CD34抗原阴性的造血干细胞

即往研究表明造血干细胞(HSC)存在于CD34~ 的细胞组群中,但最近研究发现在鼠和人体内存在有CD34~-的HSC。本文对CD34~-HSC的认识现况作了一简要的概述。     

CD34~-造血干细胞的研究进展

造血干细胞(HSCs)的表型一直是研究的重要课题。一般认为:CD34~ 是骨髓HSCs的标志之一。但近年研究发现:存在一CD34~- HSCs群,它能长期重建造血并可分化为CD34~ 细胞,可能是CD34~ 细胞的前身细胞。本文对CD34~- HSCs从发现、含量、表面分子表达、体外体内生物学特性及体外培养扩增条件方面的研究进展等作一综述。     

关于CD34-造血干细胞的新观点

最近的研究表明CD34-造血干细胞的存在,改变了传统的造血干细胞必须表达CD34抗原的观点.近来大量资料对其功能、与CD34+细胞的关系、表面标志以及基因表达等作了报道,现对此做一综述.     

CD34—造血干细胞的研究进展

造血干细胞（ＨＳＣｓ）的表型一直是研究的重要课题。一般认为：ＣＤ３４＾＋是骨髓ＨＳＣｓ的标志之一,但近年研究发现：存在－ＣＤ３４＾－ＨＳＣｓ群,它能长期重建造血并可分化主国ＣＤ３４＾＋细胞,可能是ＣＤ３４＾＋细胞的前身细胞。本对ＣＤ３４＾－ＨＳＣｓ从发现、含量、表面分子表达、体外体内生物学特性及体外培养扩增条件方面的研究进展等作一综述。     

造血干细胞移植后移植物抗宿主病患者CD158的表达

杀伤细胞抑制物受体 (Ｋｉｌｌｅｒｃｅｌｌｉｎｈｉｂｉｔｏｒｒｅｃｅｐｔｏｒｓ,ＫＩＲ)主要表达于ＮＫ和Ｔ细胞表面 ,可与靶细胞ＭＨＣⅠ类分子特异性识别并产生负性信号 ,抑制对靶细胞的细胞毒活性[1 ,2 ] 。已在小鼠和人同种造血干细胞移植 (ＨＳＣＴ)中观察到ＮＫ细胞、Ｔ细胞表达ＫＩＲ与移植物抗宿主病 (ＧＶＨＤ)有关[3 ,4] 。外周血造血干细胞移植 (ＰＢＳＣＴ)和脐血移植 (ＵＢＣＴ)中 ,尽管是供受者间ＨＬＡ全相合 ( Ａ、 Ｂ、 ＤＲ、 ＤＱ) ,ＧＶＨＤ仍是同种ＨＳＣＴ的主要障碍。因此 ,探讨ＨＬＡ Ｃ位点特异性识别分子ＣＤ1…     

造血微环境决定脐血造血干/祖细胞的早期分裂行为

目的 在特定生长因子的培养体系中，观察模拟造血微环境及粘附因素对人类脐血造血干/祖细胞早期分裂行为影响。方法 （1）应用流式细胞仪（FACS）分选CD34^ CD38^-细胞；（2）细胞培养体系中应用干细胞支持性基质AFT024及单一粘附因素纤维结合素（Fn)。并观察其对细胞早期分裂行为的影响。结果 （1）在联合生长因子的条件下，人类脐血CD34^ CD38^-细胞早期分裂呈现固定比例的静止，慢分裂，快分裂以及不对称分裂状态；（2）未观察到单一粘附因子Fn对其早期分裂行为的影响；（3）干细胞支持性基质AFT024所模拟的体外造血微环境可促使脐血造血干/祖细胞广泛增殖并更多地进行不对称分裂。结论 （1）CD34^ CD38^-细胞群体具有异质性。由具有不同增殖行为的亚群组成，在体外培养早期存在不对称分裂；（2）体外模拟的骨髓微环境AFT024基质滋养层较细胞因子及单一粘附因素能够更好地支持造血干/祖细胞的增殖并保持其自我更新的特性。     

