谷氨酰胺体外抑制脂多糖诱导的NCM460细胞线粒体途径凋亡作用的研究

目的探讨谷氨酰胺对小鼠NCM460细胞线粒体凋亡的影响及其机制。方法对数生长期NCM460细胞分为正常组、脂多糖组、谷氨酰胺组,脂多糖组予以加5μg/ml的脂多糖,谷氨酰胺组予以加5μg/ml的脂多糖和12 mmol/L的谷氨酰胺。CO_2培养箱培养24 h后,收集各组细胞,采用Western blotting检测各组细胞Bcl2、Bax及Cyt-c蛋白的表达量,采用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡情况。结果 Western blotting检测脂多糖组细胞中Bax、Cyt-c蛋白的表达均明显升高(P均0.05),Bcl-2蛋白的表达较正常组低,Bcl-2/Bax值较正常组下降;而谷氨酰胺组肠组织中Bax、Cyt-c蛋白的表达均弱于脂多糖组(P均0.05),Bcl-2蛋白的表达较脂多糖组高(P0.05),Bcl-2/Bax值较脂多糖组升高。流式细胞仪检测三组细胞的凋亡率,显示脂多糖组细胞出现大量凋亡,其早期凋亡率及晚期凋亡率均明显高于正常组,差异有统计学意义(P0.05);谷氨酰胺组细胞的凋亡较脂多糖组减轻,其早期凋亡率及晚期凋亡率均低于脂多糖组,差异有统计学意义(P0.05)。结论谷氨酰胺能体外抑制脂多糖诱导的NCM460细胞凋亡,可能是通过抑制NCM460细胞线粒体凋亡途径来实现其保护作用。     

零下非结冰抑制线粒体途径相关的细胞凋亡成功保存生物人工肝用L02细胞

目的 比较常规低温(4℃及0℃)及零下非结冰温度(-0.8℃)保存L-02肝细胞时Bcl-2/Bax基因和蛋白表达的差异及与低温保存引起细胞凋亡的关系.方法 L-02细胞分为3组:-0.8C组(零下非结冰组),0°C组(0℃非结冰组),4℃组(对照组).低温保存72 h后,分别测定细胞存活率及凋亡率(流式细胞术),检测LDH、ALT释放及凋亡基因Bcl-2与Bax的mRNA及蛋白定量表达并计算Bcl-2/Bax比值.结果 零下非结冰组较0℃组及4℃组显著提高了低温保存72 h的L-02细胞存活率[(70.95％±3.33％)vs(65.9％±3.22％)、(61.02％±3.37％),均P＜0.05];降低了细胞凋亡率[(5.82％±1.68％)vs(8.53％±1.67％)、(9.40％±2.57％),均P＜0.05];抑制了LDH[(101.50±6.58) U/L vs(127.67±12.09)U/L、(150.13±11.38) U/L,均P＜0.05]与ALT释放[(6.07±0.63) U/L vs (7.00 ±0.60) U/L、(8.63±1.25) U/L,P ＜0.05];提高了L-02细胞Bcl-2基因mRNA及蛋白表达(均P＜0.05),降低了Bax基因mRNA及蛋白表达(均P＜0.05),Bcl-2/Bax指数上升(均P＜0.05).结论 同常规低温保存相比,零下非结冰可显著提高肝细胞低温保存后细胞存活率,降低低温损伤引起的细胞凋亡.零下非结冰降低了低温源性细胞凋亡的机制可能同Bcl-2基因表达增加、Bax基因表达降低即Bcl-2/Bax比值上升有关.     

