双歧杆菌WPG抑瘤作用的给药方法和剂量研究

目的研究双歧杆菌完整肽聚糖的不同给药方法及剂量对小鼠体内肿瘤的抑制效果。方法用肝癌细胞腋下接种制备肿瘤模型,观察双歧杆菌WPG对小鼠体内肿瘤的抑制作用;观察不同给药方法和剂量对淋巴细胞转化率、肿瘤的生长、抑瘤率及荷瘤小鼠生存期的影响。结果通过灌胃和注射给药都能明显抑制小鼠体内肿瘤的生长、提高淋巴细胞转化率、延长荷瘤小鼠的生存期,其中,注射给药优于灌胃给药;注射给药,双歧杆菌WPG量达0.5~0.6 mg/只时,对肿瘤的抑制效果最好。结论双歧杆菌WPG通过注射给药抑瘤效果最好,抑瘤作用的最适浓度为0.5~0.6mg/只。     

半枝莲多糖抗肝癌作用的研究

目的:探讨半枝莲多糖抗肝癌作用,观察其对H22荷瘤小鼠的增效减毒作用及对肝癌细胞Hep G2增殖的抑制作用。方法:将肝癌H22荷瘤小鼠,24h后随机分组,连续给药8天,剥离肿瘤,计算抑瘤率,并检测半枝莲多糖对人肝癌细胞Hep G2增殖的影响。结果:半枝莲多糖与环磷酰胺联用对H22荷瘤小鼠有增效减毒的作用,其对肝癌细胞Hep G2增殖的抑制作用显著。结论:初步表明半枝莲多糖具有抗肝癌的作用。     

树突状细胞激活效应细胞作用的初步研究

目的探讨树突状细胞（DC）对肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）和小鼠脾淋巴细胞（小鼠脾LC）的最佳激活作用比例.方法联合应用GM-CSF、IL-4和小鼠H22肝癌细胞全细胞性抗原致敏从荷瘤小鼠四肢长骨提取的DC,依据不同的激活比例用致敏DC体外激活TIL和小鼠脾LC,采用乳酸脱氢酶（LDH）4小时释放法测定、观察被不同程度激活的TIL和小鼠脾LC对小鼠H22肝癌细胞的杀伤活性.结果当E/T为1：400和1：200时,所激活的TIL或小鼠脾LC的杀伤活性较弱,线性关系不明显,P＞0.05;当E/T为1：100时,杀伤活性有较明显的提高,与前两者比较,P＜0.05;当E/T=1：50时,杀伤活性徒增,与前三者比较均有显著性差异;而当E/T=1：25,1：12.5和1：6.25时,杀伤活性与E/T=1：50时基本没变化,P＞0.05.结论当E/T=1：50时,DC能使小鼠脾LC和TIL充分激活,显著提高其对小鼠H22肝癌细胞的体外杀伤活性.     

双歧杆菌完整肽聚糖对结肠癌细胞株SW480上皮-间质转化的调控作用研究

目的研究双歧杆菌完整肽聚糖(whole peptidoglycan,WPG)对结肠癌细胞株SW480上皮-间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)、侵袭和迁移能力的调控作用,阐明WPG抑制结肠癌细胞EMT从而影响肿瘤转移的分子机制。方法常规培养结肠癌细胞株SW480,分为NC组(阴性对照组)、EMT组(TGF-β1诱导EMT组)、EMT+WPG组、WPG组。给予WPG(116μg/ml)孵育48 h后,western-blot法检测EMT相关标志蛋白E-cadherin、Vimentin及转移相关蛋白MMP-2、MMP-9的表达,transwell检测细胞的侵袭及转移能力。结果 TGF-β1诱导SW480细胞中EMT发生。与NC组相比,EMT组E-cadherin、MMP-2、MMP-9表达升高(P=0.004 8、0.002 6、0.000 4),而Vimentin表达降低(P=0.000 7),且增加了SW480细胞的侵袭(P=0.001 3)及迁移数量(P0.01);经WPG处理后(EMT+WPG组)E-cadherin、MMP-2、MMP-9表达降低(P=0.013、0.031 5、0.000 9),而Vimentin表达升高(P=0.000 1),且细胞侵袭(P=0.012 1)及迁移数量减少(P0.01)。单纯给予WPG对SW480细胞中E-cadherin、Vimentin、MMP-2、MMP-9表达及对细胞侵袭及迁移无影响(P=0.518、0.238、0.281、0.315 3)。结论双歧杆菌完整肽聚糖能抑制结肠癌细胞株SW480的EMT进程,降低结肠癌细胞的侵袭及转移能力。     

