二苯乙烯苷对Aβ25-35致神经干细胞损伤的保护作用

目的:观察不同浓度二苯乙烯苷(TSG)对β-淀粉样肽(Aβ25-35,25μmol· L-1)致损伤的神经干细胞(NSCs)生长、增殖及自我更新能力的影响,探讨TSG对Aβ25-35致NSCs损伤的保护作用.方法:从孕14 d昆明小鼠体外提取神经干细胞,以25 μmol·L-1浓度Aβ25-35诱导NSCs建立稳定的AD细胞模型,与不同浓度二苯乙烯苷共同孵育,分为对照组、模型组(Aβ25-3525 μmol· L-1)、TSG 1×10-8mol· L-1+ Aβ25-35组、TSG 1×10-7 mol·L-1+ Aβ25-35组、TSG 1×10-6mol·L-1+ Aβ25-35组,共5组,分别采用EDU化学荧光染色法检测NSCs增殖情况;采用WST-1细胞增殖及细胞毒性检测法检测不同时段NSCs的细胞活性;体外培养7d后通过神经干细胞球计数法观察NSCs的自我更新能力.结果:与模型组相比,二苯乙烯苷各剂量组均能在一定程度上抑制Aβ25-35对NSCs的损伤,细胞生长状态良好,细胞增殖率、细胞活性及神经干细胞球计数与模型组相比均有显著性差异(P＜0.01).结论:二苯乙烯苷对Aβ25-35诱导的神经干细胞损伤具有一定保护作用.     

丹参酮ⅡA对高血压病患者血清损伤后的内皮细胞的影响

目的 研究丹参酮ⅡA对高血压病患者血清损伤后的血管内皮细胞(VEC)的影响,进一步探讨丹参酮ⅡA保护VEC的作用机制.方法 利用15％的高血压病患者血清损伤正常培养的人脐静脉内皮细胞(ECV-304),用不同质量浓度的丹参酮ⅡA(10、20、40μg/mL)作用于损伤后的细胞24h,运用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的活性;单细胞凝胶电泳(SCGE)技术检测细胞DNA的损伤;逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测内皮细胞血栓调节蛋白(TM)和血管性假血友病因子(vWF) mRNA的表达.结果 与模型组比较,20 μg/mL和40 μg/mL的丹参酮ⅡA能增加内皮细胞的活性(P＜0.05);3个质量浓度的丹参酮ⅡA均能减轻内皮细胞DNA的损伤(P＜0.01);3个质量浓度的丹参酮ⅡA都可以下调TM mRNA表达(P＜0.01);20 μg/mL和40 μg/mL的丹参酮ⅡA可以下调vWF mRNA表达(P＜0.01).结论 丹参酮ⅡA对高血压病患者血清损伤后的ECV-304有保护作用,其作用机制可能与丹参酮ⅡA减轻细胞的DNA损伤有关.     

hUC-MSCs来源外泌体联合肾脑复元汤激活Wnt3a/β-catenin通路减轻NSCs损伤的研究

目的：探讨人脐带间充质干细胞（hUC-MSCs）来源的外泌体联合肾脑复元汤减轻氧葡萄糖剥夺/复氧（OGD/R）诱导的神经干细胞（NSCs）损伤的作用机制。方法：组织块法分离培养SD乳鼠的NSCs；免疫荧光鉴定NSCs标记物Nestin的表达；流式细胞术鉴定hUC-MSCs，分离外泌体，透射电镜观察；采用OGD/R构建NSCs损伤模型；CCK8法、EdU法和流式细胞术用于评估NSCs的增殖和凋亡；qRT-PCR、蛋白质印迹法和免疫细胞化学法分析Wnt3a/β-catenin通路相关基因的表达。结果：本研究成功分离得到并鉴定了NSCs和hUC-MSCs，以及hUC-MSCs来源的外泌体。OGD/R诱导NSCs细胞活力和增殖率下降，促进细胞凋亡，抑制Wnt3a、β-catenin、Cyclin D1和TCF4基因和蛋白表达。与OGD/R模型组比较，肾脑复元汤、外泌体，以及二者联用显著增加NSCs的细胞活力和增殖率，抑制凋亡，促进Cyclin D1、β-catenin、Wnt3a和TCF4基因和蛋白的表达。结论：hUC-MSCs来源外泌体联合肾脑复元汤通过促进NSCs细胞增殖减轻OGD/R诱导...     