CD34-细胞是否为更原始的造血干细胞

造血干细胞（ＨＳＣ）凭借其强大的自我更新和多系分化的能力而维持机体造血处于一相对恒定的状态,并持续一生。因此,ＨＳＣ被认为是进行造血组织移植后重建长期造血和免疫功能的关键成分,而且在某些疾病的基因治疗中是最理想的靶细胞。因而,如何有效地分离纯化造血干细胞始终是血液学研究领域的热点问题,这使得造血干细胞表型的研究显得尤为重要。目前,普遍认为人ＨＳＣ的表型为ＣＤ３４＋ＣＤ３８－Ｌｉｎ－ＨＬＡＤＲ－Ｔｈｙ１＋ｃｋｉｔ＋ＬＦＡ１－ＣＤ４５ＲＡ－ＣＤ７１－Ｒｈｏｄｕｌｌ。其中ＣＤ３４是早期造血细胞…     

关于CD34^-造血干细胞的新观点

最近的研究表明CD34^-造血干细胞的存在，改变了传统的造血干细胞必须表达CD34抗原的观点。近来大量资料对其功能、与CD34^ 细胞的关系、表面标志以及基因表达等作了报道，现对此做一综述。     

当前造血干细胞研究面临的挑战

在新千年到来的时刻 ,综观一下造血干 /祖细胞基础和临床研究当前面临的众多难题 ,会有益于探讨我国实验和临床血液学如何赶上国际先进水平的。造血干细胞究竟是CD3 4阳性还是阴性 ?近年来国际文献中有些报告发现CD34/Lin阴性细胞具有长期重建造血的活性 ,引起了广泛的注意。从发育生物学观点来看 ,CD34 Lin- 细胞来自CD34- Lin- 的论点是合理可信的。已定向发育为造血系统的干细胞 (即造血干细胞 )都来自尚未定向的胚胎中胚层干细胞 ,所以CD34 Lin- 细胞起源于CD34- Lin- 细胞。当干细胞分化为各系的祖细胞 ,出现髓 /淋巴各系的专一…     

外周血CD34+细胞计数预测造血干细胞收获量

目的了解外周血CD34+细胞计数与造血干细胞收获量的关系.方法用流式细胞仪Pro-COUNT方法检测了16例造血干细胞移植患者单采前外周血和采集物中CD34+细胞百分率、绝对数,用血细胞计数仪计数白细胞数.分析各项检测指标与CD34+细胞收获量(×106/kg体重)的相关性.结果外周血白细胞计数、CD34+百分率、CD34+细胞计数与CD34+细胞收获量的相关系数分别为-0.307,0.738,0.665.经相关系数t检验,单采前外周血白细胞计数与CD34+收获量无相关性(P＞0.05),而外周血CD34+百分率和绝对计数与CD34+收获量密切相关(P＜0.01).结论外周血CD34+计数可准确预测采集效果,确定干细胞采集时机.     

造血干细胞与基因治疗

国际上临床基因治疗从1991年开始,至今有关的基础研究已取得很大进展,但一些重大难题尚未解决。例如:基因转染的载体、目的基因体内转染的靶向性、目的基因在体内表达的水平和时间的调控以及有治疗效果基因的选择和寻找等。美国几例ADA基因治疗病例,其带有目的基因的细胞在病人体内维持时间太短。为了使目的基因能在病人体内长期或永久地表达,必须选一种能在体内自我更新和自我维持的永不消亡的细胞,作为目的基因的宿主细胞。于是,造血干细胞便成为最理想的目的基     

