抗纤软肝冲剂药物血清对激活肝星状细胞表达Ⅰ型前胶原及TGF—β1mRNA的影响

目的：探讨抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的作用机理。方法：分离正常大鼠肝星状细胞,并传代培养。用抗纤软肝冲剂给正常大鼠灌胃,制备药物血清,温育培养细胞72h,提取细胞总RNA,RT-PCR法分析Ⅰ型前胶原、TGF-β1mRNA的表达。结果：抗纤软肝冲剂药物血清能显著抑制肝星状细胞的Ⅰ型前胶原及TGF-β1mRNA的表达。结论：抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的机理之一是调控肝星状细胞的Ⅰ型前胶原及TGF-βmRNA的表达。     

抗纤软肝冲剂药物血清对肝星状细胞胶原代谢及其相关基因表达的影响

目的 :从细胞分子学水平探讨抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的作用机制。方法 :抗纤软肝冲剂药物血清温育传一代HSC ,以生理盐水和秋水仙碱为对照。ELISA测定细胞上清Ⅰ型胶原 ,并测定细胞层总蛋白以校正胶原含量 ;半定量法RT -PCR法检测Ⅰ型胶原、间质胶原酶 (MMP1)的mRNA表达。结果 :抗纤软肝冲剂组细胞上清中的Ⅰ型胶原含量明显低于其它两组 (P <0 .0 1) ;能明显抑制细胞的Ⅰ型胶原mRNA表达 (P <0 .0 1) ,且能促进MMP1的mRNA表达 (P <0 .0 1)。结论 :抗纤软肝冲剂能明显抑制HSC的胶原基因表达和促进间质胶原酶基因表达 ,从而可达到抑制胶原合成 ,促进胶原降解 ,这可能是抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的细胞分子学机制之一。     

抗纤软肝中剂药物血清对肝星状细胞胶原代谢及其相关基因表达的影响

目的从细胞分子学水平探讨抗纤软肝中剂抗肝纤维化的作用机制.方法抗纤软肝中剂药物血清温育传一代HSC,以生理盐水和秋水仙碱为对照.ELISA测定细胞上清Ⅰ型胶原,并测定细胞层总蛋白以校正胶原含量;半定量法RT-PCR法检测Ⅰ型胶原、间质胶原酶(MMP1)的mRNA表达.结果抗纤软肝冲剂组细胞上清中的Ⅰ型胶原含量明显低于其它两组(P＜0.01);能明显抑制细胞的Ⅰ型胶原mRNA表达(P＜0.01),且能促进MMP1的mRNA表达(P＜0.01).结论抗纤软肝冲剂能明显抑制HSC的胶原基因表达和促进间质胶原酶基因表达,从而可达到抑制胶原合成,促进胶原降解,这可能是抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的细胞分子学机制之一.     

抗纤软肝冲剂药物血清对肝星状态细胞胶原代谢及其相关基因表达的影响

目的：从细胞分子学水平探讨抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的作用机制。方法：抗纤软肝冲剂药物血清温育传一代HSC，以生理盐水和秋水仙碱为对照。ELISA测定细胞上清Ⅰ型胶原，并测定细胞层总蛋白以校正胶原含量；半定量法RT－PCR法和检测Ⅰ型胶原，间质胶原酶（MMPI）的mRNA表达。结果：抗纤软肝冲剂组细胞上清中的Ⅰ型胶原含量明显低于其它两组（P＜0．01）；能明显抑制细胞的Ⅰ型胶原mRNA表达（P＜0．01），且能促进MMP1的mRNA表达（P＜0．01）。结论：抗纤软肝冲剂能明显抑制HSC的胶原基因表达和促进间质胶原酶基因表达，从而可达到抑制胶原合成，促进胶原降解，这可能是抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的细胞分子学机制之一。     

