调节性T细胞在免疫性血小板减少症发病与治疗的研究进展

免疫性血小板减少症(ITP)是一种常见的自身免疫性出血性疾病,以皮肤、黏膜出血和血小板数量减少,骨髓巨核细胞正常或增多伴成熟障碍为特征。其发病机制尚未完全明确,除体液免疫外,细胞免疫异常的作用受到越来越多学者的关注。调节性T细胞(Treg)是存在于正常人外周血和脾脏中的一类特定亚群的T细胞,CD4+CD25+Treg细胞是Treg家族中研究最多也最主要的一群,近年来研究表明Treg细胞在ITP的发病机制中起重要作用,本文就Treg的概述、与Treg有关的ITP临床研究展开综述。     

儿童免疫性血小板减少症患者外周血B淋巴细胞亚群变化的研究

目的 探讨儿童免疫性血小板减少症患者(immune thrombocytopenia,ITP)外周血中CD38,CD27,CD19表达阳性的B淋巴细胞亚群的变化及临床意义。方法 选取2017年1月～12月中山大学孙逸仙纪念医院收治的初诊ITP患儿21例为初诊未治疗组(untreated ITP,U-ITP),完全缓解ITP患儿30例为完全缓解组(remission ITP,R-ITP)及同期健康体检儿童26例为健康对照组(normal control,NC),运用流式细胞术对其外周血B淋巴细胞亚群进行检测并与ITP患儿的PLT计数进行相关性分析。结果 外周血总CD19+B淋巴细胞比例:U-ITP组显著高于R-ITP组和NC组(F=7.543,P<0.01)。外周血CD19+CD27+CD38-记忆性B细胞占CD19⁺B细胞百分率:U-ITP组显著高于R-ITP组和NC组(F=8.876,P<0.001)。CD19⁺CD27-CD38^-初始B细胞占CD19⁺B细胞百分率:U-ITP组显著低于R-ITP组)和NC组(F=5.058,P<0.01)。CD19⁺CD27⁺CD38⁺浆母细胞百分率:U-ITP组显著高于R-ITP组和NC组(F=9.588,P<0.001),而R-ITP组与NC组比较,B淋巴细胞各分群差异均无统计学意义(F=0.842～1.258,均P>0.05)。PLT计数与总CD19⁺ B细胞百分率呈负相关(r=-0.318,P=0.007),与CD19⁺CD27⁺CD38^-记忆性B细胞百分率呈负相关(r=-0.444,P=0.000),与CD19⁺CD27^-CD38^-初始B细胞百分率呈正相关(r=0.416,P=0.000),与CD19⁺CD27⁺CD38⁺浆母细胞百分率呈负相关(r=-0.442,P=0.000)。结论 B淋巴细胞亚群在ITP患儿体内分布存在异常,其检测能够为ITP患儿临床疾病监测与判断预后提供重要的指导作用。     

外周血miRNA-150与CD19+CD24hiCD38hiBreg细胞在儿童免疫性血小板减少症中的变化及意义

目的探讨外周血miRNA-150与CD19⁺CD24^hiCD38^hiBreg细胞在儿童免疫性血小板减少症（ITP）中变化及意义。 方法选取南通大学附属妇幼保健院在2017年3月至2020年9月接受诊治的ITP患儿93例,其中新诊断ITP患儿（病程＜3个月）56例,持续性ITP患儿（病程3~12个月）37例。另选取本院同期健康体检儿童50例作为对照组。采用实时荧光定量PCR反应测定外周血miRNA-150表达,采用流式细胞术测定CD19⁺CD24^hiCD38^hiBreg细胞表达。 结果ITP患儿外周血miRNA-150表达高于对照组,且CD19⁺CD24^hiCD38^hiBreg细胞表达率低于对照组（P＜0.05）。持续性ITP组外周血miRNA-150表达高于新诊断ITP组,而CD19⁺CD24^hiCD38^hiBreg细胞表达率低于新诊断ITP组（P＜0.05）。全反应（CR）组外周血miRNA-150表达低于反应（R）组和无效（NR）组,且R组低于NR组（P＜0.05）。CR组CD19⁺CD24^hiCD38^hiBreg细胞表达率高于R组和NR组,且R组高于NR组（P＜0.05）。外周血miRNA-150对ITP诊断敏感度和特异度分别为78.18%和60.53%;CD19⁺CD24^hiCD38^hiBreg细胞表达对ITP诊断敏感度和特异度分别为83.63%和71.05%。miRNA-150与PLT呈负相关（r=-0.738）,而CD19⁺CD24^hiCD38^hiBreg细胞与PLT呈正相关（r=0.796）。 结论外周血miRNA-150在ITP患儿中高表达,而CD19⁺CD24^hiCD38^hiBreg细胞在ITP患儿中低表达,且外周血miRNA-150和CD19⁺CD24^hiCD38^hiBreg细胞表达与疗效密切相关。     

调节性T细胞与免疫性血小板减少症

调节性T细胞(regulatory T cells,Tregs)在维持机体自身免疫耐受平衡状态中起重要作用.免疫性血小板减少症(immune thrombocytopenia,ITP)患者不仅Tregs数量减少,而且伴有明显的功能下降.但与其相关的细胞因子和分子机制等尚不明确.临床常用的治疗手段对Tregs的数量和功能...     

