凋亡信号调节激酶在心肌细胞凋亡中的研究进展

心肌梗死、心肌缺血再灌注（I/R）损伤、心肌炎、心力衰竭和心律失常等多种心血管疾病的病理生理因素很多,而心肌细胞的凋亡则是最重要的影响因素.目前心肌细胞凋亡机制已成为国内外心血管领域研究者的研究热点.国内的吴小侨等认为心肌细胞的凋亡可能是病毒性心肌炎心肌损伤及演变为心肌病的一个发病机制.     

一氧化氮通过环磷酸鸟苷激活细胞外信号调节激酶／P^90RSK信号通路在大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用

目的：观察大鼠脑缺血再灌注损伤时诱导型一氧化氮合酶源性一氧化氮、细胞外信号调节激酶激酶／细胞外信号调节激酶的信号转导通路，分析神经细胞损伤之间的联系。 方法：实验于2005-03／2006-03在中国医科大学第一临床学院麻醉实验室完成。32只Wistar大鼠随机摸球法分为4组，即对照组、模型组、诱导型一氧化氮合酶抑制剂组、细胞外信号调节激酶激酶抑制剂组，每组各8只。采用4血管阻断法制作大鼠全脑缺血再灌注模型，对照组行假手术。诱导型一氧化氮合酶抑制剂组、细胞外信号调节激酶激酶抑制剂组夹闭两侧颈总动脉前30min分别腹腔注射N-3-苯甲基-乙脒（诱导型一氧化氮合酶特异性抑制剂）45μmol／kg或SL327（细胞外信号调节激酶激酶特异性抑制剂）100mg／kg，对照组和模型组腹腔注射等量生理盐水。缺血20min再灌注24h后处死大鼠取海马，检测大鼠海马组织中一氧化氮、环磷酸鸟苷量的变化及诱导型一氧化氮合酶mRNA和细胞外信号调节激酶1／2、p^90RSK蛋白表达水平；电镜观察海马线粒体的变化。 结果：Wistar大鼠32只全部纳入结果分析。①模型组大鼠海马中一氧化氮、环磷酸鸟苷的量、诱导型一氧化氮合酶mRNA水平比对照组增高[（0．42&;#177;0．03），（0．21&;#177;0．02）μmol／g；（44．7&;#177;4．1），（19．6&;#177;1．8）nmol／L：1．07&;#177;0．04，0．25&;#177;0．02；P〈0．01]；诱导型一氧化氮合酶抑制剂组、细胞外信号调节激酶激酶抑制剂组大鼠海马中一氧化氮、环磷酸鸟苷、诱导型一氧化氮合酶mRNA水平比模型组降低[（0．31&;#177;0．02），（0．44&;#177;0．03）μmol／g；（29．5&;#177;2．4），（46．3&;#177;4．2）nmol／L；0．70&;#177;0．03，1．10&;#177;0．04；P〈0．011。②模型组大鼠海马中细胞外信号调节激酶1／2，p^90RSK蛋白表达水平较对照组升高；诱导型一氧化氮合酶抑制剂组、细胞外信号调节激酶激酶抑制剂组较模型组降低（P〈0．01）。③电镜观察模型组大鼠海马线粒体变性率比对照组升高（P〈0．01），诱导型一氧化氮合酶抑制剂组和细胞外信号调节激酶激酶抑制剂组大鼠海马线粒体变性率比模型组低（P〈0．01）。 结论：脑缺血再灌注损伤时，诱导型一氧化氮合酶源性的一氧化氮可能通过环磷酸鸟苷激活了细胞外信号调节激酶激酶／细胞外信号调节激酶/p^90RSK信号转导通路诱导了神经细胞的损伤。     

一氧化氮通过环磷酸鸟苷激活细胞外信号调节激酶/P90RSK 信号通路在大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用

