIB。结果高血压脑梗死组、正常血压脑梗死组与原发性高血压组血小板糖蛋白CD62p、CD63、PAC-1及FIB均显著高于正常对照组（均P〈0．001），且高血压脑梗死组、正常血压脑梗死组血小板糖蛋白CD62p、CD63、PAC．1及FIB均明显高于高血压组（均P〈0．001）。高血压脑梗死组与正常血压脑梗死组血小板糖蛋白CD62p、CD63、PAG-1及FIB均无明显差异。血小板糖蛋白及FIB大梗死灶组〉中梗死灶组〉小梗死灶组，各组之间均有明显差异（P均〈0．01）。血小板糖蛋白CD62P、CD63、PAC-1与FIB呈正相关结论脑梗死、高血压患者均存在血小板活化，脑梗死患者血小板活化与病情及梗死灶大小有关。血小板糖蛋白的检测对高血压患者的病情分析和脑梗死的预防以及早期诊断和治疗具有重要的意义。     

25Gy γ射线辐照对手工富集人血小板CD62p表达的影响

本研究观察25Gyγ射线照射对22℃保存条件下的手工富集血小板悬液不同保存期CD62p、血小板计数及平均血小板体积(MPV)的影响。将富浆法分离的16袋血小板,每袋平均分为两份,其中1袋经25Gy137铯γ射线辐照,另1份不辐照,然后按美国血库协会(AABB)标准保存72小时。经辐照的血小板作为观察组,未辐照的血小板作为对照组。流式细胞术检测两组血小板辐照前及保存24和72小时后P选择蛋白的表达水平;同时用血细胞计数仪检测血小板数和平均血小板体积(MPV)。结果表明:辐照组与对照组血小板表达CD62p百分率均随保存时间的延长而增高;保存24小时与新鲜血小板比较有显著性差异(p(0.05),保存72小时与保存24小时比较有非常显著性差异(p(0.01)。在保存24、72小时后,两组血小板CD62p表达率、血小板计数无显著差异(p0.05);但两组血小板在保存72小时后MPV与新鲜血小板比较有显著性差异(p(0.05)。结论:γ射线照射不影响血小板的数量和质量,但手工血小板液态储存时间应尽可能缩短。     

白细胞滤除对机采血小板质量的影响研究

本研究旨在评价白细胞滤除对机采血小板整体质量的影响。随机选取20单位单供者机采血小板在（22±2）℃条件下振荡保存24—96小时后使用血小板型白细胞过滤器进行过滤,分别检测机采血小板过滤前后的血小板浓度、平均血小板体积（MPV）、血小板单位容量、白细胞量、pH值、乳酸脱氢酶（LDH）浓度、K^＋浓度、血小板膜表面CD62p表达率、血小板凝血指数MA值,并计算白细胞去除率和血小板损失率。结果表明：机采血小板经白细胞过滤器过滤后,残留白细胞计数明显低于滤前白细胞计数（P〈0．001）,白细胞去除率达到了99．97％;血小板损失率为（8．1±4．2）％,明显低于20％的国家标准规定（P〈0．001）;与过滤前相比,过滤后MVP、机采血小板保存介质中的LDH浓度、K^＋浓度和pH值无明显变化（P〉0．05）,过滤后的血小板膜表面CD62p表达率出现轻度下降（P〉0．05）,但滤盘灌注液内血小板膜表面CD62p表达率却明显高于滤前（P〈0．05）;过滤后血小板MA值出现轻度下降,但无明显统计学差异（P〉0．05）。结论：使用白细胞过滤器可以有效去除机采血小板中混杂的白细胞及部分活化血小板,使血小板损失率控制在较低水平,且对于血小板凝血活性没有产生明显影响。过滤后的机采血小板达到预防巨细胞病毒感染及HLA同种免疫的质量要求。     