氟、砷及其联合染毒对大鼠海马和大脑皮质组织Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的 探讨氟、砷及其联合染毒对大鼠海马和大脑皮质组织Bcl-2和Bax凋亡蛋白表达的影响.方法 将初断乳SPF级雄性SD大鼠按体质量随机分为对照组、氟处理组、砷处理组和氟砷联合组,每组10只.氟处理组大鼠饮用120 mg/L氟化钠(NaF)水溶液,砷处理组大鼠饮用70 mg/L亚砷酸钠(NaAsO2)水溶液,氟砷联合组大鼠饮用含120mg/L NaF和70 mg/L NaAsO2的水溶液,对照组大鼠饮用蒸馏水.3个月后采用免疫组织化学和Western blot法检测大鼠海马和大脑皮质组织Bcl-2和Bax凋亡蛋白的表达.结果 ①免疫组织化学法检测结果:大鼠海马和大脑皮质组织细胞质中Bcl-2和Bax凋亡蛋白呈现为棕黄色颗粒物;与对照组和氟、砷处理组比较,氟砷联合组大鼠海马和大脑皮质Bcl-2阳性神经元细胞数较少;与对照组比较,氟、砷处理组和氟砷联合组大鼠海马和大脑皮质Bax阳性神经元细胞数较多,尤其以氟砷联合组的阳性细胞数最多.②Western blot法检测结果:对照组、氟处理组、砷处理组、氟砷联合组大鼠海马组织Bcl-2、Bax蛋白表达分别为0.84±0.22、0.76±0.10、0.75±0.24、0.28±0.05和0.44±0.19、0.81±0.14、1.22±0.45、1.45±0.26,其中氟砷联合组Bcl-2表达明显低于其他3组(P均＜0.05),而氟、砷处理组和氟砷联合组Bax表达均明显高于对照组(P均＜ 0.05),且砷处理组和氟砷联合组Bax表达高于氟处理组;上述4组大鼠大脑皮质Bcl-2、Bax蛋白表达分别为0.51±0.18、0.50±0.12、0.49±0.19、0.33±0.19和0.39±0.18、0.79±0.30、0.79±0.35、0.80±0.18,其中氟、砷处理组和氟砷联合组大鼠Bax蛋白表达明显高于对照组(P均＜0.05).氟、砷处理组和氟砷联合组大鼠海马和大脑皮质组织Bcl-2/Bax表达比值(0.96±0.28、0.72±0.45、0.33±0.05和0.69±0.37、0.57±0.10、0.37±0.18)均明显低于对照组(1.91±1.32、1.44±0.29,P均＜0.05),尤以氟砷联合组最明显.结论 在一定染毒剂量下,氟和砷均促进大鼠海马及大脑皮质组织Bax蛋白的表达,降低海马及大脑皮质组织的Bcl-2/Bax表达比值.氟和砷对大鼠海马组织Bcl-2蛋白表达和大脑皮质组织Bcl-2/Bax蛋白表达比值的影响存在协同作用.     

新癀片对急性胰腺炎大鼠胰腺细胞凋亡的影响

目的 观察新癀片对急性胰腺炎(AP)大鼠胰腺细胞凋亡和胰腺组织Bcl-2、c-Myc蛋白表达的影响,并探讨其作用机制.方法 90只Wistar大鼠按完全随机法分为对照组、AP组和新癀片治疗组.采用胆胰管逆行注射5%牛黄胆酸钠1 ml/kg体重方法制备AP模型.治疗组于制模后30 min按480 mg/kg体重的剂量予新癀片水溶液灌胃.术后6、12、24 h分批处死大鼠,检测血淀粉酶活性,观察胰腺病理变化,TUNEL法检测胰腺细胞凋亡,Western blotting法检测胰腺组织Bcl-2、c-Myc蛋白表达.结果 对照组12 h点的血淀粉酶活性、胰腺病理评分、凋亡指数、胰腺组织Bcl-2和c-Myc蛋白表达量分别为(1927±186)U/L、0、0.59±0.12、0.406±0.112、0.185±0.046;AP组分别为(5611±473)U/L、2.65±0.56、3.80±0.91、0.282±0.082、0.339±0.076;治疗组分别为(4572±400)U/L、2.40±0.75、7.15±0.86、0.220±0.068、0.302±0.090.AP组和治疗组的淀粉酶活性、胰腺病理评分、凋亡指数、c-Myc蛋白表达量均显著高于对照组(P值均＜0.05),而Bcl-2蛋白表达量显著低于对照组(P＜0.05).与AP组比较,治疗组的淀粉酶活性、胰腺病理评分、胰腺组织Bcl-2蛋白表达量均显著降低(P值均＜0.05),凋亡指数显著增高(P＜0.05),c-Myc蛋白表达量无显著变化.结论 新癀片可通过下调Bcl-2蛋白表达、诱导AP早期胰腺细胞凋亡,从而减轻胰腺炎症反应.     

