转化生长因子β1诱导人肾小管上皮细胞表达结缔组织生长因子

目的　研究转化生长因子 β1(transforminggrowthfactorβ1,TGFβ1)对人肾小管上皮细胞 (humanproximaltubularep ithelialcells ,HTECs)表达结缔组织生长因子 (connectivetissuegrowthfactor ,CTGF)的影响。方法　体外培养的HTEC被根据随机数字表分为 3组 :对照组 (C组 ) :无血清培养基 (freeserummedium ,FSM)培养 ;TGFβ1a和TGFβ1b组 (Ta 组和Tb 组 ) :分别用含不同浓度TGFβ1(Ta 组 :2 0ng/ml,Tb 组 :40ng/ml)的FSM培养 ,96h后 ,分别用RT PCR和免疫组化方法检测HTEC表达CT GFmRNA和蛋白。结果　①C组 :CTGFmRNA和蛋白表达为阴性 ;②Tb 组和Ta 组 :CTGFmRNA和蛋白表达皆呈阳性。Tb 组和Ta 组相比 ,CTGF的mRNA和蛋白表达量皆显著增加 (P <0 .0 1)。结论　TGFβ1能呈剂量依赖性地诱导HTEC合成CTGF。     

转化生长因子β2对人晶状体上皮细胞间质转分化的影响

目的:探讨转化生长因子β2(TGF-β2)对培养的人晶状体上皮细胞(HLECs)增殖及诱导HLECs间质转分化的影响。方法:体外培养HLECs,培养基加入不同质量浓度TGF-β2进行干预,采用MTT法测定TGF-β2对细胞增殖的影响;细胞免疫化学染色方法检测100ng/LTGF-β2作用后E-钙黏素(E-cadherin)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和F-肌动蛋白(F-actin)的表达;RT-PCR方法检测E-cadherin、α-SMAmRNA的表达。结果:经TGF-β2处理后的HLECs增殖受到抑制;TGF-β2减弱HLECsE-cadherin的表达,相对表达量为(10.674±3.233),较对照组的(23.352±4.192)减弱(t=4.232,P=0.013)。TGF-β2增加HLECsα-SMA和F-actin的表达,相对表达量分别为(17.613±4.272)、(15.857±4.121),较对照组的0、(4.272±1.538)增强(Z=12.537,P<0.001;t=7.186,P=0.004)。RT-PCR结果显示,TGF-β2组HLECsE-cadherinmRNA的相对表达量为(0.321±0.081),较对照组的(0.983±0.248)减弱(t=3.491,P=0.008);TGF-β2组细胞α-SMAmRNA相对表达量为(0.632±0.158),较对照组的(0.097±0.028)增强(t=5.365,P=0.005)。结论:TGF-β2可以抑制HLECs的增殖,诱导HLECs间质转分化,可能参与后囊膜混浊的形成。     

整合素及去整合素与晶状体上皮细胞凋亡

后发性白内障(posterior capsule opacification, PCO)是白内障术后主要并发症,其主要病因是术后残留的晶状体上皮细胞(lens epithelial cells, LEC)黏附、增殖、移行导致后囊的混浊.LEC需要黏附才能正常生长,细胞黏附的破坏可以导致细胞凋亡.     

内源性结缔组织生长因子介导转化生长因子β1对肾小管上皮细胞的转分化效应

目的：探讨内源性结缔组织生长因子（CTGF）在人肾小管上皮细胞（HK2）转分化过程中的作用。方法：将HK2细胞分为4组：对照组;转化生长因子β1（TGF-β1）5ng／ml刺激组;TGF-β1 5ng／ml刺激4-CTGF反义0DN 3 mmol／L干预组;TGF-β1 5ng／ml刺激＋CTGF正义ODN3mmol/L对照组。用倒置显微镜观察各组细胞的形态学变化,用RT-PCR检测各组细胞中CTGF、上皮细胞钙粘蛋白（E-cadherin）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、纤连蛋白（FN）mRNA表达变化。结果：TGF-β1刺激使HK2细胞形态由椭圆形转为梭形;下调E-cadherinmRNA表达。上调CTGF、α-SMA和FNmRNA表达．且CTGFmRNA表达变化在时间上早于E-cadherin、α-SMA和FNmRNA表达变化;CTGF反义ODN可对抗TGF-β1引起的细胞形态学改变和E-cadherin、CTGF、α-SMA、FiNmRNA表达变化效应。结论：内源性CTGF介导了TGF-β1对HK2细胞的转分化效应。     

