探讨血小板输注中血小板抗原基因分型与配型的应用效果

目的探讨血小板输注中血小板抗原基因分型与配型的应用效果。方法选取我站2011年8月~2014年8月收集的262例无偿献血者和70例血小板输注患者的血小板,采用聚合酶链序列特异性引物技术对供血者和患者的HPA1-5系统进行等位基因分型,同时采集与患者ABO血型及HPA基因型相同的血小板制剂并加以固相凝集法配型,配型结果相合后给予输注。结果 70例需输注血小板患者经血小板基因配合后,相吻合的血小板有31例(吻合组),未配型者39例(对照组),其中吻合组血小板输注后CCI1h和CCI24h效果明显优于对照组,两组差异对比有意义(P<0.05)。结论在血小板输注中应用血小板抗原基因分型与配型可防止血小板免疫性抗体的产生及输注无效的发生,从而有效提高输血疗效和安全性,安全便捷,值得推广和应用。     

新乡地区HPA基因分型供者库在免疫性血小板输注无效中的应用研究

目的建立新乡地区已知HPA-1-18基因型的无偿机采血小板供者库,为临床血小板输注无效(PRT)患者提供HPA相合的血小板,方法建立PCR-SSP检测HPA-1-18基因型检测方法;采用固相凝集法对52名PRT患者,做血小板同种抗体筛查;应用HLA抗体特异性试剂盒检测患者血清群体反应性抗体;对血小板同种抗体筛查阳性患者,采用已知HPA基因型的标准谱血小板做抗体鉴定,并对其进行HPA基因分型;采取HPA抗体无对应抗原的供者血小板进行输注。结果成功检测出150名无偿血小板捐献者HPA-1-18基因型。在52例PRT病例中,检出血小板同种抗体23例(阳性率44%),其中5例鉴定为抗-HPA(21.7%),分别为HPA-3a 2例;HPA-15b 3例;其余HLA抗体阳性18例。结论对PRT患者采用HPA基因型相合的方法进行输注取得临床效果。     

HPA配型在免疫性血小板输注无效中的应用研究

目的探讨以HPA配型解决免疫性血小板输注无效的方案。方法 1)建立PCR-SSP方法检测HPA-1～5基因型检测方法,建立机采血小板供者库;2)采用微柱凝胶法和Capture-P法对32名血小板输血无效患者作血小板同种抗体筛查,并对2种方法比较;3)对血小板同种抗体筛查阳性患者采用已知HPA基因型的标准谱血小板作抗体鉴定并采取HPA基因型同型输注的原则寻找供者。结果 1)采用PCR-SSP方法成功检测出HPA-1～5基因型,并对1 000名血小板供者的HPA-1～5基因型定型;2)32例血小板输注无效病例中,微柱凝胶法检测血小板同种抗体阳性率为50%,Capture-P法血小板抗体阳性检出率为40%;3)32例血小板输血无效病例中2种方法同时血小板抗体阳性13例,其中2例鉴定为抗-HPA,分别为抗-HPA-5b(P=1/84)、抗-HPA-1a(P=1/55)。结论对抗-HPA引起的血小板输注无效患者采用HPA基因型相合的方法寻找供者是有效的。     

肇庆地区血小板供者库的建立及应用

目的 建立肇庆地区已知人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)基因分型及人类血小板抗原(human platelet alloantigen,HPA)HPA-1~6、9、15基因型的无偿机采血小板供者库,为临床血小板输注无效(platelet transfusion refractory,PTR)患者提供HLA及HPA相合的血小板.方法 采用聚合酶链反应-序列特异性寡核苷酸探针(polymerase chain reaction-sequence specific olignuliotide probe,PCR-SSO)检测血小板供者的HLA基因分型及聚合酶链反应-序列特异性引物(polymerase chain reaction-sequence specific primer,PCR-SSP)检测HPA-1~6、9、15基因型.对杂合度高的HPA-3、15随机抽样20个标本进行测序.对3例患者进行HLA-I分型.结果 成功检测出101名无偿血小板捐献者HLA及HPA-1~6、9、15基因型;HPA-3、15的测序结果与PCR-SSP一致.HLA-A位点等位基因共检出11个;HLA-B位点共检出等位基因20个.3例患者中的1例从已知的HLA血小板库中找到完全一致供者,另外2例也找到三位点吻合的血小板供者.结论 建立基于HLA-I类抗原及HPA基因分型的血小板供者资料库,有助于给PTR患者提供HLA和HPA相合的单采血小板.     