后适应渐进模式通过线粒体途径减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤

目的 探讨后适应不同模式对大鼠急性心肌缺血再灌注损伤的影响,并进一步研究线粒体途径在其中的作用.方法 60只SD大鼠随机分为假手术(Sham)组、缺血再灌注(R/I)组、后适应逆向模式(R-Post,后适应处理方案短暂再灌注/缺血时间为30/10 s,25/15 s,15/25 s,10/30 s)组、后适应标准模式(S-Post,后适应处理方案为20/20 s x 4)组和后适应渐进模式(G-Post,后适应处理方案短暂再灌注/缺血时间为10/30 s,15/25 s,25/15 s,30/10 B)组,共5组,建立急性心肌梗死再灌注和缺血后适应模型.再灌注6 h后每组取4只处死,取心肌组织用Western blot方法测定B细胞淋巴瘤/自血病-2(Bcl-2)、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关抗原(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)在心肌组织中的表达及细胞色素C(Cyt-c)在胞浆中的表达.各组其余大鼠再灌注24 h后测定血液动力学,抽血测心肌酶,取心脏进行TUNEL凋亡检测和梗死面积测定.结果 三种后适应处理方案Bax、Cyt-c、Caspase-9、凋亡指数、心肌酶释放均显著低于R/I组(P均<0.05),同时三种后处理方案Bcl-2水平均显著高于R/I组(P均<0.05),其中G-Post组最为明显,其次是S-Post组,R-Post组最不明显.G-Post组同S-Post组比较,Bax(0.35±0.10比0.50±0.02,P<0.05)、Cyt-c(O.66±0.16比1.68±0.22,P<0.05)、Caspase-9(0.61±0.17比1.66±0.55,P<0.05)的表达水平均较低,心肌酶释放水平低[CK:(251.00±45.16)U/L比(388.56±75.01)U/L,P<0.05;CK-MB:(146.00±60.12)U/L比(291.16±52.41)U/L,P<0.05],凋亡指数小[(4.32 ±1.16)%比(8.58 ±1.12)%,P<0.05].同时Bcl-2表达水平高于S-Post组(2.00 ±0.34比1.40±0.18,P<0.05).在以上指标中渐进模式均显著优于逆向模式.结论 后适应渐进模式减轻心肌再灌注损伤程度较标准模式显著,线粒体途径在其中发挥了重要作用.     

肾气丸对非酒精性脂肪性肝炎大鼠Bcl-2/Bax、Fas/FasL信号通路的影响

目的:观察Bcl-2/Bax、Fas/Fas L介导的信号转导通路在高脂饮食诱导的非酒精性脂肪性肝炎大鼠的作用及肾气丸对其的影响。方法:采用高脂饲料连续喂养12周建立大鼠非酒精性脂肪性肝炎模型,同时以肾气丸进行干预12周。HE染色观察大鼠肝组织病理组织学变化,免疫组织化学检测肝组织中Fas、Fas L、Bcl-2、Bax、Caspase-8蛋白的表达;Realtime-PCR法检测肝组织Caspase-8 mRNA表达。结果:模型组大鼠肝组织Bcl-2、Bax、Fas、Fas L蛋白以及Caspase-8 mRNA和蛋白表达均较正常组显著增加(P<0.01),Bcl-2/Bax比值较正常组明显的降低(P<0.05);大鼠肝组织Caspase-8蛋白表达与Fas、Fas L蛋白表达均呈明显正相关(r分别为0.907、0.804,P均<0.01);予以肾气丸干预后,Bax、Fas、Fas L蛋白的表达以及Caspase-8 mRNA和蛋白的表达均较模型组明显的降低(P<0.05),Bcl-2/Bax比值较模型组明显的增加(P<0.05),Bcl-2蛋白的表达与模型组比较差异无显著性意义(P>0.05)。结论:肾气丸可能通过影响Bcl-2/Bax、Fas/Fas L信号转导通路,下调Bax、Fas、Fas L、Caspase-8表达,减少肝细胞的脂性凋亡,从而防治大鼠非酒精性脂肪性肝炎的发生发展。     

福辛普利对慢性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡及相关基因表达的影响

目的:探讨福辛普利对慢性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡及相关基因表达的影响。方法:采用肾上腹主动脉缩窄法建立大鼠慢性心力衰竭模型,随机分为假手术组、慢性心力衰竭组、福辛普利组,每组10只大鼠。术后假手术组和慢性心力衰竭组给予生理盐水灌胃,福辛普利组给予福辛普利10 mg/(kg·d)灌胃。8周后,观察各组大鼠左心室舒张末压(LVEDP)、左心室内压最大上升及下降速率(±dp/dtmax)和左心室质量指数(LVMI);脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测大鼠左心室心肌细胞的凋亡指数(AI);SP免疫组织化学染色法检测左心室心肌组织B细胞白血病/淋巴瘤相关抗原2(Bcl-2)、B细胞白血病/淋巴瘤相关抗原相关X(Bax)蛋白的表达;蛋白免疫印记法(Western blotting)检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)蛋白的表达。结果:慢性心力衰竭组与假手术组相比,大鼠LVEDP、LVMI、心肌细胞凋亡指数、Bax蛋白、Caspase-3蛋白的表达均明显升高(P0.01),±dp/dtmax、Bcl-2蛋白的表达、Bcl-2/Bax比值显著下降(P0.01);与慢性心力衰竭组比较,福辛普利组大鼠LVEDP、LVMI、心肌细胞凋亡指数、Bax蛋白、Caspase-3蛋白的表达均明显降低(P0.01),±dp/dtmax、Bcl-2蛋白的表达、Bcl-2/Bax比值显著升高(P0.01),差异均有统计学意义。结论:慢性心力衰竭过程中发生了心肌细胞凋亡,福辛普利可通过上调Bcl-2的表达及下调Bax及Caspase-3的表达抑制心肌细胞凋亡,改善慢性心力衰竭大鼠心室功能及心肌肥厚。     

