一种快速、灵敏测定谷胱甘肽S-转移酶A免疫荧光法的建立

本文运用对人ＧＳＴＡ有高度特异的单克隆抗体建立一种灵敏、快速检测血清中ＧＳＴＡ总浓度的时间分辨免疫荧光测定(ＴＲ ＩＦＭＡ)一步法。在反应板的每孔中加入溶于 1 5 0 μｌ反应缓冲液 ( 0 0 5ｍｏｌ/ＬＴｒｉｓ ＨＣｌ,0 1 5ｍｏｌ/ＬＮａＣｌ,0 0 2ｍｏｌ/Ｌ二乙烯三胺戊醋酸 ,0 5 ｇ/ＬＮａＮ3,0 1ｍｌ/ＬＴｗｅｅｎ2 0 ,2 0ｍｇ/Ｌ苋紫 ,0 5ｇ/ＬＢＳＡ ,0 5 ｇ/Ｌ牛ＩｇＧ及 1 5ｍｇ/ＬＭＡＫ33 ＩｇＧ ,ｐＨ7 8)的Ｅ3+Ｕ ＬＤ45抗体 2 0 0ｎｇ ,然后加入 2 5 μｌ的校准液或标本各 2孔 ,室温下不断振荡 30ｍｉｎ。用洗涤…     

核酸杂交及聚合酶链反应检测人微小病毒B19感染

检测人微小病毒Ｂ19(ＨＰＶＢ19)采用聚合酶链反应(ＰＣＲ)、核酸杂交等基因诊断技术仍是目前最常用的方法 ,本研究对两种方法进行了比较。一、材料与方法1 标本来源 :于青岛大学医学院附属医院及第二附属医院采集 2 6例不明原因自然流产患者的血、宫颈分泌物及流产胎块组织 ;同期采集 2 0名健康人工流产者的上述标本。2 试剂 :ＰＣＲ引物参考ＨＰＶ19全基因序列设计[1] ,中国科学院微生物所合成 ,(Ｋ1:ＡＴＡＡＡＴＣＣＡＴＡＴＡＣＴＣＡＴＴ 2 936 2 95 4,Ｋ2 :ＣＴＡＡＡＧＴＡＴＣＣＴＧＡＣＣＴＴＧ 36 17 36 35 6 99ｂｐ ;Ｋ3:ＴＴ…     

石蜡包埋组织DNA的快速提取技术

传统方法提取石蜡包埋组织ＤＮＡ ,步骤繁琐耗时。本实验室以ＰＣＲ方法检测结核菌为例 ,摸索出一种不经过脱蜡及酚—氯仿抽提 ,直接提取石蜡包埋组织ＤＮＡ简捷而快速的方法。1　材料与方法1.1　主要仪器 :全电脑基因扩增仪ＮＴ116 9型 (北京新技术应用研究所 ) ;低温高速离心机ＵＮＩＶＥＲＡＬ - 16Ｒ(德国 ) ;多功能紫外透射仪 (温洲市孚华分析仪器厂 )。1.2　试剂1.2 .1　裂解液 10ｍｍｏｌ ＬＴｒｉｓＨＣＬ(ｐＨ8.0 ) ;2ｍｍｏｌ ＬＥＤＴＡ(ｐＨ8 0 ) ;0 5 %Ｔｗｅｅｎ - 2 0 (ｖ ｖ) ;0 5 %ＮＰ - 40 (ｖ ｖ)。1.2 .2　 2 0ｍｇ …     

OKT3与骁悉联合治疗Ⅳ度移植物抗宿主病成功一例

患者 ,女 ,46岁 ,原发病为急性髓系白血病 (ＡＭＬ)Ｍ4 型 ,ＣＲ1持续 1年进行异基因外周血干细胞移植 (ａｌｌｏ ＰＢＳＣＴ)。ＨＬＡ位点完全相合 ,刺激指数 (ＳＩ)为 0 .90 ,混合淋巴细胞培养 (ＭＬＣ) :Ｒ12 (患者刺激细胞与供者反应细胞 ) =0 .0 0 % ,Ｒ2 1(供者刺激细胞与患者反应细胞 ) =0 .78%。预防移植物抗宿主病 (ＧＶＨＤ)用环孢菌素Ａ(ＣｓＡ) 10 0ｍｇ/ｄ 短程甲氨蝶呤(ＭＴＸ) ( 1天 15ｍｇ/ｍ2 , 3天、 6天均给予 10ｍｇ/ｍ2 )。移植后白细胞 >1.0× 10 9/Ｌ ,血小板 >5 0× 10 9/Ｌ的时间分别为 2 0天和 2 9天。 2 4天…     