青岛地区已知HLA和HPA分型血小板供者库的建立及临床应用

目的建立青岛市已知HLA和HPA分型的无偿机采血小板供者库并用于解决血小板输注无效(PRT)患者的血小板输注。方法采用PCR-SSO流式磁珠法和PCR-SSP法分别对青岛地区无偿机采血小板捐献者1 800人进行HLA-Ⅰ类(A,B位点)、HPA-1—-5,-15基因分型,针对不同免疫状态的PTR患者比较3种不同配型法(血小板随机交叉配型法、抗原特异性配合法、抗原阴性选择法)解决血小板输注无效的效果。结果在高致敏(群体反应性抗体PRA>60%)患者中,HLA和或HPA特异性配型效果较好;轻度致敏(PRA<60%)患者随机交叉,抗原阴性选择,抗原特异性配型方案效果相似。不考虑ABO血型的因素1 800名的血小板供者库可以使99%的患者在库中找到至少1例HLA完全相合的供者,理论估算的供者库规模被不同表型的患者库中检索结果证实。结论理论上青岛本地化已知分型血小板供者库规模需达到6 000人左右可以有效解决血小板输注无效患者的血小板输注问题。只有重度致敏的患者需要HLA完全相同的供者,而轻度致敏的患者可以选择随机交叉配合或抗原阴性选择方案。     

血小板膜糖蛋白Ⅱb／Ⅲa基因多态性与血小板输注疗效的关系

目的通过对98例患者血小板膜糖蛋白（GP）Ⅱb／Ⅲa基因多态性及血小板抗体的检测,探讨其与血小板输注疗效的关系。方法采用聚合酶链反应（PCR）扩增结合测序的方法检测患者GPⅡb／Ⅲa基因中5个外显子的9个多态性位点,采用固相凝集法检测患者血小板抗体。结果98例患者中只检测到GP11b基因的第26外显子存在T18809G变异,导致Ile843Ser多态性,产生HPA-3aa／ab／bb血型的3种基因型。此3种基因型均与血小板抗体产生相关,造成血小板输注无效。98例患者的血小板抗体阳性率为52．0％,1468袋血小板输注总有效率为77．8％,其中65袋配合性血小板输注的有效率为83．1％。3种基因型之间均无明显差异。结论血小板特异性及相关性抗体的存在是造成血小板输注无效的主要免疫性因素,GP11b基因上的HPA-3多态性与血小板输注无效有关。     

固相凝集法血小板配合实验在免疫性血小板输注无效中的应用

目的 探讨固相凝集法血小板配合实验在解决免疫性因素引起的血小板输注无效中的作用.方法 对18例血小板输注无效且血小板抗体筛选阳性的患者,采用固相凝集法进行多次血小板配合实验,找到配型相合的供者血小板输给患者,比较血小板配合实验前后的平均血小板输注间隔期和平均每次血小板的输入量.结果 血小板配合实验前的血小板平均输注间隔期为5 d,平均每次输注量为1.8个治疗量;配合实验后的血小板平均输注间隔期为8 d,平均每次输注量为1.0个治疗量,配合实验前后两者的差异均具有统计学意义(P<0.05).结论 固相凝集法血小板配合实验可提高血小板输注的效率,解决免疫性血小板输注无效的问题.     

HPA和HLA已知型的血小板供者库建立及应用

目的 开展血小板同型或配合性输注是预防和治疗免疫性血小板输注无效(PTR)的良策.为此建立一定规模的HPA和HLA已知型血小板资料库,为临床提供匹配的单采血小板,是血小板输注安全有效的保障.方法 对所有供者库单采血小板进行ABO、HLA-A、B及HPA1-6,15基因分型.根据ABO、HPA同型和HLA同型或HLA交叉反应组相同(CREG)配型策略,编制数据库软件,建立上海市单采血小板供者资料库.结果 上海市血小板供者库至今已接受80人/次患者查询,共有78名患者找到合适的供者.HPA和HLA的CREG相同配合率为97.5％.其中50名患者接受了单采血小板的同型(或配合型)输注,47名输注有效(24 h血小板回收率＞20％).其中更有15名患者同型输注疗效明显,24 h回收率＞80％.结论 建立血小板供者HPA和HLA Ⅰ类抗原基因分型资料库,为患者提供HLA和HPA、ABO匹配的单采血小板,可以降低PTR的发生率,是解决免疫性PTR的根本手段.     

