功能性电刺激对急性脑梗死大鼠运动功能及室管膜下区内源性神经干细胞的影响

目的 观察不同时间点功能性电刺激(FES)对急性脑梗死大鼠神经功能和室管膜下区（SVZ）内源性神经干细胞增殖、迁移及分化的影响。 方法 采用大脑中动脉阻塞(MCAO)法制作急性脑梗死大鼠模型212只,其中128只大鼠符合入选标准,最终108只完成实验。将这108只大鼠按随机数字表法分为对照组、假刺激组和FES组,每组36只,每组再按治疗时间的不同分为治疗1、3、7和14d四个亚组,每亚组9只大鼠。术后第3天开始以表面电极刺激瘫痪侧前肢,治疗强度（约4～5mA）以引起瘫痪侧出现伸腕伸指动作为准,每日1次,每次治疗15min。分别于治疗前和治疗各时间点,采用改良神经功能缺损评分(mNSS)法评定各组大鼠神经功能变化情况;采用免疫组织荧光化学法检测缺血侧脑组织SVZ的BrdU+/GFAP+、BrdU+/DCX+、BrdU+/NeuN+阳性细胞表达的动态改变。 结果 治疗第7天和第14天,FES组的mNSS评分与其余2组比较,差异有统计学意义(P<0.05);治疗第14天,单独行运动功能项目的评分比较,FES组的评分与其余2组比较,差异有统计学意义(P<0.05);FES组大鼠梗死侧SVZ的BrdU+细胞数目在FES治疗第7天达到高峰;FES组BrdU+/GFAP+阳性细胞数目表达在治疗第7天和第14天分别与假刺激组和对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);BrdU+/DCX+细胞数目随着时间延长增加,在治疗第14天时FES组阳性细胞数目均高于假刺激组和对照组(P<0.05);BrdU+/NeuN+仅在治疗第14天时有少量表达,组间差异无统计学意义（P>0.05）。 结论 FES治疗能够改善急性脑梗死大鼠神经功能,促进SVZ神经干细胞的增殖和分化。     

跑台运动训练促进脑梗死大鼠外源性移植的神经干细胞迁移分化的实验研究

目的：研究跑台运动训练促进移植到脑梗死大鼠纹状体内的神经干细胞存活、迁移和分化，以及神经功能障碍的康复。方法：选用大脑中动脉缺血大鼠模型，在缺血后第5天将培养的神经干细胞立体定向移植到缺血纹状体区。30只大鼠随机分为移植组、跑台运动训练组以及移植联合跑台运动训练组。移植组大鼠自由活动。分别在缺血前1天，缺血后第5，6，14和28天评测大鼠的神经行为学评分情况。免疫荧光染色观察神经干细胞在脑内的迁移、分化情况。结果：免疫荧光染色显示，运动训练的大鼠移植后的神经干细胞在宿主脑内存活、迁移分化情况较无运动训练而自由活动大鼠好。移植联合运动训练组大鼠的神经行为学评分较单纯移植和单纯运动组低（P<0.05，P<0.01）。结论：运动训练可以促进移植的神经干细胞迁移、分化，并提高移植细胞在脑梗死大鼠脑内的存活率，促进神经功能障碍的康复。     

基质细胞衍生因子1趋化神经干细胞迁移的体外效应

背景:神经干细胞的迁移在神经系统的发育和损伤修复中起着至关重要的作用,近来研究表明趋化因子参与神经干细胞的迁移,但关于其迁移机制目前尚不清楚.目的:观察体外条件下基质细胞衍生因子1 对胎鼠海马神经干细胞的趋化迁移作用.方法:通过无血清法体外分离、培养及鉴定胎鼠海马神经干细胞;细胞免疫荧光及RT-PCR 检测其CXCR4 是否表达;观察不同浓度基质细胞衍生因子1 对神经干细胞的趋化迁移作用,中和CXCR4 受体以验证基质细胞衍生因子1 趋化迁移作用的特异性.结果与结论:胎鼠海马来源神经干细胞表达趋化因子受体CXCR4,呈阳性.RT-PCR 琼脂糖凝胶电泳后出现643 bp 特异性扩增条带.体外条件下基质细胞衍生因子1 趋化迁移随浓度而增强,500 μg/L 为最佳趋化浓度.加入抗CXCR4 多克隆抗体中和后,神经干细胞迁移较基质细胞衍生因子1 组明显减少,与对照组比较,差异无显著性意义(P > 0.05),提示抗CXCR4多克隆抗体可阻断趋化迁移作用.     