丙泊酚对大鼠肺缺血再灌注损伤细胞凋亡及相关蛋白的影响

目的 探讨丙泊酚对大鼠肺缺血再灌注损伤(LIRI)细胞凋亡及相关蛋白的影响.方法 雄性SD大鼠42只,随机分为3组:假手术组(S组)、缺血再灌注组(IR组)、丙泊酚组(P组).IR组、P组均建立大鼠原位肺缺血再灌注模型(缺血1 h,再灌3 h),P组于缺血前30 min静脉输注丙泊酚5 mg·kg-1·h-1.实验结束后立即取左肺标本,用免疫组化法检测Bcl-2与Bax蛋白表达情况,原位细胞凋亡检测(TUNEL)法检测肺上皮细胞凋亡指数(AI),同时光镜下观察肺组织的病理学变化.结果 与S组相比,IR组凋亡指数增加,肺组织中Bcl-2、Bax表达均增强,Bcl-2/Bax比值明显降低 (P＜0.05);与IR组相比,P组Bcl-2蛋白表达增加、Bax蛋白表达减少和细胞凋亡指数降低(P＜0.05),光镜下肺组织病理学变化明显轻于IR组.结论 丙泊酚对大鼠LIRI具有保护作用,其机制可能与调控Bcl-2/Bax蛋白表达从而减轻肺细胞凋亡有关.     

氧化苦参碱对多发性骨髓瘤U266细胞凋亡的作用及机制

目的:探讨氧化苦参碱对多发性骨髓瘤(MM)U266细胞凋亡的诱导作用及机制。方法:以不同终浓度(0、5、10、20mmol/L)氧化苦参碱处理MM U266细胞。分别采用MTT法、瑞特染色、流式细胞仪及western blot检测MM U266细胞增殖、细胞凋亡形态、细胞凋亡及其凋亡因子(Bax、Bcl-2)蛋白表达。结果:氧化苦参碱(5、10、20mmol/L)可显著抑制MM U266细胞增殖,呈剂量依赖性。20 mmol/L氧化苦参碱作用48h,MM U266细胞呈现典型凋亡形态学改变。氧化苦参碱(5、10、20mmol/L)作用48h后,MM U266细胞凋亡率分别为(11.5±1.4)%、(24.7±2.5)%、(43.6±3.4)%,呈剂量依赖性。氧化苦参碱(5、10、20mmol/L)作用MM U266细胞48h,可上调Bax蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达,并呈现剂量依赖性。结论:氧化苦参碱可诱导MM U266细胞凋亡,调控凋亡因子Bax、Bcl-2的表达是其可能作用机制。     

多功能蛋白APE1/Ref1在肝衰竭大鼠肝细胞不同部位的表达意义

目的研究多功能蛋白酶脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶(APE1/Ref1)在慢加急性肝衰竭大鼠肝细胞不同部位的表达意义。方法将30只SD大鼠随机分为对照组(n=15)和模型组(n=15)。采用四氯化碳(CCL4)联合D-氨基半乳糖(D-GalN)和内毒素(LPS)注射法制备肝衰竭模型,使用B超监测筛选成功模型。检测血清ALT、AST、总胆红素(TBIL),采用HE染色观察肝组织病理学变化,采用免疫组化和免疫印迹法检测肝组织胞浆蛋白、胞核蛋白、总蛋白APE1/Ref1的表达。结果本组实验,经B超筛选模型成功率达80%;正常对照组血清ALT、AST和TBIL水平分别为(56.5±16.0)U/L、(178.7±36.5)U/L和(3.2±0.6)μmol/L,均显著低于模型组【(620.4±347.5)U/L、(1077.7±666.1)U/L和(21.2±16.9)μmol/L,均P0.05】;免疫组化法检测模型组肝组织APE1/Ref1表达水平为(6.8±1.3)IOD,显著低于正常对照组的【(8.1±1.2)IOD,P0.05】,模型组胞浆蛋白水平为(0.91±0.08)IOD,明显高于正常对照组的【(0.18±0.01)IOD,P0.01】,而核蛋白和总蛋白水平分别为(0.71±0.01)IOD和(0.92±0.03)IOD,均明显低于正常对照组【(1.41±0.04)IOD和(1.15±0.01)IOD,P0.05】。结论慢加急性肝衰竭大鼠肝内APE1/Ref1表达呈现由细胞核内转向胞浆内表达的特征,总体表达呈下降水平。     

