EGCG协同塞来昔布抑制鼻咽癌细胞增殖和下调COX-2表达

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）是否具有协同塞来昔布抑制鼻咽癌细胞CNE-2增殖及下调环氧化酶-2（COX-2）表达。方法体外培养CNE-2细胞,与EGCG或（和）塞来昔布孵育24~72 h,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞术分析细胞周期,Western blot检测COX-2的表达。结果 EGCG对塞来昔布抑制CNE-2细胞增殖具有协同作用,能协同增加G0~G1期细胞比例、降低S、G2~M期细胞数,促进细胞凋亡,且能协同协调COX-2的表达。结论 EGCG对COX-2抑制剂的协同效应可做为鼻咽癌化疗潜在的辅助用药。     

塞来西布对HL-60细胞增殖、凋亡及表达VEGF影响的体外研究

目的研究塞来西布（Celecoxib）对急性髓系细胞白血病（AML）HL-60细胞的增殖抑制、诱导凋亡作用及其机制。方法以不同浓度的Celecoxib作用于体外培养的HL-60细胞,用MTT法检测细胞生长抑制率;用流式细胞仪分析凋亡细胞的百分率和细胞周期变化;QRT—PCR法检测VEGF表达水平。结果Celeeoxib以浓度依赖性方式有效地抑制HL-60细胞增殖,Celecoxib增加G0／G1期HL-60细胞百分率,降低S、G2期HL-60细胞百分率;Celecoxib能以浓度依赖性方式诱导HL-60细胞凋亡。当Celecoxib浓度大于40μmol／L时,随着Celecoxib浓度增高,HL-60细胞VEGF-mRNA的表达逐渐降低,呈浓度依赖性变化。结论Celecoxib对HL-60细胞具有显著的增殖抑制和诱导凋亡作用,增殖抑制可能在于阻断了细胞周期的进行,降低VEGF活性可能是其诱导凋亡重要作用机制之一。     

塞来昔布对肺癌细胞的增殖抑制作用研究

目的研究非甾体类抗炎药塞来昔布对肺癌细胞的体外抑制作用。方法选用肺癌A549细胞系体外培养,在不同塞来昔布浓度作用下,MTT法检测肺癌细胞的增殖抑制,流式细胞仪测定肺癌细胞周期分布以及RTPCR法观察肺癌细胞血管内皮生长因子mRNA(VEGFmRNA)的表达水平。结果塞来昔布对肺癌细胞增殖有抑制作用,且呈剂量依赖关系,IC50为50μmol/L;塞来昔布可将肺癌细胞阻滞在G0/G1期,有剂量依赖性;RTPCR法中,对照组肺癌细胞VEGFmRNA的表达水平高于药物组(P<0.05),药物组中肺癌细胞VEGFmRNA表达水平与塞来昔布浓度相关。结论塞来昔布对肺癌细胞有明显的体外增殖抑制作用,与VEGFmRNA的表达下调和阻滞细胞周期在G/G期有关。     

塞来昔布联合 PDTC 对人结肠癌细胞 HT-29 的抑制增殖和促凋亡作用及其机制

目的研究塞来昔布联合吡咯烷二硫氨基甲酸（PDTC）对人结肠癌细胞HT-29增殖、凋亡的影响及其对COX-2、NF-κB、Caspase-3基因表达的影响,探讨塞来昔布联合用药抗肿瘤的机制。方法用不同浓度的塞来昔布（30、60、120、240μmol／L）（单药组）以及不同浓度塞来昔布联合不同浓度的PDTC（50、100μmol／L）（联合组）分别处理人结肠癌细胞,采用CCK-8法检测细胞的增殖情况,流式细胞术分析细胞凋亡情况,实时荧光定量PCR检测各组细胞COX-2、NF-κB、Caspase-3表达的变化。结果塞来昔布单药组对结肠癌细胞具有抑制增殖、促进凋亡作用,其作用随着药物浓度、给药时间的增加而增强（P均〈0．05）;同时检测到COX-2、NF-κBKBmRNA的表达降低（P均〈0．05）,Caspase-3表达升高（P〈0．05）,且具有浓度依赖性;联合组较同一塞来昔布浓度的单药组上述作用更明显（P均〈0．05）。结论塞来昔布单药组和联合组均能抑制人结肠癌细胞的增殖,促进其凋亡;联合组作用强于单药组;其机制可能与COX-2、NF-κB的下调和Caspase-3表达上调有关。     