剔毒护肝方对肝星状细胞表达Ⅰ型胶原及TGFβ1mRNA的影响

目的：探讨剔毒护肝方抗肝纤维化的作用机理。方法：分离正常大鼠肝星状细胞，并传代培养，用剔毒护肝方给正常大鼠灌胃，制备药物血清，温育培养细胞72h，测定培养上清中Ⅰ型胶原含量及TGF-β1活性，提取细胞总RNA，RT-PCR法分析Ⅰ型胶原，TGF-β1mRNA的表达。结果：剔毒护肝方药物血清能显著降低肝星状细胞培养上清中的Ⅰ型胶原含量及TGFβ1活性，并能抑制Ⅰ型胶原及TGFβ1mRNA的表达。结论：剔毒护肝方抗肝纤维化的机理之一是抑制肝星状细胞自分泌TGFβ1，并通过TGFβ1生成的减少，下调细胞Ⅰ型胶原的基因转录。     

抗纤Ⅰ号对实验性肝纤维化大鼠组织Ⅰ、Ⅲ型胶原及转移生长因子β1 mRNA表达的影响

目的:从分子水平研究抗纤Ⅰ号方剂治疗肝纤维化作用机理.方法:利用CCl4制造大鼠肝纤维化模型,设立正常对照组、肝纤维化模型组及中药治疗组,中药灌胃治疗42d,检测病理学指标、肝纤维化血清学指标、肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原的免疫组化,以及肝组织TGF β1mRNA表达量的变化.结果:肝组织病理学以及血清学指标同对照组统计学尚有显著差异,同时实验也表明治疗组能够明显减少肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原以及TGF β1mRNA的表达量.结论:抗纤Ⅰ号具有逆转肝纤维化的作用,其作用机理可能是通过下调TGF β1mRNA,抑制Ⅰ、Ⅲ型胶原的合成而减轻肝纤维化.     

抗纤软肝冲剂对肝星状细胞胶原降解相关基因表达的影响

目的 从细胞分子水平研究抗纤软肝冲剂对肝星状细胞(HSC)胶原降解的影响。方法 抗纤软肝冲剂药物血清温育传一代HSC，以生理盐水和秋水仙碱为对照。ELISA法测定细胞上清I型胶原，并测定细胞层总蛋白以校正胶原含量；半定量RT—PCR法检测间质胶原酶(MMN)和金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1）的mRNA表达。结果 抗纤软肝冲剂组细胞上清中的I型胶原含量明显低于其他两组(P＜0．05或P＜0．01)；明显促进细胞MMN的mRNA表达(P＜0．05或P＜0.01)，显著抑制细胞TIMP-1的mRNA表达(P＜0．05或P＜0．01)。结论 抗纤软肝冲剂能促进MMN基因表达，抑制TIMP-1基因表达，从而促进胶原降解，这可能是该方抗肝纤维化的细胞分子学机制之一。     

消痰化瘀抗纤方药物血清对肝星状细胞增殖及胶原降解基因表达的影响

目的:观察消痰化瘀抗纤方(简称抗纤方)药物血清对肝星状细胞(HSC)增殖,Ⅰ型胶原含量及相关基因表达水平的影响,探讨该方抗肝纤维化的细胞分子学机制。方法:正常大鼠血清和药物血清干预HSC-T6细胞24h,MTT法检测抗纤方药物血清对HSC增殖,ELISA法测定细胞上清液Ⅰ型胶原含量变化,RT-PCR法检测细胞中金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)和基质金属蛋白酶-1(MMP-1)的mRNA表达量。结果:抗纤方高(13.5倍)、中(4.5倍)、低(1.5倍)剂量组药物血清能明显抑制HSC增殖(P<0.05),且增殖抑制率与剂量呈正相关;对上清液中Ⅰ型胶原含量影响,随药物剂量增加明显降低(P<0.05);能明显抑制TIMP-1mRNA表达(P<0.05),促进MMP-1mRNA表达(P<0.05)。结论:抗纤方药物血清能抑制HSC增殖,减少Ⅰ型胶原含量,抑制TIMP-1表达,促进MMP-1表达,具有抗肝纤维化作用。     

