豚鼠膜迷路积水模型耳蜗Ca^2＋ATP酶的变化

目的 了解Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶在耳蜗活动位点及膜迷路积水后耳蜗Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶的变化。方法 选成年健康、Ｐｒｅｙｅｒ反射正常豚鼠１４只，左耳装圆窗电极一阻塞肉淋巴，经声反应阈（ＣＡＰ阀值）证明膜迷路积水形成；右侧为对照耳。用枸橼酸铅细胞组化法测定Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶，在透射电镜下Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶以磷酸铅黑色颗粒显示。结果 对照耳Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶活动部位在蜗管前庭膜内淋巴侧、内外毛细胞皮     

氯化钠等物质豚鼠圆窗膜上对前庭功能行为影响的观察

在豚鼠的单侧或双侧圆窗膜上旋转ＮａＣｌ，ＫＣｌ或蔗糖晶体，观察其前庭功能行为受影响情况。结果：置ＮａＣｌ或ＫＣｌ的动物中，单侧置药组和双侧不同时置药组的部分动物出现刺激性和麻痹性双相眼震或其中一相眼震，而双侧同时置药组动物均未出现类似现象。各组的部分动物均可诱发变向性位置性眼震。放置蔗糖对前庭功能行为无影响。提示圆窗外单纯高渗透压对前庭无明显影响，放置ＮａＣｌ或ＫＣｌ后Ｎａ＾＋，Ｋ＾＋进入内耳可能     

豚鼠壶腹嵴毛细胞内钙离子活动及ATP的影响

目的 探讨离体前庭毛细胞（ＶＨＣ）去极化时细胞内钙离子活动特征及内耳活性物质ＡＴＰ对离体ＶＨＣ内钙离子浓度的影响及其机制。方法 采用酶孵育后机械分离法分离豚鼠壶腹嵴ＶＨＣ,６μｍｏｌ／Ｌ钙荧光探针Ｆｌｕｏ－３染色,利用激光扫描共聚焦显微镜（ＬＳＣＭ）记录静息状态下、加入高Ｋ＾＋液及不同浓度ＡＴＰ时代表ＶＨＣ内［Ｃａ＾２＋ｉ的荧光强度相对值的变化。结果 细胞外有Ｃａ＾２＋存在时,７５ｎｍｏｌ／ＬＫ＾     

豚鼠膜迷路积水模型耳蜗Ca2+-ATP酶的变化

目的了解Ｃａ２＋ＡＴＰ酶在耳蜗活动位点及膜迷路积水后耳蜗Ｃａ２＋ＡＴＰ酶的变化。方法选成年健康、Ｐｒｅｙｅｒ反射正常豚鼠１４只,左耳装圆窗电极后阻塞内淋巴,经声反应阈（ＣＡＰ阈值）证明膜迷路积水形成;右侧为对照耳。用枸橼酸铅细胞组化法测定Ｃａ２＋ＡＴＰ酶,在透射电镜下Ｃａ２＋ＡＴＰ酶以磷酸铅黑色颗粒显示。结果对照耳Ｃａ２＋ＡＴＰ酶活动部位在蜗管前庭膜内淋巴侧、内外毛细胞皮板及静纤毛、血管纹中间细胞指突膜等处;实验性膜迷路积水后,声反应阈提高,前庭膜、内外毛细胞等处之Ｃａ２＋ＡＴＰ酶颗粒明显减少。结论膜迷路积水后声反应阈提高,前庭膜、内外毛细胞等处Ｃａ２＋ＡＴＰ酶活性明显下降,两者呈负相关。     

实验性膜迷路积水活体Ca^2＋浓度与内淋巴电位测定

为了探索Ｍｅｎｉｅｒｅ病发病机理，阻塞豚鼠内淋巴囊造成膜迷路积水模型。对膜迷路积水成功的１７只动物的左耳分别于术后１、２、３个月在耳蜗第三回开窗，用双管离子选择性微电极插入中阶，测Ｃａ＾２＋浓度及内淋巴电位（ＥＰ）；１４只豚鼠健耳（右耳）作为对照。结果证明积水后中阶Ｃａ＾２＋浓度增高，与对照耳比较差异有显著性，随积水时间延长Ｃａ＾２＋浓度逐渐增高，且１、２、３个月之间差异有显著性。对照耳ＥＰ为７２     