和厚朴酚对HL-60细胞增殖抑制作用及其相关机制研究

本研究旨在探讨和厚朴酚（honokiol,HNK）对急性髓系白血病细胞HL-60增殖和凋亡的影响及其作用机制。MTT法检测HNK对HL-60细胞增殖抑制作用。流式细胞术检测细胞周期变化。Annexin V/PI法检测细胞凋亡情况。Western blot检测细胞周期蛋白（cyclins）、细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK）、P53、P21、P27、BCL-2、BCLXL、BAX、caspase-3、-9、M APK信号通路蛋白。结果表明：HNK能够抑制HL-60细胞增殖,呈时间剂量依赖性。HNK阻滞HL-60细胞于G0/G1期,S期细胞显著减少（P〈0.05）。HNK作用HL-60细胞24 h后,cyclin D1、cyclin A、cyclin E、CDK2、4、6表达显著下调（P〈0.05）,P53、P21表达显著上调（P〈0.05）。HNK作用24 h后HL-60细胞凋亡增加,活化的caspase-3、-9表达显著增加;BCL-2和BCL-XL表达下调,而BAX表达上调。MAPK亚族P38、JNK表达无明显变化;而M EK1/2-ERK1/2的表达显著下调（P〈0.05）。结论：HNK通过干预M EK1/2-ERK1/2信号通路阻滞HL-60细胞于G0/G1期并诱导HL-60细胞凋亡。     

雷帕霉素对骨髓瘤细胞RPMI8226增殖、凋亡及趋化因子受体CXCR4表达的影响

本研究探讨雷帕霉素对骨髓瘤细胞系RPMI8226体外增殖、凋亡、细胞周期及对趋化因子受体CXCR4表达的影响。不同浓度雷帕霉素作用于RPMI8226细胞不同时间,应用MTT检测细胞的增殖,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期,半定量PCR检测雷帕霉素干预RPMI8226后细胞周期蛋白D1（cyclinD1）、CXCR4mRNA表达,荧光定量PCR检测哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）mRNA表达的影响。结果表明：雷帕霉素对RPMI8226细胞有增殖抑制作用,细胞周期显示细胞阻滞于G0／G1期,G2／M期比例降低,cyclinD1、CXCR4和mTORmRNA表达下调。结论：雷帕霉素呈时间一剂量依赖性抑制RPMl8226细胞增殖,诱导细胞凋亡,并通过下调mTOR及cyclinD1表达,使细胞周期阻滞于G0／G1期,同时通过下调细胞CXCR4的表达,减少骨髓瘤细胞与基质细胞间的黏附及趋化作用达到抗肿瘤的效果。     

环氧化酶2抑制剂塞来昔布诱导 NB4细胞凋亡的研究

目的：研究环氧化酶2（COX-2）选择性抑制剂塞来昔布对髓性白血病细胞株 NB4凋亡的影响,探讨塞来昔布诱导细胞凋亡的机制。方法RT-PCR 检测不同细胞系中 COX-2 mRNA 表达,MTT 法检测 NB4细胞增殖抑制,DNA Ladder 试验分析NB4细胞 DNA 片段化,流式细胞术检测 NB4细胞 Bcl-2蛋白的表达。结果与未加药处理组相比,不同浓度塞来昔布作用后DNA Ladder 片段随浓度的增加而更为明显。不同用药组25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L 塞来昔布组 Bcl-2蛋白表达率分别为（71．69±1．65）％、（34．51±2．53）％和（29．28±2．38）％,与空白对照组 Bcl-2蛋白表达率为85．34±2．89％相比,50μmol/L、100μmol/L 塞来昔布组 Bcl-2蛋白明显下降（P ＜0．05）。结论COX-2选择性抑制剂塞来昔布通过下调 NB4细胞 Bcl-2蛋白表达致诱导其凋亡。     