定量逆转录PCR测定健康人外周血细胞甲状腺球蛋白mRNA

新近研究发现定量逆转录ＰＣＲ(ＲＴ ＰＣＲ)测定甲状腺球蛋白 (Ｔｇ)ｍＲＮＡ有助于监测转移性甲状腺癌患者的疗效。而此种ＲＴ ＰＣＲ通常需要繁琐的、高度敏感的抽提技术 ,作者介绍了一种从全血中提取ＲＮＡ的简化方法 ,并检测了ＴｇｍＲＮＡ采用标准ＥＤＴＡ采血管收集健康人全血 17份 ,用ＰＵＲＥ手工药盒提取ＲＮＡ ,15份用ＴＲＩＺＯＬＬＳ提取ＲＮＡ。以随机六聚引物将 1μｇＲＮＡ逆转录成ｃＤＮＡ。反应条件如下 :1×ＴａｑＭａｎ缓冲液 ,5 5ｍｍｏｌ/ＬＭｇＣｌ2 ,5 0 0 μｍｏｌ/ＬｄＮＴＰ ,2 .5 μｍｏｌ/Ｌ引物 ,40 0ｋＵ/…     

CTX-M-3和CMY-2型β-内酰胺酶在台湾南部临床大肠埃希菌分离株中的播散

研究背景 :近年来 ,越来越多的非ＴＥＭ和非ＳＨＶ型ＥＳ ＢＬＳ如ＣＴＸ Ｍ型 ,ＴＯＨＯ 1型等在世界范围内发展 ,对产此类ＥＳＢＬＳ的菌株及临床意义目前知之不多。本文首先报道远东地区ＣＴＸ Ｍ 3的存在并检出ＣＭＹ 2型ＡｍｐＣ酶。材料与方法　从 1 999年 1月 9月 ,台湾南部ＮａｔｉｏｎａｌＣｈｅｎｇＫｕｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ医院病理科共收集 2 0 4 7株大肠埃希菌 ,在研究中采用琼脂稀释法测定ＭＩＣ ,ＮＣＣＬＳ推荐的表型确证试验测ＥＬＢＬＳ ,等电聚集电泳 ,ＰＣＲ及ＤＮＡ测序测定 β 内酰胺酶的型别 ,结合试验和质粒分…     

念球菌PCR检测技术的初步探讨

念珠菌 18ＳｒＲＮＡ基因区为念珠菌共有的保守区 ,我们在此基因区设计了一对寡核苷酸引物 ,建立了念珠菌的ＰＣＲ检测方法 ,现介绍如下。1　材料与方法1.1　菌种　热带念珠菌、白色念珠菌、罗伦念珠菌、新型隐球菌 (江苏省临床检验中心程梅老师惠赠 )。对照组为常见细菌、病毒及人染色体ＤＮＡ。1.2　引物　中科院上海生工生物技术服务公司合成并纯化。序列 :5′ ＧＡＣＴＡＡＣＴＡＣＴＧＣＧＡＡＡＣＧ 3′ ;5′ ＧＴＣ ＴＡＡＧＧＧＣＡＴＣＡＣＧＡ 3′。1.3　试剂　ＴａｑＤＮＡ聚合酶 ,ｄＮＴＰｓ(日本ＴａｋａＲａ产品 ) ;裂解液 :0…     

红细胞CR1分子在免疫相关性疾病表达的探讨

本文对类风湿性关节炎 (ＲＡ)、风湿性心脏病(ＲＣ)、系统性红斑狠疮 (ＳＬＥ)等患者进行红细胞ＣＲ1分子的测定 ,以探讨该病种的红细胞ＣＲ1分子数量表达和变化的相关性 ,现报告如下 :1　材料和方法1 1　免疫试剂　鼠抗人ＣＲ1单抗 (ＩｇＧ1、Ｅ11克隆 ) ,鼠抗人ＣＤ2单抗 (无关单抗 ) ,碱性磷酸酶标志的羊抗鼠ＩｇＧ。1 2　底物　现配现用。1 3　Ｂｕｆｆｅｒ液　常规使用的ＰＢＳ(等ｐＨ 7.2的磷酸缓冲盐液 )。其它缓冲液有Ｓ/ＢＳＡ :0 15ｍｏｌ/ＬＮ Ｓ+ 2ｇ/Ｌ小牛血清 + 1ｇ/Ｌ叠氮钠 ;ＰＢＳ/ＢＳＡ :含有 2 0ｇ/Ｌ的ＢＳＡ + 1ｇ/…     

