重组Der f1变应原诱导小鼠哮喘模型的建立

目的建立重组粉尘螨Ⅰ类变应原（Der f1）诱导BALB/c小鼠哮喘模型。方法 30只BALB/c小鼠随机分成3组：PBS阴性对照组、卵清蛋白（OVA）阳性对照组、重组Der f1模型组。用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测小鼠血清中IgG1、IgG2α和IgE含量,ELISA法检测脾细胞培养上清液和支气管肺泡灌洗液（BALF）IL-2、IL-4、IL-5、IL-17和IFN-γ含量,计数BALF中细胞总数,同时切取小鼠未灌洗侧肺组织进行病理学观察。结果 OVA阳性对照组、重组Der f1模型组小鼠血清中IgG1、IgG2a和IgE含量,脾细胞上清液和BALF中IL-2、IL-4、IL-5、IL-17和IFN-γ含量与PBS阴性对照组相比差异均具有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）;OVA阳性对照组、重组Der f1模型组小鼠BALF中细胞总数和嗜酸性粒细胞（EOS）计数显著高于PBS组（P〈0.05或P〈0.01）。OVA阳性对照组和重组Der f1模型组小鼠肺部病理改变呈明显的变态反应性炎症。结论用重组Der f1能成功诱导BALB/c小鼠哮喘模型。     

IL-27对哮喘小鼠血清IgE的影响

目的研究IL-27对卵白蛋白（OVA）激发哮喘小鼠血清IgE的影响。方法 24 只雌性BALB/c小鼠随机分为生理盐水组、哮喘组及IL-27组,每组8只。应用OVA建立哮喘模型,IL-27组小鼠应用1 μg IL-27（溶于 50 μl PBS中）滴鼻给药,ELISA法测定小鼠血清IL-4和 IFN-γ 浓度,荧光酶标法测定小鼠血清总IgE和OVA特异性IgE浓度;计数支气管肺泡灌洗液（BALF）中嗜酸粒细胞数量。结果 IL-27 组小鼠血清IL-4浓度为（45.6±10.1）μg/L,明显低于哮喘组的（79.3±14.8）μg/L（P 〈 0.05）;IL-27 组小鼠血清IFN-γ浓度为（63.8±11.5）μg/L,明显高于哮喘组的（25.7±8.2）μg/L（P 〈 0.05）;IL-27组小鼠血清总IgE和OVA特异性IgE浓度分别为（2.77±0.51）KU/L、（0.48±0.09）KU/L,均明显低于哮喘组的（5.88±0.86）KU/L、（1.89±0.15）KU/L（P均〈0.05）;IL-27组小鼠 BALF中嗜酸粒细胞数量为（2.21±0.33）×107/L,明显低于哮喘组的（12.82 ± 2.17）×107/L（P 〈 0.01）。结论 IL-27可能通过促进IFN-γ合成、抑制IL-4合成,降低哮喘小鼠血清总IgE和OVA特异性IgE浓度,降低BALF中嗜酸粒细胞数量。     

小剂量5-氟尿嘧啶对哮喘小鼠气道炎症的影响

目的 ：观察小剂量5-氟尿嘧啶（50 mg/kg）对哮喘小鼠气道炎症的影响。方法 ：将15只6～8周龄的BALB/c雌性小鼠随机分成正常对照组、哮喘对照组和5-氟尿嘧啶治疗组,每组5只。哮喘对照组和5-氟尿嘧啶治疗组以卵清白蛋白（OVA）致敏和激发,正常对照组以等量PBS代替,其中5-氟尿嘧啶治疗组在第1次激发前24 h给予5-氟尿嘧啶腹腔注射,正常对照组和哮喘对照组给与等量PBS代替。采用苏木精-伊红（HE）染色和糖原（PAS）染色观察肺组织炎症和气道杯状细胞增生;瑞氏-姬姆萨染色检测支气管肺泡灌洗液（BALF）细胞总数和分类计数;酶联免疫吸附试验检测血清OVA特异性IgE和BALF中IL-4、IL-5、IL-13和IFN-γ的水平。结果：5-氟尿嘧啶治疗组哮喘小鼠肺组织炎症细胞浸润减少;气道基底膜杯状细胞数量以及BALF中细胞总数、嗜酸粒细胞数和巨噬细胞数均明显低于哮喘对照组（P<0.01）,但高于正常对照组（P<0.01）。5-氟尿嘧啶治疗组哮喘小鼠血清OVA特异性IgE和BALF中IL-4、IL-5和IL-13水平明显低于哮喘对照组（P<0.01）,5-氟尿嘧...     