扶正化瘀方对肝纤维化模型大鼠肝组织纤维化及肝星状细胞的影响

目的 评价扶正化瘀方对肝纤维化模型大鼠肝组织纤维化及活化肝星状细胞(HSC)的影响. 方法 64只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、四氯化碳(CCl4)肝纤维化模型组、药物干预低剂量组和药物干预高剂量组.除正常组外,所有大鼠用CCl4复合法制备大鼠肝纤维化模型；在造模同时,药物干预组给予扶正化瘀方灌胃,1次/d,6次/周,共6周(低剂量组按0.75g/kg,高剂量组1.5 g/kg);分别在实验的第2、4、6周处死正常组、模型组及药物干预低、高剂量组大鼠各4只,收集大鼠血清及肝组织标本,测定大鼠血清ALT、AST、总胆红素(TBil);组织标本常规石蜡包埋、切片、HE染色及Masson三重染色,采用计算机图像分析测定大鼠肝组织纤维化面积比例；测定α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的积分吸光度值.组间数据比较用完全随机设计的单因素方差分析.结果 2周末正常对照组、模型对照组、药物干预低、高剂量组ALT分别为(24.68±1.50) U/L、(85.33±5.68)U/L、(56.49±4.85) U/L、(36.94±5.23)U/L,4组比较,F值为98.11,差异有统计学意义；4组的AST值分别为(37.69±3.35)U/L、(112.34±7.02) U/L、(82.89±5.32) U/L、(61.39±6.06)U/L,4组比较,F值为96.31,差异有统计学意义；4组的TBil值分别为(6.70±1.10) U/L、(14.12±0.68) U/L、(10.85±0.64) U/L、(7.78±0.69) U/L,4组比较,F值为51.67,差异有统计学意义.4周末4组ALT、AST、TBil比较,F值分别为111.24、72.11、101.20,P值均＜0.05,差异均有统计学意义；6周末4组ALT、AST、TBil比较,F值分别为154.16、190.80、158.91,P值均＜0.05,差异均有统计学意义.与正常组比较,2、4、6周末模型组、扶正化瘀高、低剂量各组ALT、AST、TBil的水平均有不同程度的升高；与模型组比较,药物干预各组ALT、AST、TBil数值均有不同程度下降,其中以扶正化瘀方高剂量组改善最为显著.与正常组比较,模型组、药物干预低、高剂量组肝组织纤维化面积比例明显升高,2周末正常组、模型组、药物干预低、高剂量组肝组织纤维化面积比例分别为5.23％±0.10％、11.93％±1.78％、9.33％±1.09％、8.26％±0.77％,4组比较,F=18.68,P＜0.01；4周末、6周末正常组、模型组、药物干预低、高剂量组肝组织纤维化面积比较,F值分别为49.95、82.44,P值均＜0.01,差异均有统计学意义.随着造模时间的延长,α-SMA表达亦较正常对照组均有升高,药物干预低、高剂量组大鼠肝组织α-SMA的表达与正常组和模型组比较,均明显下调,且药物干预高剂量组α-SMA表达下调显著.结论 扶正化瘀方具有抗肝纤维化的作用,且可减少α-SMA的表达,其抗肝纤维化机制可能是通过促进活化HSC的凋亡,减少活化HSC的数量.     

盐酸氨溴索对慢性阻塞性肺疾病大鼠肺组织细胞凋亡和血清炎症因子的影响

目的研究细胞凋亡在大鼠慢性阻塞性肺疾病(简称慢阻肺)形成过程中的作用机制,并探讨盐酸氨溴索对慢阻肺大鼠肺组织细胞凋亡和血清炎症因子的影响。方法 34只健康SD大鼠随机分为3组:A正常对照组、B盐酸氨溴索组、C模型组。采用免疫组化法检测Bcl-2(b cell lymphoma/lewkmia-2)蛋白、Bax(Bcl-2 associated x protein)蛋白及Caspase-3蛋白的表达;采用血清酶联免疫吸附测定法测定各组血清中炎症因子(LTB4、IL-8、SP-D)的浓度。结果与A组比较,C组中Bax蛋白、Caspase-3蛋白以及炎症因子表达增多,Bcl-2蛋白的表达及Bcl-2/Bax减少,差异均显著(P0.05);与C组比较,B组Bax蛋白、Caspase-3蛋白以及炎症因子表达减少,Bcl-2蛋白的表达及Bcl-2/Bax增高,差异均显著(P0.05)。结论慢阻肺的发病机制可能与细胞凋亡有关,盐酸氨溴索在慢阻肺肺组织中发挥抗细胞凋亡和抗炎作用,其机制可能在于调控死亡信号通路中Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白的表达以及抑制炎症因子的表达,起到肺保护的作用。     

