过氧化物酶抗体和球蛋白抗体对甲状腺疾病的检测意义

目的对比分析甲状腺过氧化物酶抗体与甲状腺球蛋白抗体诊断甲状腺疾病的优势、价值及两种方法存在的不足之处。方法对60例经手术或穿刺明确病理诊断的甲状腺疾病进行回顾性分析,通过两独立样本t检验的方法比较甲状腺过氧化物酶抗体与甲状腺球蛋白抗体两种检查方法的诊断符合情况。结果在60例甲状腺疾病中,有18例甲状腺功能亢进患者,甲状腺过氧化物酶抗体与甲状腺球蛋白抗体诊断的准确率分别为88.89%、77.78%,P=0.089;有10例甲状腺功能低下患者,甲状腺过氧化物酶抗体与甲状腺球蛋白抗体诊断的准确率分别为90.00%、70.00%,P=0.016;有7例甲状腺癌患者,甲状腺过氧化物酶抗体与甲状腺球蛋白抗体诊断的准确率分别为100.00%、85.71%,P=0.025。结论甲状腺过氧化物酶抗体与甲状腺球蛋白抗体诊断甲状腺疾病最常用的检查方法,在鉴别甲状腺疾病性质时,甲状腺过氧化物酶抗体的诊断价值相对较高,建议两者结合起来,综合考虑,诊断的准确率会更高。     

肝炎血清标志的酶联免疫检测技术探讨

<正> 酶联免疫吸附试验(ELISA)是利用免疫酶标记技术在固相载体上进行抗原或抗体的测定,由于酶催化效率高,抗原抗体反应有高度的特异性,所以普遍应用于乙型肝炎血清标志物的检测,为了更好的使酶联免疫检测技术的日益完善,现把我们在检测中遇到的技术问题进行回顾及探讨。1、ELISA的原理1·1 使抗原或抗体结合到某种固相载体表面,并保持其免疫活性。1·2 使抗原或抗体与某种酶联结成酶标抗原或抗体,这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性,又保留酶的活性。     

用BALB/c小鼠制作抗青霉素酰化酶和抗头孢菌素酰化酶抗体及其交叉反应的观察

用3种不同方法制备的抗原分别免疫BALB／c小鼠，制备了抗青霉素酰化酶a亚基、β亚基和抗头孢菌素酰化酶a亚基、β亚基共4种抗体，测定了它们的效价并比较这几种方法的优缺点；还比较了用同一种方法制备的抗原免疫小鼠后制作这两类抗体的效价以及上述毛种抗体的交叉反应。结果：用割胶法制备的抗原（加用不完全佐剂）免疫小鼠后所得抗体效价较高，且所制备的两类抗体效价无显著差异：在交叉反应测试中，抗头孢菌素酰化酶抗体也能识别青霉素酰化酶，但抗青霉素酰化酶抗体却几乎不能识别头孢菌素酰化酶，说明抗青霉素酰化酶抗体更为专一、而同类抗体对相应抗原的2个亚基之间的交叉反应说明其互相结合部位的结构有类似之处，同时也说明只有进一步制作单克隆抗体才能提高抗体的特异性。##6—动物实验—     

抗脂蛋白脂酶卵黄抗体IgY的制备

目的:用人脂蛋白脂酶制备鸡卵黄抗体,并研究其应答持久性、稳定性.方法:用纯化的人脂蛋白脂酶免疫生蛋鸡,琼脂糖免疫扩散法测定IgY抗体效价变化.PEG法结合Sephadex-150凝胶过柱提取抗体;ELISA法测抗体对酸、碱、酶的稳定.结果:免疫后大约3～4周抗体效价达到高值,此高效价可持续3个月;抗体含量为8.11mg/ml蛋黄;IgY在70℃以下基本不失活;在pH4～10时活性无明显变化;胃蛋白酶处理90min后IgY活性稳定.结论:用人脂蛋白脂酶免疫鸡可制备高效价的特异抗体IgY,抗体应答时间持久、稳定性好.     