基质细胞衍生因子1趋化神经干细胞迁移的体外效应

背景：神经干细胞的迁移在神经系统的发育和损伤修复中起着至关重要的作用,近来研究表明趋化因子参与神经干细胞的迁移,但关于其迁移机制目前尚不清楚。目的：观察体外条件下基质细胞衍生因子1对胎鼠海马神经干细胞的趋化迁移作用。方法：通过无血清法体外分离、培养及鉴定胎鼠海马神经干细胞;细胞免疫荧光及RT-PCR检测其CXCR4是否表达;观察不同浓度基质细胞衍生因子1对神经干细胞的趋化迁移作用,中和CXCR4受体以验证基质细胞衍生因子1趋化迁移作用的特异性。结果与结论：胎鼠海马来源神经干细胞表达趋化因子受体CXCR4,呈阳性。RT-PCR琼脂糖凝胶电泳后出现643bp特异性扩增条带。体外条件下基质细胞衍生因子1趋化迁移随浓度而增强,500μg/L为最佳趋化浓度。加入抗CXCR4多克隆抗体中和后,神经干细胞迁移较基质细胞衍生因子1组明显减少,与对照组比较,差异无显著性意义（P〉0.05）,提示抗CXCR4多克隆抗体可阻断趋化迁移作用。     

基质细胞衍生因子-1对神经干细胞移植治疗脊髓损伤大鼠疗效的影响

目的观察基质细胞衍生因子-1(SDF-1)对神经干细胞移植治疗脊髓损伤大鼠疗效的影响。 方法共选取96只成年健康雄性SD大鼠,应用改良Allen′s打击法制成脊髓损伤大鼠模型,采用随机数字表法将其分为4组,分别是A组（于制模后7d时给予磷酸盐缓冲液注射）、B组（于制模后7d时给予神经干细胞移植）、C组（于制模后7d时联合给予SDF-1注射及神经干细胞移植）及D组（于制模后7d时给予AMD3100及神经干细胞移植）。于制模后7d、14d、21d及28d时分别采用BBB运动功能评分对各组大鼠后肢运动功能进行评定,并于上述时间点对各组大鼠受损脊髓进行HE染色及CM-Dil荧光观察。 结果在制模后14d、21d及28d时B组及C组大鼠受损脊髓区均能见到荧光标记阳性细胞聚集,上述时间点C组脊髓损伤区域阳性细胞数量［分别为（27.4±4.7）个、（20.4±5.2）个、（18.3±3.9）个］较B组细胞数量［分别为（23.6±3.7）个、（18.9±5.6）个、（15.2±4.3）个］显著增多（P<0.05）。在制模后14d、21d及28d时B组BBB运动功能评分［分别为（4.18±0.87）分、（6.18±1.25）分、（9.27±0.91）分］及C组BBB运动功能评分［分别为（5.09±1.30）分、（8.18±0.75）分、（11.82±0.87）分］均较A组及D组显著改善（P<0.05）,并且C组大鼠上述时间点BBB运动功能评分亦显著优于B组水平（P<0.05）。 结论移植的神经干细胞能向大鼠受损脊髓部位迁移、存活并分化,能促进大鼠后肢运动功能恢复;SDF-1能诱导神经干细胞增殖并向脊髓损伤部位迁移,CXCR4受体阻断剂AMD3100能显著阻断神经干细胞向大鼠受损脊髓部位迁移。     