转化生长因子β1和基质金属蛋白酶2在糖尿病性白内障大鼠晶状体上皮细胞中的表达及意义

目的 探讨糖尿病性白内障大鼠晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LECs)中转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)和基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)的表达情况及其意义。 方法 将28只SD大鼠随机分为白内障组和对照组,建立糖尿病性白内障大鼠模型,观察2组大鼠LECs变化,测定2组大鼠LECs中TGF-β1和MMP-2表达情况。 结果 HE染色:白内障组大鼠LECs形态异常,排列紊乱,核大小不均匀,胞质疏松;对照组大鼠LECs正常。白内障组大鼠2周末和4周末LECs中TGF-β1蛋白和MMP-2蛋白平均光密度(0.045±0.002、0.075±0.006;0.028±0.003、0.055±0.006)均高于对照组(0.006±0.001、0.006±0.002;0.000、0.000,均P＜0.05),白内障组大鼠4周末LECs中TGF-β1蛋白和MMP-2蛋白平均光密度高于2周末(P＜0.05)。白内障大鼠LECs中TGF-β1蛋白和MMP-2蛋白呈正相关(r=0.915,P=0.004)。 结论 糖尿病性白内障的发生发展可能和LECs中TGF-β1蛋白、MMP-2蛋白水平升高有关,糖尿病性白内障LECs中TGF-β1蛋白和MMP-2蛋白呈正相关。      

消癥散结法对转化生长因子β1诱导人肾小管上皮细胞表达整合素连接激酶的影响

目的研究消癥散结法对转化生长因子β1(TGF-β1)刺激人肾小管上皮细胞表达整合素连接激酶(ILK)的影响,探讨其在肾间质纤维化中的干预作用。方法将消癥散结法复方总方拆为补方、散方,运用血清药理学方法分别制备总方、补方、散方、盐酸贝那普利含药血清。体外培养人肾小管上皮细胞,分为6组:空白组、TGF-β1组、贝纳普利组、总方组、补方组、散方组。将5%各含药血清培养基加入体外培养的肾小管上皮细胞,除空白组外均加入TGF-β110μg/L,48 h后,提取细胞总蛋白及总RNA,分别采用免疫印迹法及逆转录-聚合酶链反应方法检测各组ILK蛋白及其mR-NA的表达。结果空白组肾小管上皮细胞胞浆内ILK及其mRNA有少量表达,TGF-β1刺激后能够诱导肾小管上皮细胞ILK及其mRNA表达显著增加(与空白组相比P<0.01);与TGF-β1组相比,贝纳普利组和总方组、散方组肾小管上皮细胞ILK及其mRNA含量明显降低(P<0.01);补方组与TGF-β1组相比差异不明显(P>0.05)。结论消癥散结法复方总方含药血清能抑制细胞ILK及其mRNA的表达,干预TGF-β1/ILK信号通路可能是其防治肾间质纤维化的机制之一。     

人肾小管上皮细胞在转化生长因子β1诱导下桩蛋白表达研究

目的 探讨不同浓度重组人转化生长因子β1（human recombinant transforming growth factor β1,rhTGFβ1）对人近端肾小管上皮细胞株（human kidney proximal tubular epithelial cell line,HKC）表达桩蛋白（paxillin,Pax）的影响。方法 将体外培养的HKC随机分为3组：对照组（C组）：无血清培养基（free serum mudium,FSM）培养;TGFβ1培养组（T1、T2组）：分别用含不同浓度的TGFβ1（T1组：5ng／ml,T2组：10ng／ml）的FSM培养,48h后分别用逆转录多聚酶链式反应（RT-PCR）、免疫组化方法和Western blot检测HKC的Pax mRNA及蛋白表达情况。结果 ①C组：Paxillin mRNA及蛋白有基础的表达;②T1和T2组：Pax mRNA及蛋白表达均明显增加,T2组和T1组相比,Pax的mRNA及蛋白表达量增加更显著（P〈0．01）。结论 TGFβ1能呈剂量依赖性地诱导HKC合成Pax。     

