TRIzol法与磁珠法用于丙型肝炎病毒RNA定量检测的比较

目的 比较不同核酸提取方法TRIzol法与磁珠法对丙型肝炎病毒核酸（HCV RNA）定量检测结果的影响。 方法 收集117例丙型肝炎病毒感染阳性患者的血清及其基因分型信息。分别采用TRIzol法与磁珠法提取患者血清样本的HCV RNA,定量PCR检测提取HCV RNA的病毒载量,比较两种提取方法HCV RNA检测结果的差异性。 结果 定量PCR检测结果显示TRIzol法和磁珠法具有良好的线性相关性：y=0.978x+0.063（R2=0.973）。Bland-Altman统计分析显示TRIzol法的检测平均值略低于磁珠法,但无明显统计学差异（P>0.05）. 基因型分析显示1b、2a、3a和6a 亚型之间无显著性差异（P>0.05）.结论TRIzol提取法的HCV定量检测结果和磁珠法相当,且标本用量更少,成本低廉,可在国内广泛使用,且能更大范围地应用在试剂盒的开发和HCV RNA临床检测中。     

两种HCV RNA荧光定量试剂盒检测丙型肝炎病毒的比较分析

目的 比较分析两种丙型肝炎病毒（HCV）核酸定量检测试剂盒的临床性能.方法 随机抽取63例临床血清样本进行平行检测,分别采用HCV磁珠法试剂和对照试剂检测血清中RNA水平.结果 对照试剂检测63例临床样本中有22例阳性,41例阴性;磁珠法试剂检测63例样本中有27例阳性,36例阴性,两种试剂的阳性样本具较好的一致性（P=0.000）,磁珠法试剂与对照试剂的定量检测结果具有线性相关性（r=0.935,P＜0.05）.结论 两种试剂都可以应用于HCV临床检测,磁珠法试剂具有更高的灵敏度,是一种比较理想的HCV RNA定量检测试剂.     

HCV RNA定量检测试剂的临床应用

目的:探讨HCV RNA定量检测试剂的临床应用效果。方法:通过和市场上广泛使用的柱提取试剂比实验,对一种丙型肝炎病毒磁珠法核酸提取荧光定量PCR检测试剂的临床使用进行评估。结果:①浓度在5.00E+03～5.00E+06 IU/mL的样本,两种试剂的定量结果与理论靶值均具有很好的对应性,具有较好的重复性和精密度;对于1.00E+03IU/mL以下的样本,磁珠法的定量结果重复性好,定量准确;而柱提取法大部分均未能检出。②对于2种方法检测的339例临床样本,中高病毒载量组柱提取法检测>5.00E+02IU/mL有147例,两种试剂定量结果基本一致,相关性r为0.9413。3 339例临床血清样本中5例样本磁珠法检测为阳性,而柱提取法检测为阴性,P<0.01,二者有显著性差异。这5例样本,丙肝肝炎抗体检测均为阳性。结论:①对于中高病毒载量的样本,两种试剂均具有良好的检测效果;②磁珠法对比柱提取法在低病毒载量区域,灵敏度更高,同时操作相对简单,不易出现污染与脱靶,具有较高的临床应用价值。     

山东地区丙型肝炎病毒基因型及相关因素分析

目的 探索山东地区丙型肝炎病毒(HCV)基因分型及其相关关系.方法 采用基因芯片技术检出了448例HCV感染者的血清HCV基因型,同时检测了其中388例血清HCV RNA的含量,并对HCV基因型与HCV感染者的性别、年龄和HCV RNA含量进行了相关性分析.结果 检测到4种基因亚型(1a、1b、2a、3b),呈8种组合;其中1b和2a亚型多见,分别占61.2%(274例)和32.8%(147例).Logistic多因素分析表明,基因1b型与HCV高病毒载量独立相关.结论 山东地区HCV基因分型以1b型为主,且与HCV高病毒载量相关.     

丙型肝炎患者HCV病毒基因型与抗体浓度分布的关系

目的:探讨丙型肝炎患者HCV基因型与抗体浓度分布的关系。方法:选取抗HCV阳性标本168份,采用荧光定量PCR法进行HCV RNA检测,并进行基因型分析,探讨不同基因型患者的抗体浓度分布规律。结果:不同基因型的抗体浓度差异无统计学意义(P>0.05),在HCV RNA载量方面,1a型HCV RNA载量最低,其他基因型之间差异无统计学意义(P>0.05);1b、2a、6a型患者的抗体浓度分布相对均匀,1a型患者抗体浓度主要集中在P50,P75区域;3a、3b型患者抗体浓度主要集中在P25,P50区间。结论:丙型肝炎患者病毒基因型同抗体浓度分布之间存在一定的相关性,但由于HCV基因变异性较高,本研究纳入的样本数量有限,研究结果有待进一步验证。     