腺病毒介导PTEN基因抑制肝癌体外生长和侵袭力的研究

目的探讨腺病毒介导PTEN基因对肝癌细胞株H22体外生长和侵袭力的影响。方法以Ad-PTEN、Ad-PTEN^G-129R质粒及空载质粒分别转染体外培养肝癌细胞株H22，并以来转染组为对照，用RT-PCR检测目的基因，用四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT）检测细胞活力，通过Boyden小室法检测肝癌细胞株H22体外侵袭力的变化。结果RT-PCR显示Ad-PTEN-H22组、Ad-PTEN^G-129R-H22组的H22细胞相应基因mRNA表达呈阳性条带，表明有PTEN和PTEN^G-129R的表达；在细胞活力检测上，Ad-PTEN-H22组550nm波长光吸收值为0.5627±0.0633，表明该组活细胞数明显低于其他各组（P〈0．05）；Ad-PTEN-H22组的侵袭细胞数为（15.64±3．27）％，低于其他组（P〈0.05）。结论重组腺病毒载体介导的PTEN基因转染可抑制肝癌细胞株H22体外生长并且其体外侵袭力受到明显抑制。     

短小双歧杆菌对小鼠细胞免疫功能的影响

观察热杀的短小双歧杆菌对小鼠单核巨噬细胞（ＭΦ）吞噬功能、自然杀伤细胞（ＮＫ）活性、淋巴因子激活的杀伤细胞（ＬＡＫ）活性的影响。结果表明，短小双歧杆菌腹腔注射后，小鼠ＭΦ吞噬功能，ＮＫ细胞、ＬＡＫ细胞的细胞毒作用均显著增强，并可提高小鼠ＩＬ２的诱生活性。提示短小双歧杆菌可能通过其细菌细胞壁免疫活性成分而对小鼠细胞免疫功能发挥免疫调节作用     

去蛋氨酸环境中多种化疗药对肝癌细胞株的杀伤作用

目的 探索肝癌细胞和肝细胞在缺乏蛋氨酸环境中的生长状况和去蛋氨酸状况与多种化疗药物联合应用是否可增加对肝癌细胞的杀伤作用。方法 将肝癌细胞株BEL-7402、肝细胞株L-02分别置于不含蛋氨酸含同型半胱氨酸培养基(Met^-Hcy^ )和含蛋氨酸不含同型半胱氨酸培养基(Met^ Hcy^-)中培养，MTT法检测两组细胞增值状态及在不同培养基中分别加入ADM、CDDP、5-FU、MMC和MTX化疗药物后，对各组细胞生长的抑制程度。结果 L-02在Met^-Hcy^ 和Met^ Hcy^-中生长无差异；Met^-Hcy^ 未增加5-FU、ADM、CDDP、MMC和MTX对L-02的毒性作用。与Met^ Hcy^-组相比，在Met^-Hcy^ 培养基中BEL-7402细胞生长受抑。Met^-Hcy^ 与5-FU相结合可显著提高对BEL-7402细胞的杀伤作用，与ADM、CDDP、MMC和MTX结合未提高对BEL-7402细胞的杀伤作用。结论 肝癌细胞BEL-7402细胞具有Met依赖性。Met^-Hey^ 与周期特异性化疗药物5-FU相结合可显著提高其对肝癌细胞BEL-7402的杀伤作用。     

NK、NKT和γδT淋巴细胞对鼻咽癌细胞株CNE-1的杀伤效应研究

目的比较NK、NKT、γδT等3种淋巴细胞对鼻咽癌细胞株CNE-1的杀伤作用,为鼻咽癌免疫治疗提供依据。方法提取鼻咽癌患者外周血单核细胞(PBMC),体外诱导培养NK、NKT、γδT淋巴细胞14d,并用流式细胞术鉴定细胞表型。以鼻咽癌细胞株CNE-1作为靶细胞,表型鉴定正确的3种细胞分别加入CNE-1细胞中,采用实时无标记动态细胞分析(RTCA)实时检测NK、NKT和γδT淋巴细胞对靶细胞的杀伤效应,比较3种淋巴细胞的杀伤效率。结果自鼻咽癌患者外周血PBMC培养的NK、NKT、γδT淋巴细胞经流式细胞术证实表型正确;RTCA的结果表明在加入不同效靶比的3种效应细胞后,CNE-1细胞均呈现快速死亡,其中NKT淋巴细胞在1、4、8h对鼻咽癌CNE-1细胞株的体外杀伤率,高于NK和γδT淋巴细胞。结论 NK、NKT、γδT淋巴细胞对鼻咽癌细胞有杀伤作用,NKT细胞的杀伤作用最显著,提示具有鼻咽癌临床生物治疗应用的潜力。     