苦丁冬青苷 D 对人 HCC-1806 乳腺癌细胞增殖、凋亡、自噬的影响及机制研究

摘要：目的 探讨苦丁冬青苷 D （KD-D） 对人 HCC-1806 乳腺癌细胞增殖、凋亡、自噬的影响及机制。方法 将人 HCC-1806 乳腺癌细胞作为研究对象,给予不同浓度 KD-D 处理后,采用 CCK-8 法检测细胞存活率; EdU 法检测细胞增殖能力;结晶紫染色法检测细胞克隆形成能力;流式细胞术 （Annexin V-FITC/PI 法） 检测细 胞凋亡;JC-1 染色法检测细胞线粒体膜电位;免疫荧光法检测细胞 Cleaved Caspase-3、LC3、P62 蛋白表达; Western Blot 法检测细胞 Cleaved Caspase-3、Pan-AKT、Phosp-AKT、LC3Ⅱ蛋白表达;自噬双标 mRFP-EGFP- LC3 腺病毒感染实验检测细胞自噬流。结果 与对照组比较,12.5、25、50、100、200、400 μmol·L-1 KD-D 处理 HCC-1806 细胞 24、48 h 后,随着给药浓度增大和处理时间延长,细胞活性显著降低 （P＜0.001） ,细胞 内吸光度值显著降低 （P＜0.001） ,细胞增殖受到抑制;60、80 μmol·L-1 KD-D 组的细胞克隆形成计数显著减少 （P＜0.001） ;50、100、150 μmol·L-1 KD-D 组细胞的早期及晚期凋亡比例均显著升高 （P＜0.05,P＜0.001） ; 40、60、80 μmol·L-1 KD-D组的红色荧光比例显著下降 （P＜0.001） ,绿色荧光比例显著升高 （P＜0.01,P＜0.001） , HCC-1806 细胞线粒体膜电位下降;60、80、100 μmol·L-1 KD-D 组细胞的 Cleaved Caspase-3 蛋白表达均显著 上调（P＜0.001）,60 μmol·L-1 KD-D 组细胞的 Pan-AKT、Phosp-AKT 蛋白表达均显著上调（P＜0.001）; 60 μmol·L-1 KD-D 组细胞的 LC3 蛋白荧光小点数量显著增加 （P＜0.001） ,P62 蛋白平均荧光强度显著降低 （P＜0.001） ,LC3Ⅱ蛋白表达显著上调 （P＜0.001） ,自噬小体及自噬溶酶体数量显著增加 （P＜0.01,P＜0.001） , 自噬流激活。与 60 μmol·L-1 KD-D 组比较,KD-D+AKT 抑制剂（Afuresertib）组细胞的 Cleaved Caspase-3、 Pan-AKT 蛋白表达显著下调 （P＜0.01,P＜0.001） ,Phosp-AKT 蛋白表达显著上调 （P＜0.001） 。结论 KD-D 能抑制人乳腺癌 HCC-1806 细胞增殖,并诱导其发生凋亡和自噬,KD-D 诱导 HCC-1806 细胞凋亡可能与激活AKT 信号影响 Cleaved Caspase-3 表达有关。     

基于高内涵细胞成像系统研究黄芩苷对人肺癌A549 细胞上皮间质转化模型的影响

目的基于高内涵细胞成像系统（HCS）探讨黄芩苷（Baicalin）对转化生长因子β1（TGF-β1）诱导的人肺癌 A549 细胞上皮间质转化（EMT）的影响。方法体外培养人肺癌A549 细胞,用TGF-β1 诱导A549 细胞发生上 皮间质转化,设立空白对照组（TGF-β1 0 ng·mL-1）、TGF-β1 模型组（TGF-β1 5 ng·mL-1）和黄芩苷干预组 （TGF-β1 5 ng·mL-1 +黄芩苷5、10、20 μmol·L-1）。采用MTT 法检测黄芩苷对A549 细胞活性的影响;以 TGF-β1 诱导人肺癌A549 细胞发生上皮间质转化,并加入不同浓度黄芩苷干预,采用HCS 分析细胞肌动蛋白 应激纤维（F-actin）纹理强度、细胞面积、细胞圆度和细胞长度等形态学变化,以及细胞黏附能力和运动迁移能 力变化;RT-qPCR 法检测上皮间质转化相关标志基因Collagen I、FN1、Vimentin 和E-cadherin 的相对表达 量。结果黄芩苷干预A549 细胞48 h 后半数抑制浓度（IC50）为22.59 μmol·L-1。HCS 分析结果显示,与空白对 照组比较,TGF-β1 模型组细胞形态呈间质细胞样（纺锤形）变化,F-actin 纹理强度增强（P＜0.01）,细胞长度 和细胞面积增大（P＜0.01）,细胞圆度减小（P＜0.01）,黏附率降低（P＜0.01）,迁移率和迁移速度升高（P＜ 0.01）;与TGF-β1 模型组比较,黄芩苷干预组细胞形态呈上皮细胞样（不规则多边形）变化,F-actin 纹理强度 减弱（P＜0.05,P＜0.01）,细胞长度和细胞面积减小（P＜0.01）,细胞圆度增大（P＜0.01）,黏附率升高（P＜ 0.01）,迁移率和迁移速度降低（P＜0.05,P＜0.01）。RT-qPCR 结果表明,与空白对照组比较,TGF-β1 模型组 Collagen Ⅰ、FN1 和Vimentin 的mRNA 相对表达量升高（P＜0.01）,E-cadherin 的mRNA 相对表达量降低（P＜ 0.01）;与TGF-β1 模型组比较,黄芩苷干预组Collagen I、FN1 和Vimentin 的mRNA 相对表达量降低（P＜ 0.05,P＜0.01）,E-cadherin 的mRNA 相对表达量升高（P＜0.05,P＜0.01）。结论黄芩苷能够有效阻止 TGF-β1 诱导的人肺癌A549 细胞上皮间质转化进程,提示HCS 是一种多参数系统分析细胞上皮间质转化的有 效工具。     

