Polyporus sp.MO5多糖的抗肿瘤作用

目的研究真菌Polyporus sp.M05多糖PSM-a体内对荷瘤小鼠S180的抑瘤作用及其机制.方法 MTT法检测PSM-a体外对S180细胞株的增殖抑制作用.建立S180小鼠模型,灌胃治疗,每日检测肿瘤体积并计算瘤体比和抑瘤率.实验结束后处死小鼠,MTT比色法测定小鼠自然杀伤(NK)细胞及淋巴因子活化杀伤细胞(LAK)的杀伤活性.HE染色检测肿瘤组织细胞坏死情况.结果 PSM-a在体外能抑制S180细胞生长;在体内能显著降低荷瘤小鼠的瘤重和瘤体比,250μg/ml的PSM-a对肿瘤抑制率高达80%以上;PSM-a能促进NK细胞及LAK细胞的杀伤活性;病理切片显示PSM-a作用后引起肿瘤组织坏死.结论 PSM-a对S180荷瘤小鼠肿瘤的生长有明显的抑制作用,其机制可能与提高机体免疫细胞对肿瘤细胞的杀伤活性有关.     

硒酸酯多糖增强荷瘤小鼠免疫功能和自身肿瘤杀伤活性的作用

本文研究了硒酸酯多糖(KSC)对荷S180肉瘤小鼠NK细胞活性、LAK细胞活性、IL-2分泌能力和自身肿瘤杀伤活性(ATK)的影响及抑癌效应.结果表明,KSC(40mg/kg·d×9d,ig)能增强荷瘤鼠NK细胞和LAK细胞活性,促进脾细胞产生IL-2,增强ATK活性;加强环磷酰胺(Cy,20mg/kg·d×9d,ip)的抑瘤作用,并能拮抗Cy对免疫活性细胞的抑制效应.体外用rIL-2激活荷瘤鼠脾淋巴细胞可诱生或增强ATK活性.本研究结果提示,KSC上调肿瘤宿主NK细胞和LAK细胞活性及IL-2的分泌水平,增强ATK活性,可作为生物反应调节剂(BRM)应用于肿瘤生物治疗.     

人LI-LAK细胞和环磷酰胺对小鼠S_(180)肉瘤的体内外抗瘤作用

本文用人LI—LAK细胞作了对小鼠S_(180)肿瘤细胞的体外杀伤试验,并与环磷酰胺分别及协同对小鼠S_(180)荷瘤鼠体内抗瘤试验。结果表明:人LI—LAK细胞在体内外均有明显的抗小鼠S_(180)肿瘤的作用。经人LI—LAK细胞及环磷酰胺治疗,S_(180)荷瘤鼠存活期显著延长,部分可完全治愈。     

以SMMC—7721为靶细胞MTT法检测LAK细胞活性方法的建立

目的建立以贴壁生长的癌细胞为靶细胞、MTT法检测LAK细胞活性的方法。方法用MTT比色法测定LAK细胞对体外培养的K562、Raji、SMMC－7721细胞的杀伤活性。结果LAK细胞对已知的NK敏感细胞K562及NK耐受细胞Raji均有明显杀伤作用,贴壁生长的SMMC-7721肝癌细胞对NK细胞不敏感,而对LAK细胞敏感,在效靶比为40：1时,LAK细胞对肝癌细胞的杀伤率达90％以上,其杀伤效应随效靶比增高而增高。结论SMMC-7721细胞可作为检测LAK细胞活性的靶细胞。以贴壁细胞作为靶细胞的MTT法检测LAK细胞活性较传统的悬浮细胞如Raji作为靶细胞具有灵敏、准确、简单、可靠的优点,更适用于国内一般实验室开展。     

淋巴因子激活的杀伤细胞活性

在体外,血和脾脏中的淋巴细胞可被IL-2激活,对某些肿瘤细胞系产生细胞毒作用。新近研究表明,这种淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)在一定条件下能够抑制动物和病人的实体瘤生长。Herberman及其同事总结了8个国际实验室关于LAK细胞活性的特征,认为大多数是由IL-2激活的NK细胞。LAK细胞首先由Grimm、Kosamberg及其同事报道。这种细胞与NK细胞明显不同,它能溶解对NK敏感和NK抵抗的靶细胞,尤其重要的是它能对新分离的自体或同种     