合肥地区HPA、HLA高分辨基因型血小板供者库的建立及库容分析

目的 建立合肥地区HPA、HLA高分辨已知基因型血小板供者资料库,并分析合适的库容水平,为免疫性血小板输注无效患者提供数据基础。方法 采用多重荧光PCR方法对1 157名合肥地区无偿献血者进行HPA-1～6,-10,-15,-21基因分型并计算其频率;采用PCR-SSO方法对合肥地区1 115名无偿献血者进行HLA-A,-B高分辨基因分型,使用最大期望值计算HLA-A,-B高分辨基因频率和单体型频率。结果 根据对合肥地区人群HPA、HLA高分辨基因多态性分析,建立合肥地区血小板供者资料库,在1 157份已知HPA-1～6,-10,-15,-21基因型供者库中,约有91%的患者可以找到HPA基因型全匹配供者;1 115份已知HLA-A,-B高分辨基因型血小板供者库中,找到至少1例相同供者的概率约为60%。结论 建立了适合合肥地区人群HPA、HLA已知基因型血小板供者资料库,经分析合肥地区血小板供者库基本满足免疫性血小板输注无效患者找到适配的血小板需求。     

血小板特异性糖蛋白抗体在血小板输注无效患者中分布的研究

目的探讨血小板输注无效(PTR)患者的血小板特异性糖蛋白抗体的表达及PTR与血小板特异性抗原的相关性。方法采用ELISA方法检测27名临床上确诊为PTR患者的血小板特异性糖蛋白抗体,应用PCR-SSP的方法检测其HPA-1～17基因分型。结果 27名PTR患者的HPA基因频率为HPA-1a(0.900),1b(0.100);HPA-2a(0.926),2b(0.074);HPA-3a(0.648),3b(0.352);HPA-4a(0.981),4b(0.019);HPA-5a(0.940),5b(0.060);HPA-6a(0.815),6b(0.185);HPA-7a～14a、16a、17a(1.000),7～14、16、17b(0.000);HPA-15a(0.463),15b(0.537);PTR患者的HPA抗原分布与健康献血者的基因频率无统计学差异(P>0.05)。血小板抗体阳性的27名PTR患者中,血小板特异性糖蛋白GPⅡb/Ⅲa抗体阳性表达者占78%(21/27)、GPⅠa/Ⅱa抗体阳性占70%(19/27)。对3名PTR患者作血小板特异性抗原分析发现:患者产生的血小板特异性糖蛋白抗体与HPA基因型密切相关,以抗-HPA-3b、-5b为常见。结论多次输注血小板无效的患者,应选择与其HPA基因型一致的血小板供者,以提高血小板输注疗效,避免血液资源的浪费。     

中国汉族人群HPA分型单采血小板供者库的建立模式与库容

本研究探讨建立中国汉族人群HPA分型单采血小板供者库的模式和合适的库容水平。研究方法为合并分析公开发表的中国16个省份的汉族血小板献血者人群人类血小板抗原（human platelet antigen,HPA）分布多态性群体调查数据。对HPA多态性群体调查数据进行Hardy—Weinberg平衡检验。结果表明,HPA．1、-4、石、-10未检出bb纯合子,HPA-7-9,11-14、-16未检出b基因。HPA1-16系统相互独立存在于血小板表面。中国汉族人群中发现了648种HPA组合,其中42种频率高于0．001的组合的累积频率达0．9763,频率最高（0．2012）的组合为：HPA-（7-8-9-11-12-13-14—16）aa-（1-4-5-6-10）aa-2aa-3ab-15ab。HPA对偶抗原不配合概率高于0．1的系统有HPA．15、-3和-2,对偶抗原不配合概率介于0．01—0．1的系统有HPA-1、-5和-6。中国汉族人群供受者间随机输血HPA1—16系统对偶抗原全匹配概率为0．3195。根据库容（N）随频率（F）变化的曲线,推导得到在P=95％时的回归方程LogN=-0．4394x Ln（F）＋0．4324。使用该公式椎测综合频率（HPA和AB0的频率乘积）为0．005的库容至少需要为576．07人。结论：中国汉族人群HPA分型单采血小板供者库应采用单库容600名供者的区域多中心联合建库模式,它既能解决当地主要的HPA—15、3和2系统不配合造成的血小板输注无效（platelet transfusion refractoriness,PTR）,还可以在遗传背景相近的区域有效地扩大建库规模以解决HPA低频抗原的不配合问题。在评估HpA分型血小板供者库容时不仅要考虑HPA的频率还同时要考虑ABO血型分布频率对库容的影响。     