转化生长因子-β1体外诱导气道上皮细胞向肌纤维母细胞转分化

目的探讨TGF-β1体外诱导气道上皮细胞表型向肌纤维母细胞转分化的可能性。方法TGF-β1（10μg/L）处理气道上皮细胞株16HBE-14o，显微镜下实时观察形态学变化，免疫染色方法检测E-cadherin，α-SMA和F-actin的表达，RT-PCR方法检测E-cadherin，α-SMA mRNA的表达。结果TGF-β1 10μg／L作用3d，气道上皮细胞株16HBE-14o失去正常的立方形，变得肥大，胞体拉长；上皮细胞特征性标志E-cadherin表达减弱，胞浆中出现肌纤维母细胞表型标志物α-SMA，F-actin聚合形成张力纤维沿着细胞长轴分布。结论本研究提示，气道上皮细胞在TGF-β1的作用下经历了表型改变向肌纤维母细胞转分化，可能作为肺肌纤维母细胞的一个新的来源，从而参与哮喘气道重塑、气道高反应性的发生发展。     

转化生长因子β1对软骨样细胞整合素和吞噬细胞糖蛋白-1表达的影响

目的 :检测软骨样细胞 (HEMCSS)α1β1,α2 β1,α5 β13种整合素 (integrins)和吞噬细胞糖蛋白 - 1(CD4 4 )的表达 ,及转化生长因子 β1(TGF - β1)对它们表达水平的影响。方法 :HEMCSS是永生性软骨肉瘤细胞 ,培养于含10 %胎牛血清 ,不含或含 1,5 ,10ng·ml-1的TGF - β1的培养液 ,培养时间 2 4h。共聚焦显微镜观察α1β1,α2 β1,α5 β1和CD4 4在HEMCSS细胞上的表达和分布 ,流式细胞仪检测α1β1,α2 β1,α5 β1和CD4 4在HEMCSS细胞上表达的水平。结果 :共聚焦显微镜结果显示 ,HEMCSS细胞膜表面均有α1β1,α2 β1,α5 β1及CD4 4表达。流式细胞仪检测表明 ,加入TGF - β1,培养HEMCSS细胞 2 4h后可诱导α1β1,α2 β1,α5 β1的表达增加 ,并呈剂量依赖趋势。而 3种不同浓度的TGF - β1培养 2 4h后均减少了HEMCSS细胞CD4 4表达。结论 :TGF - β1可以调节HEMCSS细胞膜上细胞外基质受体的表达 ,从而调节软骨细胞与细胞外基质成分的结合 ,对调节软骨细胞的功能起着重要的作用。     