竹节香附素A对人结肠癌细胞HCT-116增殖、凋亡、迁移和侵袭活性的影响

摘要：目的 研究竹节香附素A (Raddeanin A,RA) 对人结肠癌细胞HCT-116增殖、凋亡、迁移及侵袭的活性影响,并初步探讨其作用机制。 方法 采用不同浓度的RA（0.125~50 μmol·L-1）处理?HCT-116细胞24,48 h,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖能力。RA(1.0,2.0,4.0 μmol·L-1)干预后,采用Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率;JC-1染色法检测线粒体膜电位变化;DCFH-DA法检测细胞内活性氧簇（ROS）水平;采用Western Blot法检测细胞中Cleaved caspase-3蛋白表达。选择低于凋亡浓度的RA （0.25,0.5,1.0 μmol·L-1）作用HCT-116细胞,采用细胞划痕实验和Transwell穿膜实验观察不同浓度RA 对结肠癌细胞HCT-116细胞迁移的影响;采用铺有matrigel胶的Transwell实验检测RA对HCT-116细胞侵袭能力的影响;采用RT-PCR法和Western Blot法检测RA作用后各组细胞中MMP-2、MMP-9基因及蛋白表达。 结果 RA干预24,48 h后的IC50值分别为5.967 μmol·L-1和4.797 μmol·L-1,且呈现浓度与时间依赖性。与空白对照组比较,RA 1.0,2.0,4.0?μmol·L-1浓度组凋亡、坏死的HCT-116细胞明显增多（P < 0.05,P < 0.01）;线粒体膜电位坍塌率分别为70.2%,74.4%和91.6%,差异有统计学意义（P < 0.01）;细胞内ROS含量显著增加（P < 0.01）,且呈现浓度依赖性;Cleaved caspase-3蛋白的表达水平随RA浓度的增加而显著提高（P < 0.01）。RA干预后与空白对照组比较,0.5,1.0 μmol·L-1浓度组的细胞愈合率显著降低（P < 0.01）;RA 0.25,0.5,1.0 μmol·L-1浓度组均能显著抑制HCT-116 细胞的迁徙能力（P < 0.01）,均能显著抑制HCT-116 细胞体外侵袭能力（P < 0.05,P < 0.01）。与空白对照组比较,RA 0.5,1.0 μmol·L-1浓度组MMP-2、MMP-9 mRNA相对表达水平显著降低（P < 0.05,P < 0.01）;RA 0.5,1.0?μmol·L-1浓度组MMP-2、MMP-9 蛋白相对表达水平显著降低（P < 0.01）。结论 RA既能够有效抑制人结肠癌HCT-116细胞增殖,又能诱导该细胞的凋亡,可能与诱导细胞内ROS产生,导致线粒体膜电位坍塌,激活caspase信号通路有关。低于凋亡浓度的RA （0.25,0.5,1.0 μmol·L-1）能明显抑制HCT-116细胞的迁移与侵袭活性,可能与通过下调HCT-116细胞MMP-2、MMP-9 mRNA及蛋白表达有关。     

刺五加提取物对人神经细胞SH-SY5Y氧糖剥夺再灌注损伤的保护作用研究＊

目的 研究一种刺五加提取物对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y氧糖剥夺再灌注（Oxygen and Glucose Deprivation/Reperfusion，OGD/R）后损伤的影响。方法 体外培养SH-SY5Y细胞，并分成空白对照组（Natural Control，NC）、氧糖剥夺再灌注模型组（OGD/R）、阳性对照组（80 μM 依达拉奉Edaravone+ OGD/R）、刺五加提取物中剂量组（500 μg·mL^-1+ OGD/R）、刺五加提取物高剂量组（1000 μg·mL^-1+ OGD/R）。其中，NC组给予DMEM/F12培养基培养，模型组给予氧糖剥夺6 h、复氧复糖再培养12 h处理。各组采用MTT法检测细胞活力，流式细胞术检测凋亡水平，多功能酶标仪及荧光显微镜检测活性氧（ROS）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛含量（MDA）。结果 与模型组相比，刺五加提取物能显著降低OGD/R引起的SH-SY5Y细胞凋亡；降低活性氧及丙二醛水平，提高超氧化物歧化酶活力，提高胞内ATP水平。结论 刺五加提取物可通过抑制氧化应激、保护线粒体功能和抑制细胞凋亡来减轻SH-SY5Y细胞氧糖剥夺后再灌注损伤的作用。     

积雪草酸对前列腺癌细胞增殖及转化生长因子 β1 诱导的上皮间质转化的影响

目的观察积雪草酸对前列腺癌细胞DU145 和PC-3 增殖、迁移、侵袭的影响,并探讨其对上皮间质转 化（EMT）的影响和潜在调控机制。方法体外培养DU145 和PC-3 细胞,以不同浓度积雪草酸干预后,采用 MTT 法检测其对细胞活力的影响;通过克隆形成实验检测其对细胞克隆形成能力的影响;通过细胞划痕实 验、Transwell 迁移及侵袭实验观察低浓度积雪草酸（10、20 μmol·L-1）对转化生长因子β1（TGF-β1,5 ng·mL-1） 诱导后DU145 和PC-3 细胞迁移、侵袭的影响;采用Western Blot 法检测DU145 细胞的血管内皮生长因子A （VEGFA）和EMT 相关纤维连接蛋白（Fibronectin）、波形蛋白（Vimentin）、N-钙黏蛋白（N-Cadherin）、Snail 及 E-钙黏蛋白（E-Cadherin）的表达情况。结果积雪草酸可浓度及时间依赖性地抑制DU145 和PC-3 细胞增殖, 干预24、48、72 h 后的IC50 值分别为29.10、17.52、11.53 μmol·L-1 和27.91、21.43、14.82 μmol·L-1。积雪草 酸（10、20 μmol·L-1）能够明显抑制DU145 及PC-3 细胞克隆形成能力。与空白组比较,TGF-β1 能够明显促进 DU145 和PC-3 细胞的划痕愈合（P＜0.01）,促进DU145 细胞的侵袭（P＜0.05）,上调DU145 细胞内VEGFA 蛋 白和间质指标Fibronectin、Vimentin、N-Cadherin、Snail 蛋白的表达（P＜0.05,P＜0.01）,下调上皮指标 E-Cadherin 蛋白表达（P＜0.05）,进而诱导细胞EMT 进程。与TGF-β1 组比较,10、20 μmol·L-1 浓度的积雪草 酸能明显抑制TGF-β1 诱导后的DU145、PC-3 细胞划痕愈合及Transwell 细胞迁移、侵袭（P＜0.05,P＜ 0.01）,且呈现浓度依赖性;10 μmol·L- 1 浓度的积雪草酸能明显下调TGF-β1 诱导的DU145 细胞内的 VEGFA、Fibronectin、Vimentin、N-Cadherin、Snail 蛋白表达（P＜0.05）, 上调E-Cadherin 蛋白表达（P＜ 0.05）,进而逆转TGF-β1 诱导的EMT 进程。结论积雪草酸可抑制前列腺癌细胞DU145 和PC-3 增殖,并逆 转TGF-β1 诱导的前列腺癌细胞DU145 的EMT 进程,从而发挥其抗前列腺癌细胞侵袭、转移的作用。     

