日本血吸虫中国大陆株23 kDa膜蛋白核酸疫苗对猪免疫保护作用的研究

目的 研究日本血吸虫中国大陆株23kDa膜蛋白（SjC23）DNA疫苗诱导猪的保护性免疫作用。方法 构建并大量制备pcDNA3．1－SjC23质粒DNA和pcDNA3．1－p34，pcDNA3．1－p40（小鼠IL－12的2个亚单位）的DNA疫苗。30头2．5月龄的上海松江本地猪（阉猪）发为A、B、C3组，每组10头。A组（SjC23组）于每头猪两侧臂部肌肉注射500μgpcDNA3．1－SjC23质粒DNA，B组（Sj23＋IL－12组），于每头猪肌肉注射500μgpcDNA3．1－SjC23DNA及500μgpcDNA3．1－p35和500μgpcDNA3．1－p40的混合质粒DNA；C组（对照组）每头猪肉注射500μgpcDNA3．1质粒DNA。共免疫3次，每次间3周。末次免疫后30d，每猪经背部皮肤攻击感染日本血吸虫尾蚴600条。攻击后45d剖杀，经胸主动脉灌中，并从门静脉收集计算成虫。从肝脏的同一部位切下小块肝组织，置5％KOH内消化后，计算每克肝组织虫卵数（EPG），比较各组间减虫率、减雌率和减卵率。在免疫前，末次免疫后和攻击后从猪耳静脉采血，分离血清，用ELISA检测抗SjC23抗体。结果 SjC23组与SjC23＋IL－2组与质粒对照组相比，分别获得29．2％和58．6％的减虫率、50．8％和58．8％的减雌率以及48．2％和56．4％的减卵率。抗体检测SjC23组和SjC23＋IL－12组均有约50％的实验猪可检测到明显的抗SjC23抗体。结论 SjC23DNA疫苗可诱导猪产生较好好的保护保护作用，具有较大的发展潜力。     

日本血吸虫磷酸丙糖异构酶(TPI)DNA疫苗对肝脏虫卵肉芽肿调节作用的研究

目的 探讨日本血吸虫TPI DNA疫苗对血吸虫肝脏虫卵肉芽肿的免疫调节作用，以评价其作为抗病疫苗的潜能。方法 30头松江猪分为3组。A组(TPI组)每头猪于两侧臀部肌注500μg pcDNA3．1-SjCTPI质粒DNA；B组(TPI IL-12组)每头猪肌注500μg pcDNA3．1-sjCTPI DNA疫苗及500μg pcDNA3．1-P35和500μg pcDNA3．1-P40质粒DNA的混和物；C组(对照组)，每头猪肌注500μg pcDNA3．1质粒DNA。于第0、3、6周共免疫3次。末次免疫后30d，每头猪采用背部贴片法攻击感染600条日本血吸虫尾蚴，攻击后45d剖杀实验猪，取肝脏，于同一部位切取1．5cm^3的肝组织。按常规法制备石蜡切片。切片在NYD-1000型图像分析系统下观察，测定所有肉芽肿的面积和直径，并比较。结果 与对照组相比TPI组及TPI IL-12组肉芽肿内炎性细胞明显减少。肉芽肿平均面积较对照组分别减少41．95％和42．50％，肉芽肿直径分别减少25．14％和25．66％。结论 SjCTPI DNA疫苗具有下调血吸虫肝脏肉芽肿的作用，可望成为一种血吸虫病抗病疫苗。     

日本血吸虫中国大陆株TPI DNA疫苗诱导BALB／c小鼠保护性免疫力的研究

目的 研究日本血吸虫中国大陆株磷酸丙糖异构酶（SjCTPI)DNA疫苗诱导BALB/c小鼠的保护性免疫作用。方法 将39只BALB/c小鼠随机分成3组：A组（对照组），肌注pcDNA3.1质粒DNA100μg/鼠；B组（实验组），每鼠肌注pcDNA3.1-SjCTPI100μg;C组（加强组），每鼠肌注pcDNA3.1-SjCTPI100μg及pcDNA3.1-P35和pcDNA3.1-P40的混合物100μg。每两周免疫1次，共计3次，末次免疫4周后，每鼠用45条尾蚴进行攻击，45d后剖杀小鼠，计数成虫以及每鼠肝组织内虫卵数；于攻击前每组各取两只小鼠采用^51Cr释放法测定SjCTPI介导的特异性细胞毒作用。ELISA检测攻击前后的抗TPI的抗体水平。结果 用ELISA检测抗TPI抗体的结果表明，攻击前A组的10份血清均为阴性，B组5/10份血清出现弱阳性，C组也有6/10份血清出现弱阳性反应。^51Cr释放法测定细胞毒活性结果表明，A、B、C组细胞毒活性分别为9.1%、27.6%和54.4%。与对照组相比，实验组的减虫率、减卵率分别为30.2%、52.9%，加强组的减虫率、减卵率分别为32.7%、47.0%。结论 进一步证实了SjCTPI DNA疫苗作为抗血吸虫病核酸疫苗的潜力。     