目的:观察大鼠脑缺血再灌注损伤时诱导型一氧化氮合酶源性一氧化氮、细胞外信号调节激酶激酶/细胞外信号调节激酶的信号转导通路,分析神经细胞损伤之间的联系。方法:实验于2005-03/2006-03在中国医科大学第一临床学院麻醉实验室完成。32只Wistar大鼠随机摸球法分为4组,即对照组、模型组、诱导型一氧化氮合酶抑制剂组、细胞外信号调节激酶激酶抑制剂组,每组各8只。采用4血管阻断法制作大鼠全脑缺血再灌注模型,对照组行假手术。诱导型一氧化氮合酶抑制剂组、细胞外信号调节激酶激酶抑制剂组夹闭两侧颈总动脉前30min分别腹腔注射N-3-苯甲基-乙脒(诱导型一氧化氮合酶特异性抑制剂)45μmol/kg或SL327(细胞外信号调节激酶激酶特异性抑制剂)100mg/kg,对照组和模型组腹腔注射等量生理盐水。缺血20min再灌注24h后处死大鼠取海马,检测大鼠海马组织中一氧化氮、环磷酸鸟苷量的变化及诱导型一氧化氮合酶mRNA和细胞外信号调节激酶1/2、P90RSK蛋白表达水平;电镜观察海马线粒体的变化。结果:Wistar大鼠32只全部纳入结果分析。①模型组大鼠海马中一氧化氮、环磷酸鸟苷的量、诱导型一氧化氮合酶mRNA水平比对照组增高[(0.42±0.03),(0.21±0.02)μmol/g;(44.7±4.1),(19.6±1.8)nmol/L;1.07±0.04,0.25±0.02;P<0.01];诱导型一氧化氮合酶抑制剂组、细胞外信号调节激酶激酶抑制剂组大鼠海马中一氧化氮、环磷酸鸟苷、诱导型一氧化氮合酶mRNA水平比模型组降低[(0.31±0.02),(0.44±0.03)μmol/g;(29.5±2.4),(46.3±4.2)nmol/L;0.70±0.03,1.10±0.04;P<0.01]。②模型组大鼠海马中细胞外信号调节激酶1/2,P90RSK蛋白表达水平较对照组升高;诱导型一氧化氮合酶抑制剂组、细胞外信号调节激酶激酶抑制剂组较模型组降低(P<0.01)。③电镜观察模型组大鼠海马线粒体变性率比对照组升高(P<0.01),诱导型一氧化氮合酶抑制剂组和细胞外信号调节激酶激酶抑制剂组大鼠海马线粒体变性率比模型组低(P<0.01)。结论:脑缺血再灌注损伤时,诱导型一氧化氮合酶源性的一氧化氮可能通过环磷酸鸟苷激活了细胞外信号调节激酶激酶/细胞外信号调节激酶/P90RSK信号转导通路诱导了神经细胞的损伤。     

人脑挫裂伤后神经细胞凋亡的临床研究

目的:通过对人脑挫裂伤后脑组织中细胞凋亡的研究,了解人脑挫裂伤后脑组织中凋亡发生的情况及凋亡在颅脑损伤过程中所起的作用。方法:采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的d-UTP生物素标记法(TUNEL法)检测细胞凋亡,同时显微镜观察病理切片。结果:66.7%出现TUNEL阳性,TUNEL阳性与阴性患者间的GCS评分(t=-2.88,P=0.01)、受伤时间(t=2.14,P=0.049)差异有显著性意义。TUNEL阳性与阴性患者间性别(χ2=0.26,P=0.61)、年龄(t=-1.06,P=0.30)、预后(χ2=0.26,P=0.61)差异无显著性意义。结论:人脑挫裂伤后脑组织中存在凋亡,并且与患者的病情严重程度及病程相关。其在颅脑损伤的病理过程中有一定作用,但只是颅脑损伤后复杂病理过程中的一种表现,即创伤后神经细胞死亡的一种方式,其在机体的病理变化过程中似有双重作用。     

