裙带菜多糖诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡的研究

目的:检测裙带菜多糖(UPPS)对人肝癌HepG-2细胞生长的抑制作用,并探讨其诱导细胞凋亡和抗肿瘤作用的关系。方法:采用MTT法、流式细胞术检测UPPS对HepG-2细胞生长的抑制作用和诱导细胞凋亡的作用;采用免疫细胞化学染色,观察Bax和Bcl-2表达水平的变化。结果:UPPS能抑制HepG-2细胞增殖,明显高于对照组(P<0.01)。诱导细胞凋亡作用发生在UPPS处理24～48h;UPPS处理HepG-2细胞后,Bax蛋白表达增强,Bcl-2蛋白表达下调。结论:UPPS对HepG-2的抑制作用是通过诱导细胞凋亡实现的,可能与Bcl-2和Bax表达水平的变化有关。     

川芎嗪对乳腺癌MCF-7细胞AKT、Bcl-2蛋白活性表达的影响

目的:研究川芎嗪(TMP)对人乳腺癌MCF-7细胞增殖与凋亡的影响并探讨其可能的作用机制。方法:对乳腺癌MCF-7细胞分别施以0,0.5,1.0,2.0 mg/ml浓度TMP处理24、48、72 h,MTT法检测细胞的增殖抑制作用,Western Blot法检测AKT、Bcl-2蛋白的表达情况。所有数据均采用SPSS18.0,P0.05差异具有显著性,P0.01差异极具显著性。结果:与对照组相比,TMP对MCF-7细胞的增殖有抑制作用,且呈现一定的浓度、时间相关性(P0.01)。同时TMP可下调Bcl-2及AKT蛋白表达(P0.05,P0.01)。结论:TMP可能是通过调节Bcl-2、AKT蛋白的表达达到抑制MCF-7细胞增殖及诱导凋亡的效果。     

去磷酸化RB蛋白表达状况对阿霉素诱导人乳腺癌细胞凋亡和抑制其增殖的关系

目的探讨去磷酸化RB蛋白表达状况对阿霉素(ADR)诱导人乳腺癌细胞(MCF-7/S)凋亡和抑制其增殖的影响。方法应用MTT比色法检测ADR对MCF-7/S细胞增殖抑制作用,同时应用末端标记(TUNEL)法测定ADR诱导MCF-7/S细胞凋亡程度。采用免疫细胞化学法检测去磷酸化RB蛋白的表达状况。结果ADR抑制MCF-7/S细胞增殖,呈剂量依赖性,半数抑制浓度(IC50)为0.128mg.L-1;ADR作用组MCF-7/S细胞的凋亡率及去磷酸化RB蛋白的表达量分别与对照组细胞相比明显增高。结论去磷酸化RB蛋白的表达量与ADR抑制MCF-7/S细胞增殖和诱导MCF-7/S细胞凋亡呈正相关。     

多西紫杉醇对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡及其相关基因表达的影响机制

目的探讨多西紫杉醇对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡及其相关基因表达的影响机制。方法采用MTT比色法分析多西紫衫醇对人乳腺癌MCF-7肿瘤细胞的增殖作用,应用光镜、电镜分别进行细胞形态学及超微结构的观察;采用Annexirr V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率和周期变化,以及应用免疫组化方法检测Bax,Bcl-2基因蛋白的表达变化。结果多西紫杉醇对人乳腺癌MCF-7肿瘤细胞有生长抑制作用,并呈现量效关系,可随着作用时间的延长出现形态学以及超微结构的改变,而细胞凋亡率以及周期亦随剂量呈递增关系,并可上调bax和下调Bcl-2的蛋白表达。结论多西紫衫醇对人乳腺癌MCF-7细胞具有明显抑制生长的作用,并可进一步诱导细胞凋亡,其机制可能与调节Bax,Bcl-2等凋亡基因有关。     

