中麻黄基因组DNA不同提取方法的比较

目的:比较不同DNA提取方法,选择最适于中麻黄基因组的方法.方法:采用改良CTAB,SDS法、试剂盒法提取中麻黄基因组DNA;用琼脂糖凝胶电泳法和紫外分光光度法检测所得总DNA的得率和纯度,并进行ISSR-PCR扩增检测.结果:3种方法均可从新鲜中麻黄中提取出产量较高的基因组DNA,但其中改良CTAB法提取的总DNA纯度高,质量好,扩增产物的电泳条带也较明显;SDS法和试剂盒法提取的总DNA质量差,不适用于下游分子生物学实验.结论:改良十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法为中麻黄基因组DNA提取的最佳方法,该方法提取的基因组DNA适用于中麻黄基因组PCR扩增和其他分子生物学研究.     

不同栽培品种橘皮中主要活性成分的动态积累

目的：利用不同方法对白及基因组DNA进行提取,比较提取质量的差异,找到一种最适于白及基因组的DNA提取方法,以满足白及DNA条形码研究的需要。方法：采用十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）法、十二烷基硫酸钠（SDS）法、碱裂解法和经本文改良的CTAB法提取白及叶片基因组DNA,利用琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法及PCR扩增效果检测所提DNA的质量。结果：CTAB法、SDS法和改良CTAB法均能从白及中提取到基因组DNA,而碱裂解法几乎提取不到。其中改良CTAB法提取的DNA纯度和完整度均高于其他方法,PCR扩增效率达到100 %,且扩增条带明亮清晰。结论：经本文改良的CTAB法是提取白及基因组DNA的最佳方法,该方法提取的基因组DNA适用于DNA条形码研究。     

中草药干品和鲜品基因组总DNA提取及质量比较研究

目的 探讨中草药干品和鲜品总DNA的提取方法,并比较干、鲜品总DNA质量之间的差别,为后续研究奠定基础.方法 分别采用SDS法和改良的CTAB法提取6种中草药干品和鲜品总DNA,并对其进行核酸含量测定、电泳检测和酶切反应检测. 结果改良CTAB法提取的DNA质量要高于SDS法,在干品和鲜品样品间,干品提取的DNA质量要高于鲜品.利用CTAB法提取鲜品和干品的各6种DNA样品,进行酶切反应得到了清晰的酶切条带.结论 改良的CTAB法能够获得高质量的中草药总DNA,且该方法得到的干品DNA比鲜品DNA质量更高,酶切验证二者都可以用于进一步的实验分析.     

破布木果基因组DNA不同提取方法比较研究

目的采用不同方法对维药破布木果基因组DNA进行提取,为破布木果基因组DNA的研究提供参考。方法采用改良CTAB(十六烷基三乙基溴化铵)法和改良SDS(十二烷基磺酸钠)法提取破布木果基因组DNA,并采用分光光度法和琼脂糖凝胶电泳技术检测提取DNA的纯度和浓度。结果分光光度法检测结果表明,用改良CTAB法提取的基因组DNA纯度优于改良SDS法,无蛋白质和RNA污染。琼脂糖凝胶电泳结果表明,2种方法提取得到的基因组DNA电泳图谱均有明显的主带出现,但改良SDS法提取的基因组DNA降解较多。结论改良CTAB法可以提取相对较高质量的破布木果基因组DNA。     

中药DNA条形码鉴定中的DNA提取方法研究

目的：建立一种直接从药材中提取DNA的方法以满足中药材DNA条形码研究的需要。方法: 以麦冬药材为实验对象,对比5种常用植物DNA提取方法,筛选出最优方法后,对不同部位入药的10种中药材进行DNA提取,采用琼脂糖凝胶电泳及PCR扩增效果进行检测。结果：改良的CTAB法较适合药材DNA提取,虽然所有样品DNA都出现降解,但基于ITS2序列引物PCR扩增成功率为90%。结论：通过增加药材的预处理、核分离液等步骤,并改良CTAB浓度等措施,CTAB法能够用于上述不同药用部位入药的9种药材DNA提取,可以为中药DNA条形码鉴定中的DNA提取提供参考。     