尘螨1类变应原Derf1和Derp1生物信息学分析

目的:分析尘螨1类变应原的理化特性。方法:Gen Bank检索尘螨1类变应原Der f 1和Der p 1的氨基酸序列,利用生物信息学软件预测分析这两个氨基酸序列的一级结构、疏水性、跨膜区、二级结构及空间结构,并对其可能的功能位点进行预测。结果:尘螨1类变应原Der f 1和Der p 1分别编码321和320个氨基酸,分子量分别为36.4和36.1 ku,理论等电点(p1)分别为5.66和5.65,两蛋白均为亲水性蛋白且可能均无跨膜区,Der f 1的二级结构以不规则卷曲为主(43.93%),而Der p1的二级结构以α螺旋为主(43.75%)。两变应原均由蛋白酶抑制子I 29和木瓜蛋白酶C-端2个结构域组成,且半胱氨酸活性位点、组氨酸活性位点和天冬酰胺活性位点的位置相似。结论:Der f 1和Der p 1的这些特性有助于为螨性过敏性疾病的变应原特异性免疫治疗提供理论支持。     

变应原疫苗雾化吸入治疗对哮喘患者的疗效评定

目的探讨用变应原疫菌（AV）雾化吸入，观察其对支气管哮喘患者血清中的细胞因子IL-2，IL-4，IgE水平的影响。方法将90例哮喘缓解期的患者分作3组观察，根据变态原皮试阳性报告，对30例患者用变应原疫菌雾化吸入，测定治疗前后血清中IL-2，IL-4，IgE水平含量的变化，随机将另外60例平均分为两组，以变应原疫菌舌下含服和变应原疫菌皮下注射的途径分别给药。最后对三种不同的特异性免疫治疗方法进行疗效评定。同时选择32例健康者作对照。结果变应原疫菌雾化吸入组的30例病人，测定治疗前后血清中IL-4，IgE的含量比正常对照组明显偏高，IL-2的含量明显偏低，有临床统计学意义：（t=4．869；5．598；10．009；均为P〈0.01）。经过一年的治疗，复查血清IL-2的含量明显增高，IL-4和IgE的含量有所降低，治疗前后有临床统计学意义：（t=7．303；2．494；2．225；均为P〈0．05）其他两种给药途径也具有相同作用。三种给药途径的疗效均达到86％以上，无统计学差异（X=0.05，P=0．05）而AV雾化吸入方法的效率略高于其它两组。结论变应原疫菌（AV）雾化吸入治疗法目前是一种安全，有效，简便的特异性免疫疗法，更便于被患者接受。     