上调HCCR-2基因表达对乳腺癌细胞增殖与凋亡的影响

目的利用细胞转基因技术探讨人宫颈癌癌基因-2(HCCR-2)对人乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其可能的分子机制。方法经脂质体介导将含有HCCR-2真核表达质粒转染人乳腺癌MCF-7细胞株,采用G418筛选阳性细胞克隆及Western blot鉴定;Western blot检测阳性细胞克隆Bcl-2、Bax蛋白表达改变;流式细胞仪检测细胞凋亡率;噻唑盐(MTT)比色法检测阳性细胞克隆的增殖活性。结果成功建立高表达HCCR-2的阳性MCF-7细胞克隆(M-23),并证实其Bcl-2蛋白表达与细胞增殖活性均显著增高,而Bax蛋白表达与细胞凋亡显著降低。结论上调MCF-7细胞HCCR-2基因后,细胞增殖活性增加,细胞凋亡降低,其作用机制与Bcl-2表达增加而Bax表达降低。     

miR-125b对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨miR-125b对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响。方法培养乳腺癌MCF-7细胞,用miR-125b模拟物和miR-125b抑制物转染乳腺癌MCF-7细胞,检测miR-125b表达,乳腺癌MCF-7细胞活力、凋亡情况、细胞周期及Cyclin A1、Cyclin D1、Bcl-2及Bax蛋白表达水平。结果 miR-125b模拟物和miR-125b抑制物转染乳腺癌MCF-7细胞1、2、3、4 d后,乳腺癌MCF-7细胞活性均显著降低(均P0. 05)。miR-125b模拟物组乳腺癌MCF-7细胞凋亡率均显著低于miR-125b抑制物组(均P0. 05); miR-125b抑制物组细胞周期G1期显著长于miR-125b模拟物组(P0. 05)。两组Cyclin A1、Cyclin D1、Bax及Bcl-2表达水平比较,差异均有统计学意义(均P0. 05)。结论 miR-125b抑制剂可显著抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖并诱导细胞凋亡。     

热疗对人乳腺癌细胞MCF-7凋亡的影响

目的探讨加热对人乳腺癌细胞MCF-7凋亡的影响。方法以正常培养状态下的MCF-7细胞为对照，应用MTT、Hoechst—PI染色方法分析不同的热处理条件（41℃，42℃，43℃）对MCF-7细胞生长状况的影响，采用细胞荧光免疫法检测热处理前后MCF-7细胞中Bcl-2基因和Bax基因的表达变化。结果热处理后肿瘤细胞凋亡数量明显增多，MCF-7细胞的最佳热处理温度为42℃，热疗使细胞中Bcl-2基因的表达水平降低，Bax基因的表达水平明显升高。结论热疗能够调节Bcl-2基因和Bax基因的表达水平，诱导肿瘤细胞凋亡。     

FTY720对人乳腺癌MCF-7细胞、喉癌Hep-2细胞增殖的影响

目的:探讨FTY720抑制人乳腺癌MCF-7细胞和喉癌Hep-2细胞增殖作用。方法:将人乳腺癌MCF-7细胞和喉癌Hep-2细胞用不同浓度FTY720作用48 h,MTT法检测细胞活性,流式细胞术检测其对细胞周期及凋亡率的影响。结果:MTT结果显示,FTY720对乳腺癌MCF-7细胞和喉癌Hep-2细胞增殖均有抑制作用,而且对喉癌Hep-2细胞抑制作用的浓度依赖性高于对乳腺癌细胞的作用;流式细胞术检测结果显示,FTY720可将乳腺癌MCF-7细胞阻滞于G1期,将喉癌Hep-2细胞阻滞于G2/M期,并明显促进乳腺癌MCF-7细胞凋亡。结论:一定浓度的FTY720能明显抑制体外培养的乳腺癌和喉癌细胞增殖,调节其细胞周期,诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡。     

姜黄素通过Notch途径抑制人宫颈癌细胞株HeLa细胞增殖

目的:探讨姜黄素对人宫颈癌细胞株HeLa细胞体外增殖抑制及凋亡诱导作用及相关机制。方法:MTT法检测不同浓度姜黄素对HeLa细胞的增殖抑制作用;RT-PCR法检测HeLa细胞Notch1、Notch2、Jagged1、Bcl-2、Bax基因表达情况。结果:姜黄素对HeLa细胞具有增殖抑制作用,且呈时间-剂量依赖性。随着姜黄素剂量的增加,Notch1、Notch2、Bcl-2mRNA的表达逐渐下降,Bax mRNA的表达逐渐升高,Bcl-2/Bax亦逐渐减小,Jagged1mRNA无明显变化。结论:姜黄素可能通过Notch信号途径改变凋亡蛋白的表达,抑制HeLa细胞增殖。     