日本血吸虫23kDa膜蛋白DNA疫苗抗病免疫作用的研究

目的探讨日本血吸虫SjC23 DNA疫苗对血吸虫肝脏虫卵肉芽肿的免疫调节作用,以评价其作为抗病疫苗的潜能。方法 30头松江猪分为3组。A组(SjC23组)每头猪于两侧臀部肌注500μgpcDNA3.l-SjC23质粒 DNA;B组(SjC23+IL-12)每头猪肌注500μg pcDNA3.1-SjC23 DNA疫苗及500μgpcDNA3.1-P 35和500μg pcDNA3.1-P40质粒DNA的混和物;C组(对照组),每头猪肌注500μgpcDNA3.1质粒DNA。于第0、3、6周共免疫3次。末次免疫后30天,每头猪采用背部贴片法攻击感染600条日本血吸虫尾蚴,攻击后45天剖杀实验猪,取肝脏,于同一部位切取1.5cm~3的肝组织。按常规法制备石腊切片。切片在NYD-1000型图象分析系统下观察,测定所有肉芽肿的面积和直径,并比较。结果与对照组相比,SjC23组及SjC23+IL-12组肉芽肿内炎性细胞明显减少。肉芽肿平均面积较对照组分别减小48.57％和44.37％,肉芽肿直径分别减小27.56％和 22.78％。结论 SjC23 DNA疫苗具有下调血吸虫肝脏虫卵肉芽肿的作用,可望成为一种血吸虫病抗病疫苗候选分子。     

日本血吸虫复合表位DNA疫苗免疫保护作用的研究

目的研究日本血吸虫复合表位DNA疫苗诱导BALB/c小鼠抗血吸虫感染的免疫保护作用。方法将40只雌性BALB/c小鼠随机分为4组:pcDNA3.1组(对照组),每鼠经两侧股四头肌注射100μg pcDNA3.1质粒DNA,每侧50μg;TPI组,每鼠肌注100μg pcDNA3.1-TPI质粒DNA;TP组,每鼠肌注100μg pcDNA3.1-T-linker-P质粒DNA;PT组,每鼠肌注100μg pcDNA3.1-P-linker-T质粒DNA。每隔2周加强免疫1次,剂量和方法相同,共免疫3次。末次免疫后4周每鼠经腹部皮肤攻击感染(45±1)条日本血吸虫尾蚴,45d后剖杀,计数成虫及肝脏虫卵数。首次免疫前2 d及感染前2 d尾静脉采血,间接ELISA检测特异IgG及IgG1I、gG2a水平。末次免疫后3周,每组取2只小鼠制备脾细胞,双抗体夹心法检测脾细胞经ConA和rSjCTPI刺激后培养上清中的IL-2I、L-4和IFN-γ水平。结果TP组和PT组小鼠减虫率分别为34.76%和36.14%,显著高于TPI组(P<0.05)和对照组(P<0.01);减卵率分别为51.20%和50.79%,与TPI及对照组比较差异有显著性(P<0.05)。TP组和PT组小鼠血清特异性IgG水平均升高(P<0.05),IgG2a/IgG1的比值分别为4.23和4.34。脾细胞经ConA和rSjCTPI刺激后,IL-2水平TP组和PT组较对照组均升高。结论复合表位DNA疫苗能诱导小鼠产生抗血吸虫感染的免疫保护力,效果优于rSjCTPI疫苗。     