心脑舒通胶囊对氧糖剥夺/复氧星形胶质细胞神经营养因子分泌的影响及对神经元的保护作用

[目的]探讨心脑舒通胶囊对氧糖剥夺/复氧(OGD/R)处理的星形胶质细胞(C8-D1A)神经生长因子分泌的影响,以及研究心脑舒通药物处理的OGD/R胶质细胞条件培养液对神经元细胞(Neuro-2A)的保护作用。[方法] CCK-8检测心脑舒通对正常培养和OGD/R胶质细胞活力的影响;酶联免疫吸附(ELISA)法检测心脑舒通对OGD/R胶质细胞的脑源性神经营养因子(BDNF)、胶质源性神经营养因子(GDNF)、睫状神经营养因子(CNTF)释放的影响;CCK-8检测心脑舒通处理的胶质细胞条件培养液对OGD/R神经元细胞活力的影响。[结果] 1)心脑舒通对正常培养的胶质细胞活力无显著影响,但可以提高OGD/R后胶质细胞的增殖活力。2)0.1μg/mL心脑舒通可以显著提高OGD/R胶质细胞BDNF的释放。3)0.1μg/mL心脑舒通药物处理的胶质细胞条件培养液可提高OGD/R神经元的存活能力。[结论]心脑舒通对OGD/R损伤后的胶质细胞有一定保护作用,其处理后的胶质细胞条件培养液对神经元有一定的保护作用。     

丹参酮ⅡA减轻棕榈酸诱导的心肌细胞凋亡及内质网应激

【目的】 探讨丹参酮ⅡA对棕榈酸诱导心肌细胞脂毒性损伤模型内质网应激凋亡的影响。【方法】 将对数期H9c2细胞分6组,即对照组,棕榈酸（400 μmol/L）组,丹参酮 ⅡA 20 μmol/L组和棕榈酸+丹参酮 ⅡA（5、10、20 μmol/L）组,另外引入棕榈酸+CCT020312组与棕榈酸+CCT020312+丹参酮ⅡA 20 μmol/L组考察通路激活状态。细胞计数试剂盒8（CCK-8）法测定H9c2细胞活力;流式细胞术测定细胞凋亡情况;实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）法检测细胞内质网应激相关分子葡萄糖调控蛋白78（GRP78）、转录激活因子4（ATF4）和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）的mRNA表达水平;蛋白免疫印迹（Western Blot）法检测细胞 GRP78、ATF4、CHOP、Caspase-3、Caspase-9、Caspase-12、蛋白激酶 RNA 样内质网激酶（PERK）、磷酸化PERK（p-PERK）、真核生物翻译起始因子2α（eIF2α）、磷酸化eIF2α（p-eIF2α）的蛋白表达水平。【结果】与对照组比较,棕榈酸组细胞存活率显著降低（P < 0.01）,GRP78、ATF4、CHOP mRNA 和蛋白表达水平均显著升高（P <0.01）,H9c2 细胞的凋亡率升高,p-PERK/PERK 和 p-eIF2α/eIF2α 比例也显著增大（P < 0.01）,凋亡相关分子 Caspase-3、Caspase-9和Caspase-12蛋白表达水平均显著升高（P < 0.01）。不同浓度丹参酮 ⅡA作用后,与棕榈酸组比较,棕榈酸+丹参酮 ⅡA（5、10、20 μmol/L）组细胞存活率显著升高（P < 0.01）,GRP78、ATF4、CHOP mRNA 和蛋白表达水平均显著降低（P < 0.01）,H9c2细胞的凋亡率降低,p-PERK/PERK和p-eIF2α/eIF2α比例也显著减小（P < 0.01）,Caspase-3、Caspase-9和Caspase-12蛋白表达水平显著降低（P < 0.01）,均具有剂量依赖性,且棕榈酸+丹参酮 ⅡA 10 μmol/L组（P < 0.05）和棕榈酸+丹参酮 ⅡA 20 μmol/L 组（P < 0.05）变化显著。加入 PERK 通路激活剂 CCT020312 作用后,与棕榈酸组比较,棕榈酸+CCT020312组的p-PERK/PERK和p-eIF2α/eIF2α比例,细胞凋亡率,GRP78、ATF4、CHOP 的mRNA和蛋白表达水平均显著升高（P < 0.05）;再经过丹参酮ⅡA处理,与棕榈酸+CCT020312组比较,棕榈酸+CCT020312+丹参酮ⅡA组的p-PERK/PERK和p-eIF2α/eIF2α比例,细胞凋亡率,GRP78、ATF4、CHOP 的mRNA和蛋白表达水平均显著回降（P < 0.05）。【结论】 丹参酮ⅡA可减轻心肌细胞脂毒性损伤,其机制与其通过抑制PERK信号通路活化来减轻棕榈酸诱导的心肌H9c2细胞凋亡,并且控制内质网应激反应有关。     