哈蟆油药材基因组DNA提取方法的比较

目的:建立一种适合于哈蟆油药材基因组DNA的提取方法,为该药材的后续分子鉴定奠定基础。方法:采用十二烷基硫酸钠(SDS)法,改良SDS法,Chelex-100法,异硫酸氰胍(Gu SCN)法,试剂盒法及改良试剂盒法提取哈蟆油基因组DNA,利用琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法及细胞色素C氧化酶Ⅰ(COⅠ)序列的引物聚合酶链式反应(PCR)扩增对DNA产量及质量进行检测。结果:Chelex-100法,改良SDS法,Gu SCN法及改良试剂盒法均能从哈蟆油药材中提取得到基因组DNA,SDS法和试剂盒法提取不到。其中改良SDS法得到的DNA质量良好,得率高,但操作繁琐;改良试剂盒方法得到的DNA质量较好,但得率低,成本高;Chelex-100法操作简单快速、得率高,但得到的DNA质量较差;Gu SCN法提取的DNA含有较多杂质,会抑制PCR反应。结论:Chelex-100法、改良SDS法及改良试剂盒法均可得到满足PCR扩增要求的DNA,实践中可根据条件选择适宜方法来提取哈蟆油基因组DNA。     

药用植物马齿苋RNA提取方法的研究

目的 探讨不同RNA提取方法对马齿苋DNA质量的影响.方法 对提取的RNA进行紫外光谱分析、总RNA电泳及RT-PCR分析.结果 不同方法提取的RNA质量及产率存在显著差异.结论 结果表明改良TRIZOL试剂法较好.     

忍冬干叶基因组DNA提取方法的研究

目的从变色硅胶干燥的忍冬叶片中提取高质量的基因组DNA.方法分别采用常规CTAB法与改良CTAB法提取干叶的DNA,通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法、酶切检测其质量,并与鲜叶的提取效果比较.结果改良CTAB法所得DNA优于常规CTAB法,电泳条带清晰,完整性好,纯度高,能被EcoR I完全酶切.从变色硅胶干燥的忍冬叶片中提取的DNA质量与鲜叶无明显差异,且产率更高.结论改良CTAB法适合忍冬干叶基因组DNA的提取.     

山茱萸药材鲜品与干品总DNA提取方法比较

目的:探讨山茱萸药材鲜品与干品总DNA的提取方法,比较鲜、干品总DNA质量,为以后的研究奠定基础。方法:采用改良CTAB法A,B和经典SDS法,提取山茱萸药材鲜品和干品总DNA,对其进行DNA含量测定和电泳检测。结果:改良CTAB法A提取山茱萸药材鲜品与干品总DNA的OD260/OD280比值在1.7~1.9之间,电泳条带清晰,无拖尾,对山茱萸药材鲜品与干品DNA进行综合比较,结果显示鲜品获得的DNA质量高于干品。结论:改良的CTAB法A是分离高质量完整DNA的方法简便、快速,该方法得到的DNA适合下一步分子生物学研究。     

DNA提取4种中药材方法的筛选

目的筛选龙胆Gentiana scabra Bunge、锁阳Cynomorium songaricum Rupr、天花粉Trichosanthes kirilowii Maxim.、菟丝子Cuscuta chinensis Lam.的DNA提取方法。方法通过试剂盒法、SDS法、高盐低p H法、CTAB法以及改良PVP法,对4种中药材DNA进行提取。紫外分光光度、琼脂糖凝胶电泳和PCR扩增进行检测,SPSS20.0软件进行统计学分析。结果改良PVP法所得4种中药材DNA的得率均较高。SDS法和改良PVP法提取的DNA条带较清晰,高盐低p H法提取者呈弥散状态,试剂盒法和CTAB法提取者几乎看不到条带。试剂盒法和改良PVP法提取的DNA可完全扩增ITS2和psb A-trn H序列,而其他3种方法未能完全扩增。结论改良PVP法高效简单,最适合提取这4种中药材DNA。     