骨形态形成蛋白-7对体外培养肾小管上皮细胞TGF-β1诱导转分化的作用

目的观察骨形态形成蛋白-7(BMP-7)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人类肾小管上皮细胞(HKC)转分化的作用,并探讨其作用机制.方法将体外培养的HKC分为5组:(1)无血清培养基阴性对照组;(2)TGF-β1阳性对照组;(3)BMP-7单独作用组;(4)BMP-7与TGF-β1共同作用组;(5)BMP-7预处理后加入TGF-β1组.间接免疫荧光法测定HKC角蛋白(keratin)的表达;免疫组织化学方法测定α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及E-钙粘素(E-cadherin)表达;流式细胞技术测定α-SMA阳性HKC的百分数;半定量反转录PCR(RT-PCR)方法测定HKC细胞α-SMA、TGF-β1及其Ⅱ型受体mRNA的表达.结果TGF-β1与BMP-7共同作用HKC细胞48 h,α-SMA表达较阳性对照组减弱,而E-钙粘素及角蛋白表达较阳性对照组增强,与阴性对照组相比差异无显著性;BMP-7预处理后再加入TGF-β1作用HKC细胞48 h,α-SMA表达较阳性对照组减弱,而E-钙粘素及角蛋白表达较阳性对照组增强,与阴性对照组相比差异无显著性;流式细胞技术测定α-SMA阳性HKC的百分数,在BMP-7与TGF-β1共同作用组明显低于阳性对照组(9.7% vs 19.8%,5.8% vs 19.8%,P＜0.05).BMP-7组预处理组亦明显低于阳性对照组(8.7% vs 19.8%,P＜0.05).RT-PCR显示BMP-7与TGF-β1共同或者预处理HKC细胞,α-SMA mRNA表达分别为阳性对照组的15%和12%,而TGF-β1及其Ⅱ型受体mRNA表达水平分别为阳性对照的28%和19%及47%和36%.结论一定浓度的BMP-7与TGF-β1同时培养或预处理,都能抑制TGF-β1诱导的HKC细胞转分化;BMP-7可以预防和抑制HKC细胞TGF-β1及其Ⅱ型受体mRNA表达,这很可能是BMP-7抑制HKC细胞转分化的重要机制之一.     

Smads信号通路在转化生长因子-β1诱导气道上皮细胞转分化中的作用

目的:探讨Smads信号通路在rhTGF-β1体外诱导气道上皮细胞表型向肌成纤维细胞转分化中的作用.方法:用TGF-β1(10 μg/L)处理气道上皮细胞株16HBE,Western blot法检测刺激不同时间点细胞核蛋白内磷酸化Smad 2和Smad 3(30min、24h和48 h)的表达;脂质体法瞬时转染Smad 7表达载体pCDNA 3.0/Smad 7或空载体,转染20h后,加入TGF-β1处理,RT-PCR法检测刺激不同时间E-钙黏蛋白、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的基因表达,免疫荧光法检测α-SMA的蛋白表达. 结果:①正常对照组核内无磷酸化-Smad 2表达,Smad 3有微弱表达,TGF-β1刺激30min时表达量明显增加,随着刺激时间的延长,表达量进一步增加;②TGF-β1刺激24h,瞬时转染Smad 7组α-SMA表达量低于相应转染空载体组,E-钙黏蛋白表达量明显高于相应转染空载体组,TGF-β1刺激36h后Smad 7组α-SMA、E-钙黏蛋白表达量与相应空载体组相似;免疫荧光显示转染Smad 7组α-SMA阳性细胞数显著低于空载体组(P<0.05). 结论:Smads信号通路参与了TGF-β1诱导的支气管上皮细胞株16HBE向肌成纤维细胞转分化过程.     

转化生长因子-β1促血管内皮细胞向间质细胞转化的作用研究

目的 观察转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)促进内皮细胞向间质细胞转化[endothelial-mesenchymal (myofibroblast) transition,EnMT]的效应,探讨肌成纤维细胞的来源以及纤维化疾病发生的新机制.方法 分离培养人脐静脉内皮细胞,采用不同浓度的TGF-β1(0、10、25、和50 ng/ml)刺激细胞 72 h后,倒置显微镜观察诱导后细胞形态变化,免疫荧光方法检测第Ⅷ因子相关抗原和α-SMA表达变化,RT-PCR检测VE-钙粘蛋白(VE-Cadherin),α-SMA和Ⅰ型胶原基因表达变化. 结果 正常对照组内皮细胞呈铺路石样生长,TGF-β1刺激组内皮细胞由铺路石样形态向梭形转化.免疫荧光检测可见对照组含有少量FⅧ,α-SMA双阳性细胞.TGF-β1组FⅧ,α-SMA双阳性细胞明显增多,并且具有明显的浓度依赖性(P<0.05,P<0.01).RT-PCR检测结果显示,TGF-β1刺激导致内皮细胞特异性标记物VE-钙粘蛋白(VE-cadherin)基因的表达显著减少(P<0.05),随着TGF-β1刺激浓度的增加,VE-钙粘蛋白基因表达呈明显的下降趋势;相反,内皮细胞间质性标记物α-SMA和I型胶原基因的表达显著增加(P<0.05,P<0.01),并且具有明显的浓度依赖性.结论 TGF-β1刺激内皮细胞后,细胞表型和功能均表现为间质细胞特性,提示TGF-β1具有促进内皮细胞向间质细胞转化(EnMT)的作用,并且其促EnMT效应具有明显的浓度依赖性.     