酶联免疫吸附试验(双抗体夹心法)测定人血清IgE

免疫酶技术是利用酶标记抗体或抗原,借助酶的催化作用,使相应底物显色作为指标,测定免疫反应中抗原或抗体的方法。 1966年Nakane,Ram等从铁蛋白标记技术得以启发,首创酶标记技术。1971年Engvall等,利用免疫反应中酶结合物催化底物显色,然后用分光光度计测量底物的显色程度,进行抗体、抗原的定量测定,此方法称酶联免疫吸附试验。70年代以来,随着酶与抗体等反应物偶联技术不断改进,免疫酶技术已广泛应用于体液内各种因子、抗体、激素、药物,以及各种传染病病原及其特异抗体的测定。     

双位点酶免疫测定中采用一种通用试剂:过氧化物酶-抗过氧化物酶体系

在通常的酶免疫分析中,辣根过氧化物酶(HR-P)与抗体 IgG 以共价联接,但往往使 HRP 结合能力丧失50%,而且联接物中 HRP 的活性也会降低75%。为此,本文作者采用 HRP 与抗 HRP 抗体,通过免疫联接,形成一种可溶性的 PAP 复合物,从而克服 HRP 失活的缺点,并做为一种通用的试剂,应用于简化酶免疫测定(EIA)和 PAPEIA 测定。简化 EIA 的原理是 PAP 复合物直接与第二抗体包被固相进行免疫结合;而 PAP-EIA 的原理是:     

测定大鼠血清甲胎蛋白的酶联免疫吸附法

用自制的甲胎蛋白(AFP)抗体和酶标AFP抗体,建立大鼠血清AFP定量的酶联免疫吸附法(ELISA)即双抗体夹心法。对方法的特异性和重复性进行了研究。测定时在酶标抗体溶液中加入0.5％的牛血清白蛋白可减少塑料板小孔对酶标抗体的非特异吸附。用本法对127例正常雄性Wistar成鼠血清AFP进行了测定,结果为30.35±31.34ng/ml,正常值范围应在115.25ng/ml以下。     

化学发光酶免疫分析法在乙肝病毒及核心抗体定性检测中的应用价值

目的:探究化学发光酶免疫分析法在乙肝病毒及核心抗体定性检测中的应用价值。方法:选取我院收治的72例疑似乙型肝炎患者,采集血液样本后分别应用化学发光酶免疫分析法及酶联免疫吸附试验检测其乙肝病毒、核心抗体并分析其检测结果。结果:化学发光酶免疫分析法检测乙型肝炎病毒阳性率与酶联免疫吸附试验对比,差异无统计学意义(P>0.05);化学发光酶免疫分析法检测抗IgM、IgG抗体阳性率均高于酶联免疫吸附实验,差异有统计学意义(P<0.05);化学发光酶免疫分析法检测灵敏度明显优于酶联免疫吸附试验。结论:化学发光酶免疫分析法在乙型肝炎病毒、核心抗体定性检测中,乙型肝炎病毒检出率较高,且对其核心抗体检测灵敏度颇高,在临床研究中具有重要价值。     

妊娠中期甲状腺功能减退症与甲状腺过氧化物酶抗体的相关性

目的：探讨妊娠中期的孕妇发生甲状腺功能减退症与甲状腺过氧化物酶抗体之间的相关性。方法对广东省深圳市南山区蛇口人民医院门诊登记的180例产前检查孕妇进行甲状腺过氧化物酶抗体检测与横截断面调查,采用二分类Logistic回归分析法,对甲状腺过氧化物酶抗体水平与甲状腺功能减退症的相关性进行分析。结果亚临床甲状腺功能减退症检出率为13.89%,亚临床甲状腺功能减退症与低T 4血症、甲状腺功能正常孕妇的过氧化物酶抗体阳性检出率对比,差异具有统计学意义（P〈0.05）;二分类Logistic回归分析结果显示,甲状腺过氧化物酶抗体阳性、孕次等是亚临床甲状腺功能减退症的危险因素。结论妊娠中期的孕妇甲状腺功能减退症发病率较高,与甲状腺过氧化物酶抗体密切相关,可作为产前筛查指标。     