忍冬干叶基因组DNA提取方法的研究

目的：从变色硅胶干燥的忍冬叶片中提取高质量的基因组DNA。方法：分别采用常规CTAB法与改良CTAB法提取干叶的DNA，通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法、酶切检测其质量，并与鲜叶的提取效果比较。结果：改良CTAB法所得DNA优于常规CTAB法，电泳条带清晰，完整性好，纯度高，能被EcoRⅠ完全酶切。从变色硅胶干燥的忍冬叶片中提取的DNA质量与鲜叶无明显差异，且产率更高。结论：改良CTAB法适合忍冬干叶基因组DNA的提取。     

沉香DNA的提取及其ITS2-PCR体系的优化

目的:建立沉香的总DNA提取方法及r DNA第二内转录间隔区序列(ITS2)聚合酶链式反应(PCR)扩增体系。方法:分别采用改良的CTAB法、改良的CTAB法联合DNA提取试剂盒法及DNA提取试剂盒法提取沉香总DNA,利用通用引物ITS2P1/ITS2P2扩增r DNA ITS2目的片段,通过正交试验优选沉香的PCR扩增条件并对目的片段进行测序。结果:改良的CTAB法联合DNA提取试剂盒法提取总DNA的A260 nm/A280 nm1.79,质量浓度350 mg·L-1,PCR扩增目的片段产率最高。不同因素水平对沉香ITS2-PCR反应的影响顺序为模板DNA引物Taq DNA聚合酶d NTP。最佳反应体系为20μL体系,DNA模板40 ng,引物0.2 mmol·L-1,d NTP 0.5 mmol·L-1,Taq DNA聚合酶1.5 U。测序获得的目前片段长度230 bp,与Gen Bank中瑞香科沉香属白木香序列相似性100%。结论:CTAB法联合DNA试剂盒法可简单、快速获得高质量沉香总DNA,正交试验可快速获得ITS2目的片段,为沉香的分子鉴定和系统发育分析提供参考。     

连翘干叶片和鲜叶片DNA提取方法和质量比较研究

目的探讨三种DNA提取方法对连翘干叶片和鲜叶片DNA质量的影响,比较干叶片和鲜叶片DNA提取质量。方法采用常规CTAB法、高盐低pH法和新改良CTAB法提取连翘干叶片和鲜叶片DNA,进行A260/A280测定、琼脂糖凝胶电泳检测和RAPD扩增分析。结果新改良CTAB法提取的连翘干叶片和鲜叶片DNA的A260/A280比值在1.8～2.0之间,电泳条带清晰无拖尾,选用随机引物（S7）对上述DNA样品进行RAPD扩增,可获得具有一定多态性扩增谱带。对连翘干叶片和鲜叶片DNA样品综合比较,结果显示由干叶片获得的DNA质量高于鲜叶片。结论新改良CTAB法是一种分离高质量完整DNA的简便、快速方法,该方法得到的干叶片DNA质量较鲜叶片更适合下一步分子生物学研究。     

鹿骨类药材DNA提取方法研究

目的:建立一种简便、实用、高效的鹿骨DNA提取方法,为动物骨类药材真伪鉴别奠定基础.方法:取净制后的梅花鹿骨、马鹿骨、牛骨、狗骨、猪骨样品,经干燥、研磨粉碎后,对脱钙时间(24,48,72h),脱钙温度(4,25,37,56,70℃)及不同提取方法(改良SDS提取法、试剂盒提取法)进行考察,分析比较不同提取方法获得的DNA质量.结果:实验证明,脱钙过程有助于骨细胞的裂解,在较宽泛的脱钙时间及脱钙温度下,均可从骨细胞中获得DNA,但提取量稍有差异.结论:骨粉经0.5mol·L(-1)EDTA脱钙液4℃脱钙24h,加入裂解液后56℃水浴1h,即可从鹿骨(约0.1g)中提取到高质量DNA,用于PCR扩增.     