单链构象多态性银染技术检测结核菌katG基因变异

单链构象多态性 (ＳＳＣＰ)技术能分辨碱基不同的核酸片段 ,并应用于基因变异检测。我们根据对耐药结核菌的测序结果 ,设计了一对引物 ,建立ＳＳＣＰ检测ｋａｔＧ基因突变的方法。一、材料与方法1 菌株分离与药敏测定方法同文献 [1]。2 核酸提取 :痰液经碱消化 ,提取ＤＮＡ。方法同文献[1]。3 引物设计和ＰＣＲ扩增 :ＫＧ3:5′ ＴＣＡＣＣＡＧＣＧＧＣＡＴＣＧＡＧＧＴＣ 3′ ,ＫＧ4:5′ ＡＴＧＣＣＣＧＧＡＴＣＴＧＧＣＴＣＴＴＡ 3′。位于ｋａｔＧ的第 2 916～ 3371碱基位置 ,长度为 45 6ｂｐ。由大连宝生物技术公司合成并纯化。4 ＳＳ…     

限制性显示技术分离差异表达基因--Mac30

为了进一步从基因水平上阐明Ａｓ2 Ｏ3 治疗白血病的作用机制 ,以更好地预防和治疗白血病 ,我们应用限制性显示ＰＣＲ(ＲＤ ＰＣＲ)技术收集Ａｓ2 Ｏ3 处理前后Ｋ5 6 2细胞的ｃＤＮＡ片段 ,用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离 ,并进一步筛选、分析了细胞内基因表达的变化情况。材料和方法1　主要试剂　精制小牛血清和ＲＰＭＩ 16 4 0培养基购自Ｈｙ ｃｌｏｎｅ公司 ,Ａｓ2 Ｏ3 购自Ｓｉｇｍａ公司 ,用 12 0ｍｍｏｌ/Ｌ的ＮａＯＨ溶液配成 1ｍｍｏｌ/Ｌ的贮备液 ,4℃贮存。总ＲＮＡ提取试剂(ＴＲＩｚｏｌ)购自上海生工生物工程公司。ｍＲＮＡ纯化试剂…     

家族性高胆固醇血症合并家族性载脂蛋白B100缺陷的复合型杂合子表现更高的高胆固醇血症

家族性高胆固醇血症 (ＦＨ)是发生于ＬＤＬ受体上的常染色体显性遗传缺陷 ,导致早熟冠状动脉疾病 (ＣＡＤ) ,发生率为1∶5 0 0。家族性载脂蛋白Ｂ 10 0缺陷 (ＦＤＢ)是由 2号染色体上的ａｐｏＢ 10 0基因点突变造成的配基 受体结合异常。发生率亦为 1∶5 0 0 ,也可导致早熟ＣＡＤ。ＦＤＢ无法从表型与ＦＨ区分开。同时患有ＦＨ和ＦＤＢ的个体极为罕见。本文报道一个患有两种症候群的家族成员。方法　用ＰＣＲ单链构象多态性分析 (ＰＣＲ ＳＳＣＰ)和ＰＣＲ变性梯度凝胶电泳分析 (ＰＣＲ ＤＧＧＥ)研究ＬＤＬ受体全部 18个外显子和启动子区。…     

连接蛋白CRKL在正常血细胞和表达BCR／ABL细胞中的研究进展

ＣＲＫＬ是由２２号染色体ｑ１１的ｃｒｋｌ基因编码的含ＳＨ２、ＳＨ３结构域的３９ｋＤａ的连接蛋白。ＣＲＫＬ羧基端ＳＨ３结构域与Ｃ３Ｇ、ＳＯＳ、Ｐ１３－Ｋ、ＨＰＫｌ、ｃ－ＡＢＬ或ＢＣＲ／ＡＢＬ结合,ＣＲＫＬ氨基端ＳＨ２结构域与酷氨酸磷酸化的蛋白如ＣＢＬ、ＨＥＦ１、ＣＡＳ、ＳＴＡＴ５或ｐａｘｉｌｌｉｎ结合,在正常造血细胞和白血病中ＢＣＲ／ＡＢＬ的主要底物,与ＢＣＲ／ＡＢＬ和ｃ－ＡＢＬ形成连接复活复合物。     