耳蜗内淋巴环境阳离子成分稳态的研究进展

正常的耳蜗内淋巴环境阳离子成分稳态是听觉产生过程中的重要环节 ,内耳必须维持其内环境的相对稳定才能保持正常的生理功能。随着解剖内耳螺旋韧带技术的发现和完善 ,以及膜片钳和振动电极记录在该领域的应用 ,内耳上皮细胞已成为研究听觉机制的重要实验对象。血管纹是耳蜗内代谢活跃的组织 ,对维持耳蜗内电位及内淋巴液中高钾低钠状态有重要作用。耳蜗内淋巴具有类似细胞内液的离子成分 ,即Ｋ+浓度高 ,Ｎａ+、Ｃａ2 +浓度低 ;外淋巴液中Ｋ+浓度低 ,Ｎａ+、Ｃａ2 +浓度高。这种独特的离子环境在听觉生理机制中具有十分重要的作用。感受声音…     

氯化钠等物质置豚鼠圆窗膜上对前庭功能行为影响的观察

在豚鼠的单侧或双侧圆窗膜上放置ＮａＣｌ、ＫＣｌ或蔗糖晶体，观察其前庭功能行为受影响情况。结果：置ＮａＣｌ或ＫＣｌ的动物中，单侧置药组和双侧不同时置药组的部分动物出现刺激性和麻痹性双相眼震或其中一相眼震，而双侧同时置药组动物均未出现类似现象。各组的部分动物均可诱发变向性位置性眼震。放置蔗糖对前程功能行为无影响。提示圆窗外单纯高渗透压对前庭无明显影响，放置ＮａＣｌ或ＫＣｌ后Ｎａ＋、Ｋ＋进入内耳可能与前庭兴奋性改变有关。     

膜迷路积水豚鼠的内、外淋巴液钾、钠离子浓度

本研究测定手术阻断豚鼠内淋巴囊和前庭导水管后的内、外淋巴液Ｋ＋，Ｎａ＋离子的浓度。术后１个月，经组织学观察，８只豚鼠中的７只出现了膜迷路积水（８７．５％）。另一组１０只豚鼠于术后１个月用原子吸收光谱仪分别测定内、外淋巴液中Ｋ＋，Ｎａ＋的浓度。与对照耳组比较无明显差异（Ｐ＞０．０５）。     

ATP对离体耳蜗外毛细胞内游离钙浓度的影响

为探讨三磷酸腺苷对耳蜗外毛细胞内游离下浓度的影响，利用荧光染色法５７０型粘附式细胞仪对ＡＴＰ引起的豚鼠耳蜗外毛细胞Ｃａ＾２＋浓度的变化进行动态观察。加入ＡＴＰ使Ｃａ＾２＋浓度明显升高，升高后迅速下降，高峰处无延迟，再次加入ＡＴＰ，出现类似反应。说明ＡＴＰ是以一种神经递质的作用影响外毛细胞的生理活动。     

应用显微荧光测钙技术研究乙酰胆碱对豚鼠耳蜗对外毛细胞内 …

介绍了应用最显微荧光测钙技术研究豚鼠耳蜗外毛细胞（ＯＨＣ）内游离钙浓度的变化的方法。该技术以钙敏感染料Ｆｕｒａ－２作为胞内Ｃａ＾２＋的指示剂，装协进入细胞后，与胞内游离Ｃａ＾２＋结合，在特定波长光的激发下可发出荧光，由此可推算「Ｃａ＾２＋」ｉ的变化。结果发现乙酰胆碱在含钙的细胞上液中可引起「Ｃａ＾２＋」ｉ升高。对显微荧光测钙技术在研究耳蜗毛细胞中的应用以及ＡＣｈ引起「Ｃａ＾２＋」ｉ升高的机制进行讨     