术中自体血回收对血小板活化及凝血功能的影响

目的探讨术中自体血回收对回收血中血小板活化及凝血功能的影响。方法将40例出血量≥800ml的骨科择期手术患者随机分为2组,每组20例。A组术中进行自体血回收,并在术中予以回输;B组为对照组,术中按需输注异体血。测量各组患者5个时间点的凝血酶原时间（PT）、部分凝血活酶时间（APTT）、凝血酶时间（TT）、纤维蛋白原（FIB）、血小板计数（PLT）以及血小板膜糖蛋白纤维蛋白原受体（PAC-1）、P-选择素（CD62P）的表达量,同时测量A组回收血中的PLT及血小板PAC-1、CD62P的表达量。结果两组间PT、APTT、TT、FIB的变化差异无统计学意义（P〉0.05）。两组术后血小板PAC-1的表达均高于术前（P〉0.05）。A组回收血中PLT显著低于体内血（P〈0.01）,而血小板PAC-1和CD62P表达量则显著高于体内血（P〈0.01）。结论自体血回收可引起回收血中血小板的活化,但在一定范围内并未引起不良反应。其对凝血指标和血小板活化程度的改变与输注异体血基本一致。所以,术中自体血回收是安全的,可以起到节约用血、减少异体输血反应的作用。     

检测血小板参数在血小板减少性疾病中的意义

目的探讨血常规检测中血小板（PLT）计数、血小板平均体积（MPV）及血小板分布宽度（PDW）在血小板减少性疾病中的意义。方法使用雅培CD-1800全自动血细胞分析仪进行检测。结果与健康对照组相比，在疾病组中，再生障碍性贫血PLT计数降低（P〈0．01），MPV降低（P〈0．01），PDW无变化；而急性白血病PLT计数降低（P〈0．01），MPV降低（P〈0．01）；PDW升高（P〈0.01）；特发性血小板减少性紫癜（ITP）组中，PLT计数减少（P〈0．01），MPV升高（P〈0．05），PDW升高（P〈0．01）。结论PLT、MPV、PDW在血小板减少性疾病的鉴别诊断中有较大的临床应用价值。     

改良血小板添加液低温液态保存血小板的形态及功能研究

本研究探讨使用改良的血小板添加液替代70％自体血浆在低温（10℃）液态条件下对血小板的保存效果。采集6名供者单采血小板,每一名供者单采血小板平均分为3组,A组（常规保存组）加入100％血浆、22℃保存：B组（添加液10℃保存组）加入70％PAS—ⅢM／30％血浆、10℃保存;C组（冰冻保存组）加入100％血浆和海藻糖、-85℃保存;另设D组（血浆4℃保存组）加入100％血浆、4℃保存,作为扫描电子显微镜对照组。A、B组在第1、5、7、9天取样,C组在20天后复苏取样,分别检测CD62p、HSR、PAgT、LDH的变化。血浆常温组、添加液低温组于保存后第3、9天取样扫描电镜观察,血浆低温组于保存后第3天取样观察．冰冻组在20天后复苏取样观察,同时使用新鲜血小板作为对照。结果表明,保存期内随保存时间延长,A组和B组CD62p表达增加,HSR和最大聚集率降低;A组的LDH释放、CD62p表达、HSR、血小板最大聚集率与B组比较有显著统计学差异（P〈0．05）。C组LDH释放明显较其他两组增多,但CD62p表达较少（P〈0．05）。A、B组血小板形态保持较好,C组血小板形态保持差。结论：改良的PAS—ⅢM保存液能够替代血浆用于血小板的保存,在低温条件下能够很好地保护血小板的功能,保存效果优于血浆常温保存。     