重组日本血吸虫中国大陆株rTPI分子对小鼠免疫保护性作用的研究

目的研究重组日本血吸虫中国大陆株磷酸丙糖异构酶（SjC－TPI）分子抗血吸虫感染的保护性作用。方法用IPTG诱导表达,制备纯化的重组TPI蛋白,将重组TPI抗原免疫C57BL／6及昆明鼠,8周后用血吸虫尾蚴攻击感染,45d后剖杀,计数减虫率及减卵率。结果C57BL／6获得27．78％的减虫率;昆明鼠获得21．39％的减虫率,54．00％的减卵率。结论重组SjC－TPI对血吸虫感染具有一定的保护作用,可能为日本血吸虫病疫苗候选分子之一。     

日本血吸虫中国大陆株TPI DNA疫苗诱导BALB/c小鼠保护性免疫力的研究

目的研究日本血吸虫中国大陆株磷酸丙糖异构酶(SjCTPI)DNA疫苗诱导BALB/c小鼠的保护性免疫作用.方法将39只BALB/c小鼠随机分成3组A组(对照组),肌注pcDNA3.1质粒DNA 100μg/鼠;B组(实验组),每鼠肌注pcDNA3.1-SjCTPI 100μg;C组(加强组),每鼠肌注pcDNA3.1-SjCTPI 100μg及pcDNA3.1-P35和pcDNA3.1-P40的混合物100μg.每两周免疫1次,共计3次.末次免疫4周后,每鼠用45条尾蚴进行攻击,45 d后剖杀小鼠,计数成虫以及每鼠肝组织内虫卵数;于攻击前每组各取两只小鼠采用51Cr释放法测定SjCTPI介导的特异性细胞毒作用;ELISA检测攻击前后的抗TPI的抗体水平.结果用ELISA检测抗TPI抗体的结果表明,攻击前A组的10份血清均为阴性,B组5/10份血清出现弱阳性,C组也有6/10份血清出现弱阳性反应.51Cr释放法测定细胞毒活性结果表明,A、B、C组细胞毒活性分别为9.1%、27.6%和54.4%.与对照组相比,实验组的减虫率、减卵率分别为30.2%、52.9%;加强组的减虫率、减卵率分别为32.7%、47.0%.结论进一步证实了SjCTPI DNA疫苗作为抗血吸虫病核酸疫苗的潜力.     

日本血吸虫鸡尾酒式DNA疫苗与蛋白疫苗联合应用增强免疫保护作用的研究

目的 探讨日本血吸虫鸡尾酒式DNA疫苗与蛋白疫苗联合应用以增强免疫保护作用的效果。方法分别大量制备质粒DNA：pcDNA3．1-SjC23、pcDNA3．1-SjCTPI、pcDNA3．1-（CDR3）6和重组蛋白SjC23-HD、SjCTPI、NP30。pcDNA3．1-SjC23、pcDNA3．1-SjCTPI、pcDNA3．1-（CDR3）6等量混合后即为鸡尾酒式的混合DNA疫苗，重组蛋白SjC23-HD、SjCTPI、NP30等量混合后即为鸡尾酒式的混合蛋白疫苗。70只BALB／c小鼠随机分为A、B、C、D、E5组，每组14只。A组为自然感染组；B组（空质粒对照组）每只小鼠分别在第0、3、6周经股四头肌注射100μlpcDNA3．1；C组（空质粒＋混合蛋白对照组）每只小鼠分别在第0、3、6周经股四头肌注射100μlpcDNA3．1，第9周每鼠经背部皮下多点注射100μl混合蛋白疫苗＋100μl福氏完全佐剂（FCA）；D组（混合DNA组）每只小鼠分别在第0、3、6周经股四头肌注射100μl混合DNA疫苗；E组（混合DNA＋混合蛋白组）每只小鼠分别在第0、3、6周经股四头肌注射100μl混合DNA疫苗，第9周每鼠经背部皮下多点注射100μl混合蛋白疫苗＋100μlFCA。DNA免疫组末次免疫后4周，蛋白加强组末次免疫后2周，所有小鼠同时经腹部皮肤感染（40±1）条尾蚴。攻击感染后42d剖杀小鼠，计数成虫及肝脏虫卵数。首次免疫前2d及感染前2d分别经尾静脉采血，分离血清检测IgG抗体水平、抗体亚类IgG1及IgG2a，并取小鼠脾脏制备单个脾细胞，检测细胞因子IL-2、IL-4、IFN-γ的水平。结果C、D组和E组的减虫率分别为17．70％、32．88％和45．35％，D组和E组的减虫率均显著高于C组（P均〈0．01），且E组的减虫率显著高于D组（P〈0．01）；C、D组和E组的减卵率分别为9．39％、36．20％和48．54％，D组和E组的减卵率均显著高于C组（P均〈0．01），且E组的减虫率也显著高于D组（P〈0．05）。C、D、E3组小鼠血清都检测到特异性IgG抗体，?     