免疫性血小板减少症发病机制的研究进展

免疫性血小板减少症是一种以PLT减少为主的自身免疫性出血性疾病.目前发病机制仍不十分明确.体液免疫及细胞免疫异常在ITP发病中起重要作用.笔者主要就与ITP发病相关的分子拟态,T细胞异常,B细胞异常,抗原提呈细胞,异常细胞因子模式和遗传学异常等机制进行综述.     

Th17细胞及白介素17在原发性免疫性血小板减少症中的表达和临床意义

本研究检测原发性免疫性血小板减少症(ITP)患者外周血中Th17细胞比例和IL-17水平的变化,并探讨其临床意义。应用流式细胞术和ELISA方法分别检测48例ITP患者及28例对照组外周血中Th17细胞比例及IL-17水平。结果显示,ITP患者Th17细胞比例为(1.40±1.35)%,较对照组升高(P<0.05),Th17细胞比例在糖皮质激素治疗组低于未使用糖皮质激素治疗组(P<0.05)。ITP患者Th17分泌的IL-17量为(19.624±5.187)pg/ml,较正常对照组升高(P<0.05),但IL-17水平在糖皮质激素治疗组与未使用糖皮质激素治疗组的差异无统计学意义。结论:Th17细胞在ITP发病中可能发挥一定作用,糖皮质激素可能通过抑制Th17细胞发挥治疗作用。     

血小板抗体和T细胞亚群检测在诊断原发免疫性血小板减少症中的意义

目的探讨血小板抗体和T细胞亚群检测在诊断原发免疫性血小板减少症(ITP)中的意义。方法回顾性分析2017年3月至2018年5月广元市第二人民医院收治的143例免疫性血小板减少症患者的临床资料,其中ITP患者93例(ITP组),继发免疫性血小板减少症(sITP)患者50例(sITP组)。选取同期在该院体检的健康志愿者50例为对照组。采用流式细胞仪检测患者血小板抗体(PAIgG、PAIgM、PAIgA)和T细胞亚群(CD3~+、CD4~+、CD8~+、CD4~+/CD8~+)水平。采用受试者工作特征曲线(ROC曲线)评价血小板抗体和T细胞亚群诊断ITP的作用。结果 ITP组患者PAIgG、PAIgM、PAIgA均明显高于sITP组和对照组,差异有统计学意义(P0.05);CD3~+、CD4~+、CD4~+/CD8~+水平明显低于sITP组和对照组,差异有统计学意义(P0.05),而CD8~+水平明显高于sITP组和对照组,差异有统计学意义(P0.05)。ITP组患者PAIgG、PAIgM、PAIgA异常率均明显高于sITP组和对照组,差异有统计学意义(P0.05);CD3~+、CD4~+、CD8~+、CD4~+/CD8~+异常率均明显高于sITP组和对照组,差异有统计学意义(P0.05)。血小板抗体联合T细胞亚群诊断ITP的ROC曲线下面积为0.932,灵敏度为86.5%,特异度为87.5%。结论 ITP患者存在血小板抗体升高和T细胞亚群紊乱的现象,联合检测血小板抗体和T细胞亚群能够更加准确地反映患者病情,提高诊断效能,为疾病的临床治疗提供更好的支持。     