APOE-TREM2 介导的蛇床子素对阿尔兹海默病体外细胞模型的抗炎机制研究

目的探究载脂蛋白E（APOE）-髓细胞触发受体2（TREM2）信号通路介导的蛇床子素（Osthole）对阿尔兹 海默病体外细胞模型的抗炎作用机制。方法将小鼠小胶质细胞（BV2 细胞）分为：空白组、溶剂组（0.1% DMSO）、模型组（Aβ1-42,10 μmol·L-1）、阳性药组（地塞米松,2.5 μmol·L-1）及蛇床子素高、中、低剂量组 （25、5、1 μmol·L-1）。给药组分别给予药物预保护4 h 后,再给予Aβ1-42 诱导损伤24 h,建立阿尔茨海默病 BV2 细胞模型。采用CCK-8 法检测细胞存活率;ELISA 法检测细胞炎性因子白细胞介素（IL）1β、肿瘤坏死因 子（TNF）α 的表达;免疫荧光法检测细胞促炎表型M1 型标志物CD16/32 的表达;倒置显微镜观察BV2 细胞培 养上清对SH-SY5Y 细胞形态的影响;流式细胞术检测BV2 细胞培养上清对SH-SY5Y 细胞凋亡的影响;采用 Western Blot、qPCR 法检测细胞中APOE、TREM2 蛋白及基因的表达情况。结果与空白组比较,模型组BV2 细胞存活率明显降低（P＜0.001）,TNF-α、IL-1β 分泌量明显增加（P＜0.001）,CD16/32 荧光明显增强, SH-SY5Y 细胞损伤明显,SH-SY5Y 细胞凋亡率明显升高（P＜0.001）,APOE、TREM2 蛋白及mRNA 表达显著 上调（P＜0.01,P＜0.001）。与模型组相比,蛇床子素组的BV2 细胞存活率明显升高（P＜0.01,P＜0.001）, TNF-α、IL-1β 分泌量明显减少（P＜0.01,P＜0.001）,CD16/32 荧光明显减弱,SH-SY5Y 细胞形态有所改善 且凋亡率明显降低（P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001）,APOE、TREM2 蛋白及基因表达明显下调（P＜0.05,P＜ 0.01,P＜0.001）。结论蛇床子素对Aβ1-42 诱导的BV2 细胞的炎性反应有较好的治疗作用,其机制可能与下 调APOE、TREM2 蛋白及基因表达有关。     

双硫仑靶向 Wnt 和 AKT 信号通路降低卵巢癌 细胞的恶性程度及对顺铂的耐受性

〔摘 要〕 目的：探究双硫仑（DSF）对人卵巢癌细胞恶性程度及其对化疗药物敏感性的影响及相关机制。方法： 使用不同浓度 DSF（0.1 μmol·L-1 、1 μmol·L-1 、5 μmol·L-1）处理卵巢癌细胞 SK–OV–3 和 A278,四甲基偶氮唑盐 微量酶反应比色法（MTT）测定细胞活性。选取 DSF 有效浓度（5 μmol·L-1）处理细胞,通过软琼脂糖克隆形成实验、 微球形成实验检测干细胞特性,Transwell 实验检测细胞迁移,实时荧光定量聚合酶链式反应（PCR）检测 Wnt 靶基 因的信使核糖核酸（mRNA）表达,双荧光素酶法检测 Wnt 通路的转录活性,免疫印迹实验检测 PI3K/AKT/mTOR 和 RAF/MEK/ERK 的激活情况。采用 DSF（5 μmol·L-1）和顺铂联合处理 SK–OV–3 和 A2780 细胞,并使用 MTT 实 验、软琼脂糖克隆形成实验和微球形成实验检测 DSF 对顺铂药物敏感性的影响。结果：与对照组相比,DSF 处理能 够显著降低卵巢癌细胞的增殖能力（P ＜ 0.01）,降低软琼脂糖中癌细胞克隆形成能力（P ＜ 0.01）,抑制卵巢癌细 胞在悬浮培养下的微球形成（P ＜ 0.01）以及细胞的迁移能力（P ＜ 0.01）,从而降低卵巢癌细胞的恶性程度。在与 顺铂药物联合使用情况下,DSF 联合用药显著增强卵巢癌细胞对顺铂药物的敏感性（P ＜ 0.01）。机制方面的研究 表明 DSF 处理显著降低卵巢癌细胞中 Wnt 信号通路活性,同时显著抑制卵巢癌细胞中 RAF/MEK/ERK 和 PI3K/AKT/ mTOR 通路的激活。结论：DSF 处理可显著降低卵巢癌细胞的恶性程度,同时增强其对传统化疗药物顺铂的敏感性。 DSF 抑癌作用可能是通过抑制 Wnt、RAF/MEK/ERK 和 PI3K/AKT/mTOR 等癌症促进信号通路的活性来实现的。     