沉默长链非编码PCAT-1对乳腺癌细胞阿霉素耐药性的影响

目的探究沉默长链非编码RNA (lncRNA) PCAT-1对乳腺癌细胞阿霉素(ADM)耐药性的影响。方法 qRTPCR实验检测PCAT-1的mRNA表达水平;通过小RNA干扰技术下调MCF7细胞中PCAT-1的表达,CCK-8和MTT实验检测MCF7、MCF7/ADM细胞增殖的活性; TUNEL实验检测MCF7/ADM细胞凋亡。结果 PCAT-1在乳腺癌组织和MCF7细胞中的mRNA表达水平明显高于癌旁组织和人乳腺上皮细胞MCF10A。PCAT-1在MCF7/ADM细胞的mRNA表达水平明显高于MCF7细胞。沉默PCAT-1可以促进ADM对MCF7、MCF7/ADM细胞增殖的抑制作用。沉默PCAT-1能够增强ADM诱导的MCF7/ADM细胞的凋亡。此外,沉默PCAT-1可以促进Bax的表达,抑制Bcl-2和PCNA的表达。结论沉默PCAT-1增强ADM对乳腺癌细胞的毒性作用。     

槲皮素逆转人乳腺癌MCF - 7细胞阿霉素耐药及其相关机制的研究

目的 探讨槲皮素（quercetin,Que）逆转人乳腺癌MCF - 7细胞阿霉素（doxorubicin,Dox）耐药及其相关机制。方法 用不同浓度的槲皮素处理MCF - 7细胞及其阿霉素耐药的MCF - 7/dox细胞,MTT法筛选无毒剂量的槲皮素用于实验。用无毒剂量的槲皮素联合不同浓度的阿霉素处理MCF - 7和MCF - 7 /dox细胞,MTT法检测细胞增殖率,Transwell法检测细胞侵袭能力,流式细胞法检测细胞凋亡率和人乳腺癌干细胞表面标志物CD44+/CD24 - /low的表达, Western - blot检测人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因（Phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome 10 ,PTEN）及磷酸化的丝氨酸/苏氨酸激酶（Phosphorylated serine/threonine kinases,p - AKT）的表达。结果 与MCF - 7细胞组相比较,MCF - 7/dox细胞组的乳腺癌干细胞表面标志物CD44+/CD24 - /low表达增高(P＜0.01),且PTEN的表达降低、p - AKT的表达升高(P＜0.05);与单用阿霉素组相比较,阿霉素与槲皮素联合应用能抑制细胞增殖和侵袭、诱导细胞凋亡、杀死肿瘤干细胞,并能上调PTEN、下调p - AKT的表达。结论 槲皮素能有效逆转人乳腺癌MCF - 7细胞阿霉素耐药,其机制可能与槲皮素协同阿霉素杀死人乳腺癌干细胞,调控PTEN/AKT信号通路有关。     

Twist及其相关调控基因在不同转移性人乳腺癌细胞中的差异表达

目的:观察不同转移潜能人乳腺癌细胞株中Twist及其相关调控基因mRNA表达的差异。方法:培养低侵袭性人乳腺癌细胞株MCF-7和高转移性人乳腺癌细胞株MDA-MB-435S,采用RT-PCR法检测两种细胞株中Twist、脆性组氨酸三联体(FHIT)、皮性钙黏附素(E-cadherin)、细胞凋亡相关基因Mcl-1、Bcl-2和Bax mRNA表达的差异。结果:MCF-7中FHIT、E-cadherin、Bax mRNA的表达显著高于MDA-MB-435S细胞,Twist mRNA在MDA-MB-435S细胞中的表达明显高于MCF-7,Mcl-1、Bcl-2 mRNA在两种细胞株中的表达无明显差异。结论:Twist、FHIT、E-cadherin、Bax mRNA表达差异可能与人乳腺癌细胞的不同转移潜能有关。     