脑缺血后强制性运动疗法对内源性神经干细胞及基质细胞衍生因子-1水平的影响

目的目前强制性运动疗法广泛地应用于康复领域,并被证实能够有效地促进肢体功能恢复,但其确切的机制尚不清楚。方法应用免疫组化及ELISA方法并结合行为学探讨了强制性运动疗法对脑缺血后内源性神经干细胞及间质细胞源性因子-1表达的影响。结果发现脑缺血后强制性运动疗法能够促进患侧肢体运动功能的恢复,增加大鼠侧脑室下区新生神经干细胞的数量,并能提高脑组织基质细胞衍生因子-1蛋白的表达水平。结论强制性运动疗法可能通过影响脑缺血后的神经再生过程从而达到增强中枢神经系统修复能力的作用。     

半乳凝素1对脑损伤大鼠室管膜下区内源性神经干细胞原位增殖及迁移的影响

背景：半乳凝素1表达于室管膜下区的星形胶质细胞中并诱导其分化，分化的星形胶质细胞可明显提高脑源性神经生长因子的产生。目的：观察侧脑室注入半乳凝素1对脑缺血损伤大鼠内源性神经干细胞增殖、迁移的影响。设计、时间及地点：细胞学体内观察实验，于2007-03／11在佳木斯大学神经科学研究所完成。材料：纯利，清洁级成年Wistar大鼠48只，随机分为模型组、药物组，24只／组。半乳凝素1为北京晶美生物工程公司产品。方法：两组大鼠均采用线栓法制作局灶性大脑中动脉闭塞模型。造模后24h，药物组经右侧侧脑室注入10μL浓度为0．2g／L的半乳凝素1，模型组注射等肇生理盐水。分别于缺血再灌注后3，7，14，28d处死大鼠，取脑组织制作石蜡切片，处死前1d腹腔注射BrdU。主要观察指标：免疫组织化学染色检测大脑室管膜下区BrdU和巢蛋白阳性细胞的表达。结果：模型组缺血再灌注3d后大脑室管膜下区BrdU、巢蛋白阳性细胞开始增加，7d增殖达高峰，14d后表达开始下降，28d后下降至最低。药物组缺血再灌注3d后大脑室管膜下区两种阳性细胞均明显增加；7d增殖达高峰，半定量分析BrdU、巢蛋白阳细胞数分别是模型组的2倍和1．5倍，且BrdU阳性细胞向腹外侧迁移，巢蛋白阳性细胞胞体变大，突起增长，并有向外侧迁移进入脑实质的迹象；14d后开始下降；28d降至最低，但仍明显多于模型组（P〈0．05）。结论：经侧脑室注入半乳凝素1在大鼠脑缺血后可激活内源性神经十细胞原位增殖，并存在由增殖区向外周脑实质迁移的趋势。     

脊髓室管膜区内源性神经干细胞在脊髓损伤修复中的潜在作用机制研究

脊髓损伤是中枢神经系统的严重损伤,目前尚缺乏有效的治疗。近年来发现脊髓室管膜区存在内源性神经干细胞(ENSCs)具有促进脊髓损伤修复的潜力。脊髓损伤及微环境改变等可使脊髓室管膜区的ENSCs激活、增殖、分化,进一步修复受损的神经结构。虽然脊髓室管膜区ENSCs在脊髓损伤修复中具有积极作用,但其机制尚无定论。本文对脊髓室管膜区ENSCs在脊髓损伤修复中潜在作用机制进行综述,为基础和临床领域全面认识脊髓室管膜区ENSCs提供参考。     