一种简单γδT细胞扩增培养方法及其抗肿瘤生物学功能研究

目的 :建立一种特异快速地诱导扩增人外周血γδT细胞的方法 ,并比较了γδT细胞 ,NK和LAK细胞的抗肿瘤的生物学特性。方法 :收集用不同单抗分别包被粘附的细胞 ,然后通过MACS细胞分选仪的分选 ,获取的细胞进行细胞增殖动力学、细胞表型、细胞杀伤活性的测定以及单抗阻断效应的分析。结果 :经MACS分离得到的γδT细胞 ,培养 2周后细胞数扩增 6 0 0～ 80 0倍 ,CD3,CD8和γδ细胞表达阳性率分别是 72 .2 9% ,5 8.0 2 %和 6 5 .98%。γδT细胞对NK敏感细胞K5 6 2以及NK不敏感细胞Raji和XG 7这 3种不同靶细胞均有较高的杀伤率 ,分别为 35 .98% ,5 2 .2 7%和 6 9.0 8% ;NK细胞对此 3种细胞的杀伤率分别是 45 2 1% ,12 .34%和 11.94% ;LAK细胞的杀伤率分别为 44 .0 1% ,2 9.2 7%和 2 5 .6 8%。γδT细胞对经MHC Ⅰ类单抗阻断前后的K5 6 2 ,Raji和XG 73种靶细胞的杀伤率无明显改变。结论 :γδT细胞、NK细胞和LAK细胞都具有一定的非特异性杀伤肿瘤细胞的作用 ;γδT细胞对MHC Ⅰ类单抗阻断后的肿瘤细胞的杀伤无明显变化。提示γδT细胞较NK细胞和LAK细胞有更广泛的抗瘤谱     

树突状细胞对肿瘤浸润淋巴细胞抗小鼠肝癌活性影响的研究

目的探讨H22细胞全细胞性抗原致敏的DC激活的TIL体外抗小鼠肝癌活性,并将H22-DC-TIL过继免疫荷瘤小鼠,研究其对荷瘤小鼠免疫功能的影响及抑瘤作用。方法从小鼠四肢长骨骨髓中获取DC,应用粒/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白介素-4(IL-4)和肿瘤全细胞性抗原致敏DC,然后用DC激活TIL,观察TIL在体外对H22细胞、Hepal-6细胞和B16细胞的杀伤活性;检测应用H22-DC-TIL后荷瘤小鼠的脾淋巴细胞的NK、LAK、CTL活性、血清TNF活性、抑瘤作用以及瘤体病理改变,并与对照组相比较。结果①H22-DC-TIL具有很强的对H22细胞杀伤活性[杀伤率为(71.31±3.11)%],明显高于其对Hepal-6和B16细胞的杀伤活性[杀伤率分别为(50.11±3.03)%,(30.31±2.89)%],也明显高于未经DC激活的TIL、H22-DC-脾淋巴细胞和未经DC激活的脾淋巴细胞对H22细胞杀伤活性[杀伤率分别为(49.80±3.21)%,(48.76±3.60)%和(19.23±2.71)%]和对Hepal-6细胞杀伤活性[杀伤率分别为(39.40±3.21)%,(38.62±2.87)%和(18.73±2.40)%]以及对B16细胞杀伤活性[杀伤率分别为(26.38±2.51)%,(25.82±2.70)%和(18.34±3.01)%],同时B16-DC-TIL(TIL来源于H22瘤体)也可诱导相对较低的对B16细胞的特异性细胞杀伤活性。②H22-DC-TIL可明显诱导提高荷瘤脾淋巴细胞NK、LAK和CTL活性[活性为(30.43±1.35)%、(31.40±1.80)%、(35.30±1.20)%],并可检测到血清TNF水平明显上升[血清TNF为(40.41±1.85)U/ml],它们均达正常对照组水平,与未经DC激活的TIL组、H22-DC-脾淋巴细胞组、未经DC激活的脾淋巴细胞组、生理盐水组分别对应比较,差异均有显著性(P<0.01)。该组瘤体内淋巴细胞浸润程度也高于对照组,其瘤体生长明显受到抑制。结论①H22-DC-TIL可产生很强的体外针对H22细胞的特异性杀伤活性。②H22-DC-TIL具有很强的特异性抗小鼠肝癌作用。     