日本血吸虫混合DNA疫苗免疫效果观察

目的 为提高日本血吸虫DNA疫苗免疫效力,观察日本血吸虫抗原分子的混合DNA疫苗诱导小鼠的抗攻击感染的保护性免疫。方法 大量制备真核质粒pBK-CMV-Sj26和pBK-CMV-Sj23,然后将单价DNA疫苗pBK-CMV-Sj26和pBK-CMV-Sj23混合后免疫小鼠。实验分为4组：混合疫苗组、单价疫苗pBK-CMV-Sj23组、空质粒对照组及生理盐水对照组。各组于0周、3周、5周在小鼠股四头肌注射相应质粒DNA或生理盐水,第9周小鼠用血吸虫尾蚴攻击感染,第15周剖杀小鼠计算减虫率及减卵率。结果 与对照组比较,实验组小鼠减虫率及减卵率有极显著性意义（P＜0．01）;与单价pBK-CMV-Sj23组比较,混合DNA疫苗组的减虫率及减卵率有显著性意义（P＜0．05）。结论 血吸虫混合DNA疫苗诱导小鼠对血吸虫的保护力优于单价DNA疫苗。     

日本血吸虫SjCTPI-Hsp70 DNA疫苗与白细胞介素12对水牛的联合免疫保护作用研究

目的 探讨中国大陆株日本血吸虫磷酸丙糖异构酶-热激蛋白（SjCTPI-Hsp70）DNA疫苗联合佐剂白细胞介素-12（IL-12）质粒DNA对水牛的免疫保护作用。 方法 实验采用双盲法，所用疫苗及制剂均在实验结束后解码。将购自非血吸虫病流行区45头8～10月龄健康水牛随机分为 A组（SjCTPI-Hsp70+IL-12，300 μg）、B组（SjCTPI+IL-12， 300 μg）和C组（空质粒pVAX+IL-12， 300 μg）等3组（每组15头），每头牛分别经肩部肌肉注射免疫3次，每次间隔28 d。末次免疫后28 d，每头牛经大腿内侧皮肤感染日本血吸虫尾蚴1 000条。解剖前2 d及当天分别收集粪便1次，用定量法计数虫卵和毛蚴。攻击感染后56 d解剖，用生理盐水经胸主动脉灌冲法收集、计数成虫，检测每克肝组织虫卵数。 结果 A、B组减虫率分别为51.2％和41.5％（χ²=1.89，P＞0.05），减雌虫率分别为48.9％和44.7％（χ²=0.35，P＞0.05），减粪卵率分别为52.1％和38.3％（χ²=3.84，P＜0.05），减毛蚴率为52.1％和33.2%（χ2=7.30，P＜0.01）及减肝卵率为61.5％和42.0％（χ²=7.61，P＜0.01）。 结论 用SjCTPI?鄄Hsp70+IL-12免疫水牛可获得一定的免疫保护性作用。     

模拟抗原表位基因测定及合成多肽的血吸虫病诊断价值的研究

目的测定能用于血吸虫病诊断及疗效考核的噬菌体展示肽基因序列,研究合成多肽抗原的血吸虫病诊断价值.方法扩增目的噬菌体,制备和纯化噬菌体DNA,对目的噬菌体中外源性肽的基因序列进行测定和演绎氨基酸序列分析.根据血清反应强度和演绎氨基酸序列选择2个噬菌体的展示肽段进行人工多肽合成.以合成的多肽为抗原,建立血吸虫病诊断方法,检测急、慢性血吸虫病人血清,观察方法的敏感性及特异性;同时检测治疗前及治愈后的血吸虫病人血清,观察该合成抗原的血吸虫病疗效考核价值.结果测定了14个噬菌体展示外源肽的基因序列,序列分析表明,其中有6个噬茵体的外源肽基因序列完全相同,其余8个噬菌体展示肽的基因序列不相同.分析演绎氨基酸序列,发现1个噬菌体展示肽中的3个连续的氨基酸(GVK)残基与血吸虫23 kDa分子氨基酸残基相同.合成多肽抗原检测急、慢性血吸虫病人血清,敏感性分别为92.3%和91.1%,与华支睾吸虫病人血清的交叉反应率为7.5%,检测健康人血清,特异性为95.5%.检测治愈后0.5年的同一病人血清,阴转率为55.3%,治愈后1年的病人血清中IgG抗体的阴转率为63.2%.结论 9个具有血吸虫病诊断价值的噬菌体展示表位的基因序列被确定,并证明了合成多肽抗原有较好的血吸虫病诊断及疗效考核价值.     