Th17细胞在原发免疫性血小板减少症动物模型中的作用

目的 探讨Th17细胞在原发免疫性血小板减少症(ITP)中的作用。方法 采用腹腔注射大鼠抗小鼠CD41抗体(MWReg30)的方法诱导BALB/c小鼠产生ITP,之后分离外周血和脾单个核细胞,采用实时定量PCR法检测Th17细胞相关转录因子及细胞因子mRNA的表达水平,同时采用流式细胞术检测外周血和脾细胞内Th17细胞的比例。结果 ITP模型小鼠外周血及脾单个核细胞Th17细胞百分比分别为(1.410±0.307)％和(0.220±0.045)％,明显高于正常对照小鼠[分别为(0.457±0.089)％和(0.064±0.024)％](P值分别为0.007、0.006)。同时,ITP模型小鼠脾单个核细胞中IL-17F、IL-17A和IL-6 mRNA相对表达量分别为2.203±0.427、2.981±0.860和1.949±0.423,明显高于对照组(分别为1.099±0.250、1.005±0.253和0.990±0.110)(P值均＜0.05)。外周血有核细胞IL-21 mRNA相对表达量为1.857±0.533,明显高于正常对照(0.824±0.190)(P＜0.05)。结果 显示IL-17F和IL-17A的表达呈明显正相关性(r=0.934,P=0.000),IL-17F和IL-17A与IL-6也具有相关性(r =0.598,P=0.001;r=0.619,P=0.000)。结论 Th17细胞在ITP发病过程中起重要作用,它至少参与了血小板的清除。     

Breg细胞与Treg细胞在免疫性血小板减少症患者外周血中的表达及临床意义

目的 研究免疫性血小板减少症(ITP)患者治疗前后外周血中调节性B细胞(Breg细胞)、调节性T细胞(Treg细胞)的表达及与白细胞介素(IL)-10、肿瘤坏死因子 α(TNF-α)的相关性,探讨以上指标在ITP患者发病中的免疫调节机制.方法 选取2017年3月至2019年12月该院血液病科收治的初诊患有ITP的住院患...     

TRAIL在原发免疫性血小板减少症患者外周血单个核细胞中的表达及临床意义

目的：探讨原发免疫性血小板减少症（primary immune thrombocytopenia,ITP）中TRAIL的表达及其在发病机制中的作用。方法使用Ficoll密度梯度离心法,收集28例ITP患者和30例健康对照的外周血单个核细胞（PBMC）。采用实时荧光定量PCR检测TRAIL基因的表达,采用 ELISA方法检测血清中细胞因子TNF-α,IFN-γ,IL-4和 IL-10的量,并分析TRAIL与患者TNF-α,INF-γ,IL-10和血小板计数的相关性。结果与健康对照组相比,ITP患者 PBMC中 TRAIL表达显著增高（2.80±0.43 vs 1.00±0.24,t＝19.72,P＜0.001）。与健康对照组相比,ITP患者血清中IFN-γ和TNF-α升高（52.43±11.04 pg/ml vs 23.26±8.15 pg/ml;69.14±10.89 pg/ml vs 36.14±13.17 pg/ml,t＝10.36～11.50,P值均＜0.001）,IL-10降低（11.18±6.13 pg/ml vs 33.28±9.85 pg/ml,t＝10.17,P＜0.001）,IL-4的变化差异无统计学意义（35.75±12.52 pg/ml vs 40.16±14.26 pg/ml,t＝1.25,P＞0.05）。且ITP患者TRAIL的表达与血清中IFN-γ,TNF-α正相关（r＝0.432,0.541,P 值均＜0.05）,与 IL-10,血小板计数负相关（r＝-0.424,-0.553,P 值均＜0.05）。结论TRAIL可能通过介导细胞因子免疫紊乱,参与了 ITP的发生与发展,这为进一步研究 ITP的免疫干预治疗提供了新的线索和思路。     

天然调节性T细胞的调节因素研究进展

天然CD4^＋CD25^＋调节T细胞来源于胸腺,通过直接接触机制抑制效应细胞的增殖,调节自身免疫和移植免疫。本文主要综述了影响天然调节T细胞分化、发育和功能的主要因素和可能机制。Foxp3是Treg的标志,检测其表达可以作为判定Treg的方法。IL-2主要通过IL-2Rα及STAT5途径促进Treg的增殖活化。膜型和分泌型TGF-β具有不同功能,膜型TGF-β1可能主要介导Treg的抑制功能,而分泌型TGF-β可能主要促进Treg的增殖。树突状细胞由于作用途径不同,对Treg既有正调节,也有负调节。CTLA-4途径可能通过作用于Treg自身、DC或效应细胞直接或间接地调节Treg的功能。     