毛蕊异黄酮苷调控SIRT1 信号通路缓解海马神经元细胞损伤的研究

目的探讨毛蕊异黄酮苷（CG）通过调控沉默信息调节因子1（SIRT1）信号通路对氧糖剥夺再灌注（OGD/R） 海马神经元细胞损伤的保护作用。方法将海马神经元细胞在无糖培养基中缺氧8 h 后,在完全培养基中复氧 6 h 建立OGD/R 模型。将细胞分为4 组：正常对照组、氧糖剥夺再灌注组（OGD/R 组,模型组）、SIRT1 特异性 抑制剂组（EX527 组）、EX527+毛蕊异黄酮苷组（EX527+CG 组）。细胞处理结束后,采用CCK-8 法测定细胞存 活率;分光光度法检测细胞上清液中乳酸脱氢酶（LDH）、超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）的含量;荧光 法检测细胞中活性氧（ROS）含量、细胞凋亡率;Western Blot 及ELISA 法检测SIRT1 信号通路中相关蛋白的表 达水平。结果与OGD/R 组比较,EX527 组的细胞活力、SOD 含量及SIRT1、叉头转录因子1（FOXO1）、B 淋 巴细胞瘤-2（Bcl-2）、过氧化物酶体增殖物激活受体γ 共激活因子-1α（PGC-1α）蛋白表达水平均明显降低（P＜ 0.05）,LDH 及MDA 含量、细胞凋亡率、Bax 蛋白表达水平明显升高（P＜0.05）。与EX527 组比较,EX527+CG 组的细胞活力及FOXO1、Bcl-2 和PGC-1α 蛋白表达水平均有升高,SOD 含量及SIRT1 蛋白表达水平明显升高 （P＜0.05）;MDA 含量有降低,LDH 含量、细胞凋亡率及Bax 蛋白表达水平明显降低（P＜0.05）。结论毛蕊 异黄酮苷缓解海马神经元OGD/R 损伤的机制与调控SIRT1 信号通路有关。     

丹酚酸B-葛根素联用对氧糖剥夺/复氧损伤的SH-SY5Y神经细胞焦亡的影响

目的 基于细胞焦亡探讨丹酚酸B和葛根素联用对氧糖剥夺/复氧（OGD/R）损伤的SH-SY5Y神经细胞的保护作用及机制。方法 利用SH-SY5Y细胞构建OGD/R损伤模型，设立空白组、OGD/R组、10 μmol·L^-1丹酚酸B组、100 μmol·L^-1葛根素组、10 μmol·L^-1丹酚酸B和100 μmol·L^-1葛根素联用组及10 μmol·L^-1NOD样受体蛋白3（NLRP3）炎症小体抑制剂MCC950组。除空白组外，其余各组细胞在OGD/R 6 h后迅速复糖复氧12 h进行OGD/R造模。采噻唑蓝（MTT）法检测细胞存活率，光学显微镜下观测细胞形态，分光光度计法检测培养上清中乳酸脱氢酶（LDH）释放率，Hoechst/碘化丙啶（PI）染色检测细胞膜损伤情况，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测NLRP3、胱天蛋白酶-1（Caspase-1）、消皮素D（GSDMD）、凋亡斑点样蛋白（ASC）和白细胞介素-1β（IL-1β） mRNA表达水平，免疫荧光检测NLRP3和Caspase-1蛋白表达的变化，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测IL-1β、ASC、NLRP3、Caspase-1和剪切胱天蛋白酶-1（cleaved Caspase-1）蛋白表达的变化。结果 与空白组比较，OGD/R组SH-SY5Y细胞存活率显著降低（P<0.01），细胞形态受损，培养上清中LDH渗漏率显著提高（P<0.01），细胞膜破损，细胞中NLRP3、Caspase-1、GSDMD、ASC和IL-1β mRNA表达水平显著提高（P<0.01），IL-1β、ASC、NLRP3、Caspase-1和cleaved Caspase-1蛋白的表达水平显著提高（P<0.01）。与OGD/R组比较，丹酚酸B、葛根素与丹酚酸B和葛根素联用均能显著提高OGD/R损伤后SH-SY5Y细胞的存活率（P<0.01）；与单用组比较，联用组具有更好的效果（P<0.01）。与OGD/R组比较，丹酚酸B和葛根素联用及MCC950均能改善细胞形态，降低细胞上清液LDH的渗漏（P<0.01），减轻细胞膜损伤水平，降低SH-SY5Y细胞NLRP3、Caspase-1、GSDMD、ASC和IL-1β的mRNA表达水平（P<0.05，P<0.01），降低IL-1β、ASC、NLRP3、Caspase-1和cleaved Caspase-1蛋白的表达水平（P<0.05，P<0.01）。结论 结果表明，丹酚酸B和葛根素联用能减轻OGD/R对SH-SY5Y细胞造成的损伤，这可能与其能够抑制细胞焦亡相关。     