小儿急性阑尾炎患者血小板参数检测的临床意义

目的通过分析小儿急性阑尾炎患者血小板各项参数的变化情况,探讨血小板指标在该疾病诊断中的临床意义,为该疾病的诊断提供更多实验室依据。方法选择52例急性阑尾炎患儿及49例健康对照者,采用Sysmex2100全自动血液分析仪检测血小板参数,包括血小板计数（plateletcount,PLT）、平均血小板体积（meanplateletvolume,MPV）、血小板分布宽度（plateletdistributionwidth,PDW）及外周血细胞计数。采用SPSS17．0软件对检测结果及各参数间相关性进行统计学分析。结果与对照组相比,阑尾炎患者组WBC及PLT明显升高,而MPV和PDW降低,差异均具有统计学意义（P均〈0．01）。相关性分析结果显示MPV与PDW（r=0．974,P〈0．01）,以及PLT与WBC（r=0．451,P〈0．01）均呈正相关关系,PLT分别与MPV和PDW（r=-0．610,r=-0．621,P均〈0．01）,WBC分别与PDW和MPV（r=-0．335,r=-0．364,P均〈0．05）均呈负相关。结论急性阑尾炎患儿外周血存在PLT增高、而MPV和PDW降低的血小板模式,用这些参数联合其他炎性指标建立诊断模型可能对小儿急性阑尾炎具有较大的实验室诊断价值。     

血小板参数联合乳酸脱氢酶在血小板增多症鉴别诊断中的价值

本研究探讨血小板参数联合乳酸脱氢酶在血小板增多症鉴别诊断中的价值。常规检测骨髓增殖性疾病组（CMPD组）[包括慢性髓系白血病（CML）、真性红细胞增多症（PV）、原发性血小板增多症（ET）]和反应性血小板增多症组（RT组）血小板计数（Plt）、平均血小板体积（MPV）、血小板体积分布宽度（PDW）、大血小板比率（P—LCR）和血清乳酸脱氢酶酶（LDH）水平,应用非参数检验进行统计学分析,绘制ROC曲线,判断各个指标在血小板增多症患者鉴别诊断中的价值,并确定最佳截断值。结果表明,CMPD组血小板参数MPV、PDW、P-LCR和LDH各项指标均明显高于RT组（P〈0．05）,可以鉴别CMPD和RT,尤以PDW、P—LCR预测CMPD的诊断效能最高,ROC曲线下面积分别为0．96、0．89,最佳截断值分别为11．95％、23．05％;鉴别3种CMPD的方法如下：如LDH、P—LCR明显升高,应考虑CML,其最佳预测截断值分别为424U／L、26．10％;如LDH中度升高,同时Pit明显升高,应考虑ET,Plt最佳预测截断值为939×10^9／L。结论：血小板参数联合LDH有助于血小板增多症的鉴别诊断．它是一种简单、快速、初步的鉴别方法,尤其适合基层医院推广应用。     

血小板TLR4表达介导LPS诱导的血小板活化

本研究探讨人血小板Toll样受体4（toll—like receptor4,TLR4）表达及其在细菌内毒素脂多糖（lipopolysaccsharide,LPS）诱导血小板活化中的作用。对15例健康人肘静脉抽血各20ml,制备富含血小板血浆（PRP）和血小板悬液,在有或无凝血酶作用的基础上加入LPS（0．2μg/ml）孵育30分钟,分别用流式细胞术和免疫印迹（Western blot）方法检测LPS作用前后血小板TLR4、CD62P和CD40L的表达。结果表明：流式细胞术检测静止血小板TLR4表达为25．44％,凝血酶刺激后明显升高（32．34％,P〈0．05）,LPS继续作用后TLR4的表达进一步增高（39．16％,P〈0．01）;在无凝血酶刺激下,LPS作用血小板后TLR4的表达接近于凝血酶刺激后结果。Westernblot方法检测结果与流式细胞术相符;血小板CD62P和CD40L表达（流式细胞术）在静止血小板分别为6．39％和2．45％,凝血酶刺激后明显增高,分别为42．68％和14．8％,LPS进一步刺激后表达率进一步升高,分别为63．03％和13．94％,均明显高于仅用凝血酶的刺激组（P〈0．001）;抗TLR4抗体显著抑制了LPS诱导的血小板TLR4、CD62P、CD40L表达,但不影响凝血酶诱导的血小板膜CD62P、CD40L表达。结论：人血小板能够表达功能性TLR4,它直接参与了机体针对细菌的固有免疫反应。