三七皂苷对人骨髓CD34+造血干/祖细胞的增殖分化作用

为了探讨三七皂苷 (PNS)对人骨髓CD34+ 造血干 /祖细胞的刺激增殖和诱导分化的作用 ,用DynalM 4 5 0CD34+ 免疫磁珠阳性选择法获取高纯度的人骨髓CD34+ 细胞 ,采用多向祖细胞 (CFU Mix)体外集落培养和流式细胞术检测细胞增殖与分化。结果显示 :经免疫磁珠阳性选择 ,从骨髓细胞收获的CD34+ 细胞获得率为 (1.0 3±0 .74 ) % ,流式细胞术分析纯度达到 86 % - 93%。PNS 10mg/L和 2 5mg/L能刺激CD34+ 细胞增殖 ,使CFU Mix集落生成增加 ,2 5mg/L的PNS对CFU Mix产率提高 (34.7± 16 .0 ) % (P <0 .0 1) ,是促进造血的最适浓度 ;PNS2 5 ,5 0和 10 0mg/L时 ,能诱导CD34+ 细胞向粒系细胞分化 ,粒系表面标记CD33+ 和CD15 + 的细胞百分比均明显高于无PNS的对照组 ,而红系细胞表面标记CD71+ 和G A+ 细胞百分比则无明显变化。结论 :PNS对CD34+ 造血干 /祖细胞不但具有显著的刺激增殖作用 ,而且能够诱导其向粒系细胞定向分化的效应     

人类胚胎干细胞向造血细胞和内皮细胞诱导分化的初步研究

胚胎干(ES)细胞是一种能够自我更新、长期增殖并且具有多向分化潜能的干细胞。近年来的研究表明，小鼠胚胎干细胞体外分化能够模拟体内造血发育的过程。为探讨诱导人类胚胎干细胞向造血细胞和内皮细胞的分化的方法．将人类胚胎干细胞去饲养层，形成拟胚体(EB)培养3天后消化；采用基质细胞条件培养基联合细胞因子的诱导体系。诱导8天后，种植到半固体培养基中培养7—14天。应用RT—PCR检测诱导细胞flk-1、BMI-1、scl、Zeta—globin造血相关基因的表达；流式细胞术检测KDR、CD34等造血细胞表面抗原的表达；免疫组织化学检测集落细胞的表面标记。结果表明：①半固体培养基中出现20—30个细胞组成的集落，集落细胞再种植仍然能够形成大小相似的细胞集落；另外一些较大的细胞集落中CIM5细胞呈阳性．．②部分细胞贴壁生长形成内皮细胞样集落，Ⅷ因子、KDR、UEA检测均为阳性．．③在ES细胞内有少量flk-1、BMI-1表达，而scl、Zeta—globin基因不表达；自发分化3天的EB可见flk-1、BMI-1表达上调；消化形成单细胞并诱导4天，检测到flk-1、BMI-1、scl、Zeta—globin基因的表达。第8天仍然检测到flk-1、BMI-1、scl基因的表达，Zeta—globin基因不表达。④诱导8天的细胞中表达flk-1阳性细胞的率为9．8％．CD34阳性细胞占总细胞量的16．8％，对照组ES细胞阳性率分别为0．04％和0．16％；EB自发分化阳性率分别为0．36％和1．16％。结论：采用基质细胞条件培养基联合细胞因子的培养体系，可诱导人类胚胎干细胞向造血细胞及内皮细胞分化。     

间充质干细胞在造血调控中的作用

间充质干细胞（MSC）作为造血微环境主要细胞成分的来源，具有自我更新和多向分化的潜能，通过与造血细胞直接接触、分泌细胞外基质及多种细胞因子维持造血微环境结构和功能的完整性，进而实现对造血的精细调控。本文结合近几年来国内外MSC的研究进展，就MSC在造血调控中的作用，诸如MSC分泌多种支持造血的细胞因子，MSC表达与造血细胞相互作用的黏附分子，联合移植MSC对造血重建的支持作用及其临床应用前景作一综述。     