大鼠脑挫裂伤后神经细胞凋亡的相关因素

背景：脑海马区作为脑损伤后的选择性易损区，在伤后某些早期基因超表达、兴奋性氨基酸过度释放以及神经细胞延迟性死亡等方面对外源性刺激较为敏感。目的：探讨脑挫裂伤后血清一氧化氮、内皮素改变与脑海马区神经细胞凋亡之间的相关性。设计：观察对比动物实验，采用配对t检验及多元线性相关分析。单位：华北煤炭医学院附属开滦医院神经外科。材料：实验于2003-02／06在华北煤炭医学院分子生物学实验室完成。取二级健康雄性Wistar大鼠126只，体质量250～350g，随机分成3组。即实验组60只、对照组60只和正常组6只，其中前两组又各自分成0.5，1，3，6，12，24，72，120，168，240h10个时相组，每组6只大鼠。方法：实验组按照改良Feeney自由落体脑损伤模型方式制作大鼠左顶叶脑挫裂伤模型；对照组动物只颅骨开窗，不致伤；正常组动物不做任何处理。各组大鼠脑挫裂伤后各时相点的血清一氧化氮、内皮素水平与脑海马区凋亡神经细胞数量检测采用硝酸还原酶法、酶联免疫吸附法及原位末端标记法。主要观察指标：脑挫裂伤大鼠血清一氧化氮、内皮素水平与脑海马区神经细胞凋亡情况。结果：126只大鼠全部进入结果分析。①实验组大鼠血清一氧化氮、内皮素与脑海马区c-fos mRNA表达水平：均在脑挫裂伤后6h达高峰[（81．45&;#177;2．41）mmol／L，（20．29&;#177;1．63）ng／L]，伤后12h开始逐渐回落[（66．11&;#177;1．97）mmol/L，（20．14&;#177;1．63）ng／L]。大鼠脑挫裂伤后0．5h至120h一氧化氮水平、0．5h至168h内皮素水平与正常组和对照组各相应时间点比较，均明显升高（t=3．33-27．91，P〈0．01）。②实验组大鼠脑海马区神经细胞凋亡情况：于伤后168h达到高峰（27．33&;#177;1．86）&;#215;10^2个／mm^2，伤后240h开始下降（21．67&;#177;2．07）&;#215;10^2个／mm^2。正常组脑海马区神经细胞未见凋亡细胞，对照组脑海马区凋亡神经细胞数量极少。③实验组大鼠血清一氧化氮水平、内皮素水平与脑海马区神经细胞凋亡之间的关系：存在显著正相关性（r=0．838，P〈0．O1；r=0．281，P＜0．05）。结论：大鼠脑挫裂伤后血清一氧化氮、内皮素水平之间以及与脑海马区神经细胞凋亡之间存在着特定关系。一氧化氮与内皮素相互影响、相互作用，参与调控了脑挫裂伤后的病生理过程，从而诱导了脑海马区神经细胞的凋亡。     

电针激活老年痴呆大鼠海马蛋白激酶信号通路的作用

目的：探讨电针能否激活老年痴呆大鼠海马蛋白激酶信号传导通路，从而提高学习记忆能力。方法：实验于2003-04-25／05-30在成都中医药大学针灸推拿学院时间生物实验室进行。取SD大鼠100只，先以迷宫测试筛选60只，随机分为正常组、模型组、假手术组、电针组，每组15只；以穹隆-海马伞损伤进行老年痴呆造模，造模成功后，每组随机选取9只接受相应的处理：正常组、模型组和假手术组接受与电针组相同方式和相同时间的抓取、固定；电针组穴位选取“百会”、“涌泉”、“太溪”、“血海”，电针频率20Hz，1次／d，30min／次；2嗽后，放免法分别测定每组大鼠海马组织细胞胞膜蛋白激酶C(protein C．PKC)、酪氨酸蛋白激酶(proteintyrosine kinase，PTK)含量。结果：正常组、模型组、假手术组、电针组PKC活性分别为(5．13&;#177;0．58),(4．92&;#177;0．93)，(3．98&;#177;0．75)，(5．05&;#177;0．83)nkat／g，其他3组与模型组比较，差异有非常显著性意义(F=4．182，P&;lt;0．01)；4组PTK活性分别为(0．477&;#177;0．063)，(0．476&;#177;0．014)，(0．369&;#177;0．080)，(0．468&;#177;0．1l0)nkat／g，模型组与其他组比较，差异有显著性意义(P&;lt;0．05)。结论：穹隆-海马伞损伤所致老年痴呆大鼠可能存在海马蛋白激酶信号通路的抑制，电针能够激活低下的蛋白激酶信号通路，从而提高老年痴呆大鼠习记忆能力。     