三七总皂甙对肝纤维化大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF-β_1的影响

目的 :观察三七总皂甙对肝纤维化大鼠胶原合成及TGF β1表达的影响。方法 :用四氯化碳复合因素致大鼠肝纤维化模型 ,同时给与三七总皂甙治疗 ,免疫组化观察Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF β1的合成表达 ,纤维化程度分级。结果 :三七总皂甙能抑制肝纤维化大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF β1的合成表达 ,减轻肝纤维化程度。结论 :三七总皂甙具有抗肝纤维化作用 ,其机理尚待进一步研究     

抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的实验研究

目的 :通过抗纤软肝冲剂对肝纤维化动物防治作用的研究 ,探讨该方抗肝纤维化的作用机理。方法 :四氯化碳、高脂、高胆固醇、低蛋白等复合因素诱导大鼠肝纤维化动物模型 ,同时给予抗纤软肝冲剂 ,以秋水仙碱为对照。检测肝组织羟脯氨酸 Hyp、超氧化物歧化酶 SOD及丙二醛 MDA,观察血清肝纤维化指标 (透明质酸 HA、层粘蛋白 LN、 型前胶原 PC 、 型胶原 -C)及肝功能 (白蛋白 Alb、球蛋白 G、谷丙转氨酶 A LT)。结果 :抗纤软肝冲剂对肝纤维化大鼠有升高A lb,降低 AL T和 G的作用 ;显著提高肝 SOD活性 ,降低 MDA含量 ;显著降低 HA ,LN ,PC , -C;减轻肝脏 Hyp的作用。结论 :抗纤软肝冲剂具有确切的防治肝纤维化的作用 ,其机理在于抗脂质过氧化和保护肝细胞 ,对胶原代谢也有直接作用     

扶正化瘀319方药物血清对肝星状细胞Ⅰ型胶原及转化生长因子β1表达的影响

目的：探讨扶正化瘀３１９方抗肝纤维化的主要作用机理。方法：分离正常大鼠肝星状细胞,并传代培养。用扶正化瘀３１９方给正常大鼠灌胃,制备药物血清,温育培养细胞。胶原酶消化法测定细胞内外胶原生成率,ＥＬＩＳＡ法测定培养上清的Ⅰ型胶原含量,免疫细胞化学染色、图像分析半定量转化生长因子β１（ＴＧＦβ１）蛋白表达,ＲＴＰＣＲ法分析Ⅰ型前胶原、ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ的表达量。结果：扶正化瘀３１９方药物血清能明显抑制肝星状细胞的细胞内外胶原生成率,抑制细胞的Ⅰ型前胶原基因表达及其胶原分泌,抑制肝星状细胞ＴＧＦβ１与蛋白表达。结论：扶正化瘀３１９方能明显抑制肝星状细胞的活化,对肝星状细胞Ⅰ型前胶原及ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ表达的抑制可能是该方抗肝纤维化的主要作用机理。     

抗纤软肝冲剂对肝星状细胞自分泌转化生长因子β1的影响

目的：从细胞分子水平研究抗纤软肝冲剂对肝星状细胞(HSC)表达转化生长因子β1(TGF-β1)的影 响。方法：抗纤软肝冲剂药物血清温育传一代HSC,以生理盐水和秋水仙碱为对照。免疫细胞化学分析TGF-β1 的 蛋白合成；半定量RT-PCR 法检测TGF-β1 的mRNA 表达量。结果：抗纤软肝冲剂能明显抑制HSC 的自分泌TGF-β1 及其mRNA 表达(P<0.01)。结论：抗纤软肝冲剂能抑制HSC 的TGF-β1 的基因和蛋白表达,阻断其自分泌放大活化 效应,这可能是该方抗肝纤维化的细胞分子学机制之一。     