血糖波动对糖尿病大鼠小肠上皮细胞凋亡的影响及可能机制

目的探讨血糖波动对糖尿病大鼠小肠黏膜上皮细胞凋亡的影响及可能机制。方法用链脲佐菌素(STZ)诱导,间断短效胰岛素应用辅助高糖高脂饮食制备2型糖尿病(T2DM)血糖波动模型。12 w后,检测大鼠血清丙二醛(MDA)水平及超氧化物歧化酶(SOD)活性;TUNEL法检测小肠上皮细胞凋亡,免疫组化法检测凋亡基因Bcl-2、Bax的表达。结果血糖波动组大鼠MDA水平、SOD活性与正常组、持续性高血糖组比较差异显著(P0.05);持续高血糖组大鼠小肠上皮可见少数阳性凋亡细胞表达,与正常组相比明显增多(P0.05);血糖波动组凋亡阳性细胞较持续高血糖组增多更加明显(P0.01)。血糖波动组、持续高血糖组Bcl-2的表达较正常组显著下降,Bax显著升高(P0.05),血糖波动组Bcl-2的表达较持续高血糖组进一步下降,Bax进一步升高(P0.05)。结论糖尿病大鼠血糖波动可明显加速小肠上皮细胞凋亡。肠黏膜上皮细胞凋亡与血糖波动所致的氧化应激有关,Bcl-2/Bax参与氧化应激的过程。     

原花青素对缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡及凋亡相关基因蛋白表达的影响

目的:观察原花青素对缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡相关基因半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、B型白细胞/2型淋巴细胞样蛋白(Bcl-2)和凋亡相关基因Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达的影响,探讨原花青素在大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡中发挥的作用及可能的调控机制。方法:40只雄性SD大鼠随机等分为4组,即正常组,模型组,原花青素低剂量组[原花青素50 mg/(kg·d)],原花青素高剂量组[原花青素100 mg/(kg·d)],灌胃给药,每天1次,连续2周。末次给药后结扎冠状动脉左前降支(LAD)30 min再灌注120 min,建立大鼠心肌缺血再灌注模型。测定肌酸激酶同工酶(CK-MB)活性、心肌梗死面积;用Western blot检测各组细胞凋亡相关基因Caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达;原位末端转移酶标记(TUNEL)法检测心肌细胞凋亡。结果:与正常组比较,模型组大鼠CK-MB活性显著增强、心肌梗死面积增大,心肌细胞凋亡指数升高,Caspase-3、Bax蛋白表达增强,Bcl-2蛋白表达、Bcl-2/Bax降低(P0.05);与模型组比较,原花青素高、低剂量组大鼠CK-MB活性显著减弱、心肌梗死面积减小,细胞凋亡指数显著降低,Caspase-3、Bax蛋白表达显著减弱,Bcl-2蛋白表达、Bcl-2/Bax增加(P0.05)。结论:原花青素可拮抗缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡,其机制可能与Caspase-3、Bax蛋白表达降低,Bcl-2表达升高,Bcl-2/Bax比例增加有关。     

大剂量当归预适应抗心肌缺血再灌注后心肌细胞凋亡的机制

目的观察大剂量当归水煎液预适应对缺血再灌注(IR)大鼠心肌细胞凋亡及心肌组织Bcl-2及Bax蛋白表达的影响。方法应用离体灌流大鼠心脏,复制大鼠心肌IR与缺血预适应(IPC)模型,并以不同大剂量当归水煎液灌胃6 w后,取大鼠心脏进行离体灌注,复制当归IPC模型,以TTC法测定心肌梗死面积,以Tunel法检测细胞凋亡,Western印迹法检测Bcl-2及Bax蛋白表达。结果大剂量当归水煎液预适应能有效降低IR大鼠心肌梗死面积,降低心肌细胞的凋亡率,并增加心肌组织Bcl-2的表达而抑制Bax的表达,且呈现明显剂量-效应关系(P0.05,P0.01)。结论大剂量当归水煎液预适应可增加心肌组织Bcl-2的表达而抑制Bax的表达,从而减少IR大鼠心肌细胞的凋亡,对IR大鼠心肌具有明显保护作用。     