内镜下Oddi括约肌测压的临床意义

为观察胆石症、胆囊切除术后等胆系疾病及功能性消化不良（ＦＤ）、糖尿病胃轻瘫（ＤＧＰ）等非胆系疾病Ｏｄｄｉ括约肌（ＳＯ）功能变化，通过内镜采用灌注式高分辨多道胃肠功能测定仪，对１５例胆系疾病患者、１３例非胆系疾病患者进行Ｏｄｄｉ括约肌测压。结果显示，胆系疾病组的胆总管压力、ＳＯ基础压及蠕动波振幅明显高于非胆系疾病组（６．８６±０．６３ｋＰａ与１．２７±０．１０ｋＰａ，Ｐ＜０．０１；７．３１±０．９５ｋＰａ与１．８７±０．１６ｋＰａ，Ｐ＜０．０１；３２．００±１．２ｋＰａ与２４．１４±１．５ｋＰａ，Ｐ＜０．０５）；同时，非胆系疾病组的十二指肠压、ＳＯ蠕动频率及间期较胆系疾病组明显降低、减慢及延长（１．４２±０．２６ｋＰａ与０．３０±０．１０ｋＰａ，Ｐ＜０．０１；３．６±１．２次／分与２．２±０．４次／分，Ｐ＜０．０５；７．４±１．２秒与１１．０±１．８秒，Ｐ＜０．０５）。结果显示，无论是胆系疾病还是ＦＤ及ＤＧＰ等非胆系疾病均有ＳＯ功能紊乱，但表现形式相反，对指导临床诊断与治疗有一定价值。     

钉螺3种酶的酶谱分析

本研究用淀粉凝胶同工酶电泳法比较了安徽及云南两省的钉螺的酸性磷酸酶（ＡｃＰ，ＥＣ３．１．３．２）、过氧化物酶（Ｐｏ，ＥＣ１．１１．１．７）及酯酶（Ｅｓｔ，ＥＣ３．１．１．１）的电泳带型。ＡｃＰ及Ｐｏ的同工酶中ＡｃＰ１、ＡｃＰ２及Ｐｏ１、Ｐｏ２由单态位点编码。Ｅｓｔ的同工酶由４个位点编码，其中Ｅｓｔ３在安徽的钉螺中为１条电泳快带，相对迁移率（Ｒｆ）为０．３６２±０．０２７；在云南的钉螺中为１条电泳慢带，Ｒｆ为０．３４０±０．０３６。     

骨代谢指标测定在骨质疏松诊治中的应用价值

目的 比较妇女绝经前后骨代谢指标的变化，研究各指标在骨质疏松症治疗后的变化率，对各指标在骨质疏松症诊治中的应用作出初步评价。方法 48例绝经前妇女、48例绝经后妇女测定10项骨代谢指标．45例绝经后骨质疏松症患者．治疗前、治疗6个月后分别测定10项骨代谢指标，观察其变化率。12名绝经后妇女，每两个月测定10项骨代谢指标。共观察一年。结果 绝经后妇女骨代谢指标明显升高，绝经后骨质疏松症患者经抗吸收治疗后．大部分骨代谢指标明显降低，血清骨形成指标比尿骨吸收指标长期个体内的变异要小。结论 绝经后骨质疏松症患者骨转换加快，部分血清骨代谢指标优于尿骨代谢指标，尤以血清骨形成指标N—mid骨钙素和血清骨吸收指标CTX为优。     

EVOLUTION OF FITNESS, V. RATE OF EVOLUTION OF IRRADIATED POPULATIONS OF Drosophila

Measurable evolution occurs in laboratory populations of Drosophila under strong natural selection. The rate of adaptation to the experimental environment is significantly greater in populations with genetic variability increased by radiation than in the control, nonirradiated populations.