人类血小板抗原1—16基因与血小板输注无效风险研究

目的探讨HPA-1—16基因多态性分布与血小板输注无效相关性。方法应用PCR-SSP法对上海地区268名汉族人群行HPA-1—16基因检测;应用ELISA法对49名反复输血的恶性血液病患者行血小板抗-HLA-Ⅰ与抗-HPA筛查试验。结果上海地区汉族人群HPA-1—16系统中,HPA-1—6,15系统等位基因频率1a=0.9889,1b=0.0111,2a=0.8881,2b=0.1119,3a=0.5989,3b=0.4011,4a=0.9963,4b=0.0037,5a=0.9907,5b=0.0093,6a=0.9832,6b=0.0168,15a=0.6418,15b=0.3582,均呈多态性分布;其余HPA-7—14,16系统等位基因均呈单线性分布。HPA-1,2,4—6,15系统主要以aa纯合子基因型频率分别为0.9776,0.7799,0.9925,0.9813,0.9664,0.4328。在HPA-2、3、15系统中出现bb纯合子基因型,其频率均为0.0037,0.1530,0.1492外,其余系统均未出现bb纯合子基因型。另外,在HPA-1—6,15系统中出现ab杂合子基因型,其频率分别为0.0224,0.2164,0.4963,0.0075,0.0187,0.0336,0.4180,以HPA-3杂合度最高,其次次序为HPA-15、HPA-2。在随机输血中,HPA不合发生率以HPA-3为最高(0.3650),其次分别为HPA-15(0.3541)、HPA-2(0.1790)。49名反复输血的恶性血液病患者中,有61.22%(30名)输血后相继出现抗-HLA-Ⅰ,而始终未检出抗-HPA。结论上海地区汉族人群血小板输注无效的主要原因是抗-HLA-Ⅰ所致;只需检测供者与受(患)者的HPA-2、-3、-15基因相合,就可基本达到血小板匹配性输注。     

洛阳地区血小板抗原等位基因频率的鉴定简

目的 调查本地区人群血小板抗原（HPA）系统等位基因的分布频率,并进行随机输血风险评估.方法 随机收集无偿献血者样本400份,应用PCR-SSP技术检测血小板抗原的基因型.结果 所有样本中均含有高频基因“a”、“aa”、“ab”、＂bb”三种基因,在HPA-3和HPA-15中所占比例的差异无统计学意义,但在所检测的其他抗原中分布不均,各种抗原引起随机输血不合概率的差异有统计学意义.结论 HPA-3和HPA-15是引起洛阳地区血小板输注不合的主要原因,基因鉴定技术可为血小板输注无效患者提供HPA相合的血小板.     