多发性骨髓瘤患者尿液检出骨髓瘤细胞1例

患者 ,郁某 ,男 ,6 1岁。因全身多部位骨痛 2 5年 ,加重伴面色苍白 6个月入院。 1998年 7月确诊为多发性骨髓瘤(ＩｇＧ型 )。先后经ＣＴＸ、ＶＤＳ、马法兰、表阿霉素等共 7个疗程化疗 ,病情控制不佳。Ｘ片显示肋骨、胸 4、髂骨、股骨均有骨质破坏并有压缩性骨折。肝肾功能检查 :总蛋白 77ｇ/Ｌ、白蛋白 2 2ｇ/Ｌ、球蛋白 5 5ｇ/Ｌ、Ａ/Ｇ =0 4/ 1 0、ＡＬＴ正常 ;ＢＵＮ2 8 4ｍｍｏｌ/Ｌ、Ｃｒ36 6 μｍｏｌ/Ｌ ,Ｇｌｕ 3.9ｍｍｏｌ/Ｌ。免疫学检查 :血清蛋白电泳Ａ 2 8 2 %、α12 0 %、α2 7 0 %、β4 1%、γ 5 8 7% ;ＩｇＧ 5 1 5ｇ/…     

胃外向型平滑肌肉瘤1例

患者女 ,5 9岁。因发现左上腹包块伴左上腹不适、乏力、纳差 3个月 ,于 2 0 0 1年1月 2日收入院。查体 :一般情况可 ,贫血貌 ,浅表淋巴结未及肿大。心肺无异常。腹软 ,稍隆起 ,左上腹可及一 2 0ｃｍ×18ｃｍ× 16ｃｍ包块 ,质硬 ,固定 ,轻微压痛 ,无肌紧张及反跳痛 ,未见肠型及蠕动波 ,肠鸣音活跃 ,未闻及气过水声。辅助检查 :血常规 :ＲＢＣ 2 2 9× 10 1 2 Ｌ ,Ｈｂ 5 2ｇ Ｌ ,ＷＢＣ 15 6× 10 9 Ｌ ,ＧＲＡ 70 % ;肝功 :ＨＢｓＡｇ ( -) ,ＧＯ ＧＰ 0 73 ,ＴＰ 5 9ｇ Ｌ ,ＡＬＢ 2 3 90ｇ Ｌ ,Ａ Ｇ 0 6 8,余者正常Ｂ超 :肝、胆、…     

中国康复医学杂志作者和文题索引

ＡＵＴＨＯＲＡＮＤＳＵＢＪＥＣＴＩＮＤＥＸＥＳＺＨＯＮＧＧＵＯＫＡＮＧＦＵＹＩＸＵＥＺＡＺＨＩＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＲｅｈａｂｉｌｉｔａｔｉｏｎＭｅｄｉｃｉｎｅ双月刊Ｂｉｍｏｎｔｈｌｙ第 1 7卷 2 0 0 2年 1月 2 6日至 1 1月 2 6日Ｖｏｌｕｍｅ 1 7,2 6ＪＡＮＵＡＲＹＴＨＲＯＵＧＨ2 6ＮＯＶＥＭＢＥＲ ,2 0 0 2第一作者索引ＡＵＴＨＯＲＩＮＤＥＸ(以姓氏汉语拼音为序 )Ｂ毕胜 .腰椎牵引三维有限元模型分析 .84 .白玉龙 .经颅磁电刺激促进周围神经再生的组织学研究 .347.Ｃ陈璧 .大面积Ⅲ°烧伤早期大片自体皮移…     

聚合酶链反应检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌mecA基因

建立聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔＳ．ａｕｒｅｕｓ，ＭＲＳＡ）ｍｅｃＡ基因的技术。四种ＤＮＡ提取方法检测灵敏度依次为超声裂解法（５×１０５ＣＦＵ／ｍｌ）、溶菌酶表面活性剂法（５×１０６ＣＦＵ／ｍｌ），表面活性剂法（１×１０７ＣＦＵ／ｍｌ）和直接煮沸法（１×１０８ＣＦＵ／ｍｌ），直接煮沸法具有简便性。引物的正链位于１８１～２００、负链位于３１１～３３０，序列分别为５＇－ＧＡＡＡＴＧＡＣＴＧＡＡＣＧＴＣＣＧＡＴ，５＇－ＧＣＧＡＴＣＡＡＴＧＴＴＡＣＣＧＴＡＧＴ，其扩增产物长度为１５０ｂｐ。五种常见菌证明本法具有较高特异性。苯唑青霉素ＭＩＣ水平与ｍｅｃＡ基因之间具有很好的相关性，ＭＩＣ≥４μｇ／ｍｌ的２２株菌均检出ｍｅｃＡ基因，提示苯唑青霉素常规检测ＭＲＳＡ的可行性。ＰＣＲ方法对于隐匿型耐药株的检出具有重要价值。     