塞来昔布对胃癌细胞株BGC-823的增殖的影响

目的研究塞来昔布在体外对人胃癌细胞BGC-823生长增殖的影响及其抗肿瘤的相关分子机制。方法体外培养人胃癌BGC-823,MTT法检测塞来昔布在相同浓度下,不同时间对于胃癌细胞增殖的影响,并计算半数抑制浓度(IC50)值;RT-PCR法检测对COX-2、MMP-9的mRNA的表达影响。结果 MTT结果显示:相同干预浓度塞来昔布抑制人胃癌细胞增殖,其24h、48h、72h的IC50分别为:158.98μmol/L、75.45μmol/L、45.08μmol/L;RT-PCR结果显示:人胃癌细胞BxPC-3正常对照组及塞来昔布干预组COX-2 mRNA灰度值分别为:0.873±0.026,0.115±0.008,P<0.05;MMP-9 mRNA灰度值分别为:0.890±0.011,0.209±0.012,P<0.05。结论塞来昔布抑制胃癌细胞增殖,塞来昔布抗肿瘤机制可能通过抑制COX-2及MMP-9的mRNA的表达来实现的。     

蛋白酶体抑制剂硼替佐米联合柔红霉素对HL-60细胞的凋亡作用和Survivin mRNA表达的影响

目的：研究蛋白酶体抑制剂硼替佐米（Bor）单用或联合柔红霉素（DNR）对HL-60细胞凋亡和Survivin mRNA表达的影响。方法：将不同浓度Bor,DNR及两药联合组和对照组作用于HL-60细胞,采用MTT法测定细胞增殖活性,RT—PCR检测Survivin mRNA表达。结果：5nmol／L Bor作用24h对HL-60细胞有增殖抑制作用,并诱导其凋亡。随着浓度增加及其作用时间的延长可使细胞凋亡率明显增加,10nmol／LBor与1．0μmol／L DNR联合作用72h细胞凋亡率最高,与同剂量两药单独作用相比差异有显著性（P〈0．01）。RT—PCR检测结果表明：随着药物浓度的增加,Survivin mRNA的表达逐渐下降,10mmol／L Bor与1．0μmol／L DNR联合作用72h Survivin mRNA表达最低。结论：Bor能显著抑制HL-60细胞的增殖并诱导其凋亡,Bor联合DNR对HL-60细胞有协同作用,并能显著下调Survivin基因的表达,这可能是促使HL-60细胞凋亡的机制之一。     

藤黄酸对SKM-1细胞生长抑制作用及其机制

本研究探讨藤黄酸（GA）对骨髓增生异常综合征细胞SKM-1生长抑制和诱导细胞凋亡及其机制。采用MTr比色法检测GA对SKM-1细胞的增殖抑制作用,在光学显微镜下观察细胞形态学变化,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期分布,RT-PCR检测SKM-1细胞baxmRNA和bcl-2mRNA表达情况。结果表明：GA能明显抑制SKM-1细胞增殖,具有时间和剂量依赖性,其48h的IC50值为0．37μg/ml;GA诱导SKM-1细胞凋亡,具有浓度依赖性,诱导SKM-l阻滞在G0／G1期;显微镜下可见典型的凋亡细胞形态特征;GA可明显下调SKM-1细胞bcl-2mRNA表达和上调baxmRNA表达。结论：GA能诱导SKM-1细胞凋亡,其机制可能与细胞G0／G1期阻滞及bcl-2／bax比率下调有关。     