半夏基因组DNA的提取及鉴定

目的探讨不同DNA提取方法对半夏DNA质量及RAPD-PCR标记结果的影响。方法对用不同方法提取的DNA进行电泳、紫外吸收A260/A280和RAPD-PCR分析。结果不同方法提取的DNA质量和产率差异不显著,对RAPD结果无影响。结论半夏在DNA提取前加入氯仿对材料预处理,可获得较高质量的DNA进行PCR扩增。     

荭草DNA提取方法实验研究

目的利用不同方法对荭草DNA提取,比较提取质量的差异,为研究药材的遗传多样性、种类鉴定和基因指纹图谱的构建等提供优质基础。方法采用改进的CTAB法和SDS法提取荭草叶片基因组DNA,利用琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法测定样品OD260/OD280的比值,检测所提DNA的纯度和质量。结果采用CTAB法提取的荭草基因组DNA样品的纯度和浓度均高于SDS法,其DNA的OD260/OD280值为1.801～1.993,CTAB法所提的DNA泳带分布较集中,无拖尾现象,其DNA浓度能够满足RAPD、SSR/ISSR扩增模板的需求。结论改良CTAB法是提取荭草基因组DNA的最佳方法。     

藏药吉子恩保(甘西鼠尾草)DNA提取方法比较

目的:建立藏药吉子恩保(甘西鼠尾草)DNA的提取方法,为进一步开展分子生药学研究奠定基础。方法:比较SDS法和改良CTAB法,运用紫外分光光度计和电泳分析方法测定所得DNA样品的纯度和浓度。结果与结论:两种方法中改良CTAB法所得的DNA质量较高。     

紫花白及基因组DNA提取方法的比较

目的比较紫花白及基因组DNA提取方法。方法选择改良CTAB法、TIANGEN植物基因组DNA提取试剂盒、ZOMANBIO植物基因组DNA提取试剂盒、SDS法提取紫花白及叶片基因组DNA,通过UV光谱法、琼脂糖凝胶电泳检测DNA质量和完整性,利用SPSS20.0软件对DNA得量差异性作统计分析,并进行SSR及ITS2引物扩增分析。结果改良CTAB法所提取的DNA质量明显较高,完整性良好,能满足SSR-PCR要求,并可有效扩增;SDS法所得DNA则不能扩增出ITS2序列。结论改良CTAB法更适合提取紫花白及基因组DNA。     

开口箭DNA提取方法比较

目的:筛选从开口箭不同类型材料中提取DNA的最佳方法。方法:采用十二烷基磺酸钠(SDS)法,改良SDS法,十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法和改良CTAB法4种方法分别对开口箭的新鲜茎、硅胶干燥茎、烘干茎、新鲜叶片和硅胶干燥叶片这5类材料进行DNA提取。从DNA的完整性、纯度、得率等方面对DNA进行比较,确定开口箭不同材料DNA提取的最适方法。结果:采用改良CTAB法提取的硅胶干燥茎和叶片的A_{260 nm}/A_{280 nm}均在1.8~1.9,纯度最高,且完整性较高,提取效果较其他方法更佳;其余材料则均有不同程度的污染, 新鲜叶片的A_{260 nm}/A_{280 nm}普遍很低。结论:从硅胶干燥叶片和茎的开口箭材料中更容易提取出纯度高、完整度好的DNA。改良CTAB法是适合开口箭DNA提取的有效方法,通过改良CTAB法从硅胶干燥叶片和茎的开口箭中更容易提取纯度高、完整度好的基因组DNA。     

石斛总DNA的提取及鉴定

目的 :探讨不同DNA提取方法对石斛属DNA质量及分子标记结果的影响。方法 :对提取的DNA进行紫外光谱分析、总DNA电泳及RAPD分析。结果 :不同方法提取的DNA质量及产率存在显著差异 ,对RAPD结果影响很大。结论 :石斛属植物在DNA提取前加入无CTAB缓冲液抽提多糖等杂质 ,可获得较高质量的DNA。