加贝酯预防急性胰腺炎的作用机制研究

目的 通过观察加贝酯对胰腺细胞凋亡及Bax、Bcl-2蛋白表达的影响,探讨加贝酯预防大鼠胰管注射法诱导的急性胰腺炎(AP)的相关机制.方法 16只SD大鼠随机分为假手术组(4只)、AP组和加贝酯治疗组(各6只).以50 mmHg(1 mmHg = 0.133 kPa)的恒压向胰胆管内注入30%泛影葡胺诱导SD大鼠AP模型,制模前15 ～ 20 min加贝酯(4 mg·h-1·kg-1体重)静脉持续滴注60 min进行预防.组织病理检查观察胰腺炎症程度,应用TUNEL染色、免疫组化检测胰腺细胞凋亡和Bcl-2、Bax蛋白表达.结果 加贝酯治疗组的胰腺组织病理改变较AP组减轻(P ＜ 0.05).治疗组凋亡指数(AI)、Bax和Bcl-2表达值分别为8.00 ± 1.80,10.12 ± 1.52和1.83 ± 0.39,前两者较AP组显著增高,而Bcl-2蛋白无显著差别.治疗组AI、Bax表达与胰腺的炎症程度呈负相关.结论 加贝酯静脉滴注对大鼠胰管注射法诱导的AP有一定的预防作用.其机制可能与促进细胞凋亡和Bax蛋白表达上调有关.     

高胸段硬膜外阻滞对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的:探讨高胸段硬膜外阻滞(HTEA)对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及机制。方法:将40只Wister大鼠随机均分为4组。缺血再灌注组(I/R组,结扎左冠状动脉前降支造成缺血30 min后再灌注120 min);保护组(结扎前硬膜外腔注入0.5%罗哌卡因,0.125 ml/kg);对照组(仅在左冠状动脉前降支下穿线,但不结扎,在穿线15 min前硬膜外腔注入等量生理盐水);硬膜外阻滞组(左冠状动脉前降支下穿线但不结扎,在硬膜外注入0.5%罗哌卡因)。实验过程中监测心电,测定心率。实验结束后测定血清肌酸激酶-同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH);用HE染色光学显微镜观察心肌结构,免疫组化法测定凋亡蛋白bax和bcl-2表达。结果:(1)I/R组3只大鼠因发生室颤而死亡,保护组仅1只发生室颤而死亡;(2)保护组大鼠硬膜外注入罗哌卡因后心率较用药前下降19%(P0.05);(3)I/R组血浆CK-MB[(2564.750±372.889)U/ml∶(1022.250±161.760)U/ml]、LDH[(2719.125±382.131)U/L∶(584.875±124.470)U/L]较对照组明显升高(P均0.01),保护组血浆CK-MB[(1779.750±215.997)U/ml]、LDH[(2131.750±491.442)U/L]比I/R组明显下降(P均0.01);(4)光镜结果显示,I/R组大鼠心肌损伤严重,而保护组损伤明显减轻;(5)I/R组大鼠凋亡蛋白Bax表达明显高于对照组[(25.750±12.629)%∶(7.500±3.725)%,P0.01],保护组Bax[(18.500±9.050)%]表达明显低于I/R组(P0.01),而I/R组大鼠抗凋亡蛋白Bcl-2的表达明显低于对照组[(6.500±2.078)%∶(22.250±3.162)%,P0.01],保护组Bcl-2[(17.250±1.328)%]的表达明显高于I/R组(P均0.01)。I/R组Bax/Bcl-2比值明显高于对照组[(3.903±2.093)∶(0.397±0.285),P0.01],而保护组Bax/Bcl-2比值(1.448±0.890)较I/R组明显降低(P0.01)。结论:(1)大鼠心肌缺血30 min后再灌注120 min,能够造成心肌严重损伤;(2)低浓度罗哌卡因应用于高胸段硬膜外阻滞能够减轻缺血再灌注大鼠的心肌损伤;(3)心肌损伤的减轻可能与下调Bax蛋白表达,及上调Bcl-2蛋白表达有关。     