六亚甲基二乙酰胺对急性白血病细胞株HL-60和U937分化、凋亡的影响及其机制

目的　研究六亚甲基二乙酰胺 (HMBA)体外诱导HL 6 0和U937细胞分化、凋亡的作用及其机制。方法　流式细胞仪检测细胞分化抗原CD1 1b、CD1 4,细胞凋亡标记Annexin Ⅴ以及进行细胞周期分布和细胞内cyclinD、cyclinE、p2 7抗原的分析 ,RT PCR检测c myc、Rb、Bcl 2基因mRNA的表达。结果　HL 6 0、U937细胞经HMBA处理 72h后CD1 1b表达显著增高 ,高剂量HMBA促使Annexin Ⅴ表达增加。HMBA阻滞HL 6 0、U937细胞于G0 G1 期 ,并使该两种细胞内cyclinE表达显著下降 ,cyclinD、p2 7表达显著增高 ,呈剂量依赖关系 ;HMBA可使HL 6 0、U937细胞c myc、Bcl 2mRNA表达下调 ,而RbmRNA在HL 6 0细胞表达上调 ,在U937细胞则无显著改变。结论　HMBA能诱导HL 6 0、U937细胞出现明显的分化 ,高剂量的HMBA有促使HL 6 0、U937细胞凋亡的倾向 ,其机制可能是通过影响细胞周期调控分子以及有关的增殖分化相关基因的表达 ,从而抑制细胞增殖 ,促进细胞分化。     

mPGES-1抑制剂MK886对白血病HL-60细胞周期的影响

本研究探讨膜结合型前列腺素E2合酶1(mPGES-1)抑制剂MK886对人急性髓系白血病HL-60细胞周期的作用。采用流式细胞仪分析技术、Western blot、ELISA等方法检测不同浓度MK886(10、25、50μmol/L)对HL-60细胞周期的作用及对细胞周期调控因子周期蛋白D1、mPGES-1、PGE2、Akt、P-Akt、C-MYC蛋白的影响。结果表明:与正常人外周血单个核细胞比较,G0/G1期HL-60细胞比例减少,S期比例增多。MK886作用24 h后,被阻滞于G0/G1期的细胞增多,同时细胞mPGES-1表达下调,合成PGE2减少,P-Akt、C-MYC、周期蛋白D1蛋白表达下降。结论:MK886对白血病HL-60细胞有细胞周期阻滞作用,其机制可能与抑制mPGES-1表达,减少PGE2的合成,抑制Akt磷酸化及C-MYC表达,下调周期蛋白D1表达有关。     

Effects of celecoxib and nimesulide on the proliferation of ectopic endometrial stromal cells in vitro

The effects of cyclooxygenase 2 (COX-2) selective inhibitors on the proliferation of ectopic endometrial stromal cells in vitro were investigated. Ectopic endometrial stromal cells were treated with either celecoxib or nimesulide for 24 and 48 h. The results showed that (i) both celecoxib and nimesulide inhibited the proliferation of ectopic endometrial stromal cells in vitro in a time- and dose-dependent manner; (ii) the expression of prostaglandin E(2) was significantly inhibited by both celecoxib and nimesulide in a dose-dependent manner; (iii) the percentage of apoptotic cells was significantly higher for cells treated with celecoxib or nimesulide than for untreated cells; and (iv) the percentage of the cells in the G(0)/G(1) phase increased after the cells were treated with either agent in a dose-dependent manner. These data suggest that celecoxib and nimesulide inhibited proliferation of ectopic endometrial stromal cells by inducing apoptosis and blocking the cell cycle at the G(0)/G(1) phase.     