胞外信号调节激酶在胃溃疡愈合中的作用研究

目的　探讨胞外信号调节激酶 (ERK1)在胃溃疡发生及愈合中的作用机制。方法　采用免疫组织化学ABC法 ,对 16例愈合前后胃溃疡患者胃黏膜组织中ERK1的表达水平及其分布进行检测。结果　治疗前 16例活动性胃溃疡患者胃黏膜组织中ERK1的表达水平为 0 .86 1± 0 .0 38(以平均吸光度A值表示 ) ,与治疗后 (A值为 0 .347±0 .0 2 6 )相比明显增高 (P <0 .0 1)。镜下 ,ERK1主要表达于胃黏膜上皮细胞和胃底 (体 )腺上皮细胞胞质内 ,少数浸润的炎症细胞及成纤维细胞亦见阳性表达。结论　ERK1的高表达可加快溃疡灶的重上皮化 ,对胃溃疡的愈合起促进作用。     

人脑挫裂伤后神经细胞凋亡及凋亡相关基因Bcl-2/Bax的蛋白质表达

目的研究挫伤脑组织中神经细胞凋亡现象及凋亡相关基因Bcl-2Bax蛋白质表达的变化,探讨创伤后脑组织中是否存在凋亡以及凋亡在脑外伤病理过程中所起的作用。方法采用流式细胞仪检测凋亡,采用免疫组化法检测脑组织中凋亡相关基因Bcl-2/Bax的表达。结果脑组织中神经细胞凋亡与患者的病情严重程度犤格拉斯哥昏迷量表(GCS)评分≥6者凋亡百分数为(1.2±2.1)%,GCS评分<6者为(4.7±2.5)%,t=3.77P=0.001犦及受伤时间犤受伤时间≥24h者凋亡百分数为(5.2±3.5)%受伤时间<24h者为(1.9±2.1)%,t=2.34,P=0.007犦有关,而与患者预后无关(χ2=0.69,P=0.50)。Bcl-2阳性表达与预后有关(Bcl-2阳性表达者15例中死亡1例,阴性表达者11例中死亡6例,χ2=5.161,P=0.023),与患者性别、年龄、GCS评分、受伤时间无关(P>0.05)。凋亡百分数与Bcl-2阳性表达间无相关性(t=0.584,P=0.564)。所有患者Ba均表达阳性。结论创伤后脑组织中存在凋亡,在病理过程中起一定作用,严重程度与患者病情及受伤时间有关,Bcl-2的蛋白表达与预后相关Bcl-2/Bax在神经细胞凋亡的信号传导中起重要作用。     