白细胞介素15在小鼠支气管哮喘发病中的作用

目的：通过检测哮喘小鼠血清、肺组织中白细胞介素15（IL-15）的表达,以及与IgE、IL-4、IFN-γ、肺泡灌洗液（BALF）中嗜酸粒细胞（EOS）的关系,探讨IL-15在小鼠支气管哮喘发病中的作用。方法：30只健康雌性BALB　C小鼠按完全随机设计原则分为OVA致敏并激发的哮喘模型组（A 组）,OVA致敏、激发并予激素治疗组（B组）及正常对照组（C 组）共3组,每组10只。ELISA法检测血清IgE、IL-4、IFN-γ和IL-15的含量;收集BALF行Eos计数;HE染色观察气道炎症及半定量评定炎性细胞浸润程度;免疫组织化学法检测各组小鼠肺组织中IL-15的含量。结果：① 哮喘组小鼠发生行为学改变,肺部组织病理学可观察到明显的 EOS 浸润为主的炎症反应,BALF 中 EOS、血清IgE 和IL-4水平较对照组显著增高（P<0.01）,而血清IFN-γ水平较对照组降低（P<0.01）,以及IL-4／IFN-γ二者呈负相关关系(r=－0.859,P<0.01),以上均显示哮喘模型制备成功。② 哮喘组小鼠血清IL-15 水平［（77.97±2.75）ng·L^-1］高于对照组［（34.63±1.44）ng·L^-1］（P<0.01）;血清IL-15水平与 IgE和IL-4水平均呈正相关关系(r= 0.681,r＝0.738,P<0.01),与 IFN-γ 无相关性。③ 哮喘组小鼠肺组织中IL-15的含量高于对照组（P<0.01）;哮喘组肺组织中IL-15含量与BALF中EOS呈正相关关系(r= 0.787,P<0.01 )。④ 激素治疗组小鼠肺组织炎症明显减轻、BALF 中的 EOS计数减少、血清IgE水平下降、血清IL-15 的水平及肺组织中IL-15的含量均低于哮喘组（P<0.01）。结论：IL-15在哮喘中可能参与了Th2 类细胞因子IL-4的调节,对于Th1 类细胞因子IFN-γ无明显调节作用。IL-15可能参与了血清IgE水平的调节。IL-15还可能与哮喘 Eos增多有关,进而参与哮喘气道的慢性炎症。糖皮质激素可有效控制哮喘气道炎症。     

铜陵地区支气管哮喘患者常见吸入变应原调查和特异性免疫治疗

目的了解铜陵地区支气管哮喘患者常见吸入变应原,观察特异性免疫治疗的有效性和安全性。方法采用敏筛过敏原检测系统对2004年1月-2006年10月铜陵市人民医院158例支气管哮喘患者进行常见吸入变应原特异性IgE检测。选择检测阳性67例进行特异性免疫治疗（SIT）。结果158例支气管哮喘中119例变应原检测阳性,检出率为75．32％,最常见的变应原为户尘螨（69．75％）、屋尘（56．30％）。67例特异性免疫治疗中满12个月者,有效率84．91％,而对照组为53．85％,P=0．0005,结果差异有显著统计学意义。SIT疗程6个月、12个月及18个月以上的有效率分别为66．13％、83．02％、100％,经统计学处理差异有显著统计学意义（P〈0．001）。67例进行SIT患者中,无大局部反应及全身性反应出现。结论铜陵地区支气管哮喘患者常见吸入变应原为户尘螨和屋尘,特异性免疫治疗安全、有效,疗程越长,其疗效越好。     

IL-33在呼吸道合胞病毒(RSV)感染致哮喘急性发作中的作用

 目的 研究IL-33在呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus,RSV）感染致哮喘急性发作中的作用。方法 将24只3周龄SPF级BALB/c雌性小鼠随机分为PBS组、RSV组、卵清白蛋白（ovalbumin,OVA）组和OVA/RSV组,每组6只。首先应用OVA或PBS激发并致敏小鼠,再感染RSV致哮喘急性发作。麻醉后处死小鼠。ELISA法测小鼠血清总IgE水平、支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid,BALF）及肺组织IL-33蛋白水平;瑞氏/吉姆萨染色后测BALF细胞总数及各细胞分类计数;取肺组织病理切片HE染色;real-time PCR测T辅助细胞2型（T helper 2,Th2）细胞因子、IL-33等mRNA表达。结果 OVA组与PBS组相比,血清IgE水平明显升高（P<0.05）。OVA/RSV组中BALF细胞总数较OVA组显著增加,主要表现为巨噬细胞和中性粒细胞的增加。病理切片HE染色可见OVA/RSV组小气道周围炎性细胞浸润更加明显。以上表明RSV感染OVA诱导哮喘急性发作的小鼠模型成功建立。real-time PCR显示：与OVA组相比,OVA/RSV组IL-13以及IL-33 mRNA表达显著增加（P<0.05）,IL-5和ST2表达有所增加,但差异无统计学意义。ELISA结果显示：与OVA组相比,OVA/RSV组肺组织中IL-33浓度增高更加显著（P<0.05）,BALF中IL-33浓度也有所增加,但差异无统计学意义。结论 IL-33可能通过启动Th2型免疫反应在RSV感染诱导哮喘急性发作小鼠模型中起重要作用。     