北京地区慢性丙型肝炎患者血清HCV-RNA定量检测与基因分型的研究

目的:探讨北京地区慢性丙型肝炎患者血清HCV-RNA定量检测和HCV基因分型的相关性。方法:用荧光定量PCR法检测310例北京地区慢性丙型肝炎患者血清HCV-RNA标本,应用RT-PCR和型特异性引物法对310例标本进行基因分型。结果:在310例标本中,HCV1b型有217例(70%),2a型74例(23.9%),2b型8例(2.6%),1b/2a混合型5例(1.6%),未分型6例(1.9%)。对299例HCV单基因型患者的基因型与性别的相关性进行统计学分析,结果显示没有统计学差异(χ2=0.028,P<0.978)。299例患者的首次血清病毒RNA定量测定与基因型之间有明显的统计学差异(F=16.525,P<0.01)。结论:北京地区丙型肝炎病毒感染以1b型为主,基因型在性别上的分布没有差异。治疗前HCV基因型与体内病毒的含量密切相关。     

乌鲁木齐地区82例丙型肝炎患者基因型分布研究

目的 观察乌鲁木齐地区丙型肝炎患者的丙型肝炎病毒(HCV)基因型分布情况,了解HCV基因型与民族、年龄的关系.方法 在82份抗HCV抗体和HCV RNA均阳性的血清标本中,分别提取HCV RNA,通过PCR-反向点杂交法进行基因分型检测.结果 82例血清标本检测示,基因分型率95.12%,其中1型占60.26%(47/78),2型占20.51%(16/78),3型占16.67%(13/78), 6型占2.56%(2/78).≤40岁和＞40岁基因型总体分布上存在差异(P＜0.05),维吾尔族、汉族间基因型分布无统计学差异.结论 乌鲁木齐地区流行的HCV基因型为1(1b)、2(2a)、3(3a、3b)、6(6a)4型,1型为流行的主要基因型, 2、3、6型均占相当比例,初步说明乌鲁木齐地区HCV流行的基因型呈现多样性.     

张掖市2008-2009年部分人群HCV感染现状分析

目的 通过调查张掖市部分不同性别、不同年龄人群的HCV感染现状及血清中的病毒载量,以研究该地区HCV感染及病毒复制状况.方法 对2008年6月至2009年6月于张掖市人民医院住院和门诊部就诊的患者13743例(男8945例,女4798例)进行传染病三项(HBsAg、抗-HCV、抗-HIV)筛查,查出抗-HCV阳性者,再进一步行HCV RNA检测.抗-HCV血清学检查采用酶联免疫法,HCV RNA检测采用实时荧光定量PCR法.结果 抗-HCV阳性率为3.74%,女性抗-HCV阳性率4.46%,高于男性的3.35%(x2=10.63,P<0.01).抗-HCV阳性者中,HCV RNA阳性率为45.53%,HCV RNA男性阳性率为42.00%,女性为50.47%,男女阳性率比较,差异无统计学意义(x2=3.61,P>0.05).抗-HCV阳性者5个年龄组构成比由高到低依次为C组42.02%、D组21.40%、B组18.68%、A组9.34%、E组8.56%.5个不同年龄组间HCV BNA阳性率差异无统计学意义(x2=6.168,P>0.05).结论 该地区HCV的发病有下降趋势,已感染人群中女性多于男性.HCV RNA阳性率不同性别及不同年龄组间差异不显著,但监测HCV RNA可指导临床用药及观察疗效.     

HCV-核心抗原及HCV RNA检测在慢性丙型肝炎诊断中的价值分析

目的探究HCV-核心抗原及HCV RNA检测在慢性丙型肝炎(CHC)诊断中的应用价值。方法选取2018年10月至2019年12月在本站无偿献血的188份标本为研究对象,收集无偿献血筛查标本,采用酶联免疫双抗体夹心法检测血清中HCV-核心抗原水平,另采用荧光定量检测法测定血清中HCV RNA水平。以HCV RNA检测结果为金标准,分析HCV-核心抗原及HCV RNA检测应用价值;比较HCV RNA不同水平的HCV-核心抗原阳性率;比较不同性质HCV-核心抗原与HCV RNA阳性率及病毒载量结果。结果HCV RNA阳性检出率为53.72%(101/188),高于HCV-核心抗原的34.57%(65/188),差异有统计学意义(P<0.05);HCV-核心抗原检测CHC灵敏度为62.38%,特异度为97.70%,准确度为78.72%,阳性预测值为96.92%,阴性预测值为69.11%;HCV RNA水平越高,HCV-核心抗原阳性率越高,组间阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05);HCV-核心抗原阳性组HCV RNA阳性检出率及病毒载量水平均高于HCV-核心抗原阴性组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论HCV-核心抗原检测在CHC诊断中具有较高特异度,可缩短窗口期,为CHC诊断提供参考依据。     