莪术对肝星状细胞活化的影响

目的:观察莪术对肝星状细胞活化的影响。方法:莪术水煎液(0.3g/ml)按10ml/kg 大鼠体重给正常大鼠灌胃,每天2次,连续3天,第4天1次给予全日剂量,1h 后采血,离心分离血清,56℃灭活,制备药物血清。以正常鼠血清及秋水仙碱药物血清作为对照。将药物血清温育传一代的肝星状细胞,氚标胸腺嘧啶核苷(~3H-TdR)掺入法及噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖;酶联免疫吸附(ELISA)法测定培养上清Ⅰ型胶原含量,改良 Lowrv's 法测定细胞层总蛋白以校正细胞数;貂肺上皮细胞株-Mvllu 抑制 MTT 法测定培养上清转化生长因子β_1(TGF β_1)。结果:莪术药物血清和秋水仙碱药物血清对活化的肝星状细胞增殖均有显著抑制作用(P<0.01)。莪术的抑制作用强于秋水仙碱(P<0.01),二者都能抑制肝星状细胞生成Ⅰ型胶原(P<0.01),并且都能显著抑制肝星状细胞分泌 TGF β_1,两者作用比较,差异无显著性(P>0.05)。结论:莪术能抑制肝星状细胞增殖,减少胶原和 TGF β_1的生成,从而抑制肝星状细胞的活化。     

软肝冲剂抗免疫损伤性肝纤维化的实验研究(2)

目的:探讨软肝冲剂治疗肝纤维化的作用机理。方法:制备免疫损伤性肝纤维化模型,以软肝冲剂作治疗组,促肝细胞生长素及秋水仙碱作对照组,观测肝组织Ⅲ型胶原(Collagen)、转化生长因子β1(TGFβ1)的免疫组化以及肝细胞生长因子(HGF)mRNA的原位杂交表达等。结果:肝脏组织TGFβ1、CollagenⅢ的免疫组化显示软肝冲剂组阳性表达显著减少;原位杂交及RT-PCR电泳图谱示软肝冲剂能明显抑制HGFmRNA的表达。结论:软肝冲剂具有明显的抗肝纤维化作用。     

抗纤软肝冲剂药物血清对肝星状细胞增殖的影响

目的从细胞学水平探讨抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的作用机制.方法采用酶消化法、密度梯度离心法,分离正常大鼠肝星状细胞(HSC),培养、鉴定及传代.制备抗纤软肝冲剂药物血清,温育传一代HSC,并设生理盐水组和秋水仙碱组为对照.3H-proline掺入法测定细胞活力;3H-TdR掺入法和MTT比色法测定细胞增殖.结果抗纤软肝冲剂组药物血清对细胞形态无影响,还能明显提高细胞的3H-proline掺入(P＜0.01),明显抑制细胞的3H-TdR掺入量和MTT转化(P＜0.01),且对MTT的抑制作用呈浓度依赖性递增趋势.结论抗纤软肝冲剂能提高细胞活力,无细胞毒性作用;能抑制HSC的增殖,这可能是该方抗肝纤维化的细胞学机制之.     

抗纤软坚冲剂对实验性肝纤维化大鼠TGFβ_1及其受体的影响

既往的临床与动物实验证实了抗纤软坚冲剂有抗肝纤维化作用,为进一步探讨抗纤软坚冲剂抗肝纤维化的机制,本实验从其对促肝纤维化关键细胞因子之一——转化生长因子TGFβ1及其受体含量、mRNA表达的影响这一角度进行观察,以探讨抗纤软坚冲剂对肝纤维化这一环节的作用。选择复合性损伤大鼠为模型,秋水仙碱为对照,应用免疫组织化学、原位杂交技术检测TGFβ1及其受体的阳染面积,并用图像分析系统计算出阳性表达率,结果得出抗纤软坚冲剂可抑制TGFβ1分泌及其传导,与正常组、模型组比较,有显著性差异(P<0.05);与秋水仙碱组比较,无显著差异(P>0.05)。证明抗纤软坚冲剂能抑制肝纤维化大鼠TGFβ1及其受体的表达。其机理可能是通过抑制HSC的活化进而减少了TGFβ1及其受体的表达。     