实验性膜迷路积水内外淋巴钙离子浓度改变及其意义

利用原子吸收光谱仪检测经手术破坏豚鼠内淋巴囊及前庭导管造成的实验性膜迷路积水一个月后的内、外淋巴Ｃａ￣（２＋）浓度的变化。结果：积水耳内淋巴Ｃａ￣（２＋）浓度为０．１８１±０．１２９ｍｍｏｌ／Ｌ（ｘ±ｓ，下同），与对照耳组０．０２０±０．０１４ｍｍｏｌ／Ｌ相比，经ｔ检验有明显升高（Ｐ＜０．０１）。而积水耳组外淋巴Ｃａ￣（２＋）浓度为０．６７９±０．３４０ｍｍｏｌ／Ｌ与对照耳组０．７３０±０．３８５ｍｍｏｌ／Ｌ相比差异无显著性（Ｐ＞０．０５）。讨论了内淋巴Ｃａ￣（２＋）升高在膜迷路积水形成机制中的可能作用。     

听神经瘤患者离体前庭毛细胞的分离及胞内钙离子活动

目的 进一步了解离体人前庭毛细胞的胞内钙离子（Ｃａ＾２＋）活动。方法 从３例经迷路听神经瘤切除术患者中采取半规管壶腹中的前庭毛细胞，用倒置显微镜观察分离出的离体前庭毛细胞形态，用Ｃａ＾２＋敏感的荧光染料Ｆｕｒａ－２和数字影像显微镜监测细胞内Ｃａ＾２＋浓度的变化。结果 分离的前庭毛细胞主要为Ｉ型毛细胞，可在体外存活２．５ｈ。用１５０ｍｍｏｌ／Ｌ Ｋ＾＋液灌流单离的前庭毛细胞引起胞内Ｃａ＾２＋的显著升     

豚鼠内淋巴囊上皮细胞Na^＋,K^＋—ATP酶不同？…

目的 进一步研究同肉淋巴囊上皮细胞Ｎａ＾＋，Ｋ＾＋－ＡＴＰ酶不同β亚基的表达。方法 采用豚鼠内淋巴囊冰冻切片、原位杂交的方法检测Ｎａ＾＋，Ｋ＾＋－ＡＴＰ酶不同β亚基ｍＲＮＡ在淋巴囊上皮细胞中的表达。结果 在内淋巴囊上皮细胞胞浆内可见Ｎａ＾＋，Ｋ＾－ＡＴＰ酶不同β亚基的阳性颗粒，β１亚基表达较弱，β２亚基表达较强。结论 结合其他报道，内淋巴囊上皮细胞具有多种亚基异构体组成的Ｎａ＾＋，Ｋ＾＋－ＡＴＰ酶     

内淋巴囊局部用药对内淋巴囊电位的影响

与耳蜗内离子浓度比较，内淋巴囊内的Ｋ＋浓度低，Ｎａ＋浓度高，内淋巴囊电位相对于外淋巴为正值。内淋巴囊离子分泌增多和／或重吸收减少可引起梅尼埃病。临床上有采用利尿剂来治疗梅尼埃病。但内耳，特别是内淋巴囊中的离子和液体转运机制及梅尼埃病内耳病变的性质和位...     

水杨酸钠豚鼠耳蜗单离外毛细胸游离钙浓度影？…

目的 观察水杨酸钠对豚鼠耳蜗外毛细胞（ｏｕｔｅｒ ｈａｉｒ ｃｅｌｌｓ，ＯＨＣ）内游离钙浓度「Ｃａ＾２＋」ｉ的影响，并对钙通道调控药物的拮抗作用进行观察，以深入探讨水杨酸钠耳毒性的分子生物学机制。方法 豚鼠全身麻醉后断头活杀，酶－机械法分离获得耳蜗单离ＯＨＣ。１０ｕｍｏｌ／Ｌ的Ｅｌｕｏ－３／ＡＭ负载３０ｍｉｎ后用ＡＣＡＳＵｌｔｉｍａ型激光扫描共聚焦显微镜观察不同药物灌流下ＯＨＣ「Ｃａ＾２＋」ｉ的变     

庆大霉素对豚鼠内淋巴囊和血管纹Na^＋—K^＋—ATP酶活性的影响

应用酶细胞化学技术和计算机图像分析，对豚鼠连续肌注庆大霉素２－１５ｄ后内淋巴囊上皮细胞和血管纹边缘细胞的Ｎａ＾＋－Ｋ＾＋－ＡＴＰ酶活性变化进行了定量观察。结果发现，与正常对照组相比，用药２ｄ后两类细胞的Ｎａ＾＋－Ｋ＾＋－ＡＴＰ酶活性反应产物没有明显变化，但连续用药５ｄ后二者的产物均明显减少，１０ｄ和１５ｄ仍呈继续轻微减少趋势。表明庆大霉素既可抑制血管纹边缘细胞Ｎａ＾＋－Ｋ＾＋－ＡＴＰ酶活性，降低其     