基质细胞衍生因子 1 对内源性神经干细胞的趋化迁移作用简

背景：目前研究表明,基质细胞衍生因子1在参与趋化迁移内源性神经干细胞中起着非常重要的作用,但其具体迁移机制尚不明确。目的：观察外源性基质细胞衍生因子1对大鼠内源性神经干细胞的趋化迁移作用及海马区神经干细胞的激活增殖情况。方法：通过向SD大鼠海马区上大脑皮质内注射外源性基质细胞衍生因子1（注射量为5μL,质量浓度为500μg/L）建立动物模型,于3,7,14,21 d后灌注取脑,通过石蜡切片免疫组织化学检测大鼠皮质内注射区及海马区nestin阳性细胞表达情况,并设实验对照组与空白对照组。结果与结论：石蜡切片免疫组织化学显示：实验组注射区周围及海马区nestin表达阳性细胞的数量随时间推移逐渐增多,3,7 d时注射区及海马区nestin表达阳性细胞少量表达,14 d时注射区及海马区nestin表达阳性细胞进一步增多,并向注射区形成明显的迁移趋势,21 d时注射区及海马区nestin表达阳性细胞更多。实验对照组及空白实验组未见上述表现。结果表明外源性基质细胞衍生因子1可能诱导海马区神经干细胞的增殖分化,参与内源性神经干细胞的趋化迁移过程。     

颅脑损伤后内源性神经干细胞增殖与迁移中的基质细胞衍生因子1

背景：神经干细胞的迁移在颅脑损伤中起着极其重要的作用,但是其具体迁移机制尚不明确。目的：观察大鼠颅脑损伤后基质细胞衍生因子1在内源性神经干细胞的增殖与迁移中的作用。方法：采用Feeney’s等的方法用自制自由落体撞击器撞击大鼠左侧皮质运动感觉区以制备大鼠中度重型颅脑损伤模型,于伤后6h,3d,5d,7d灌注取脑,通过冰冻切片免疫组织化学检测Nestin及基质细胞衍生因子1表达,比较分析大鼠颅脑损伤后基质细胞衍生因子1和内源性神经干细胞的增殖与迁移之间的关系。并设正常对照组和假手术组做对照。结果与结论：颅脑损伤大鼠的神经行为学评分与对照组比较差异显著。冰冻切片免疫组织化学显示：伤后3d,基质细胞衍生因子1表达较对照组明显,海马区可见大量Nestin阳性细胞,未见向损伤区迁移;伤后5d和7d,基质细胞衍生因子1表达更明显,范围扩大,损伤区可见少量Nestin阳性细胞。对照组及假手术组未有上述改变。结果表明大鼠颅脑损伤后基质细胞衍生因子1表达时间推移越加明显,提示基质细胞衍生因子1参与内源性神经干细胞的增殖及向损伤区迁移的过程。     

SDF-1基因沉默对脑缺血后强制性运动疗法调控海马齿状回神经发生过程的影响

目的探讨脑缺血后强制性运动疗法对海马齿状回的神经干细胞的影响。方法应用免疫组化并结合行为学方法,探讨强制性运动疗法对脑缺血后海马齿状回神经干细胞及SDF-1基因沉默对该过程的作用。结果脑缺血后强制性运动疗法能够促进大鼠学习记忆功能的恢复,增加大鼠海马齿状回新生神经干细胞的数量,而SDF-1基因沉默后会逆转强制性运动疗法该作用。结论SDF-1／CXCR4在脑缺血后强制性运动疗法调控海马齿状回神经发生的过程中起到了重要的作用。     

间充质干细胞及其迁移的研究进展

间充质干细胞(MSCs)来源广泛,分化能力强,体外扩增迅速,免疫原性低,目前在多种难治性临床疾病的治疗中广泛应用.多种信号通路参与了MSCs在骨髓中的动员及外周血中的定向迁徙,进而发挥其在受损组织区域的免疫调节和组织修复作用.基质细胞衍生因子-1(SDF-1)和它的特异性CXC趋化因子受体4(CXCR4)在MSCs动员...     

骨髓基质干细胞的定向迁移及其信号转导机制

骨髓基质干细胞(bone marrow stem cells,BMSCs)是一种极具潜力的基因工程细胞,因其有多向分化潜能而被用于心肌、血管及骨的再生研究,在治疗神经系统损伤方面能促进神经干细胞分化,诱导损伤区血管生成,从而改善损伤区微环境,促进神经功能恢复[1],且尚未发现BMSCs移植后诱发肿瘤[2].     