大鼠脑挫裂伤后神经细胞凋亡的相关因素

背景脑海马区作为脑损伤后的选择性易损区,在伤后某些早期基因超表达、兴奋性氨基酸过度释放以及神经细胞延迟性死亡等方面对外源性刺激较为敏感.目的探讨脑挫裂伤后血清一氧化氮、内皮素改变与脑海马区神经细胞凋亡之间的相关性.设计观察对比动物实验,采用配对t检验及多元线性相关分析.单位华北煤炭医学院附属开滦医院神经外科.材料实验于2003-02/06在华北煤炭医学院分子生物学实验室完成.取二级健康雄性Wistar大鼠126只,体质量250～350 g,随机分成3组,即实验组60只、对照组60只和正常组6只,其中前两组又各自分成0.5,1,3,6,12,24,72,120,168,240h 10个时相组,每组6只大鼠.方法实验组按照改良Feeney自由落体脑损伤模型方式制作大鼠左顶叶脑挫裂伤模型;对照组动物只颅骨开窗,不致伤;正常组动物不做任何处理.各组大鼠脑挫裂伤后各时相点的血清一氧化氮、内皮素水平与脑海马区凋亡神经细胞数量检测采用硝酸还原酶法、酶联免疫吸附法及原位末端标记法.主要观察指标脑挫裂伤大鼠血清一氧化氮、内皮素水平与脑海马区神经细胞凋亡情况.结果126只大鼠全部进入结果分析.①实验组大鼠血清一氧化氮、内皮素与脑海马区c-fos mRNA表达水平均在脑挫裂伤后6 h达高峰[(81.45±2.41)mmol/L,(20.29±1.63)ng/L],伤后12 h开始逐渐回落[(66.11±1.97)mmol/L,(20.14±1.63)ng/L].大鼠脑挫裂伤后0.5 h至120 h一氧化氮水平、0.5 h至168 h内皮素水平与正常组和对照组各相应时间点比较,均明显升高(t=3.33～27.91,P＜0.01).②实验组大鼠脑海马区神经细胞凋亡情况于伤后168 h达到高峰(27.33±1.86)×102个/mm2,伤后240 h开始下降(21.67±2.07)×102个/mm2.正常组脑海马区神经细胞未见凋亡细胞,对照组脑海马区凋亡神经细胞数量极少.③实验组大鼠血清一氧化氮水平、内皮素水平与脑海马区神经细胞凋亡之间的关系存在显著正相关性(r=0.838,P＜0.01;r=0.281,P＜0.05).结论大鼠脑挫裂伤后血清一氧化氮、内皮素水平之间以及与脑海马区神经细胞凋亡之间存在着特定关系.一氧化氮与内皮素相互影响、相互作用,参与调控了脑挫裂伤后的病生理过程,从而诱导了脑海马区神经细胞的凋亡.     

血小板源生长因子对瘢痕成纤维细胞胞外信号调节激酶的影响

目的:分析血小板源生长刺激因子(PDGF)刺激后各种成纤维细胞中胞外信号调节激酶(ERK)的表达及磷酸化情况,研究瘢痕特别是瘢痕疙瘩发病过程中ERK的作用。方法:应用免疫印迹(IB)方法检测5例瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFB)、瘢痕疙瘩周边相对正常皮肤成纤维细胞(rNHDF)及正常人皮肤成纤维细胞(NHDF)的ERK表达及其蛋白磷酸化。结果:①无刺激条件下,ERK在KFB,rNHDF及NHDF中的表达及磷酸化无差异。②PDGF-BB刺激后,3组成纤维细胞ERK磷酸化增强,非磷酸化含量无明显改变。③DGF-BB刺激后,KFB中ERK蛋白磷酸化明显高于其他两组成纤维细胞。结论:瘢痕疙瘩细胞外基质的过度沉积可能与KFB内PDGF结合位点自身磷酸化和ERK的磷酸化增强有关。     