原花青素诱导HL-60细胞分化及其机制的研究

本研究旨在探讨原花青素(proanthocyanidin,PAC)诱导人急性早幼粒细胞白血病细胞株HL-60细胞分化的可能机制。用PAC 20 mg/L处理HL-60细胞24 h,CCK-8法检测细胞生长状况,分析PAC对HL-60细胞的增殖影响;应用光学显微镜观察细胞形态变化,流式细胞术分析细胞周期变化和测定细胞分化抗原CD14、CD11b表达;Western blot检测P21、Cyclin D1和CDK4表达变化。结果表明,PAC 20 mg/L作用HL-60细胞24 h,细胞抑制率明显增高(73.2±1.5)%(P<0.01),髓系细胞分化抗原CD14表达明显增高(P<0.01),CD11b表达稍增高,细胞周期中G0/G1期细胞百分率明显增高(P<0.05),S期细胞明显减少(P<0.01);PAC 20 mg/L与HL-60细胞共培养4 h,部分细胞向成熟阶段细胞分化;PAC 20 mg/L处理HL-60细胞12、24和48 h,P21蛋白表达增加,Cyclin D1和CDK4蛋白表达降低。结论:PAC能抑制HL-60细胞增殖并诱导其分化,细胞周期阻滞于G0/G1,其机制可能与P21蛋白表达上调和Cyclin D1及CDK4蛋白表达下调有关。     

雷公藤红素下调HL-60细胞P-Akt与Cyclin D1蛋白表达及其诱导细胞凋亡的效应

本研究探讨雷公藤红素诱导HL-60细胞凋亡及其可能的作用机制。以不同浓度雷公藤红素(0.25-8.0μmol/L)分别作用于HL-60细胞24-72小时,采用MTT法检测细胞增殖活性;TUNEL荧光染色、流式细胞术观察雷公藤红素对HL-60细胞凋亡及周期的影响;Western blot、RT-PCR法分别检测雷公藤红素对HL-60细胞内Akt(P-Akt)及其下游分子Cyclin D1的蛋白、基因的表达水平。结果表明,雷公藤红素能明显抑制HL-60细胞增殖,具有浓度依赖和时间依赖性。此外,雷公藤红素以浓度依赖性方式诱导HL-60细胞凋亡,并伴随明显的凋亡细胞形态学改变。雷公藤红素的凋亡诱导可能与其诱导HL-60细胞周期阻滞于G0/G1期有关。雷公藤红素对P-Akt及CyclinD1蛋白及基因表达水平均有不同程度的抑制作用,该抑制作用呈明显的量效和时效关系。结论:雷公藤红素明显抑制HL-60细胞的增殖,并诱导其凋亡,其抗白血病效应可能与其下调P-Akt和Cyclin D1蛋白表达有关。     

六亚甲基二乙酰胺对HL-60细胞细胞周期及其调节蛋白表达的影响

六亚甲基二乙酰胺(hexamethylene bisecetamide,HMBA)是一种极性诱导分化剂，已应用于临床治疗急性髓系白血病和骨髓增生异常综合征(MDS)，但其诱导髓系白血病细胞分化的机制尚不清楚。本研究观察了HMBA对HL—60白血病细胞细胞周期及其调节蛋白表达的影响，以探讨其药理机制。用流式细胞术检测HMBA对HL—60细胞细胞周期分布和细胞周期蛋白D、E及p27表达的影响。用RT—PCR研究HMBA对细胞周期负性调控分子CKI p15，p16，p27基因mRNA表达的影响。结果表明，HMBA主要使HL—60细胞阻滞于G0/G1期，经HMBA处理后HL-60细胞胞浆内细胞周期蛋白E蛋白表达显降低，而细胞周期蛋白D和p27蛋白表达则显增高；未经HMBA处理的HL-60细胞p15，p16 mRNA均无表达；3mmol／L HMBA处理24小时后p15 mRNA出现弱阳性条带，48小时和72小时后出现强阳性条带，p16 mRNA则在48小时后出现弱阳性条带，72小时后出现强阳性条带；p27 mRNA在未经处理和处理后24，48和72小时后均出现强阳性条带，阳性程度无明显差异。结论：HMBA的药理机制之一可能是通过下调细胞周期蛋白E，上调p27蛋白的表达，同时使得p15，p16基因mRNA重获表达。阻滞HL—60细胞周期于G1期，从而发挥其抗增殖作用。     