岩大戟内酯B诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡的实验研究

目的：探讨岩大戟内酯B 对MCF-7 乳腺癌细胞生长抑制作用及其机理.方法：通过MTT 法观察各组细胞增殖能力;采用流式检测技术分析细胞周期;利用Annexin V/PI 双染检测细胞凋亡情况;电镜观察细胞形态.结果：随着岩大戟内酯B 浓度增加对MCF-7 的抑瘤率增高;G2/M 期细胞减少,S 期细胞增多,出现S 期阻滞;晚期凋亡和死亡的细胞增加;电镜显示加药后细胞出现核固缩,细胞器空泡变性,凋亡小体形成,甚至出现坏死.结论：岩大戟内酯B 对乳腺癌MCF-7 细胞生长明显抑制作用,并诱导肿瘤细胞凋亡,为临床开发新药提供理论依据.     

人乳腺癌多耐药细胞株中ALDH1,P-gp及CD44v6的表达研究

目的:比较人乳腺癌亲代敏感株MCF-7和多耐药细胞株MCF-7/A中ALDH1,P-gp及CD44v6的表达差异,探讨多耐药与侵袭转移作用机制。方法:以阿霉素低浓度加量持续诱导法,建立人乳腺癌多耐药细胞模型株MCF-7/A,用ALDEFLUOR分析法检测乳腺癌干细胞功能性标志物ALDH1阳性细胞在亲代敏感株MCF-7与多耐药细胞株MCF-7/A中所占比例,Transwell侵袭实验论证乳腺癌胞耐药是否伴随相应侵袭转移能力的改变,免疫细胞化学染色及荧光定量PCR分析亲代敏感株MCF-7与多耐药细胞株MCF-7/A中MDR1(P-gp)和CD44V6的表达变化。结果:耐药细胞株MCF-7/A较亲代敏感株ALDH1阳性细胞比例数明显增高;耐药细胞株MCF-7/A穿膜细胞数明显多于敏感细胞株MCF-7;耐药细胞株MCF-7/A中P-gp和CD44v6表达均明显高于亲代敏感细胞株。结论:乳腺癌的多耐药不仅包含获得性耐药细胞比例增加,同时伴有肿瘤干细胞的富集造成的内在性耐药增加,耐药的乳腺癌细胞伴有侵袭能力增强。     

他莫昔芬诱导体内外雌激素受体阳性乳腺癌细胞凋亡的周期特异性研究

目的研究他莫昔芬(TAM)诱导不同生长状态下雌激素受体阳性(ER( ))乳腺癌细胞凋亡的周期特异性并比较其差异。方法体外培养的ER( )乳腺癌细胞株MCF-7细胞株和原代培养的。ER( )乳腺癌细胞用TAM作用后，在流式细胞仪(FCM)上用亚G1峰(sub—G1)法检测细胞凋亡率，用细胞周期特异性细胞凋亡检测法(API)检测细胞凋亡的周期特异性。结果TAM诱导不同生长状态的ER( )乳腺癌细胞凋亡均为G0／G1期发生的周期特异性细胞凋亡，但TAM在体外诱导的乳腺癌细胞凋亡率高于在体乳腺癌细胞。结论在ER( )乳腺癌细胞中TAM在G0／G1期特异性诱导细胞凋亡，但在不同的生长状态下，TAM诱导细胞凋亡的效率不同。     

Synthesis and in vitro evaluation of 1,8-diazaanthraquinones bearing 3-dialkylaminomethyl or 3-(N-alkyl- or N-aryl)carbamoyloxymethyl substituent

A series of 1,8-diazaanthraquinone derivatives carrying a 3-dialkylaminomethyl or a 3-(N-alkyl or aryl)carbamoyloxymethyl substituent was synthesised and their in vitro cytotoxic activities were evaluated against eight human cancer cell lines (HOP62, SK-OV-3, HCT-15, SF295, MCF7, SNU-354, KB-3-1 and KB-V-1). A number of compounds including 8c, 8d and 11c showed cytotoxic activity comparable to that of doxorubicin against all human cancer cell lines tested. The compounds 8c and 8d were 2-100 times more potent than doxorubicin against HCT-15, MCF7 and SNU-354 cancer cell lines. Furthermore, these compounds retained considerable cytotoxic activity against the doxorubicin-resistant cell line KB-V-1, implying their therapeutic potential to treat doxorubicin-resistant tumours. These compounds inhibited topoisomerase II-mediated DNA relaxation in vitro, suggesting that this inhibitory effect be attributable to their cytotoxicity.     