依达拉奉对大鼠重型弥漫性脑创伤后细胞外信号调节激酶1/2信号通路的影响

目的 探讨依达拉奉对重型弥漫性脑创伤(TBI)的保护作用及其机制.方法 273只雄性SD大鼠按随机数字表法分为对照组(45只)、模型组(88只)及依达拉奉低剂量组(72只)、高剂量组(68只).采用重物撞击致大鼠TBI模型.伤后1、6、24、48和72 h,在光镜和电镜下观察脑组织病理变化;用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)表达;用免疫组化法和原位末端缺刻标记法(TUNEL)检测神经细胞凋亡情况.伤后7～10 d应用水迷宫对大鼠学习记忆能力进行评定.结果 与对照组比较,伤后6、24、48、72 h海马区部分神经细胞出现变性、坏死,1、6、24、48 h磷酸化ERK1/2表达水平(pg/U)显著增高(分别为:2.05±0.40、4.40±0.96、6.70±0.87、3.67±0.28比0.40±0.04、0.41±0.05、0.43±0.06、0.40±0.03),6、24、48、72 h神经细胞凋亡数(个)明显增多(分别为:9.60±2.69、12.68±2.99、16.94±3.92、25.82±4.61比2.42±0.38、2.58±0.57、2.74±0.56、2.61±0.58),7～10 d大鼠搜索安全岛潜伏期(s)延长(分别为:119.8±25.0、105.6±24.5、98.5±21.8、92.0±19.5比49.5±7.5、32.7±6.3、25.8±6.5、24.8±5.5,均P<0.05).应用依达拉奉干预后,脑组织损伤程度、磷酸化ERK1/2表达水平降低,神经细胞凋亡数回降,大鼠搜索安全岛潜伏期缩短(依达拉奉低剂量组磷酸化ERK1/2表达6、24、48 h分别为:2.46±0.22、4.00±0.84、2.38±0.32,高剂量组分别为:1.67±0.15、1.86±0.38、1.27±0.28;依达拉奉低剂量组凋亡细胞数6、24、48、72 h分别为:5.20±1.23、7.10±1.72、9.54±1.36、14.12±3.19,高剂量组分别为:3.40±0.49、4.39±0.73、5.02±1.12、8.78±2.16;依达拉奉低剂量组潜伏期7～10 d分别为:94.8±22.8、65.2±19.0、62.0±16.7、59.5±15.6,高剂量组分别为:81.5±20.7、55.4±18.5、40.0±12.3、32.2±11.0,均P<0.05);其中依达拉奉高剂量更为显著(均P<0.05).结论 依达拉奉对TBI有保护作用,其机制与对伤后ERK1/2、神经细胞凋亡通路的调控有关.     

Activation of extracellular signal-regulated kinase in proliferative glomerulonephritis in rats.

Multiple extracellular mitogens are involved in the pathogenesis of proliferative forms of glomerulonephritis (GN). In vitro studies demonstrate the pivotal role of extracellular signal-regulated kinase (ERK) in the regulation of cellular proliferation in response to extracellular mitogens. In this study, we examined whether this kinase, as a convergence point of mitogenic stimuli, is activated in proliferative GN in vivo. Two different proliferative forms of anti-glomerular basal membrane (GBM) GN in rats were induced and whole cortical tissue as well as isolated glomeruli examined using kinase activity assays and Western blot analysis. Administration of rabbit anti-rat GBM serum to rats, preimmunized with rabbit IgG, induced an accelerated crescentic anti-GBM GN. A significant increase in cortical, and more dramatically glomerular ERK activity was detected at 1, 3, and 7 d after induction of GN. Immunization of Wistar-Kyoto rats with bovine GBM also induced a crescentic anti-GBM GN with an increase of renal cortical ERK activity after 4, 6, and 8 wk. ERK is phosphorylated and activated by the MAP kinase/ERK kinase (MEK). We detected a significant increase in the expression of glomerular MEK in the accelerated form of anti-GBM GN, providing a possible mechanism of long-term activation of ERK in this disease model. In contrast to ERK, activation of stress-activated protein kinase was only detectable at early stages of proliferative GN, indicating these related kinases to serve distinct roles in the pathogenesis of GN. Our observations point to ERK as a putative mediator of the proliferative response to immune injury in GN and suggest that upregulation of MEK is involved in the long-term regulation of ERK in vivo.     

雌激素对大鼠脑创伤后海马区氧应激状态及bax表达的影响

目的探讨雌激素在颅脑创伤中发挥保护作用的分子机制。方法按照Marmarou＇s方法建立大鼠创伤性脑损伤（TBI）模型。100只雄性SD大鼠随机分为创伤组、治疗组和对照组,其中创伤组和治疗组又分为伤后10 min、30min、3 h、6 h、24 h、48 h和72 h 7个时相组。采用硫代巴比妥酸法测定氧自由基中间产物丙二醛（MDA）,免疫组化方法检测细胞凋亡相关基因bax的表达,原位缺口末端标记法（TUNEL）检测凋亡细胞。结果雌激素治疗组海马区MDA、bax的表达及TUNEL阳性细胞数均明显低于模型组。结论大鼠脑创伤后,雌激素通过抗氧化作用抑制凋亡基因bax的表达,进而抑制神经细胞凋亡而起到脑保护作用。     