人参皂苷Rg1抑制TGF-β1诱导肾小管上皮细胞转分化实验研究

目的 :通过观察人参皂苷Rg1对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)细胞转分化的影响,探讨人参皂苷Rg1在肾小管纤维化形成方面的作用。方法 :将NRK52E细胞用含10%胎牛血清的DMEM培养基培养;实验分为空白对照组、TGF-β1诱导组(5 ng/mL TGF-β1),人参皂苷Rg1与TGF-β1共同干预组(5 ng/mL TGF-β1的基础上分别加入10、20、40μg/mL的人参皂苷Rg1),培养72 h。在倒置显微镜下观察各组细胞形态的改变,并通过CCK8法检测人参皂苷Rg1对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化的影响。结果 :TGF-β1能显著诱导大鼠肾小管上皮细胞纤维样改变,与对照组相比有明显差异(P<0.05),人参皂苷Rg1能抑制TGF-β1的作用,且其作用随浓度增加而增加。结论 :人参皂苷Rg1能抑制TGF-β1诱导的大鼠肾小管上皮细胞间充质转分化的作用,可以延缓或抑制肾间质纤维的过程。     

MAPKs通路在转化生长因子β1诱导气道上皮细胞转化中的作用

目的探讨丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信号通路在转化生长因子β1(TGF-β1)体外诱导气道上皮细胞表型向肌成纤维细胞转化中的作用。方法TGF-β1(10μg/L)刺激气道上皮细胞株16HBE-14o,采用Westernblot方法检测刺激5min,15min,30min,1h和24h后细胞内磷酸化p38、Erk1/2和JNK的表达。分别预先加入p38MAPK、ERK1/2和JNK的特异性抑制剂孵育1h,再加入TGF-β1刺激16HBE-14o48h,免疫荧光方法检测E-cadherin、α-SMA和F-actin的表达。结果TGF-β1刺激5min后磷酸化p38、Erk1/2表达量较未予TGF-β1刺激的正常对照组明显增加,刺激15min,30min和1h后表达量稍有下降但仍较正常对照组明显增加,刺激24h后表达量恢复至基础水平。正常对照组与TGF-β1刺激组均有极微弱的磷酸化JNK表达,表达量无显著差别。加入p38MAPK和ERK1/2特异性抑制剂组,绝大多数细胞F-actin和E-cadherin仍定位在细胞边缘,表达α-SMA的阳性细胞数显著减少;加入JNK特异性抑制剂组E-cadherin、α-SMA和F-actin的表达与单纯TGF-β1刺激组相似。结论TGF-β1活化了16HBE-14o细胞内MAPKs信号通路,MAPKs(p38MAPK和ERK1/2)信号通路参与了TGF-β1诱导的16HBE-14o向肌成纤维细胞的转化过程。     