脐血CD_3AK细胞的制备、生物活性测定及临床应用初探

 目的　研究用脐血单个核细胞制备CD3 AK细胞的抗肿瘤作用 ,探讨肿瘤生物治疗近期疗效的免疫指标。方法　分离脐血单个核细胞 ,分别用IL 2和IL 2 +CD3 Ab诱导LAK和CD3AK细胞 ,并测其扩增数量和对K5 6 2细胞的杀伤活性 ;测定肿瘤患者用CD3 AK细胞治疗前后外周血单核细胞(PBMC)的NK杀伤活性。结果　脐血LAK细胞和脐血CD3 AK细胞均于培养后第 11天时扩增倍数最高 ,分别是培养前的 18倍、2 4倍 ,对K5 6 2的杀伤活性分别是培养前的 2 .6倍和 3.2倍 ;肿瘤患者输注CD3 AK细胞一疗程后 ,其PBMC的NK杀伤活性由 6 2 %升高到 82 % ,平均升高 32 %。结论　 (1)脐血单个核细胞是LAK细胞和CD3 AK细胞良好的前体细胞。 (2 )LAK和CD3 AK细胞的数量和杀伤能力在培养的第 11天时达高峰 ,而且CD3 AK细胞数量和杀伤活性明显优于LAK细胞。 (3)CD3 AK细胞输注能明显提高肿瘤患者PBMC的NK活性。 (4 )肿瘤病人PBMC的NK活性测定可望成为肿瘤生物治疗的一个近期疗效参数     

脐血CD3AK细胞治疗恶性肿瘤的临床应用研究

目的:研究用脐血单个核细胞制备CD3AK细胞的抗肿瘤作用,探讨肿瘤生物治疗近期疗效的免疫指标.方法:分离脐血单个核细胞,分别用IL-2和IL-2 CD3Ab诱导LAK和CD3AK细胞,并测其扩增数量和对K562细胞的杀伤活性;测定肿瘤患者用CD3AK细胞治疗前后外周血T淋巴细胞亚群绝对计数的变化情况和外周血单核细胞(PBMC)的NK杀伤活性.结果:脐血LAK细胞和脐血CD3AK细胞均于培养后11天时扩增倍数最高,分别是培养前的18倍、24倍,对K562的杀伤活性分别是培养前的2.6倍和3.2倍;肿瘤患者输注CD3AK细胞一疗程后,其外周血T淋巴细胞亚群绝对计数有明显升高:总T升高66.0%,Th升高68.0%,Ts升高58.0%;其PBMC的NK杀伤活性由63.0%升高到81.0%,平均升高28.0%.结论:1)脐血单个核细胞是LAK细胞和CD3AK细胞良好的前体细胞.2)LAK和CD3AK细胞的数量和杀伤能力在培养的11天时达高峰,而且CD3AK细胞数量和杀伤活性明显优于LAK细胞.3)CD3AK细胞输注能明显提高肿瘤患者外周血T淋巴细胞亚群绝对计数和PBMC的NK活性.4)肿瘤患者的外周血T淋巴细胞计数和PBMC的NK活性测定可望成为肿瘤生物治疗的一个近期疗效参数.     

小儿白血病NK、LAK细胞活性的研究

本文对22例正常人及21例白血病患儿NK、LAK细胞活性检测结果表明,缓解期白血病患儿NK、LAK细胞活性正常,活动期白血病患儿NK、LAK细胞活性低下,分别为10.4%±9.7%(正常值28%±13.4%)P<0.01,对K562为34.3%±14.4%(正常值52.8%±15.3%)P<0.001,对Raji为32.6%±14.7%(正常值52.8%±14.3%)P<0.01。NK细胞活性低下的原因与血液中存在的抑制淋巴细胞无关,可能系NK细胞本身缺陷所致,rIL—2能恢复活动期白血病NK细胞活性。     