抗纤软肝颗粒对肝纤维化大鼠肝脏MMP-1mRNA及TIMP-1mRNA表达的影响

目的观察抗纤软肝颗粒对实验性肝纤维化大鼠肝脏基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)的影响,探讨其防治肝纤维化的作用.方法采用250mL/L四氯化碳给大鼠皮下注射制备肝纤维化模型,并同时给与秋水仙碱及抗纤软肝颗粒小、大剂量治疗,免疫组织化学法检测肝组织Ⅰ、ⅢⅡ型胶原,原位杂交的方法检测MMP-lmRNA、TIMP-1mRNA.结果抗纤软肝颗粒能促进MMP-1的表达(P＜0.05),抑制TIMP-1的表达(P＜0.01),促进Ⅰ、Ⅲ型胶原的降解(P＜0.01).结论抗纤软肝颗粒能促进MMP-1的表达,抑制TIMP-1的表达,促进胶原的降解,产生抗肝纤维化的作用.     

抗纤Ⅰ号复方药物血清对肝星状细胞 L型钙通道的影响

目的:应用膜片钳全细胞技术研究抗纤Ⅰ号复方药物血清对单个肝星状细胞L型钙通道的影响,并进一步探讨该药防治肝纤维化的机制.方法:制备大鼠含抗纤Ⅰ号复方药物血清,分别用药物血清和CCl4处理大鼠肝星状细胞(HSC),孵育24h后,应用膜片钳全细胞技术观察细胞L型钙通道.通过正交设计方法,研究不同浓度CCl4、抗纤Ⅰ号复方药物血清及其作用的先后顺序和二者作用的时间间隔对肝星状细胞L型钙通道的影响.结果:不同浓度抗纤Ⅰ号复方药物血清、CCl4及其作用的前后顺序对细胞L型钙电流的影响有显著性(P＜0.05),两因素作用的时间间隔对结果没有显著性(P＞0.05).CCl4在5～20mmol/L范围内能显著增加肝星状细胞L型钙电流峰值,5%～40%抗纤Ⅰ号复方药物血清明显降低肝星状细胞L型钙电流峰值(P＜0.05).结论:抗纤Ⅰ号具有防治肝纤维化的作用,其机理可能与其调节肝星状细胞L型钙通道有关.     

软肝化癥丸抗肝纤维化作用的实验研究

目的 :探讨多法联用经验方软肝化丸对肝纤维化的治疗作用及作用机理。方法 :复制大鼠免疫性肝纤维化模型 ,取大鼠肝组织及血清观察肝脏和血清生化、血液流变学、肝脏病理、胶原基因表达、脂多糖诱导腹腔巨噬细胞产生细胞因子。结果 :软肝化丸具有保护肝功能 ,改善血液流变性 ,降低肝组织胶原蛋白的含量 ,抑制诱导的大鼠腹腔巨噬细胞产生一氧化氮 (NO)水平、肿瘤坏死因子a(TNF a)和白介素 1(IL 1)的活性 ,抑制大鼠肝组织Ⅰ型胶原和Ⅲ型前胶原mRNA的表达。结论 :软肝化丸能够保护大鼠肝功能 ,通过调节免疫及肝组织胶原蛋白的过度增生与沉积而达到抗肝纤维化的目的。     

抗纤I号对实验性肝纤维化大鼠组织I、Ⅲ型胶原及转移生长因子β1mRNA表达的影响

目的：从分子水平研究抗纤I号方剂治疗肝纤维化作用机理。方法：利用CCL4制造大鼠肝纤维化模型，设立正常对照组、肝纤维化模型组及中药治疗组，中药灌胃治疗42d，检测病理学指标、肝纤维化血清学指标、肝组织I、Ⅲ型胶原的免疫组化，以及肝组织TGFβ1mRNA表达量的变化。结果：肝组织病理学以及血清学指标同对照组统计学尚有显著差异，同时实验也表明治疗组能够明显减少肝组织I、Ⅲ型胶原以及TGFβ1mRNA的表达量。结论：抗纤I号具有逆转肝纤维化的作用，其作用机理可能是通过下调TGFβ1mRNA，抑制I、Ⅲ型胶原的合成而减轻肝纤维化。