Toll样受体2在原发免疫性血小板减少症中的作用研究

本研究通过检测原发免疫性血小板减少症（ITP）患者外周血淋巴细胞中TLR2的表达,同时评价体外活化TLR2对炎症因子分泌的影响,旨在探讨TLR2在ITP发病机制中的作用.39例ITP患者及21例正常对照者纳入本研究.应用实时定量PCR及流式细胞术检测外周血单个核细胞（PBMNC）中TLR2的表达.采用pam3CSK4体外刺激活化PBMNC,48 h后检测细胞培养上清中IL-6及TNF-α的浓度.结果显示,活动期ITP患者PBMNC中TLR2 mRNA的表达显著高于正常对照（3.561±0.741 vs 1.750±0.314） （P ＜0.05）,而缓解组（2.333±0.448）和正常对照之间TLR2 mRNA差异无统计学意义（P＞0.05）.流式细胞术分析显示,TLR2在正常对照及ITP患者T、B细胞表面不表达,但表达于所有单核细胞表面.进一步体外实验发现,TLR2活化能诱导ITP患者PBMNC中IL-6（1644±634.0 vs 4111±525.2 pg/ml）及TNF-α （75.37±22.31 vs 326.0±109.9 pg/ml）的表达（P均＜0.05）,但仅对正常对照PBMNC中IL-6（2119±636.9 vs4671±315.9 pg/ml） （P＜ 0.05）的分泌有促进作用.结论：TLR2mRNA在ITP患者PBMNC中高表达,这些高表达的TLR2可能通过促进炎症因子的分泌加快ITP疾病进程.     

湿疹患者外周血CD4^＋CD25^＋FOXP3^＋调节性T细胞和血清IL-4，IL-10，TGF—β检测及临床研究

目的通过对湿疹患者外周血单个核细胞（PBMC）中转录调节因子3（FOXP3）阳性的天然调节性T细胞（nTreg,CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋）表达率及其血清白介素4（IL-4）、白介素10（IL-10）、转化生长因子β（TGF—β）水平的检测结合心理评定并与对照组进行对比分析,探讨其在湿疹发病过程中的作用及患者发病的可能机制。方法应用流式细胞术（flow cytometry,FCM）和ELISA法对湿疹患者（n=32）、对照组（n=32）分别进行PBMC中nT表达率及血清IL-4,IL-10,TGF-β水平进行检测,同时应用症状自评量表（SCL-90）进行心理评定。结果湿疹患者PBMC中nTreg细胞表达率（％）为4．86±1.69,明显低于对照组6．10±2．21;血清IL-4（96．21±20．07pg／ml）,IL-10（12．6±1．95pg／ml）含量高于对照组相应检测值53．93±13．10,9．82±1．34pg／ml;TGF-β 15．76±3．11ng／ml含量明显低于对照组（24．39±4．44ng／ml）,各项检测指标两纽之间比较差并均有统计学意义（P〈0．01）,患者心理健康状态与对照组比较也有显著性差异。结论nTreg数量降低减弱了对Th2细胞的抑制作用是湿疹患者发病的关键环节,Th1／Th2失衡、细胞因子分泌异常在疾病的发生发展中起重要作用,是湿疹发病和慢性化的重要原因,加强对湿疹患者的心理疏导以减少对患者精神、躯体造成的伤害,提高疗效具有重要临床意义。     

慢性乙肝患者体内HDL和HBV DNA水平相互关系的研究

目的检测慢性乙肝患者血清HBV DNA和HDL水平变化的相互关系,检测不同HDL水平的乙肝患者其体内IL-10及CD4＋CD25＋T细胞的水平,以期进一步揭示HDL对HBV DNA水平的影响以及影响机制。方法荧光定量PCR方法检测我院152例慢性乙肝患者血清HBV-DNA的水平,全自动生化分析仪检测血清HDL水平,ELISA法检测患者血清中IL-10的水平,流式细胞法检测患者外周血中CD4＋CD25＋T细胞的水平。结果血清HBV DNA与HDL、IL-10及CD4＋CD25＋T细胞的水平均呈负相关,HDL的水平和IL-10、CD4＋CD25＋T细胞的水平呈正相关。结论在慢性乙肝患者体内,HDL具有抑制HBV DNA复制的作用,HDL的抗病毒作用很可能是通过诱导T细胞分化为CD4＋CD25＋T细胞,并通过该细胞产生大量IL-10来达到其抗病毒的作用。     