人参多糖与奥沙利铂联合作用对肝癌细胞的生物学行为的影响

目的探讨人参多糖与奥沙利铂联合作用对肝癌细胞的生物学行为的影响。方法细胞活性检测人参多糖联合奥沙利铂对肝癌细胞的影响;Transwell侵袭实验检测加入姜黄素和卡铂对肺癌细胞的侵袭能力的影响;裸鼠成瘤实验检测人参多糖联合奥沙利铂对肝癌细胞的成瘤能力的影响;Western blotting检测人参多糖联合奥沙利铂促进凋亡相关蛋白在肝癌细胞中的表达。结果人参多糖和奥沙利铂联合用药对肝癌细胞的抑制效果明显增加;在人参多糖和奥沙利铂联合治疗组中,HepG2肝癌细胞侵袭能力减弱,肿瘤重量显著降低;人参多糖和奥沙利铂联合应用可以激活下游凋亡蛋白活性从而影响肝癌细胞的生物学活性。结论人参多糖和奥沙利铂联合用药可以通过下调凋亡蛋白水平抑制HepG2肝癌细胞株的侵袭能力和成瘤能力。     

野生蚕抗菌肽对癌细胞的杀伤作用及其超微结构的研究

目的从野蚕蛹血淋巴中分离纯化抗菌肽,并研究野蚕抗菌肽对体外培养癌细胞的杀伤作用及超微结构的影响。方法采用MTT法检测野蚕抗菌肽对癌细胞的杀伤作用,并用透射电镜观察野生蚕抗菌肽对癌细胞超微结构的影响。结果野蚕抗菌肽对体外培养的A549、HepG2、SW620、HME1四株癌细胞具有较强的杀伤作用,而对HNE1鼻咽癌细胞和MCF-7乳腺癌细胞杀伤作用较弱,透射电镜观察发现野蚕抗菌肽处理癌细胞后其细胞表面微绒毛减少、细胞膜破损,线粒体肿胀并形成空泡,核被膜消失、核浓缩聚集靠边呈块状或新月状凋亡小体。结论野蚕抗菌肽可有效地杀伤人体不同系统的癌细胞,并诱导HepG2癌细胞凋亡。     

果蔬发酵液体内外的抑癌作用及对免疫功能的影响

目的研究果蔬发酵液(VFFL)的抑瘤作用及对免疫功能的保护作用。方法采用ICR小鼠建立移植性肝癌小鼠模型,随机分为阴性对照组、阳性对照组和VFFL16.6、33.36、6.6 ml/(kg.d)三个剂量组,观察小鼠的瘤重、脾指数、胸腺指数;流式细胞仪检测细胞凋亡;MTT法检测VFFL对SMMC-7721肝癌细胞增殖的抑制作用并用吖啶橙染色于荧光显微镜观察细胞核形态学变化并检测淋巴细胞转化能力、NK细胞活性。结果VFFL各剂量组对H22肿瘤细胞均有明显的抑制作用,抑制率为49.1%、35.0%和25.7%并可显著诱导细胞凋亡;VFFL作用3 d后呈剂量依赖性抑制SMMC-7721细胞增殖,5 d后作用显著,荧光显微镜下细胞核固缩、凝聚,呈浓染致密的颗粒块状并明显提高小鼠NK细胞活力(P<0.01)。结论VFFL具有抑制肿瘤细胞生长作用,其可能与诱导细胞凋亡及提高小鼠机体免疫功能有关。     

肿瘤细胞及辐照对近交系KM-HL小鼠影响的研究

目的 观察KM-HL鼠对肿瘤细胞的易感性;对¹³⁷Cs-γ射线致免疫功能下降的研究,为KM-HL鼠作为实验用鼠提供理论依据。方法 给KM-HL小鼠接上S₁₈₀、U₁₄和H₂₂等肿瘤,观察其生长情况;使KM-HL受到¹³⁷Cs-γ线6.5Gy照射后,致免疫功能下降,观察血液、造血系统、脾系数、胸腺系数等免疫指标。结果 KM-HL小鼠接种S₁₈₀、U₁₄和H₂₂的液体瘤细胞或实体瘤均生长较好;KM-HL小鼠受到照射后各项生理指标与对照组比有所下降并有统计学意义(P<0.01)。结论 近交系KM-HL小鼠可作为肿瘤药物筛选和免疫功能药物筛选的实验用鼠。     