变应原疫苗雾化吸入对哮喘患者血清中细胞因子及IgE水平的影响

目的:探讨用变应原疫苗(AV)雾化吸入,观察对支气管哮喘患者血清中细胞因子IL-2、IL-4间的平衡,及总IgE水平的影响。方法:将90例哮喘缓解期的患者分作3组观察,根据变应原皮试阳性报告,对30例患者用变应原疫苗雾化吸入,测定治疗前后血清中IL-2、IL-4、IgE水平含量的变化。随机将另外60例平均分配为两组,以变应原疫苗舌下含服和变应原疫苗皮下注射的途径分别给药。最后对3种不同的特异性免疫治疗方法进行疗效评定。同时选择32例健康者作为对照。结果:用变应原疫苗雾化吸入组的30例病人在治疗前血清中IL-4、IgE比正常对照组显著偏高,IL-2含量明显偏低,有临床统计学意义(t=4.869;5.598;10.009;均为P<0.01)。经一年的治疗,复查血清IL-2明显增高,IL-4和IgE有所减低,治疗前后有统计学意义(t=7.303;2.494;2.225;均为P<0.05)。其它两种给药途径也具有相同作用。3种途径给药的疗效均达到86%以上,无统计学差异(χ2=0.05,P=0.05),而AV雾化吸入方法有效率略高于其它两组。结论:变应原疫苗雾化吸入治疗法,目前是一种安全、有效、简便的特异性免疫疗法,更便于被患者接受。     

苏黄止咳胶囊对尘螨诱导哮喘小鼠气道炎症和黏液高分泌的影响

目的探讨苏黄止咳胶囊对尘螨诱导哮喘小鼠气道炎症和黏液高分泌的影响和机制。方法将30只雌性C57BL/6J小鼠随机分为对照组、哮喘组和治疗组,每组10只。哮喘组和治疗组小鼠使用尘螨过敏原进行致敏、激发,建立哮喘模型;治疗组小鼠于每次激发前2 h予3.5 g·kg-1苏黄止咳胶囊PBS溶液灌胃,对照组、哮喘组予PBS溶液灌胃,连续灌胃7 d。检测各组气道高反应[增强呼气间歇（Penh）值],HE染色观察肺部炎症,评估小鼠肺泡灌洗液中细胞总数和嗜酸粒细胞数量,过碘酸雪夫染色（PAS）评估小鼠气道杯状细胞增生情况,免疫组织化学染色（IHC）和实时荧光定量PCR（RT-qPCR）分别评估小鼠气道MUC5AC蛋白和mRNA水平;ELISA法检测小鼠脾细胞培养上清液中细胞因子IL-4、IL-5和IL-13水平以及血清中尘螨特异性IgE抗体（HDM-sIgE）含量。结果与哮喘组相比,治疗组Penh值、肺泡灌洗液细胞总数和嗜酸性细胞、MUC5AC蛋白和mRNA表达水平、HDM-sIgE含量、IL-5和IL-13水平均显著减少（均P<0.05）,肺部炎症浸润情况得到明显改善,气道杯状细胞增生现象明显减少。结论苏黄止咳胶囊能抑制IL-5、IL-13及sIgE分泌,减轻尘螨诱导哮喘气道炎症和黏液高分泌。     