基质细胞衍生因子1及其受体CXCR4在内源性神经干细胞迁移中的作用

背景:神经干细胞具有体外、体外迁移的特性,但关于其迁移的具体机制还不十分清楚。目的:探讨基质细胞衍生因子1及其受体CXCR4在神经干细胞体内迁移中的作用。方法:制备脑皮质微量注射脂多糖脑损伤大鼠模型,于建模后3,5,7d灌注取脑,采用冰冻切片免疫组织化学方法,动态监测基质细胞衍生因子1和nestin表达的时相变化。结果与结论:免疫组织化学染色观察显示:基质细胞衍生因子1随时间推移表达的量逐渐增多。Nestin阳性细胞有明显向外延伸和迁移的迹象,尖端指向脂多糖注射区。结果可见基质细胞衍生因子1趋化体内表达其特异性受体的内源性神经干细胞向脂多糖注射区迁移。     

运动训练诱发大鼠脑梗死周边区域神经突触变化的机制

目的 研究运动训练对大鼠脑梗死周边区域突触变化的影响及相关机制。方法 将150只大鼠制成大脑中动脉闭塞脑梗死模型，并随机分为运动训练组、生理盐水组、阿糖胞苷抑制组、美伐他丁组及对照组。各组大鼠分别于脑梗死7、21及42 d时应用免疫组织化学方法和高压液相色谱法观察其脑梗死周边区域胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、突触素表达值和胆固醇含量的变化情况。结果 运动训练组大鼠脑梗死周边区域GFAP、突触素阳性信号密度值（％）和胆固醇含量均明显高于对照组和阿糖胞苷抑制组（均P＜0、01），而对照组上述指标又显著高于阿糖胞苷抑制组（均P＜0．01）；美伐他丁组突触素表达值及胆固醇含量均低于运动训练组（均P＜0．01）。结论 运动训练可促进脑梗死大鼠加强神经突触重建及功能恢复，运动训练致使星形胶质细胞活性增强及刺激胆固醇分泌可能在其中发挥重要作用。     

早期康复训练对脑梗死偏瘫患者外周血内皮祖细胞和基质细胞衍生因子1α含量及运动功能恢复的影响

目的观察早期康复训练对急性脑梗死偏瘫患者外周血内皮祖细胞（EPCs）、基质细胞衍生因子1α（SDF 1α）含量及运动功能恢复的影响。 方法入选首次发病48h内的急性脑梗死偏瘫患者50例,按随机数字表法分成对照组和治疗组,每组25例。2组患者均给予神经内科常规药物治疗,治疗组在药物治疗基础上给予早期康复训练。所有患者均在治疗前和治疗1周后,分别采用流式细胞仪检测外周血EPCs相对数量,采用酶联免疫吸附试验法检测外周血SDF 1α含量;并于治疗前和治疗3个月后,采用简易Fugl Meyer评分法和改良Barthel指数评分法,对患者进行FMA及MBI评分。 结果①治疗前,对照组与治疗组患者的外周血EPCs相对数量和SDF 1α含量比较,差异无统计学意义（P>0.05）。经治疗1周后,2组患者的外周血EPCs和SDF 1α均较治疗前明显升高,且治疗组EPCs相对数量［(1.50±0.13)%］和SDF 1α含量［(1810.68±110.28)pg/ml］较对照组升高更为明显,差异有统计学意义(P<0.01)。②Spearman等级相关分析显示,2组患者治疗前后EPCs增加量与SDF 1α增加量呈正相关（r=0.785,P<0.01）。③2组患者治疗前FMA和MBI评分差异无统计学意义（P>0.05）,治疗3个月后上述评分均较治疗前改善,且治疗组FMA［(59.40±17.39)分］和MBI［(64.08±15.22)分］较对照组改善更为明显,差异均有统计学意义（P<0.01）。 结论早期康复训练有助于进一步改善急性脑梗死偏瘫患者运动功能预后,治疗机制可能与其上调外周血SDF 1α进而促进骨髓EPCs动员有关。     