水通道蛋白1及水通道蛋白4在人肺腺癌细胞株中的表达及意义

目的 探讨水通道蛋白(AQP)1及AQP4在人肺腺癌H1299细胞株中的表达及其临床意义.方法 采用半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot技术检测AQP1及AQP4在人肺腺癌H1299细胞株(肺腺癌组)中的表达,进一步通过Matrigel invasion assay观察肿瘤细胞的迁移情况.取癌周正常肺组织(距癌缘＞3 cm,病理证实无肿瘤细胞)作为对照组.结果 RT-PCR结果显示,对照组中的AQP1、AQP4 mRNA相对表达量分别为1.030±0.070和1.140±0.190;而肺腺癌组中的AQP1、AQP4 mRNA相对表达量分别为2.021±0.250和2.180±0.180.与对照组比较,肺腺癌组中的AQP1、AQP4表达均明显增强(P＜0.05).Western blot结果显示,对照组中的AQP1和AQP4 mRNA仅有极低表达,而在肺腺癌组中有较强表达(P＜ 0.05);Matrigel invasion assay显示肺腺癌细胞迁移能力与AQP1及AQP4的表达呈正相关(r=0.351,P＜0.05).结论 AQP1及AQP4在人肺腺癌H1299细胞株中有较明显的增强表达;AQP1及AQP4在肺腺癌细胞迁移中均起着重要的促进作用.     

阿司匹林联合奥希替尼对H1975细胞的影响

目的 探讨阿司匹林联合表皮生长因子酪氨酸酶抑制剂（Epidermal Growth Factor Receptor Tyrosine Kinase Inhibitor ,EGFR - TKI）奥希替尼（AZD9291）对非小细胞肺癌H1975细胞株增殖的抑制作用和凋亡的影响。方法 MTT法检测阿司匹林和AZD9291单独及联合作用于肺癌细胞系H1975的吸光度值,计算细胞的增殖抑制率;荧光倒置显微镜观察Hoechst33342染色的细胞核的形态学改变;流式细胞技术检测阿司匹林和AZD9291单独及联合对H1975细胞凋亡的影响,计算细胞的凋亡率。结果 MTT结果显示阿司匹林和AZD9291单独及联合应用对H1975细胞均有抑制作用,并呈剂量依赖性。实验组与对照组相比,差异具有统计学意义（P＜0.05）,联合用药组对细胞的增殖抑制具有协同作用（Q＞1.15）;荧光倒置显微镜下观察发现联合用药组镜下可见大量凋亡小体,细胞核呈致密浓染;流式细胞仪检测发现阿司匹林和AZD9291单独及联合用药均能诱导细胞凋亡,且联合用药具有协同作用。结论 阿司匹林联合AZD9291对非小细胞肺癌H1975细胞株的增殖具有协同抑制作用并可诱导细胞凋亡,为临床联合用药及防治非小细胞肺癌的有效方案提供理论依据。     

重组人生长激素联合5-氟尿嘧啶对表达或不表达生长激素受体人肝癌细胞的体外干预

目的研究重组人生长激素（rhGH）在体外对表达或不表达生长激素受体（GHR）的人肝癌细胞系的影响。方法采用免疫组织化学方法检测人肝癌细胞系的GHR表达。每种肿瘤细胞系分4组进行处理：未处理组、5-氟尿嘧啶（5-Fu）处理组、rhGH处理组及5-Fu＋rhGH联合处理组。采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法及流式细胞术分析不同浓度rhGH及其与5-Fu合用对人肝癌细胞系的生长抑制、凋亡、细胞周期及增殖指数（PJ）等的影响。结果Bel-7402细胞表达GHR；与未处理组相比，各浓度rhGH组的生长率、G2／M期比例和PI显著升高，细胞凋亡率显著降低（P均〈0．05）；与5-Fu处理组相比，各浓度rhGH＋5-Fu组的G2／M期比例和PI显著升高，抑制率和细胞凋亡率显著降低（P均〈0．05）。SMMC7721不表达GHR；不同浓度rhGH对该细胞系的分裂增殖无明显影响（P均〉0．05）；rhGH＋5-Fu联合处理组与5-Fu处理组问的细胞抑制率、凋亡率及Pl差异也无显著性（P均〉0．05）。结论rhGH在体外能促进GHR^＋的肝癌细胞增殖，减弱5-Fu对GHR^＋细胞的抗癌作用，但对GHR^-的肝癌细胞无明显影响，也不能明显干扰5-Fu对GHR^-细胞的抗癌功能。     