1例Budd—Chiari综合征患者肿瘤标志物的变化

金黄色葡萄球菌ＤＮＡ多采用经典的溶菌酶、酚、氯仿提取法 ,但是获取的ＤＮＡ量较少。我们参照文献报道[1] 的方法加以改良 ,建立一种ＤＮＡ制备方法。介绍如下。1　材料和方法1 1　菌株来源　临床分离到的细菌 ,经形态学、生化反应鉴定为金黄色葡萄球菌。1 2　主要试剂　 2 0ｍｍｏｌ/ＬＴｒｉｓ ＨＣｌｐＨ 8 0缓冲液 ;溶菌酶、ＳＤＳ、蛋白酶Ｋ(均为Ｓｉｇｍａ公司生产 ) ;丙酮 ;ＴＥ缓冲液 :10ｍｍｏｌ/ＬＴｒｉｓ ＨＣｌ(ｐＨ 7 4 ) ,1ｍｍｏｌ/ＬＥＤＴＡ(ｐＨ 8 0 ) ;裂解液 :含 10 0ｇ/ＬＳＤＳ的ＴＥ缓冲液。1 3　方法　自血平皿…     

单链DNA标记免疫探针的构建用于免疫聚合酶链反应的初步研究

免疫聚合酶链反应 (免疫ＰＣＲ)是近年出现的全新的标记免疫分析技术。它以一段ＤＮＡ作为标记物来代替酶等常规标记物 ,标记在抗体或抗原上 ,在抗原抗体反应完成后 ,用ＰＣＲ技术对标记的ＤＮＡ进行扩增将信号放大 ,然后 ,根据ＰＣＲ产物的有无及量的多少测定待测抗原或抗体。本研究以碳化二亚胺为连接分子构建单链ＤＮＡ标记的免疫探针 ,并将其用于免疫ＰＣＲ中 ,现将结果报道如下 :一、材料和方法1 .ｓｓＤＮＡ标记的羊抗人ＩｇＧ免疫探针的构建 :(1 )以 5′ ＴＴＧＡＴＣＴＴＣＡＴＧＧＴＧ (ＧＣＡ )ＴＡＧＧＡＧＣＧＡＧＧＧＣＡ 3′…     

IP衰减临床测试方法探讨

1　材料与方法富士ＣＲＩＰＳＴ ＶＮ依据曝光次数不同将 2 1块ＩＰ分为三个对照组 ,曝光次数相同或相近的ＩＰ为一组 ,每组 7块 ,第Ⅰ组 :1～ 7号ＩＰ ;第Ⅱ组 :8～ 14号ＩＰ ;第Ⅲ组 :15～ 2 1号ＩＰ。东芝ＫＸＯ 15Ｒ 6 0 0ｍＡＸ线机 ,柯达Ｍ7Ｂ自动洗片机 ,ＭＤＸ 3Ａ密度计 ,2 4级铝梯 (国产 99% ) ,日本Ｒ ＩＷ测试卡 ,ＸＲＣ ＩＩ型暗盒 ,ＳＵＰＥＲＨＲ ＧＢ富士胶片。(1)采用ＩＰ 胶片结构 ,将ＩＰ与胶片装入无屏暗盒中 ,用 76ｋＶ 2 5ｍＡｓ、70ｋＶ6ｍＡｓ分别对铝梯及分辨测试卡进行曝光 ,取得测试样片。(2 )用密度计测试每组…     

胰高血糖素受体基因的第2外显子变异

2型糖尿病是一种具有多基因遗传背景的多因子疾病。据报道 ,在某些人种中 ,胰高血糖素受体 (ＧＣＧ Ｒ)基因 40号密码子的错义突变 (Ｇｌｙ40Ｓｅｒ)与 2型糖尿病显著相关[1] ,我们同时应用聚合酶链反应 限制性片断长度多态性分析(ＰＣＲ ＲＦＬＰ)和聚合酶链反应 变性梯度凝胶电泳 (ＰＣＲ ＤＧＧＥ)技术就此变异进行检测 ,意在探讨本地区汉族人 2型糖尿病与ＧＣＧ Ｒ基因Ｇｌｙ40Ｓｅｒ突变是否存在关联。一、材料和方法1 对象 :无亲缘关系的昆明地区汉族人 2 0 0名 ,其中 2型糖尿病患者 12 0例 (男 47例 ,女 73例 ) ;健康对照者 80名(男 …