高压氧对大鼠创伤性脑损伤神经元凋亡及其凋亡相关因子的影响

目的:探讨高压氧对创伤性颅脑损伤后神经细胞凋亡及凋亡相关因子Caspase-3和Bcl-2表达的影响。方法:成年健康雄性Wistar大鼠66只,随机分为高压氧治疗组(HBOT)、损伤对照组和假手术组,应用自由落体法建立中度颅脑损伤的大鼠模型,采用原位末端标记法(TUNEL)染色检测脑挫伤灶旁周围半影区的细胞凋亡情况,用免疫组化法检测Caspase-3和Bcl-2蛋白的表达。结果:HBOT组与损伤对照组相比,凋亡细胞数和Caspase-3阳性表达均有不同水平降低,Bcl-2表达升高,差异有显著性(P<0.01)。假手术组各指标均为阴性。结论:HBO对创伤性脑损伤后神经细胞凋亡的发生有抑制作用,其抑制神经细胞凋亡的机制可能与HBOT对促凋亡蛋白Caspase-3的抑制和抗凋亡蛋白Bcl-2的促进作用有关。     

大鼠创伤性脑损伤早期基因差异表达的研究

目的研究创伤性脑损伤早期基因表达谱与正常脑组织基因表达谱的差异,以期阐明脑损伤后早期基因表达的改变规律,阐明脑损伤发生发展的分子机制,从而为临床治疗提供帮助,同时为法医损伤时间推断研究寻找标志物提供帮助。方法以大鼠自由落体损伤模型为对象,从损伤区脑组织和假手术对照组脑组织分别提取mRNA,经反转录成cDNA后与含有4096个随机基因的基因表达谱芯片杂交,杂交后的芯片经扫描仪扫描,并用GenePix3.0软件分析结果。结果发现有124个差异表达基因或表达序列标签（expression sequencetags,ESTs）;其中有46个基因和26个EST表达下调;28个基因和24个EST表达上调;在这些表达有差异的基因中,有涉及细胞内信号传导、神经递质释放、参与炎症的蛋白、离子通道及其受体蛋白和参与炎症反应的蛋白等被发现。结论创伤性脑损伤的发生发展涉及多个基因的改变;研究一个或少数几个基因很难解释其损伤后分子变化机制;基因芯片是研究颅脑损伤这种多基因改变、多因素作用的理想工具。     

脑疏宁对大鼠颅脑创伤后神经功能影响的实验研究

目的评价中药脑疏宁对创伤性脑损伤 (TBI)后神经功能的保护作用。方法按Feeney自由落体撞击法造成TBI模型 ,通过木条行走实验评价伤后大鼠的神经功能恢复情况 ,并在伤后不同时间点观察脑组织含水量及病理改变。结果伤后 1周内大鼠完成木条行走作业的能力明显受损。经脑疏宁治疗后 ,TBI大鼠神经功能明显改善 ,脑组织含水量及病理改变减轻。结论中药脑疏宁可以促进颅脑损伤后神经功能的恢复 ,可能与早期减轻脑水肿、保护脑组织有关。     

神经型一氧化氮合酶对脑损伤后神经细胞凋亡的影响

目的：探讨脑损伤后神经型一氧化氮合酶（nNOS）对神经细胞凋亡的影响及其相关机制。方法：180只SD大鼠随机分成以下三组：假手术组、脑创伤组、7-硝基吲唑（7-NI）组，此三组分别划分为伤后3，6，12，24，48，72h六个时相组，每个时相组均为10只大鼠，采用Marmarou法制造大鼠重型弥漫性颅脑创伤模型，运用原位末瑞标记TUNEL法和免疫组化法，观察三组不同时相点海马CA1区的神经细胞凋亡情况和Bcl-2的表达情况。结果：（1）假手术组偶见TUNEL阳性凋亡细胞及Bcl-2阳性细胞。（2）脑创伤组，伤后各时相点均出现TUNEL阳性凋亡细胞及Bcl-2阳性细胞，先上升后下降。（3）7-NI组，伤后6，12，24h凋亡细胞明显下降而Bcl-2阳性细胞却明显上升（同脑创伤组比较P〈0．05）。结论：在脑损伤的早期，nNOS能够通过抑制Bcl-2的表达来促进神经细胞的凋亡。     