运动训练对脑梗死大鼠功能恢复的影响

目的 探讨运动训练对脑梗死大鼠功能恢复的影响。方法 用Wistar大鼠制作大脑中动脉阻塞（MACO）模型，48h后随机分为训练组20只，对照组20只和假手术对照组10只，运动组每天被动跑笼40min，各组均单独饲养于小鼠笼中，分别于术后4，1，2，3和4周进行平衡，姿势反射和肌力评定。结果 训练组各项功能恢复均优于对照组（P＜0．05）。结论 运动训练后有助于脑梗死大鼠功能的恢复。     

胶质细胞源性神经营养因子基因修饰骨髓基质干细胞移植脑出血大鼠神经营养因子的表达

背景:研究证实,细胞移植和神经营养因子相结合治疗脑损伤能促进大鼠神经功能的恢复。目的:观察移植胶质细胞源性神经营养因子基因修饰的骨髓基质干细胞对大鼠脑出血后神经营养因子表达的影响。方法:通过脑立体定位仪向SD大鼠脑尾壳核注射胶原酶和肝素建立脑出血动物模型,将48只模型鼠随机分为3组,骨髓基质干细胞组、胶质细胞源性神经营养因子/骨髓基质干细胞组和对照组于建模后第3天在脑出血部位分别移植骨髓基质干细胞、胶质细胞源性神经营养因子/骨髓基质干细胞以及生理盐水。结果与结论:与对照组和骨髓基质干细胞组相比,胶质细胞源性神经营养因子/骨髓基质干细胞组大鼠神经功能恢复更好;与对照组相比,移植后1,2周其他2组各神经营养因子表达均显著增加(P<0.05)。提示胶质细胞源性神经营养因子基因修饰的骨髓基质干细胞移植治疗脑出血大鼠比单纯骨髓基质干细胞有更好的神经保护作用。     

单核细胞趋化蛋白-1对大鼠脑内神经干细胞的诱导作用

目的探讨外源性单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)对体内神经干细胞的作用。方法成年雄性Sprague-Dawley 大鼠64 只分为空白组(n=4)、对照组(n=30)和实验组(n=30)。空白组不做处理,对照组大脑皮层微量定向注射PBS 液,实验组注射MCP-1。注射后3 d、5 d、7 d、14 d、21 d 分别取对照组和实验组大鼠各6 只灌注取脑。免疫组织化学法观察脑内不同部位nestin 阳性细胞的分布。结果实验组皮质区、海马区nestin 阳性细胞矫正累积吸光度随时间延长而显著增加(P<0.001)。对照组和空白组之间无显著性差异(P>0.05)。结论外源性MCP-1 可以促进MCP-1 富集部位的nestin阳性细胞的数量增多。     

电针联合运动训练对脑梗死大鼠运动能力的影响及相关机制分析

目的:观察电针联合运动训练对脑梗死大鼠运动能力的影响,并探讨其对Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法:将大鼠随机分为假手术组(SC)、模型组(IC)、跑台组(T)、跑台+电针组(T+EA)、跑台+电针非穴位组(T+ENA),各18只,SC组及IC组抓取后不予任何治疗。T组术后24h予匀速跑台训练,运动强度为10m/min,每天运动30min,每天1次,T+EA组在电针曲池、足三里穴后再予跑台训练,方法同跑台组,T+ENA组在电针非经穴点后再予跑台训练,方法同跑台组,各组均干预7天。观察各组大鼠神经行为学评分、步态、行为活动、脑梗死体积、病理学结构变化、脑细胞凋亡率,Western Blot及RT-PCR法检测脑组织Wnt-1/β-catenin信号通路关键分子蛋白及mRNA表达变化。结果:神经行为学检测显示T+EA组脑梗死大鼠的神经缺损评分下调,大鼠的步态及行为活动改善。TTC染色、HE染色、透射电镜显示与其他组相比,T+EA组大鼠的脑梗死体积明显缩小,病理学形态及超微结构明显改善,Western Blot及RT-PCR显示T+EA可明显上调大鼠脑组织中Wnt-1、β-catenin、Bcl-2的蛋白及mRNA水平,下调GSK-3β、Bax的蛋白及mRNA水平(P0.05)。结论:电针联合运动训练可明显改善脑梗死大鼠运动能力,其作用机制可能与激活Wnt/β-catenin信号通路有关。