献血者血小板1-16抗原基因遗传多态性分析及已知HPA型供者数据库的建立

本研究的目的是分析人类血小板抗原（human platelet antigen,HPA）基因多态性,根据分布频率来判断HPA抗原不配合比率以及抗体产生的机会,确定有临床意义的血小板抗原系统,并建立邯郸地区血小板基因频率数据库和供者库.采用SSP-PCR方法对邯郸地区148名随机献血者进行HPA1-16抗原32个等位基因的检测分析,并与不同人群的分布频率进行比较.结果表明：每个样本均检测到HPA-1a、2a、4a-14a、16a基因;HPA-4a、7a-14a、16a呈现单态性,未检测出相应的等位基因HPA-b;对于HPA-1、-2、-5、-6主要以a/a纯合子为多,a/a基因型频率分别是0.9595、0.8108、0.9865、0.9797,没有b/b纯合子出现.在HPA1-16中,具有最高杂合度的是HPA-15,基因型HPA15a/15a、HPA15a/15b、HPA15b/15b频率分别是0.2230、0.5270、0.2500;HPA-3在其次,基因型HPA3a/3a、HPA3a/3b、HPA3b/3b频率分别是0.3851、0.5135、0.1014.经x2检验,结果符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律.邯郸地区随机献血者HPA1-5系统基因频率与石家庄地区相似（P＞0.05）;与我国台湾人群进行HPA1-13、HPA-15的比较,HPA-1、-2、-6具有明显的不同（P＜0.05）,其它相似（P＞0.05）;与韩国人群进行HPA1-8的比较,除HPA-3具有明显不同外（P＜0.05）,其余均相似（P＞0.05）;与美国黑人进行HPA1-5的比较,HPA-1、-2、-5具有明显的差异（P＜0.05）;与英国人进行HPA1-11的比较,HPA-1、-5具有明显的不同（P＜0.05）.结论：北方地区中国人群HPA-2、-3、5、-15系统具有多态性,且HPA抗原分布不配合比率较高,这必然造成免疫暴露的机会增加,提示在临床上可能具有重要的免疫学意义.同时,在此次研究数据的基础上建立了邯郸地区血小板基因频率数据库和血小板已知型供者库.     

佛山地区血小板输注无效患者的血小板输注策略及应用

目的 建立一种适用于佛山地区临床客观情况的免疫抗体致血小板输注无效输血策略与技术路线.方法 采用PCR-SSP法对佛山地区无偿机采血小板捐献者600人进行HLA-1 （A,B位点）基因分型,其中100人进行HPA-1～15基因分型,建立HLA、HPA供者库.使用3种不同输血策略（HLA/HPA供者库配合输注、血小板交叉配血试验配合输注、随机输注血小板）为血小板输注无效患者提供血小板,并比较其输血效果.结果 HLA/HPA供者库配合输注策略和血小板交叉配血试验配合输注策略获得相合供者率分别为100.0％、80.0％,两者差异无统计学意义（P＞0.05）;HLA/HPA供者库配合输注策略、血小板交叉配血试验配合输注策略和随机输注血小板策略的输注有效率分别为100.0％、62.5％、10.0％,前两者间及前两者分别与后者比,差异均有统计学意义（P＜0.05）;HLA/HPA供者库配合输注策略和血小板交叉配血试验配合输注策略的平均实验时间分别为（7.5＆#177;1.6）h、（13.3＆#177;6.1）h,两者差异均有统计学意义（P＜0.05）;平均费用分别为（365＆#177;47）元、（696＆#177;343）元,两者差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论 HLA/HPA供者库配合输注策略比血小板交叉配血试验配合输注策略更易寻找到相合的供者,平均实验时间更短,平均费用更少,输注有效率更高,输血效果良好,是为佛山地区血小板输注无效患者寻找相合血小板较为理想的输注策略,建议在临床输血中应用.     

新疆汉族人群血小板抗原1—5、15系统基因多态性分析

目的调查研究与血小板输注无效关系密切的人类血小板抗原(human platelet antigen,HPA)1—5及15系统基因在新疆汉族人群中的遗传多态性。方法采用聚合酶链-序列特异性引物(PCR-SSP)法对101例无血缘关系的新疆汉族血样进行HPA基因分型。结果新疆汉族HPA-1a、2a、3a、4a、5a、15a基因频率分别是0.9851、0.9208、0.5446、1、0.9505、0.4653,HPA-1b、2b、3b、4b、5b、15b基因频率分别是0.0149、0.0792、0.4554、0、0.0495、0.5347,新疆汉族HPA基因频率与维吾尔族人群相比,HPA-1a、1b基因频率差异具有统计学意义(P<0.05)。结论HPA-1、2、3、5、15系统均具有多态性,HPA-3、15系统具有高度多态性。     