人肺癌细胞NHE—1基因片段的克隆及其反义表达载体的构建

目的:动态观察CIK(cytokine induced killer)细胞的体外增殖,体外的细胞毒活性,及通过动物实验研究其体内的抗肿瘤作用.方法:通过提取健康供血者的PBMC,第0天加入γ-IFN,第1天加入IL-2、抗-CD3单抗和IL-1培养CIK细胞;在流式细胞仪上做动态培养物的表型分析;与LAK细胞作对比,分别用MIT法测定其体外细胞毒活性及对S180荷瘤鼠的体内抗肿瘤作用.结果:CIK细胞在培养2周后获得大量增殖,表型分析表明,CIK细胞属异质性细胞群,在培养的过程中,群体的CD3~ CD56~ 细胞大量扩增达1000多倍,是CIK细胞的主要效应细胞;实验证明,CIK细胞的体外细胞毒活性及对S180荷瘤鼠的体内抗肿瘤作用均强于LAK细胞;其较强的体内抗癌活性可能与荷瘤鼠主体内T细胞活化有关.结论:CIK细胞是一种强于LAK细胞的、新型、高效、具有广谱杀瘤活力的免疫活性细胞.     

芦荟提取物C对小鼠移植性肿瘤及免疫功能的影响

目的 :研究芦荟提取物C(AloeExtractC ,AE C)对小鼠移植性肿瘤 (实体瘤 )的抑制作用和其对脾细胞IL 2分泌活性及NK细胞杀伤活性的影响。方法 :建立AE C的提取和主要成分含量测定法。用S180和MethA移植瘤动物模型为研究对象 ,经腹腔注射AE C后 ,观察肿瘤组织的病理学改变并检测其脾细胞IL 2分泌活性和NK细胞杀伤活性。结果 :AE C能促使肿瘤组织大面积出血坏死及炎细胞浸润 ,按瘤组织坏死和炎细胞胞浸润分级积分法记录 ,AE C治疗组明显高于对照组和 5 FU治疗组 (P <0 .0 1)。脾细胞IL 2分泌活性S180 移植瘤AE C治疗组与其对照组比较升高 4 2 .6 % ,MethA移植瘤AE C治疗组与其对照组比较升高 6 2 .6 %。NK细胞杀伤活性AE C治疗组较对照组有明显的升高 (P <0 .0 1)。 5 FU治疗组小鼠免疫功能明显受到抑制。结论 :AE C有抑制肿瘤和调节机体免疫功能的作用。     

LAK细胞的细胞群体来源初探

LAK细胞既不同于目前淋巴细胞分类中的杀伤性T细胞也不同于NK细胞，其细胞群体来源有待进一步研究．本文报告了利用对不同淋巴细胞群体分别诱导LAK细胞活性的方法，研究LAK细胞的细胞群体来源的初步结果。     

肝癌患者自体CD3AK细胞与LAK细胞的杀伤活性比较

目的 比较肝癌患者自体CD3AK细胞和LAK细胞的杀伤活性,为临床是供依据。方法 以流式细胞仪检测细胞的杀伤活性。结果 原发性肝癌患者自体的CD3AK细胞的NK活性和LAK活性均高于LAK细胞。结论 CD3AK细胞效果稳定,抗瘤效应明显高于LAK细胞,CD3AK细胞可望作为一种新的生物治疗手段用于肿瘤治疗。     

多糖类药物对LAK细胞增殖功能的影响和抑瘤作用的实验研究

目的　探讨多糖类药物对LAK细胞增殖功能的影响和抑瘤作用。方法　建立B16黑色素瘤小鼠模型 ,Ⅰ组瘤体周围皮下注射IL 2 ,Ⅱ组注射IL 2和人参多糖 ,Ⅲ组注射人参多糖 ,通过测量瘤重、瘤体积和抑瘤率观察其抑瘤作用 ;同时取小鼠脾细胞培养 ,1组加IL 2 ,2组加IL 2和人参多糖 ,3组加人参多糖 ,用台盼蓝染色 ,观察多糖类药物对LAK细胞增殖功能的影响。结果　人参多糖与IL 2联合体内应用抗肿瘤作用显著强于LAK细胞 (P <0 .0 5 ) ;人参多糖与IL 2联合体外培养表明 ,人参多糖能促进LAK细胞的增殖能力 (P <0 .0 5 )。结论　人参多糖与IL 2联合应用在体内抗肿瘤作用显著强于LAK细胞 ,在体外培养能促进LAK细胞的增殖能力     