体外诱导人类诱导性多能干细胞分化为造血干 / 祖细胞的研究简

本研究探讨体外诱导人诱导性多能干细胞（induced pluripotent stem cell,iPSC）分化为造血干/祖细胞的能力.在体外用小鼠骨髓基质细胞OP9与人类iPSC共培养的方法,将iPSC诱导分化为造血干/祖细胞;用流式细胞术检测造血干/祖细胞表面标志物的表达水平;用实时定量PCR检测分化过程中iPSC及造血干/祖细胞的相关基因mRNA表达水平的变化;用免疫磁珠法分离CD34＋造血干/祖细胞并进行半固体集落形成实验检测细胞的集落形成能力.结果表明,iPSC与OP9细胞共培养诱导造血分化的第4天即可观察到iPSC形态变化;流式细胞术检测显示,分化得到的细胞表达已知的造血干/祖细胞相关表面标志物CD34和CD43分子.在体外分化过程中多能性的标志基因Oct4的表达逐渐下降,造血相关转录因子Gata-2的表达逐渐升高,而Runx-1的表达量则呈波浪式变化,CD34表达量逐渐升高.集落培养14 d能够得到红系集落（CFU-E）,粒系集落（CFU-G）,巨核系集落（CFU-M）,粒-巨核系集落（CFU-GM）和混合系集落（CFU-GEMM）.结论：iPSC细胞能够在体外通过与OP9细胞共培养分化为造血干/祖细胞.     

异基因造血干细胞移植后树突状细胞重建动力学

树突状细胞（DC）作为体内最重要的抗原呈递细胞,其移植后重建在移植合并症,如移植物抗宿主病（GVHD）、感染以及复发中发挥着重要作用,成为移植免疫领域研究的热点问题之一。本文就异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）后DC重建规律及其与移植合并症的关系,以及影响DC重建过程的正负性因素作一综述。     

造血干细胞的基因转移及其表达的实验研究

为探索一种安全、有效、简易的非病毒基因转移策略用于介导造血干细胞基因转移的可行性,本研究利用商品化的脂质体将两个标志基因(Neo R和Lac Z)共转导造血细胞。通过G418筛选、富集转导阳性细胞,观察了外源基因在小鼠原代骨髓细胞的基因转移率及其表达的稳定性。结果显示:通过脂质体介导,外源基因在小鼠骨髓细胞可获得有效的瞬时和稳定的表达。同时,经G418筛选,转导阳性细胞可得到明显的富集。提示利用脂质体这一非病毒载体个导造血干细胞基因转移的可行性。     

造血干细胞移植后患者间充质干细胞增殖功能的研究

为了研究造血干细胞移植（hematopoietic stem cell transplantation,HSCT）后造血植活患者中骨髓源的间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）的增殖能力,本研究选择造血干细胞移植后临床植活的34例患者作为研究对象,抽取34例患者及30例正常健康供者骨髓,进行微环境成纤维细胞集落形成单位（colony-formingunit-fibroblast,CFU-F）集落培养,同时对MSC进行培养传代,记录MSC的融合时间及传代总数;利用流式细胞术（flowcytometry,FCM）检测患者MSC表面抗原的表达;将此34例患者培养结果与30例正常对照结果进行比较统计。另外对其中骨髓加外周血加第二供者脐血移植的10例患者与骨髓加外周血移植的19例患者的MSC体外扩增指标进行比较统计。结果表明：34例患者中有31例（91.1%）患者的MSC原代培养能达到贴壁融合,有1例（2.9%）达到部分融合,2例（5.9）未达融合;与正常对照相比,患者的MSCs融合时间明显延长,传代总数明显减少,CFU-F数明显降低,即其MSC的体外扩增能力明显受损。骨髓加外周血加第二供者脐血移植的10例患者与骨髓加外周血移植的19例患者相比,MSC达到融合的时间短,体外传代总数多,CFU-F计数高。结论：移植后患者的MSC呈明显受损状态,加用第二供者脐血细胞能部分改善患者MSC体外增殖功能。