金香丹对缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的研究金香丹对缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法采用在体结扎大鼠冠状动脉左前降支建立心肌缺血再灌注模型,采用细胞凋亡测试盒(TUNEL)法观察心肌细胞凋亡情况,免疫组化法检测凋亡相关基因Bax、Bcl-2和Caspsase-3表达的变化。结果模型组细胞凋亡指数、Bax、Bcl-2及Caspsase-3的蛋白表达显著高于假手术组,金香丹组细胞凋亡指数、Bax及Caspsase-3的蛋白表达均显著低于模型组,Bcl-2的蛋白表达显著高于模型组。结论金香丹可以抑制缺血再灌注心肌细胞的凋亡,其作用可能与上调Bcl-2蛋白的表达同时下调Bax、Casperse-3蛋白的表达有关。     

丙泊酚对大鼠离体缺血/再灌注心肌细胞凋亡和Bcl-2/Bax蛋白表达的影响

目的研究丙泊酚对大鼠离体缺血/再灌注心肌细胞凋亡的影响及其机制。方法 SD大鼠30只,随机分为丙泊酚组与对照组,制备大鼠离体心肌缺血/再灌注(MI/R)模型,在再灌注开始时分别给以丙泊酚(25μmol/L,以950 mL/L乙醇为溶剂)或950 ml/L乙醇(3μL/h)。再灌注结束后,将缺血区剪下,制备石蜡切片,采用TUNEL技术检测心肌凋亡,免疫组化技术检测心肌组织的Bcl-2和Bax水平。结果丙泊酚组与对照组相比,心肌细胞凋亡明显增多,分别为(3 5.2±6.7)%(、5.2±0.8)%(t=28.1,P<0.01);Bcl-2表达降低,分别为5.7±1.3、1.8±0.8(t=11.9,P<0.01);Bax增高,分别为9.1±1.3、5.9±1.3,(t=11.9,P<0.01)。结论大剂量丙泊酚促进大鼠离体缺血/再灌注心肌细胞凋亡,提高Bax蛋白表达,降低Bcl-2蛋白表达。丙泊酚对Bcl-2/bax的调节可能是其促凋亡的主要机制之一。     

淫羊藿次苷Ⅱ通过沉默信息调控子1-叉头蛋白O1通路减轻心肌缺血再灌注损伤

目的探究淫羊藿次苷Ⅱ(ICSⅡ)预处理对心肌缺血再灌注损伤大鼠的保护作用,初步探究可能的作用机制。方法将大鼠分为假手术组、模型组、淫羊藿次苷Ⅱ(ICSⅡ)组、沉默信息调控子1(SIRT1)抑制剂(Selisistat)组、ICSⅡ+Selisistat组;各组大鼠预处理后采用左冠状动脉前降支结扎法建立心肌缺血再灌注损伤模型大鼠。超声检测大鼠心室功能变化;HE染色观察大鼠心肌组织病理学变化情况;酶联免疫吸附法检测血清白细胞介素1β(IL-1β)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;Tunel染色法检测心肌组织凋亡;免疫印迹法检测心肌组织中SIRT1、乙酰化叉头蛋白O1(Ac-FOXO1)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、Cleaved-Caspase-3、B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)蛋白表达情况。结果与假手术组相比,模型组左心室舒张末压(LVEDP)升高,平均动脉压(MAP)、左心室收缩压(LVSP)、左心室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(LVFS)降低,cTnI、TNF-α、IL-1β水平升高,细胞凋亡率升高,SIRT1表达降低,Ac-FOXO1表达升高,心肌组织Bax、Cleaved-Caspase-3蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达降低(均P0.05)。与模型组相比,ICSⅡ组LVEDP降低,MAP、LVSP、LVEF、LVFS升高,cTnI、TNF-α、IL-1β水平降低,细胞凋亡率降低,SIRT1表达升高,Ac-FOXO1表达降低,心肌组织Bax、Cleaved-Caspase-3蛋白表达降低,Bcl-2蛋白表达升高(均P0.05);Selisistat组LVEDP升高,MAP、LVSP、LVEF降低,cTnI、TNF-α、IL-1β水平升高,细胞凋亡率升高,SIRT1表达降低,Ac-FOXO1表达升高,心肌组织Bax、Cleaved-Caspase-3蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达降低(均P0.05)。ICSⅡ+Selisistat组LVEDP、cTnI、TNF-α、IL-1β、细胞凋亡率、Ac-FOXO1表达、心肌组织Bax、Cleaved-Caspase-3蛋白表达低于Selisistat组,MAP、LVSP、LVEF、LVFS水平和SIRT1、Bcl-2蛋白表达高于Selisistat组(均P0.05)。结论心肌缺血再灌注损伤大鼠ICSⅡ预处理后,可缓解心肌组织炎症损伤,改善心室功能,其机制可能与激活SIRT1/FOXO1通路有关。