全自动核酸纯化系统在临床分子检测中的应用研究

摘要：目的探讨全自动核酸纯化系统在实时荧光定量检测中的应用价值。方法手工法和全自动核酸纯化系统配套不同磁珠法试剂,分别提取HCV及肠道病毒核酸样本,通过实施荧光定量检测不同方法提取的RNA,对比CT值,比较不同方法的提取效率。结果同一检测项目不同试剂的机提之间无显著差异（t1=0．805,P1=〉005;1．952,P4〉O．05）,机提与手工法之间有显著差异（t3=-3．314,P3〈0．01;t1=-3．576,P2〈0．01）;手工法提取30个样本所需时间均为2h左右;而全自动核酸纯化系统同时提取32个样本所需时间均在1h以内;结论全自动核酸纯化系统提取效率明显优于手工法,NP968全自动核酸纯化系统磁珠法试剂是全开放性的,全自动核酸纯化系统操作简单、快速、提取效率高,值得临床检验推广。     

丙型肝炎病毒核酸的荧光定量检测及其临床意义

目的:建立实时荧光定量RT-PCR(RFQ-RT-PCR)检测HCV-RNA含量方法的临床应用价值。方法:在HCV基因组5’非编码区(5’-UTR)设计特异性引物和一对杂交探针,PCR扩增目的片段并构建相应基因片段载体,体外转录RNA作为标准品,根据其建立的标准曲线对血清HCV RNA进行定量,同时用传统的巢式RT-PCR进行定性分析。结果:138例样本在HCV抗体阳性患者中,肝硬化和肝癌患者的HCV RNA含量显著高于慢性肝炎患者(P<0.05),而且HCV RNA含量与ALT水平呈正相关(r=0.91)。结论:RFQ-RT-PCR检测HCV-RNA含量比ELISA法具有更好的灵敏度和特异性,能准确反映HCV在体内的复制情况。     

Predictors of response to antiviral therapy in patients with chronic hepatitis C from Pakistani population

Background  Hepatitis C virus (HCV) constitutes a major public health issue around the world, especially in developing countries like Pakistan. In this study, we assessed outcome of interferon (INF) treatment in chronic hepatitis C patients categorized by gender, age, and viral load.

Methods  In this study, 750 HCV positive patients with genotype 3 were selected, out of which 616 completed the entire treatment. Their personal history, pre-treatment HCV RNA and serum alanine transaminase (ALT) was quantified. Patients were treated with combination therapy of INF-α 2b three million units (thrice a week) plus ribavirin (1000–1200 mg per day) for 24 weeks. After 24 weeks their HCV RNA and serum ALT level was quantified.

Results  Out of the 616 patients, 391 (63.5%) responded to therapeutic regimen (INF-α 2b plus ribavirin). Among the responders, 27.1% were men and 36.4% were women. Best treatment response was observed in patients having low viral load <8×10⁵ IU/ml and age ≤40 years than patients having low viral load and age >40 years (73.2% vs. 60.3%, P=0.05).

Conclusions  Better response to IFN-α 2b plus ribavirin was observed in patients with lower viral RNA and younger age. It suggests that all patients considered for treatment should have quantification of serum HCV RNA level. The result can be used to counsel patients on the likelihood of response and may influence the patient’s decision on treatment.

     

荧光定量聚合酶链反应检测丙型肝炎病毒的临床应用

目的:用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)测定丙型肝炎病毒在临床的应用。方法:用FQ-PCR检测378例怀疑HCV感染的临床标本,并同时采用ELISA检测抗-HCV,用生化仪测定ALT水平,了解样本中HCQ-RNA含量与抗-HCV及ALT的相关性。结果:378份标本中216份HCV-RNA含量高于103拷贝/ml,348份抗-HCV阳性,156份ALT异常,经统计分析每两者间其有明显相关性。结论:FQ-PCR技术检测HCV-RNA特异性强,灵敏度高,具有良好的应用价值。     

HCV-cAg与HCV-Ab、HCV-RNA及肝功能之间的关系探讨

目的探讨丙型肝炎病毒核心抗原（hepatitis C virus core antigen,HCV-cAg）与丙型肝炎病毒RNA（hepatitis C virus RNA,HCV-RNA）关系以及丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、谷氨酰转肽酶（GGT）水平与HCV-RNA病毒载量之间的相关性。方法选取78例HCV抗体检测阳性的丙型肝炎或疑似丙型肝炎病人作为观察组,另选取同期健康体检者20名作为对照组。采用ELISA法和荧光定量PCR法等对2组血清样本进行HCV-cAg、HCV-RNA和ALT、AST、GGT水平测定,并比较各参数之间的关系。结果观察组HCV-cAg阳性检出率为41.0%（32/78）,HCV-RNA阳性检出率为53.8%（42/78）,差异有统计学意义（P < 0.01）,且二者之间具有较好一致性（κ=0.747）。观察组ALT、AST和GGT水平均明显高于对照组（P < 0.01）,但与HCV-RNA病毒载量均无明显相关性（P>0.05）。结论HCV-cAg和HCV-RNA在检测丙型肝炎方面有较好一致性和相关性,可为丙型肝炎的临床诊断提供有价值的依据。