五岁以下哮喘儿童变应原的检测及临床意义

目的了解年幼儿哮喘常见变应原,为有效避免变应原及早期干预治疗提供依据。方法选择在海南省人民医院儿童哮喘防治中心治疗的5岁以下哮喘儿童468例,使用丹麦爱尔开-阿贝优公司的吸入组点刺试剂进行皮肤点刺试验,对其中251例哮喘患儿定量检测血清中变应原特异性IgE抗体水平。结果 468例哮喘患儿体内过敏原（皮肤点刺试验）阳性率为66%,尘螨皮试阳性率最高且强阳性率（＋＋＋—＋＋＋＋）也最高,其中屋尘螨及粉尘螨分别为87.4%及86.3%,热带螨为66.3%,德国小蠊及美洲大蠊分别为26.7%及19.9%。动物皮毛中,以狗毛为主（20.1%）,猫毛次之（12.4%）。251例体外变应原检测阳性率为57.8%,其中仍以屋尘螨阳性率（63.25%）最高,粉尘螨（58.6%）次之,狗上皮为15.9%。食物组中蛋清为9.3%、花生为4.3%、苹果为3.1%,分居前3。结论哮喘儿童皮肤点刺试验有较高的变应原检出率,屋尘螨、粉尘螨、热带螨是海南儿童哮喘最常见的吸入变应原,蟑螂、狗毛、猫毛等变应原也不容忽视。食入性过敏原检出率低,其对儿童哮喘的影响远低于吸入变应原。     

18岁以下年龄组过敏性鼻炎-哮喘综合征患者变应原检测结果调查分析

目的探讨低年龄组过敏性鼻炎-哮喘综合征患者的变应原特点。方法采用德国Allergy Screen Test Kit检测系统对515例18岁以下过敏性鼻炎-哮喘综合征患者进行血清总Ig E和19组变应原特异性Ig E定量检测,统计血清总Ig E的增高比例和变应原阳性率,分析其变应原特点。结果 515例18岁以下鼻炎-哮喘综合征患者血清总Ig E的增高比例为77.9%。本组变应原s Ig E阳性率前10位的变应原依次是:户尘螨(70.1%)、屋尘(34.0%)、霉菌(33.2%)、牛奶(24.1%)、狗毛(23.5%)、鸡蛋白(12.6%)、腰果(11.7%)、猫毛(10.9%)、早晚春花粉(8.0%)、夏秋花粉(7.4%)。不同年龄组变应原阳性率比较提示学龄前组(3~6岁)最高,达69.5%。结论本组中77.9%过敏性鼻炎-哮喘综合征患者具有过敏性体质。18岁以下过敏性鼻炎-哮喘综合征患者吸入性变应原阳性率前3位是户尘螨、屋尘、霉菌;食入性变应原阳性率前3位是牛奶、鸡蛋白、腰果。     

居室粉螨抗原与螨过敏性哮喘相关性研究

目的:检测张家港市部分居室粉螨抗原及浓度,探讨其与螨过敏性哮喘发作的相关性。方法:收集过敏性哮喘患者及健康者居室床面、地面、家具、空调隔尘网及空气中的灰尘样本,用PCR法检测Der f1、Der f2、Der p1、Der p2阳性率,并用ELISA分别定量检测Der f1、Der p1及Der变应原含量。结果:共收集样本400份,过敏性哮喘患者与健康者居室Der f1、Der f2、Der p1、Der p2基因阳性率无显著性差异(P>0.05),但过敏性哮喘患者居室样本中这些变应原浓度>10μg/g者所占比例显著少于健康者(P<0.05)。对过敏性哮喘患者进行问卷调查结果显示,近期哮喘发作者Der f1、Der f2、Der p1、Der p2浓度>2μg/g所占比例明显高于近期哮喘未发作者(P<0.01)。结论:个体特异性是螨过敏性哮喘患者患病的重要因素,居室粉螨抗原浓度<2μg/g较安全。     

Effect of house dust mite immunotherapy on interleukin-10- secreting regulatory T cells in asthmatic children