Involvement of PPARalpha in the growth inhibitory effect of arachidonic acid on breast cancer cells

Epidemiological studies suggest that dietary PUFA may influence breast cancer progression. n-3 PUFA are generally known to exert antitumour effects, whereas reports relative to n-6 PUFA anti-carcinogen effects are controversial. Arachidonic acid (AA; 20:4n-6) and its metabolites have been shown to inhibit the growth of human breast cancer cell lines, even if the downstream mechanisms by which AA may influence carcinogenesis remain unresolved. We explored the molecular basis for AA influence on proliferation, signal transduction and apoptosis in two human breast cancer cell lines, MCF-7 and MDA-MB-231. In both cell lines AA inhibited cell growth in a dose-dependent manner, even if MDA-MB-231 was somewhat more growth-inhibited than MCF-7. AA decreased extracellular signal-regulated protein kinase 1/2 phosphorylation level, and positively modulated PPARgamma and PPARalpha expression, with only a slight effect against PPARbeta/delta. In addition, AA increased Bak (an apoptosis-regulating protein) expression and reduced procaspase-3 and -9 levels only in MDA-MB-231 cells, thus indicating that the growth inhibitory effect can be correlated with apoptosis induction. In both cell lines the use of a specific antagonist made it possible to establish a relationship between AA growth inhibitory effect and PPARalpha involvement. AA decreases cell proliferation most likely by inducing apoptosis in MDA-MB-231 cells, while in the MCF-7 cell line the growth inhibitory activity can be attributed to the inhibition of the signal transduction pathway involved in cell proliferation. In both cases, the results here presented suggest PPARalpha as a possible contributor to the growth inhibitory effect of AA.     

Effects of decabrominated diphenyl ether (PBDE-209) in regulation of growth and apoptosis of breast, ovarian, and cervical cancer cells

Background: Polybrominated diphenyl ethers (PBDEs), commonly used in building materials, electronics, plastics, polyurethane foams, and textiles, are health hazards found in the environment.Objective: In this study we investigated the effects of PBDE-209, a deca-PBDE, on the regulation of growth and apoptosis of breast, ovarian, and cervical cancer cells as well as the underlying protein alterations.Methods: We used MCF-7 and MCF-7/ADR (multidrug-resistant MCF-7) breast cancer cell lines, the HeLa cervical cancer cell line, the OVCAR-3 ovarian cancer cell line, and the normal CHO (Chinese hamster ovary) cell line to assess the effects of PBDE-209 using cell viability, immunofluorescence, and flow cytometric assays. Western blot assays were used to detect changes in protein expression. To assess the effects of PBDE-209 on apoptosis, we used the protein kinase Cα (PKCα) inhibitor Gö 6976, the extracellular signal-regulated kinase (ERK) inhibitor PD98059, and tamoxifen.Results: Our data indicate that PBDE-209 increased viability and proliferation of the tumor cell lines and in CHO cells in a dose- and time-dependent manner. PBDE-209 also altered cell cycle distribution by inducing the S phase or G₂/M phase. Furthermore, PBDE-209 partially suppressed tamoxifen-induced cell apoptosis in the breast cancer cell lines (MCF-7 and MCF-7/ADR) but suppressed Gö 6976- and PD98059-induced apoptosis in all cell lines. At the molecular level, PBDE-209 enhanced PKCα and ERK1/2 phosphorylation in the cell lines.Conclusions: Our data demonstrate that PBDE-209 is able to promote proliferation of various cancer cells from the female reproductive system and normal ovarian CHO cells. Furthermore, it reduced tamoxifen, PKCα, and ERK inhibition-induced apoptosis. Finally, PBDE-209 up-regulated phosphorylation of PKCα and ERK1/2 proteins in tumor cells and in CHO cells.