周期蛋白G1反义硫代脱氧寡核苷酸对白血病细胞增殖的调控

为了探讨脂质体转染细胞周期蛋白(cyclin)G1反义脱氧寡核苷酸(ASON)对HL-60细胞增殖调控的作用，用针对cyclin G1 mRNA5′端编码区起始密码子(ATG／AUG)的ASON，通过脂质体导入HL-60细胞共培养后，用免疫组织化学法和RT-PCR分别检测cyclin G1和mRNA水平的表达，用电镜、细胞原位凋亡检测法(POD)、流式细胞术(FCM)及DNA凝胶电泳等方法检测细胞凋亡。结果表明：cyclin G1 ASON组与SON及空白对照组相比，ASON能特异地抑制cyclin G1及mRNA水平的表达，当ASON的浓度达到一定程度时，HL-60细胞的增殖及集落形成率均明显受抑制，出现细胞凋亡，并且此作用随ASON浓度的升高而增强。结论：cyclin G1的特异反义脱氧寡核苷酸能封闭其蛋白及mRNA水平的表达，对白血病细胞的增殖有抑制作用，并可促使细胞凋亡，且有浓度依赖性。     

黄芩提取化合物单体SBX抗白血病效应及机制研究

本研究探讨黄芩提取化合物单体成分SBX对不同人白血病细胞株的抗白血病效应及其可能的相关机制。体外培养人HL-60、NB4、U937、K562、Jurkat细胞,应用CellTiter-Glo发光法进行细胞活力检测,筛选出敏感细胞株,应用流式细胞术检测SBX对敏感细胞细胞周期的影响,应用蛋白Pathway Array技术检测SBX对敏感细胞蛋白表达的影响。结果显示,SBX(10-200μmol/L,72 h)对各种类型的人白血病细胞均有抑制作用,并呈浓度依赖性(r值分别为0.86,0.88,0.95,0.94,0.96),对HL-60细胞抑制作用最强。流式细胞术显示SBX(50,100μmol/L,48h)对HL-60细胞周期的影响主要是引起G0/G1期阻滞。蛋白Pathway Array技术分析SBX(50μmol/L,48 h)对HL-60蛋白表达的影响显示,p-PKCα/βⅡ、p-p38、Cdc25B、XIAP蛋白表达水平上调,而p-AKT、p-SAPK/JNK、cyclin E、Notch4、Cdk4、Cdc2、Akt、Bcl-2、Bax、cdc42、TNF-α、p27、CaMKKa蛋白表达水平下调。结论:SBX能够抑制各种类型人白血病细胞的增殖,其中敏感细胞株为HL-60。SBX主要影响HL-60的EGFR、Ras/Raf/MAPK和Notch信号传导通路,并通过这些信号传导通路影响细胞周期相关蛋白表达的水平,导致细胞周期G0/G1期阻滞。     

维甲酸诱导HL-60细胞分化中对细胞周期素依赖性激酶活性的影响

目的探讨维甲酸（ＲＡ）对ＨＬ６０细胞的增殖抑制和诱导分化作用与细胞周期素依赖性激酶（ＣＤＫ）活性变化的相关性。方法用５×１０－６ｍｏｌ／Ｌ全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）或芳维甲（ＡＥ）处理ＨＬ６０细胞１～４天,在观察细胞生长、四氮唑蓝（ＮＢＴ）还原实验以及细胞周期分析的基础上,用组蛋白Ｈ１激酶活性分析技术检测ＣＤＫ２的活性,免疫沉淀法分析结合于ＣＤＫ２和ＣＤＫ４上的相应的细胞周期素（ｃｙｃｌｉｎ）Ｅ和Ｄ的量。结果ＨＬ６０细胞在ＡＴＲＡ或ＡＥ作用下,细胞增殖减慢,对ＮＢＴ的还原能力明显增强,９０％左右的细胞被阻滞在Ｇ１／Ｇ０期;在Ｇ１到Ｓ期转换过程中起关键作用的ｃｙｃｌｉｎＥ／ＣＤＫ２的活性显著下降,结合于ＣＤＫ４上的ｃｙｃｌｉｎＤ１的量减少。结论ＲＡ抑制ＨＬ６０细胞增殖并诱导其分化可能与ＣＤＫ２和ＣＤＫ４的活性下降有密切关系