海南黎族人血小板1—17抗原基因与随机输血不配合率研究

目的调查海南岛黎族人群血小板抗原(HPA)-1—17等位基因多态性及其特点,评估其在随机输血中血小板输注无效的风险。方法采用PCR-SSP方法对海南岛180名黎族人群做HPA-1—17基因分型检测>计算各系统对偶抗原不配合率。结果在海南黎族人群的HPA-1—17系统中,呈多态性分布的等位基因及其频率为HPA-2a(0.9972)、2b(0.0028),HPA-3a(0.4889)、3b(0.5111),HPA-5a(0.9667)、5b(0.0333),HPA-6a(0.9972)、6b(0.0028),HPA-15a(0.4250)、15b(0.5750);其余HPA-1、4、7—14、16、17等位基因均呈单线性分布。在HPA-3、15等位基因中出现bb纯合子基因型,频率分别为0.2834和0.3667;其余系统均未见bb纯合子基因型。随机输血中,海南岛黎族人群HPA不配合的发生率依次为:HPA-3(37.49%)、-15(36.93%)和-5(6.23%)。结论揭示了海南岛黎族人HPA-1—17基因型和等位基因频率的分布及特点;立足人群的随机血小板输注,只需检测供、受者HPA-2,-3、-5和-15基因相合,就可基本达到血小板匹配性输注。     

Establishment of platelet donor registry improves the treatment of platelet transfusion refractoriness in Guangzhou region of China

Platelet transfusion refractoriness (PTR) is the major complication of long‐term platelet supportive care. To improve the effectiveness of platelet transfusion therapy in PTR patients, we aimed to establish a platelet donor registry in our region (Guangzhou, China) by typing the human leukocyte antigen (HLA) and human platelet antigen (HPA). Blood donors (n = 864) from our population were genotyped for HLA‐A, HLA‐B and HPA systems by polymerase chain reaction amplification with sequence‐specific primer(PCR‐SSP) techniques. Using this cohort, we compared the results of platelet transfusions (matched vs. random) in 23 patients with PTR. Matched platelets were selected either by HLA antigen matching or by HLA antibody matching, as predicted by antibody specificity prediction (ASP) analysis. Significantly higher platelet recovery (PPR) values were obtained with HLA‐matched platelets in comparison with random platelets. No significant difference in PPR was observed between HLA matching and ASP methods. In two patients, platelet‐specific alloantibodies (alloabs) (anti‐HPA‐3b and anti‐HPA‐5b) were detected besides HLA class I alloabs. Transfusion with HLA‐ and HPA‐compatible platelets in both the patients resulted in significantly higher PPR when compared with HLA‐compatible platelet transfusion alone. In this study, we demonstrated that the establishment of an HLA‐ and HPA‐typed platelet aphaeresis donor registry is useful to improve the treatment outcome of PTR patients and to maintain a long‐term platelet transfusion strategy.     

应用PCR—SSP法分析中国人血小板抗原基因型频率

本研究建立了在同一PCR反应条件下同时检测人血小板抗原（human platelet antigen,HPA）系统HPA-1到HPA-5的PCR-SSP检测法。应用该方法分析了110例健康献血员的HPA-1到HPA-5的基因型,并以此为依据推算了中国人HPA-1到HPA-5各亚型的基因频率。结果表明HPA-1a和HPA-1b的基因频率分别为0.91和0.09,HPA-2a和HPA-2的基因频率分别为0.86和0.14,HPA-3a和HPA-3b的基因频率分别为0.60和0.40,HPA-4a和HPA-4b的基因频率分别为0.92和0.08,HPA-5a和HPA-5b的基因频率分别为0.85和0.15。结论：基因组DNA的血小板抗原PCR-SSP分型法切实可行,可广泛应用于临床血小板抗原的分型。     

Platelet transfusion refractoriness associated with HPA-1a (Pl(A1)) alloantibody without coexistent HLA antibodies successfully treated with antigen-negative platelet transfusions

BACKGROUND: Alloimmune-mediated refractoriness to platelet transfusion is most commonly due to antibody to HLA antigens in multiply transfused or multiparous patients. Published reports of poor transfusion response due to antibodies to platelet-specific antigens are rare and often confounded by the presence of coexistent antibodies against HLA antigens. CASE REPORT: A case is presented of a multiparous woman with acute myelogenous leukemia whose sole cause of transfusion refractoriness was antibody to platelet antigen HPA-1a. She responded dramatically to HPA-1a-negative platelet transfusion. CONCLUSION: This case provides strong serologic and clinical evidence that platelet transfusion refractoriness may result from antibodies to platelet-specific antigens.