二氢丹参酮I对H22肝癌荷瘤小鼠的放射增敏作用

目的 探讨二氢丹参酮I对荷H22肝癌小鼠的放射增敏作用。方法 建立小鼠H22肝癌模型,分为空白对照组、单纯照射组、阳性对照组、二氢丹参酮I(高、中、低)组。经照射后,观察荷瘤鼠肿瘤生长状况,记录肿瘤照射后生长时间,计算肿瘤生长延缓时间和增敏系数(EF)。照后22d处死小鼠,剥瘤称重,计算抑瘤率。结果 给药二氢丹参酮I(高、中、低)组与空白组相比,均能抑制肿瘤生长,且中、高剂量具有一定的放射增敏作用,增敏系数分别为1.43、1.66。结论 二氢丹参酮I对H22肝癌小鼠肿瘤生长有抑制作用,且有一定的放射增敏效果。     

幽门螺杆菌cagA基因对胃癌细胞影响

目的观察幽门螺杆菌（Hp）野生株与cagA基因同源缺失突变株对人胃癌细胞株BGC823的细胞增殖和凋亡的影响,探讨与Hp毒力基因cagA相关的细胞水平的毒性效应。方法将幽门螺杆菌野生株与cagA基因缺失突变株与BGC823细胞共培养,分别在6,12,24和48 h观察细胞形态学变化,采用四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果野生株和突变株Hp攻击BGC823细胞6 h,即可引起细胞的形态学变化,48 h时均可观察到细胞形态呈分散及蜂鸟样改变（细胞拉伸）。MTT法检测显示,野生株对BGC823细胞增殖具有抑制作用,而缺失cagA基因的突变株可刺激细胞增殖,且在24,48 h的2个时间点上均高于对照组和野生株组（P〈0.05）。流式细胞分析显示,在攻击BGC823细胞48 h后,野生株和突变株均可引起细胞凋亡,凋亡率高于对照组（P〈0.05）,2个实验组的凋亡率差异无统计学意义。结论Hp作用后细胞呈分散和蜂鸟样改变（伸长）并不是cagA基因特有的细胞学效应;cagA基因是Hp抑制细胞增值所必需的元素;cagA基因的有无对Hp致凋亡效应的影响不大,在Hp致细胞凋亡的效应中作用可能有限。     

青紫薯色素抗肿瘤作用及毒理学实验研究

目的研究青紫薯色素抗肿瘤作用并对其毒性进行安全性评价。方法以小鼠肉瘤S180瘤株和小鼠肝癌H22瘤株为实验对象,每日分别灌胃给予阳性药呋喃氟尿嘧啶及150、75和37.5mg的青紫薯色素,通过计算肿瘤抑制率观察青紫薯色素的体内抗肿瘤作用;通过亚慢性毒性试验以及骨髓微核试验、Ames试验对青紫薯色素进行毒理学评价。结果青紫薯色素灌胃,每日150、75mg剂量对小鼠肉瘤S180的抑瘤率分别为45.04%和36.64%,37.5mg剂量无抑瘤作用;青紫薯色素每日150mg剂量对小鼠肝癌H22有明显抑制作用,抑瘤率达33.33%;青紫薯色素1000mg/(kg.d)灌胃对大鼠未见明显毒性反应;在骨髓微核试验、Ames试验中均呈阴性结果。结论青紫薯色素对小鼠移植瘤有抑制作用,基本无毒性,无致突变作用。     

亚油酸/二十二碳六稀酸对胃癌细胞凋亡作用

目的 探讨不同比例亚油酸(LA)/二十二碳六稀酸(DHA)对人胃癌细胞株MKN-45的抑制作用.方法 采用均匀设计法初筛出LA/DHA抑制MKN-45增殖的较佳比例,采用随机区组法确定促进胃癌细胞凋亡的最佳比例;采用LA/DHA最佳比例混合脂肪酸干预MKN-45裸小鼠移植模型6周,观察裸鼠肿瘤重量、肿瘤体积变化及毒副反应情况;肿瘤组织HE染色观察肿瘤细胞形态学改变.结果 经均匀设计和随机区组筛选,LA/DHA比例为1:3时,浓度为40:120μmol/L时,对肿瘤细胞的抑制效果最佳(P<0.05);与对照组比较,1:3 LA/DHA混合脂肪酸高剂量组瘤体抑制率为21.97%,瘤重的抑制率为18.09%,差异有统计学意义(P<0.05);肿瘤组织病理切片显示,高剂量组和抗癌药物阳性对照组的肿瘤组织中出现不同程度坏死;高剂量组毒副反应不明显.结论 LA/DHA比例为1:3可诱导人胃癌MKN-45细胞凋亡;LA/DHA高剂量组有一定抑瘤作用,并且无明显毒副反应.