丹酚酸B 调节SIRT1 信号途径抑制H2O2 诱导的NLRP3 炎症 小体激活

目的基于沉默信息调节因子1（SIRT1）/ NOD 样受体蛋白3（NLRP3）炎症小体途径探讨丹酚酸B（SalB） 抗氧化应激致细胞损伤的作用机制,以期阐明丹酚酸B 抗心肌缺血的作用机制。方法采用体外构建H2O2 诱 导的氧化应激细胞模型,将H9c2 细胞分为6 组,分别为正常组、模型组（600 μmol·L-1 H2O2 刺激）、H2O2+丹酚 酸B（5、10、20 μmol·L-1）组和H2O2 + 丹酚酸B（20 μmol·L-1）+EX527（10 μmol·L-1） 组。采用MTT 法测定细胞 活性;Hoechst 染色法测定细胞凋亡;比色法及ELISA 法分别测定乳酸脱氢酶（LDH）、白细胞介素（IL）-1β 水 平;采用DCFH-DA 荧光探针检测细胞内活性氧（ROS） 水平;采用JC-1 荧光探针测定线粒体膜电位; Western Blot 法测定H9c2 细胞中NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1（Caspase-1）、凋亡相关斑点样蛋白 （ASC）,以及SIRT1 信号通路相关的SIRT1、磷酸化AMP 蛋白活化激酶α（p-AMPKα）、AMP 蛋白活化激酶α （AMPKα）、过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α（PGC-1α） 蛋白表达。结果与正常组比较,模型 组细胞活力及线粒体膜电位明显降低（P＜0.01）,细胞凋亡程度及细胞内ROS、LDH 和炎症因子IL-1β 水平明 显升高（P＜0.01）;与NLRP3 炎症小体相关的NLRP3、Caspase-1 和ASC 蛋白表达显著上调（P＜0.01）, SIRT1、p-AMPKα/AMPKα 和PGC-1α 蛋白表达明显下调（P＜0.01）。与模型组比较,丹酚酸B 组的细胞活力 以及线粒体膜电位显著升高（P＜0.05,P＜0.01）,细胞凋亡程度及细胞内ROS、LDH 及炎症因子IL-1β 释放水 平明显降低（P＜0.01）。丹酚酸B 能够明显上调SIRT1 信号通路中SIRT1、p-AMPKα/AMPKα、PGC-1α 蛋白表 达（P＜0.05,P＜0.01）,下调NLRP3 炎症小体相关的NLRP3、Caspase-1 和ASC 蛋白表达（P＜0.05,P＜ 0.01）,且呈一定量效关系。在应用SIRT1 特异性抑制剂EX527 干预后,丹酚酸B 抑制H2O2 诱导的NLRP3 炎 症小体激活作用被明显逆转。结论丹酚酸B 可能通过激活SIRT1/AMPK/PGC-1α 信号通路,抑制氧化应激诱 导的NLRP3 炎症小体的激活,继而发挥抗心肌缺血作用。     

毛蕊异黄酮介导GP130/JAK/STAT信号通路对脊髓星形胶质细胞氧化损伤的影响

目的 探究毛蕊异黄酮介导糖蛋白130（GP130）/Janus酪氨酸蛋白激酶（JAK）/信号转导及转录激活因子（STAT）信号通路对脊髓星形胶质细胞氧化损伤的影响。方法 原代分离大鼠脊髓星形胶质细胞，并利用免疫荧光检测胶质纤维酸性蛋白（GFAP）进行鉴定。分别加入5、10、20 μmol·L^-1毛蕊异黄酮预处理脊髓星形胶质细胞12 h，然后加入100 μmol·L^-1过氧化氢（H₂O₂）处理24 h造成氧化损伤模型，细胞增殖与活性检测（CCK-8）法检测各组细胞增殖情况选择合适的毛蕊异黄酮处理浓度。实验分为空白组、模型组（H₂O₂ 100 μmol·L^-1）、毛蕊异黄酮组（毛蕊异黄酮 20 μmol·L^-1）、毛蕊异黄酮+LY294002组（毛蕊异黄酮 20 μmol·L^-1+LY294002 10 μmol·L^-1）、毛蕊异黄酮+Stattic组（毛蕊异黄酮 20 μmol·L^-1+Stattic 3 μmol·L^-1）。CCK-8法、免疫荧光检测各组细胞增殖情况，流式细胞术检测各组细胞凋亡和周期情况；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组细胞中磷酸化（p）-JAK2、p-STAT3、p-蛋白激酶B（Akt）、GP130、白细胞介素-6（IL-6）的蛋白表达水平。结果 与空白组比较，模型组细胞的增殖活力明显降低，细胞凋亡率明显升高（P<0.05）；与模型组比较，毛蕊异黄酮（20 μmol·L^-1）组细胞的增殖活力明显增加，细胞凋亡率明显降低（P<0.05）；与毛蕊异黄酮（20 μmol·L^-1）组比较，PI3K抑制剂LY294002和STAT3抑制剂Stattic均能明显降低细胞的增殖活力，增加细胞凋亡率（P<0.05）。与空白组比较，模型组细胞中p-JAK2、p-STAT3、p-Akt、GP130、IL-6的蛋白表达水平明显增加（P<0.05）；与模型组比较，各用药组p-JAK2、p-STAT3、p-Akt、GP130、IL-6的蛋白表达水平均明显降低（P<0.05）。结论 毛蕊异黄酮能够促进氧化损伤的星形胶质细胞增殖并抑制其凋亡，并能通过抑制磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/Akt通路磷酸化、JAK2/STAT3通路磷酸化起作用。     

没食子酸丙酯对H2O2诱导SH-SY5Y细胞氧化损伤的影响及其作用机制

目的 探讨没食子酸丙酯（propyl gallate,PG,赤芍801）对H2O2诱导人神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y）氧化损伤的影响及其作用机制。方法 将SH-SY5Y细胞均分为对照组、H2O2模型组、PG1组、PG2组和PG3组,对照组常规加入DMEM/F12培养液培养;H2O2模型组加入H2O2 200 μmol·L-1;PG1组加入PG 20 μmol·L-1+H2O2 200 μmol·L-1;PG2组加入PG 40 μmol·L-1+H2O2 200 μmol·L-1;PG3组加入PG 80 μmol·L-1+H2O2 200 μmol·L-1。比较5组SH-SY5Y细胞的增殖活性,细胞培养物上清中8-OHdG,细胞内ROS、LDH释放量,Hoechst 33258染色结果、细胞周期变化情况及Caspase-3酶活性。结果 H2O2模型组细胞存活率显著低于对照组,细胞培养物上清中8-OHdG水平显著高于对照组,ROS水平显著高于对照组,LDH释放量显著高于对照组,具有非常显著性差异（P＜0.01）;PG1组、PG2组和PG3组细胞存活率均显著高于H2O2模型组,细胞培养物上清中8-OHdG水平均显著低于H2O2模型组,ROS水平均显著低于H2O2模型组,LDH释放量均显著低于H2O2模型组,差异具有统计学意义（P＜0.05）;PG可显著改善SH-SY5Y细胞凋亡情况,且具有剂量依赖关系;H2O2模型组G0/G1期百分率显著高于对照组,S期、G2/M期和PI均显著低于对照组,差异具有统计学意义（P＜0.05）;PG2组、PG3组G0/G1期百分率显著低于H2O2模型组,S期、G2/M期和PI均显著高于H2O2模型组,差异具有统计学意义（P＜0.05）;H2O2模型组Caspase-3酶活性显著高于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）;PG2组和PG3组Caspase-3酶活性显著低于H2O2模型组,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 PG在一定剂量范围内对H2O2诱导的SH-SYSY神经细胞损伤具有明显的保护作用,其保护效应可能与清除ROS,减轻DNA氧化损伤,抑制线粒体通路介导的细胞凋亡有关。     