Background Subcutaneous specific immunotherapy has been demonstrated to be capable of inducing T-cell regulatory response.Interleukin-10 （IL-10） plays a crucial role in inducing allergen-specific tolerance.However the reports of the changes of IL-10 in house dust mite （HDM）-specific immunotherapy were varied.The aim of this study was to evaluate the function of IL-10-secreting regulatory T cells in asthma children successfully treated with HDM immunotherapy.Methods Peripheral blood mononuclear cells （PBMCs） were isolated from 27 patients following 1.5--2 years of HDM-specific immunotherapy （SIT, SIT group） and from 27 matched treated asthmatic children allergic to HDM （asthmagroup）.After 48 hours of in vitro stimulation with HDM extracts, IL-10-secreting regulatory T cells were measured by four colour flow cytometry.Sera were tested for allergen-specific IgG4 and IgE using the Immuno CAP 100 assay.Results PBMCs from children undergoing immunotherapy following HDM extracts stimuli produced significantly more IL-10 compared with the asthma group.The frequency of iTreg cells and aTreg cells increased in SIT group after HDM stimulation, while it was not affected in the asthma group.Among the iTreg cells and aTreg cells, the frequency of CD4＋CD25-Foxp3-IL-10＋ Treg cells increased the most which was 2 times higher than that in unstimulated cultures in SIT group.The levels of HDM-specific IgG4 of SIT group was significiently higher compared with asthma group, but there was no correlation of the levels of HDM-specific IgG4 and IL-10 secreting Treg cells.Conclusions HDM-specific immunotherapy can successfully upregulate the frequency of IL-10-secreting Treg cells.CD4＋CD25-Foxp3-IL-10＋ Treg cells may play a key role in inducing the immune tolerance in HDM-specific immunotherapy.     

1. Diagnosis, treatment and prevention of allergic disease: the basics

Allergy is defined as an immune-mediated inflammatory response to common environmental allergens that are otherwise harmless. The diagnosis of allergy is dependent on a history of symptoms on exposure to an allergen together with the detection of allergen-specific IgE. The detection of allergen-specific IgE may be reliably performed by blood specific testing or skin prick testing. Skin prick testing is not without its attendant risks, and appropriate precautions need to be taken. A doctor should be present for safety and test interpretation. Accurate diagnosis of allergies opens up therapeutic options that are otherwise not appropriate, such as allergen immunotherapy and allergen avoidance. Allergen immunotherapy is an effective treatment for stinging insect allergy, allergic rhinitis and asthma. The most effective methods for primary prevention of allergic disease in children that can currently be recommended are breastfeeding and ceasing smoking. Emerging trends in allergen treatment include sublingual immunotherapy.     

藜草花粉特异性致敏哮喘动物模型的制备

目的:建立藜草花粉粗制变应原诱导的小鼠变态反应气管炎症动物模型。方法:制备藜草花粉粗制变应原,将40只BALB/c小鼠,分为:1空白对照组、2低剂量组、3中剂量组、4高剂量组,每组10只。分别通过HE染色观察小鼠肺部炎症和黏液分泌;观察支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数和细胞分类;用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测BALF、脾组织匀浆上清的IL-4、IFN-γ和血清抗原特异的IgE、IgG1抗体。结果:随着抗原浓度的升高肺部病理改变呈明显的变态反应炎症;BALF中的细胞总数、巨噬细胞数、EOS计数、IL-4、血清抗原特异性IgE抗体、IgG1抗体也逐步升高并明显高于空白对照组(P<0.05);BALF、脾组织匀浆上清的IFN-γ与空白对照组相比却反而下降(P<0.05)。结论:藜草花粉成功构建小鼠变态反应气道炎症动物模型。     

特异性尘螨过敏原免疫疗法辅助信必可都保雾化吸入治疗中重度支气管哮喘的临床研究

目的：探讨特异性尘螨过敏原免疫疗法辅助信必可都保（布地奈德福莫特罗粉吸入剂）雾化吸入治疗中重度支气管哮喘临床效果及安全性。方法：2012年5月—2013年1月选取本院中重度支气管哮喘患者130例,采用随机数字表法分为对照组和试验组,每组65例;其中对照组患者采用信必可都保雾化吸入治疗,试验组患者则在此基础上加用特异性尘螨过敏原免疫疗法;比较两组患者临床疗效,治疗前后肺部通气功能指标,哮喘症状评分、哮喘生活质量评分及治疗期间不良反应发生情况等。结果：试验组患者临床疗效显著优于对照组（P〈0.05）;两组患者治疗后肺部通气功能指标水平、哮喘症状评分及哮喘生活质量评分较治疗前均显著改善,且试验组患者治疗后各项指标水平优于对照组（P〈0.05）;两组患者治疗期间不良反应总发生率比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：特异性尘螨过敏原免疫疗法辅助信必可都保雾化吸入治疗中重度支气管哮喘可有效缓解症状体征,提高肺部通气功能和生活质量,且未增加不良反应发生风险。