TGF-β1/ILK/FSP1信号通路在环孢素诱导肾小管上皮细胞转分化中的作用

目的通过体外特异阻断试验,探讨转化生长因子-β1/整合素连接激酶/成纤维细胞特异蛋白1（TGF-β1/ILK/FSP1）信号通 路在环孢素A致肾小管上皮细胞转分化中的作用。方法构建并鉴定ILK-RNAi慢病毒表达载体ILKshRNA。将NRK52E细 胞培养分为5组,分别为空白对照组;环孢素诱导组：细胞培养液加环孢素A1 mg/L;TGF-β1干预组：阻断剂（SB431542）10 μmol/L 加环孢素A1 mg/L;ILK干预组：阳性转染ILKshRNA后加入环孢素A1 mg/L;阴性对照组：阴性转染ILKshRNA后加入环孢素 A1 mg/L。实时荧光定量PCR检测TGF-β1、ILK和FSP-1 mRNA的表达,Western blot检测TGF-β1、ILK、FSP-1的蛋白表达。免 疫组化检测细胞爬片α-SMA阳性表达细胞数。结果与空白对照组比较,环孢素诱导组细胞TGF-β1、ILK、FSP-1基因及蛋白表 达量均显著增加（P<0.05）;TGF-β1 干预组经SB431542 处理后,TGF-β1、ILK 和FSP1 水平较环孢素诱导组降低（P<0.05）;经 ILKshRNA沉默后,ILK和FSP1水平较环孢素诱导组降低（P<0.05）。α-SMA阳性细胞数经SB431542和ILKshRNA处理后较 环孢素诱导组降低（P<0.05）。结论TGF-β1/ILK/FSP1信号通路激活是环孢素A诱导大鼠肾小管上皮细胞转分化的重要机制 之一,ILK参与环孢素A诱导大鼠肾小管上皮细胞间充质转分化过程。     

晶状体上皮细胞与多肽生长因子

晶状体是一种无血管且与周围组织联系较小的透明组织 ,具有复杂的代谢过程 ,其营养主要来自房水。晶状体的病变主要表现为透明性改变及位置的异常 ,二者均可引起显著视力下降。晶状体混浊亦称白内障 ,是致盲的首要因素。尽管白内障的发病率高 ,对健康影响大 ,但对其病因及发病机理却知之甚少。流行病学研究表明 :很多因素均可增加患白内障的危险性 ,如 :年龄增大、糖尿病、营养不良、受紫外线照射过多、青光眼和其它眼外伤[1 ] ;而抗氧化剂、维生素及矿物质对白内障有保护作用。近年来 ,随着细胞生物学和分子生物学技术与临床研究的结合 ,推…     

整合素β3 和转化生长因子β1 在子宫内膜异位症在位与异位内膜组织中的表达

目的探讨整合素艮（integrinβ3）和转化生长因子β1（transforming growth factor β1，TGFβ1）在子宫内膜异位症（endometriosis，EM）中的表达，并探讨其与EM发病的关系及两者的相关性。方法采用免疫组织化学染色（SP法）分别检测Integrinβ3、TGFβ1在EM的在位内膜、异位内膜以及在正常子宫内膜中的表达。结果整合素良和TGFβ1两因子在EM患者的异位内膜与对照组同期正常子宫内膜的表达均有显著性差异（P〈0．05），在EM患者的在位内膜与异位内膜的表达均有显著性差异（P〈0．05），两因子在各组分布呈相反趋势但没有统计学意义。结论EM患者从子宫内膜到异位病灶，整合素β3表达有下降趋势而TGFβ1表达有上升趋势，两者均有明显的变化，这可能与EM发生、发展和不孕有关。     

AM12质粒对体外肾小管上皮细胞凋亡和分泌转化生长因子-β_1的影响

目的观察AM12质粒(含乙型肝炎病毒3.2 kb全基因组)对体外培养的人近端肾小管上皮细胞HK-2凋亡和分泌转化生长因子-β1(TGF-β1)的影响。方法以体外培养的HK-2细胞为对象,以AM12质粒转染HK-2细胞为转染组,以正常HK-2细胞作为对照组,用流式细胞仪检测细胞的凋亡及Fas表达率;用酶联免疫吸附法(ELISA)检测上清液中TGF-β1的浓度。结果转染组HK-2凋亡率为(1.49±0.02)%,高于对照组的(1.03±0.09)%(P<0.05);Fas表达率为(10.09±2.34)%,高于对照组的(6.58±0.65)%(P<0.05);上清液TGF-β1水平为(283.85±61.12)ng.L-1,高于对照组的(210.28±47.21)ng.L-1(P<0.05)。结论 HBV-DNA质粒转染体外培养的人肾小管上皮细胞可诱导其凋亡并上调其对TGF-β1的分泌。