腹部肿瘤病人rIL-2/LAK治疗前后T细胞亚群、淋巴细胞转化试验及NK细胞活性变化

本文对30例晚期腹部肿瘤患者rIL－2／LAK治疗前后的免疫功能进行动态观察。检测指标包括T细胞亚群（CD3、CD4、CD8及CD4／CD8）。淋巴细胞转化试验（LymphocytesBlastogenesisTestLBT）和NK细胞活性。结果表明：肿瘤患者经rIL－2／LAK治疗后，CD3、CD4明显升高．CD8也略有升高．CD4／CD8明显升高；淋巴细胞转化率明显升高；经rIL－2／LAK治疗后，NK细胞活性增强。这反映肿瘤患者经rIL－2／LAK治疗后机体细胞免疫功能得到增强。     

脂质体介导的基因转染效率与肺癌细胞的增殖特性的关系

目的：简化粘附性LAK（A－LAK）细胞的制备方法并观察其与苯乙酸（PA）的协同抗瘤作用。方法：采用苯丙氨酸甲酯（PME）处理肝癌患者外周血单个核细胞（PBMC）而制备A－LAK细胞;观察人肝癌SMMC7721细胞株经PA处理后增殖能力的变化;并用经PA预处理的SMMC7721培养上清液作用于A－LAK细胞,观察A－LAK增殖能力与杀伤活性的变化。结果：采用PME制备的A－LAK细胞,其增殖能力显著高于非粘附性LAK细胞（NA－LAK）和常规LAK细胞;肿瘤细胞经PA作用后,生长明显受 到抑制;肿瘤细胞的培养上清液可明显抑制A－LAK的增殖与杀伤活性,而经苯乙酸预处理的上清液则抑制作用减弱。结论：采用PME可 简便快速地制备A－LAK,而苯乙酸可与A－LAK协同发挥抗瘤作用。     

冻存克隆化LAK细胞净化骨髓的应用基础研究

在白血病的大量放疗和化疗中进行自体骨髓移植时必须解决骨髓中瘤细胞的清除问题.LAK细胞,具有广谱杀瘤细胞作用,IL-2、LAK细胞用于白血病自体骨髓移植,可净化残留白血病细胞.白血病骨髓的净化需要大量的LAK细胞,还需要选择治疗时机,必须解决LAK细胞冷冻保存问题.本文介绍在不同冻存条件下对冻存克隆化LAK细胞活性的影响;电镜观察其超微结构变化;冻存克隆化LAK细胞清除骨髓中白血病细胞的效果及对骨髓造血功能的影响.     

肝癌患者粘附性LAK细胞制备及抗瘤活性研究

本研究在常规LAK细胞制备基础上进行改进，用苯丙氨酸甲酯(PME)去除肝癌患者外周血中抑制LAK细胞活性的单核巨噬细胞。制备抗癌活性较高扩增迅速的粘附性LAK细胞，从实验结果分析。外周血处理后粘附性LAK细胞较未粘性LAK细胞具有较强的扩增能力，最大扩增倍数23～243倍，同时粘附性LAK细胞中TH细胞亚群有增加趋势，Ts细胞亚群有碱少趋势，其IL-2R^ 表达增加至64．3%。此外,在抗瘤活性方面粘附性LAK细胞与非粘附性LAK细胞存在一定差别，分别为64．6%和42．8%．因此。从临床实用出发。制备相对高效的粘附性LAK细胞可以提高LAK疗法的治疗效果。     

腺病毒介导的IL—2基因及B7—1基因联合转染G422细胞致瘤原性和免疫原性的变化

目的研究联合细胞因子基因转染的D422胶质母细胞瘤细胞体内致瘤原性和免疫原性的变化,为胶质瘤的免疫基因治疗打下基础.方法IL-2基因和B7-1基因转染的G422细胞1×105皮下和脑内接种,观察肿瘤生长速度和荷瘤小鼠的存活期,2周取脾脏,检测NK、LAK和CTL的杀伤活性.结果IL-2和B7-1基因联合转染的G422细胞,皮下接种后肿瘤生长明显减慢,脑内接种动物存活期明显延长,NK、LAK和CTL的杀伤活性增强.结论IL-2基因和B7-1基因联合转染的G422细胞,致瘤原性下降,免疫原性增强,能有效激活机体特异性与非特异性抗肿瘤免疫反应.