ATP对离体耳蜗外毛细胞内游离钙浓度的影响

为探讨三磷酸腺苷（ＡＴＰ）对耳蜗外毛细胞内游离钙（Ｃａ２＋）浓度的影响，利用荧光染色法，以５７０型粘附式细胞仪对ＡＴＰ引起的豚鼠耳蜗外毛细胞Ｃａ２＋浓度的变化进行动态观察。加入ＡＴＰ使Ｃａ２＋浓度明显升高，升高后迅速下降，高峰处无延迟，再次加入ＡＴＰ，出现类似反应。说明ＡＴＰ是以一种神经递质的作用影响外毛细胞的生理活动     

一氧化氮合酶和心钠素在豚鼠耳蜗的分布

目的 观察豚鼠耳蜗局部心钠素（atral natruretc peptde，ANP）和一氧化氮合酶（nitric oxide synthase，NOS）免疫组化反应产物的分布，为研究ANP和NOS在豚鼠耳蜗局部血流、淋巴以及神经调节中的相互作用提供形态学依据。方法 采用免疫组织化学双标法检测ANP和NOS在正常豚鼠耳蜗的分布特征。结果 在耳蜗各转螺旋动脉和血管纹．螺旋缘、螺旋韧带和Corti器显示双阳性染色，螺旋神经节细胞及囊斑神经上皮细胞膜及轴突NOS阳性染色，胞质ANP阳性染色；盖膜、前庭膜阴性染色。结论 ANP和NOS在内耳血 流调节，内、外淋巴平衡调节以及神经信号传递等方面可能具有重要作用，二者之间可能存在密切的相互作用机制，其分布特点与功能密切相关。     

豚鼠耳蜗外毛细胞的共聚焦图像

建立了用激光扫描共聚焦显微镜豚鼠耳蜗外毛细胞生理变化及细胞形态的方法，以荧光染料Ｆｌｕｏ－３作胞内Ｃａ＾２＋指示剂，用共聚焦显微观察乙酰胆碱（Ａｃｈ），ＡＴＰ、高钾引起的外毛细胞（ＯＨＣ）胞内Ｃａ＾２＋浓度的变化，三种物质均引起Ｃａ＾２＋升高，但升高的幅度，进相及所在细胞部位不同，高钾还引起ＯＨＣ短缩，偏折，利用共聚焦显微镜“光学切片”的特性，对Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ荧光素染色的活的ＯＨＣ形态及磺     

Ad-GFP基因经半规管转导对豚鼠内耳形态和功能的影响

目的探讨经半规管途径转导豚鼠内耳基因的可行性,绿色荧光蛋白的表达及其对内耳形态和功能的影响.方法采用白色红目健康纯种豚鼠24只,将缺陷型腺病毒携带的绿色荧光蛋白基因5μl经显微手术自前半规管灌入豚鼠内耳,同法注入人工外淋巴液5μl作对照,另一组经圆窗膜注入5μl Ad-GFP基因,分别在手术后7、14、21、28d处死,0.5%硝酸银灌注耳蜗基底膜铺片显微镜观察内外毛细胞缺失,全耳蜗铺片荧光显微镜观察GFP表达.基因导入前后及处死前测定脑干诱发电位.结果实验组耳蜗铺片内外毛细胞缺失计数和对照组无统计学意义;荧光显微镜下见术侧半规管、前庭、耳蜗均有荧光表达,术后7d表达最强,以后减弱,术后28d还有表达;经半规管组前庭区表达强于耳蜗区,主要分布在前庭及外淋巴间隙;经圆窗组耳蜗区表达强于前庭区.对侧耳蜗及对照组动物呈阴性表达.手术前后脑干诱发电位差异无显著性.结论经半规管转导基因主要分布在前庭器官及外淋巴间隙,对耳蜗功能影响不大,是一种可行的途径;腺病毒载体携带的基因表达有一定的时间性.