免疫酶标电泳技术检测结核菌特异抗体研究

近十年来研究检测结核病人血清中特异抗体的方法引起国内外重视,已报道都以酶联免疫吸附试验(ELISA)法包被不同抗原,间接检测相应抗体,其操作较复杂,检测时间均需24小时以上。本文首先在国内应用免疫酶标电泳技术(IELEP)检测血清中结核菌特异抗体,无需复杂昂贵设备,具有操作简便、快速,兼具特异性、灵敏度、稳定性优于LISA法的优点。IELEP法检测血清中结核菌特异抗体将酶标记抗原(聚合OT为抗原)和血清标本分别置于阴、阳极端,在电泳作用下直接相遇形成初级免疫复合物,经酶促反     

辣根过氧化物酶ELISA测定抗DNA抗体

用紫外线(UV)照射聚苯乙烯酶标板可明显提高DNA的包被效果,从而解决了酶联免疫吸附试验(ELISA)测定抗DNA抗体的问题。在此基础上,作者用碱性磷酸酶(AP)标记抗人IgG作为第二抗体,建立了测定抗DNA抗体的间接ELISA法,并进一步探讨了国内常用的辣根过氧化物酶(HRP)系统测定抗DNA抗体的可能性。经50例正常人、39例系统性红斑狼疮(SLE)病人及52例非SLE其     

检测PAIg酶标抗体制备中的影响因素探讨

以过碘酸钠法为基础，选用一定实验条件制备酶标抗体，探讨制备过程中影响酶标抗体质量的因素。结果显示，辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）与抗体比例在１∶１．５时，其标记率适当，容易获得质量较好的酶标抗体；ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００柱层析法纯化交联产物明显优于硫酸铵沉淀法。     

酶联免疫吸附试验影响HBsAg常见因素与对策

<正>酶联免疫吸附试验(enayme liked immunosorbent assay ELISA)是一种常用的固相酶免疫测定法。ELISA的基本原理是:使抗原(或抗体)结合到某种固相载体表面,并保持其免疫活性;使抗原(或抗体)于某种酶联结成酶标抗原(或抗体)     

HCG双位点免疫酶分析法检测试剂在妇产科中的应用

在临床检验工作中HCG双位点免疫酶分析法检测试剂，在妇产科中，用于诊断及鉴别诊断疾病断，取得了良好效果现报告如下。l资料与方法双位点免疫酶分析法检测是一种固相非竞争法，先将p－HCG抗体和固相载体相结合，再向该固相抗体中加入待测样中HCG标准物，则样品巾的HCG与之接触后，可迅速形成抗原一抗体复合物，而附在固体管壁上，然后再加上用辣报过氧化物酶联接的B－HCG抗体，再形成抗体一抗原一酶联抗体之复合物，即双抗体夹心复合物，洗去过量未结合的酶联接抗体，然后再测定“夹心复合体中酶的活性即把酶的作用底物及显色剂加…     

酶联免疫吸附试验的常见影响因素及处理方法

临床免疫室开展的乙肝系列、丙肝抗体、艾滋病抗体、梅毒特异性检测等日常检测工作,最为常用的检测方法为酶联免疫吸附试验。该试验用已知抗原检测未知抗体,或用已知抗体检测未知抗原,虽然操作简便,但影响因素诸多,一个环节出现问题,都可能会导致检测的失败。现将酶联免疫吸附试验常见影     

液相酶免疫分析的研究现状

酶联免疫吸附试验(简称 ELISA),又名酶免疫分析(简称 EIA),是 Engvall 等及 VanWeeman 等分别于1971年提出的一种将可溶性抗原或抗体吸附在固相上,利用酶标抗体或抗原定量检测相应的抗原或抗体的方法。本法已应用到免疫学、内分泌学、生物化学、微生物学和寄生虫学等方面。1972年 Ruben-stein 等建立了不需固相载体,可直接从溶液中测定反应结果的均相 EIA。1974年 Voller等以聚苯乙烯微量滴定板为载体,建立了微板法,是当前应用最广的一类 EIA 法。1976年 Belanger 等运用连续双抗体饱和法的原     