干扰素治疗慢性乙肝患者外周血调节性T细胞动态变化和临床意义

目的探讨干扰素抗病毒治疗过程中慢性乙肝患者外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞（CD4＋CD25＋Treg）的变化及其临床意义。方法采集干扰素抗病毒治疗的CHB患者46例外周血,在治疗前及治疗后12、24、36、48周,停药后24周时,分别以流式细胞仪检测外周血CD4＋CD25＋Treg比例,实时荧光定量RT-PCR检测血清HBV-DNA载量,酶联免疫吸附法检测HBV标志物,全自动生化分析仪检测ALT水平。结果在46例CHB患者中,完全应答的13例患者CD4＋CD25＋Treg频率在12、24、36、48周及停药后24周时分别为（4.16±0.64）%、（3.98±0.75）%、（3.70±0.55）%、（3.44±0.48）%、（3.07±0.48）%,呈逐步下降趋势,明显低于治疗前（5.73±0.62）%（P〈0.01）。部分应答的18例患者CD4＋CD25＋Treg频率在12、24、36、48周及停药后24周时分别为（4.98±0.62）%（、4.50±0.54）%、（4.10±0.64）%、（4.02±0.64）%（、3.82±0.47）%,呈逐步下降趋势,明显低于治疗前（5.84±0.68）%（P〈0.01）。无应答的15例患者CD4＋CD25＋Treg频率较治疗前无明显变化。完全应答、部分应答组患者Treg频率在12、24、36、48周及停药后24周时与无应答组比较,差异有统计学意义（P〈0.01）。治疗24、48周,停药后24周时,HBeAg阴转率分别为10.8%、26.1%、28.3%,发生HBeAg血清学转换者在治疗12周时CD4＋CD25＋Treg比例明显下降。结论本实验初步认为,干扰素抗病毒治疗过程中及治疗后,有应答的CHB患者的外周血CD4＋CD25＋Treg频率下降。治疗早期CD4＋CD25＋Treg比例下降的患者HBeAg血清学转换率可能更高。     

免疫性血小板减少症患者骨髓滤泡辅助性T细胞数量及功能的研究

本研究检测免疫性血小板减少症（ITP）患者骨髓滤泡辅助性T细胞（Tfh细胞）数量及功能,探讨Tfh细胞在ITP发病机制中的作用。选取2013年1月至10月在天津医科大学总医院血液科就诊的21例初治ITP患者、20例恢复期ITP患者及18名正常对照者,采用流式细胞术检测骨髓Tfh细胞数量、Tfh细胞功能相关分子CD40L、ICOS、IL-21的表达,采用RT-PCR技术检测BMMNC转录因子BCL-6mRNA相对表达水平;并将各项指标与疾病严重程度进行相关性分析。结果表明,ITP初治组骨髓CD4＋CXCR5＋／CD4＋细胞比例[（5．532±2．599）％]高于恢复期组[（4．064±2．026）％]和对照组[（4．048±1．413）％]（P〈0．05）;ITP初治组骨髓CD4＋CXCR5＋ICOS＋／CIM＋CXCR5＋细胞比例[（14．586±8．561）％]高于恢复期组[（12．884±10．161）％]和对照组[（7．487±5．176）％],初治组与对照组相比差异有统计学意义（P〈0．05）;ITP初治组和恢复期组骨髓CIM＋CXCR5＋CD40L＋／CD4＋CXCR5＋细胞比例[（15．309±10．756）％]及[（18．242±12．243）％],高于对照组[（8．618±5．719）％]（P〈0．05）;ITP初治组和恢复组骨髓CD4＋CXCR5＋IL-21＋／CD4＋CXCR5＋细胞比例1（58．560±26．285）％]及[（57．035±30．936）％]高于对照组[（36．289±24．868）％]（P〈0．05）;初治组、恢复组、对照组BCL-6mRNA的表达水平分别为（1．407±0．264）、（1．149±0．217）和（0．846±0．157）,差异均有统计学意义（P值均〈0．05）。结论：Tfh细胞在ITP患者的骨髓中数量增加,功能分子表达增多,功能亢进,在ITP发病机制中可能有重要作用。     

免疫性血小板减少症患者树突状细胞的分布特点及其活化状态的研究

免疫性血小板减少症（ITP）患者树突状细胞（DC）存在异常。本研究旨在分析ITP患者DC的分布特点及其活化状态,以进一步明确ITP患者DC异常的机制。将ITP患者分为初诊纽、难治组、有效组（完全反应＋有效）,流式细胞术检测各组患者外周血、骨髓和／或脾脏中髓系树突状细胞（mDC）,浆细胞样树突状细胞（pDC）的分布比例,各部位mDC、pDC细胞分化程度、成熟mDC和pDC抗原CD80、CD86的表达。结果表明,各组患者各部位mDC比例均较pDC高,难治组各部位mDC、pDC比例较初诊组、有效组高,且难治组中脾脏mDC比例明显高于其他部位;各组pDC比例各部位差别不明显;各组患者各部位mDC、pDC的CD86的表达较CD80高,各组mDC、pDC的CD80的表达比例均较低,各部位差别不明显;难治组各部位mDC、pDC的CD86表达较初诊组、有效组高,且难治组中脾脏mDC的CD86表达明显高于其他部位。结论：ITP患者mDC、pDC的分布存在异常,脾脏mDC分布比例较高,分化较成熟,脾脏mDC可能与ITP发病较为密切。