Influence of glutamine on intestinal inflammatory response, mucosa structure alterations and apoptosis following traumatic brain injury in rats

Traumatic brain injury (TBI) can induce a persistent inflammatory response, histopathological changes and apoptosis in the intestine. Glutamine has been shown to reduce bacterial translocation and maintain intestine mucosal integrity, but its effects on the inflammatory response, structural alterations and apoptosis in intestinal mucosa following TBI have not been previously investigated. Using the weight-drop method, a right parietal cortical contusion was induced in rats and, for the next 5 days, they were fed either chow alone or chow mixed with glutamine. Intestinal tissue samples were then removed for analysis. Following TBI, glutamine supplementation was found to: decrease intestinal concentrations of interleukin (IL) -1beta, tumour necrosis factor-alpha (TNF-alpha) and IL-6; downregulate intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1) expression; attenuate TBI-induced damage to the intestine structure; and reduce apoptosis. These results suggest that post-TBI glutamine administration could suppress intestinal inflammation, protect intestinal mucosal structure and reduce mucosal apoptosis.     

高压氧治疗对创伤性脑损伤大鼠认知功能的影响

目的:观察高压氧治疗对脑损伤大鼠认知功能的影响及海马区CCL2及其受体CCR2的表达变化。方法:75只成年雄性SD大鼠按数字表法随机分为假手术组(Sham组)、脑外伤组(TBI组)和高压氧治疗组(HBOT组),每组各25只。HBOT组和TBI组均采用Feeney自由落体法制作脑外伤模型,HBOT组每天进行HBO治疗;Sham组暴露硬脑膜不予打击。运用Morris水迷宫测试认知功能;荧光免疫双标检测海马CA1区CCL2和CCR2的表达。实时定量PCR测定损伤侧海马CCL2和CCR2mRNA的表达情况。结果:Morris水迷宫测试结果显示,HBOT组高压氧治疗后7d、14d和21d平均潜伏期下降,同时穿越平台次数增多,与TBI组相比,差异均有显著性意义(P0.05);免疫荧光双染法检测显示,大鼠TBI后海马CA1区CCL2主要表达在星形胶质细胞,CCR2主要表达在神经元;实时定量PCR显示,脑损伤后3—21d损伤侧海马CCL2 mRNA、CCR2 mRNA水平明显上升,差异有显著性意义;高压氧治疗后海马CCL2 mRNA明显下降,与TBI组相比,7d组、14d组及21d组差异有显著性意义(P0.05)。高压氧治疗7d、14d后海马CCR2 mRNA明显下降,与TBI组相比,7d组及14d组差异有显著性意义(P0.05)。结论:HBO治疗可以改善创伤性脑损伤大鼠认知功能,其机制可能与海马CCL2/CCR2表达下调有关。     

右甲吗喃对大鼠脑损伤后血脑屏障保护作用的实验研究

目的：研究Ｎ甲基Ｄ门冬氨酸（ＮＭＤＡ）受体非竞争性拮抗剂——右甲吗喃对大鼠脑创伤后血脑屏障的保护作用。方法：利用伊文思蓝（ＥＢ）只透过血脑屏障的特点，于大鼠脑损伤前３０分钟及伤后１０分钟、２小时腹腔内注射右甲吗喃（１０ｍｇ／ｋｇ），伤后６小时测定脑半球ＥＢ含量并进行统计学分析。结果：伤前３０分钟及伤后１０分钟应用右甲吗喃可显著降低伤侧脑半球ＥＢ含量（Ｐ均＜０．０１），伤后２小时用药与生理盐水对照组比较无显著性差异（Ｐ＞０．０５）；伤前３０分钟与伤后１０分钟、伤后１０分钟与伤后２小时用药比较均有非常显著性差异（Ｐ均＜０．０１）。结论：脑损伤后２小时以前应用右甲吗喃对血脑屏障损伤具有防治作用。