兔抗麻雀IgY酶标抗体的制备

目的制备辣根过氧化物酶（HRP）标记的兔抗麻雀IgY抗体,为禽类血清学检测体系的建立提供技术储备。方法硫酸铵盐析法粗提麻雀血清IgY,进一步在SDS-PAGE上分离后,切下带有目的条带的凝胶作为免疫原,免疫实验兔制备抗血清,Protein-A柱亲和纯化兔抗IgY血清IgG,,使用改良过碘酸钠法制备酶结合物。ELISA检测酶标抗体的工作浓度,western blotting检测酶标抗体的特异性。结果硫酸铵盐析法粗提IgY,可去除部分杂蛋白,SDS-PAGE上分离后切下带有目的条带的凝胶,可以得到足够纯度的抗原,将带有IgY的凝胶作为抗原免疫后获得的抗血清经Protein-A纯化后,二抗在SDS-PAGE上鉴定,纯度达到99%以上。改良的过碘酸钠法标记获得的抗体浓度为1.008 mg/mL,ELISA检测酶标抗体效价为1∶1000。Western blotting鉴定抗体具有特异性。结论获得了优质可靠的兔抗麻雀IgY酶标抗体。     

酶标抗体及酶标葡萄球菌A蛋白染色法在炭疽快速诊断中的应用——一、快速检测炭疽病人荚膜抗体的实验研究

本文介绍了酶标抗体及酶标葡萄球菌A蛋白染色检测炭疽荚膜抗体的方法,并与荧光抗体染色法作了比较。检测16例47份炭疽病人血清荚膜抗体,三种方法的阳性率分别为78.8％、78.8％和80.9％,相差不显著(P>0.05)。系统地观察7例病人荚膜抗体动态变化,提示多数炭疽病人的荚膜抗体可能维持9个月左右,并进一步证实检测该抗体可作为炭疽病的临床追溯诊断和流行病学调查的有力证据。本实验证明上述三种方法的敏感性和特异性均相似,而两种酶标染色法,尤其是酶标葡萄球菌A蛋白染色法的优点更多,更便于推广使用。     

用于石腊切片的简便免疫酶标方法

<正> 利用特异抗体与过氧化物酶结合的免疫酶标方法,可以检查组织、细胞内存在的多种物质、如激素、抗体、病原体、甲胎蛋白和某些酶等。这种方法特异性高,能较为精确地确定所要检查物质的部位和性质,所以已经广泛应用于各种研究工作中。免疫酶标技术也常用来研究淋巴系细胞表面或/和胞浆内的免疫球蛋白,以及检查单     

抗肿瘤转移肝素酶特异性抗体的筛选及鉴定

目的通过鉴定制备的人肝素酶单克隆抗体,筛选出具有抗肿瘤转移特异性的单克隆抗体株,并大量制备.方法采用Western blot技术,以HepG2、SGC-7901、MKN45、SW480、U2OS、MCF-7细胞总蛋白为样本,对已制备的3株人肝素酶单克隆抗体进行初步鉴定,筛选出能够与肝素酶蛋白特异性结合的抗体,并采用免疫细胞化学技术进一步验证筛选出的抗体特异性,然后通过Transwell体外侵袭实验观察筛选出的肝素酶单克隆抗体对肿瘤转移的抑制作用.结果已制备的3株人肝素酶单克隆抗体均能与不同肿瘤细胞肝素酶蛋白结合,其中12号抗体与商品化肝素酶单克隆抗体在MCF-7细胞中均检测出肝素酶弱阳性表达,其特异性最佳;免疫细胞化学结果也显示在SGC-7901、HepG2、MKN45、SW480和U2OS细胞中12号抗体能检测出肝素酶阳性表达,而在MCF-7细胞中检测出肝素酶弱阳性表达;Transwell体外侵袭实验结果显示12号抗体(100 μg,浓度约1 mg/ml)作用于SGC-7901、HepG2、MKN45、SW480和U2OS细胞48 h后,其穿膜细胞数与正常小鼠IgG对照组相比明显减少(P<0.05).结论纯化制备的人肝素酶单克隆抗体能够与肿瘤细胞表达的肝素酶蛋白特异性结合,并通过抑制肝素酶蛋白达到抑制肿瘤细胞的扩散与转移.