注射用丹参多酚酸通过调节Akt/mTOR通路介导的自噬对氧糖剥夺/再灌注Neuro-2a细胞凋亡的影响

目的 研究注射用丹参多酚酸（SalvianolateLyophilizedInjection,SLI）对氧糖剥夺/再灌注（oxygen-glucose deprivation/reperfusion,OGD/R）损伤小鼠脑神经瘤细胞株Neuro-2a的保护作用及机制。方法 体外培养Neuro-2a细胞,建立OGD/R损伤模型,给予SLI(10、25、50μg/mL)以及自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-methyladenine,3-MA）干预,检测SLI对OGD/R损伤Neuro-2a细胞存活率、乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）漏出量及细胞色素C(cytochrome C,Cyt-C)的释放;采用流式细胞仪检测细胞凋亡率;采用Western blotting法检测凋亡及自噬相关蛋白的表达情况。结果 与OGD/R组比较,SLI显著提高OGD 4 h/R 24 h Neuro-2a细胞存活率（P<0.05、0.01）,降低LDH漏出量（P<0.05、0.01）,抑制细胞凋亡和细胞内Cyt-C释放（P<0.05、0.01）,调节活化的半胱氨酸天...     

桂莪术提取物对人肝星状细胞的影响

目的：观察桂莪术提取物对肝星状细胞株（HSC-LX2）增殖、胶原生成以及基质金属蛋白酶表达的影响。方法：HSC-LX2 培养于含10%胎牛血清的DMEM 培养液中,用终浓度分别为0、22.5、45、90μmol·L-1 的桂莪术提取物处理24 h 后,MTT 法测定细胞增殖抑制率;LDH 比色法检测桂莪术提取物对HSC-LX2 的细胞毒性;ELISA 法检测HSC-LX2 I 型胶原表达的影响;Western Bolt 法检测HSC-LX2 基质金属蛋白酶-1（MMP-1） 蛋白表达。结果：MTT 结果显示,22.5、45、90 μmol·L-1 的桂莪术提取物均能抑制HSC-LX2 细胞增殖,呈剂量依赖性,抑制率分别为16.2%,43.9%,59.4%,IC50 为59.1 μmol·L-1;桂莪术提取物各剂量组培养上清液中LDH 活力差异无显著性;45、90 μmol·L-1 桂莪术提取物可显著降低I 型胶原的表达（P＜0.01）;Western Blot 结果分析显示,45、90 μmol·L-1 桂莪术提取物可显著提高HSC-LX2 MMP-1蛋白的表达（P＜0.05）。结论：桂莪术提取物可能通过抑制HSC-LX2 增殖和I 型胶原合成,提高MMP-1 蛋白表达,发挥抗肝纤维化作用。     

熊果酸通过促进自噬保护H2O2 诱导的H9C2 大鼠心肌细胞氧化应激损伤

目的研究熊果酸（Ursoic acid,UA）对过氧化氢（H2O2）诱导的H9C2 大鼠心肌细胞氧化应激损伤的保护 作用及对细胞自噬的调节作用。方法以200 μmol·L-1 H2O2 诱导24 h 建立H9C2 心肌细胞氧化应激损伤模 型。将H9C2 细胞随机分为6 组：正常组、溶剂组、模型组及熊果酸高、中、低剂量（10、5、2.5 μmol·L-1） 组。采用CCK-8 法检测细胞存活率;EdU 法检测细胞增殖能力;TBA 法检测丙二醛（MDA）脂质氧化水平; WST-8 法检测超氧化物歧化酶（SOD）活性;Western Blot 法检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ比值及p62 的表达水 平。结果与正常组比较,模型组细胞的存活率及EdU 阳性细胞（红色荧光）百分比均明显降低（P＜0.05）;细 胞内MDA 脂质氧化水平明显升高（P＜0.05）,SOD 活性明显降低（P＜0.05）;LC3-Ⅱ/Ⅰ蛋白表达比值明显上调 （P＜0.05）,p62 蛋白表达明显下调（P＜0.05）。与模型组比较,熊果酸高、中、低剂量均能明显提高H9C2 的 细胞存活率及EdU 阳性细胞百分比（P＜0.05）;降低MDA 水平（P＜0.05）,提高SOD 活性（P＜0.05）;上调 LC3-Ⅱ/Ⅰ蛋白表达比值（P＜0.05）,下调p62 蛋白表达水平（P＜0.05）。结论熊果酸对H2O2 诱导的H9C2 大 鼠心肌细胞氧化应激损伤具有明显保护作用,可能与其促进细胞自噬有关。