血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1在肾脏中的研究现状及展望

血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1（SGK1）是Webster等在1993年用血清和糖皮质激素刺激大鼠乳房肿瘤细胞,筛选其表达产物后发现的。当细胞受血清或糖皮质激素刺激时,SGK1基因在30min内表达迅速升高5～10倍,故命名为血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶。它是一种与蛋白激酶B（PKB／AKT）等第二信使蛋白具有极高的同源性的丝氨酸和／或苏氨酸蛋白激酶。     

血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1对大鼠肾动脉平滑肌细胞增殖的作用及机制

目的探讨血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1（SGK1）对大鼠。肾动脉平滑肌细胞增殖的作用及其可能的分子学机制。方法组织块贴壁法原代培养的大鼠平滑肌细胞（VSMCs）,将带有SGK1显性激活型突变体质粒（pIRES2-EGFP^-S422D SGK1 mutant SD）转染VSMCs,采用细胞计数,细胞流式技术、MTT比色法分析转染后平滑肌细胞增殖及细胞周期情况,应用Western Blot方法检测SGK1对细胞周期调控蛋白p27^kip1、p21^cip1、和增殖细胞核抗原（PCNA）的作用。结果SGK1能刺激平滑肌细胞增殖,使滞于G0／G1期细胞减少,周期调控蛋白p27^kip1、p21^cip1表达下降,PCNA表达升高。结论SGK1可能通过调节PCNA,p27^kip1和p21^cip1蛋白,参与细胞周期的调控,促进平滑肌细胞增殖。     

血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶在糖尿病肾病小鼠中的表达及意义

目的 探讨血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶(SGK)在糖尿病肾病(DN)早期病变中的表达及意义。方法 采用链脲佐菌素(STZ)单次腹腔注射诱导小鼠DN模型,设DN组和正常对照组(NG)。在DN模型4周时,检测肾小球细胞外基质(ECM)、肾重指数、24 h尿蛋白量和Ccr;RT-PCR检测DN病变早期肾皮质SGK 1、SGK 2、SGK 3及Ⅰ型胶原α2(Col Ⅰα2)、纤连蛋白(FN)和转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA表达;Western印迹检测SGK1蛋白的表达。结果 与NG组相比,DN组小鼠肾重／体重、24 h尿蛋白量,ECM相对面积,Ccr均显著增加。肾皮质Col Ⅰ α2、FN、TGF-β1 mRNA表达显著上调,同时SGK1 mRNA、SGK2 mRNA、SGK3 mRNA及SGK1蛋白表达显著上调。而且SGK1、SGK2、SGK3的mRNA表达与Col Ⅰ α2,FN,TGF-βl mRNA表达均有显著正相关关系。结论 SGK在DN肾脏中有较高表达,伴随有ECM积聚,与Col Ⅰα2,FN,TGF-β1 mRNA表达有显著正相关,它可能在DN早期病变中起重要作用。     

血清和糖皮质激素诱导蛋白激酶1在糖尿病大鼠肾脏的表达及氟伐他汀的调节作用

血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶（SGK）是丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶家族的一个新成员。Lang等发现TGF-β1和体外高糖明显影响纤维母细胞中hSGK的转录水平，进一步提出hSGK是TGF-β1发挥作用的下游靶分子。现已证实，CTGF是TGF-β1介导的肾间质纤维化的重要下游效应因子。经检索，有关CTGF与SGK1的关系未见报道。本研究旨在探讨SGK1介导的信号转导通路在糖尿病肾病发生、发展中的作用．并观察氟伐他汀对其的调节作用。     

高糖对人肾小管上皮细胞和系膜细胞表达血清和糖皮质激素诱导蛋白激酶1的影响

目的研究高糖作用下人近端肾小管上皮细胞(HKC)和系膜细胞(HMC)中血清和糖皮质激素诱导蛋白激酶1(SGK1)的表达,并初步探讨SGK1在介导高糖致肾细胞(HKC和HMC)过度合成细胞外基质(ECM)中的作用。方法将HKC和HMC细胞分别分为正常对照组(NG组,5.5mmol/LD-葡萄糖)、高糖组(HG组,25mmol/LD-葡萄糖)和渗透浓度对照组(MG组,19.5mmol/L甘露醇和5.5mmol/LD-葡萄糖)。SGK1mRNA水平及蛋白水平的检测分别采用RT-PCR方法和Western印迹方法。培养液中纤连蛋白(FN)水平检测采用ELISA方法。结果HKC和HMC中均存在SGK1基因和蛋白的表达。HMC中SGK1的表达明显高于HKC(P<0.01)。高糖刺激8h后,两种细胞SGK1表达均明显升高(P<0.01);同时,甘露醇也上调HKC和HMCSGK1的表达(P<0.01),但其作用明显弱于高糖(P<0.05)。FN在高糖环境下表达上调,且高峰出现时间滞后于SGK1。结论高糖能促进近端肾小管上皮细胞和系膜细胞SGK1的表达,并可能通过SGK1介导的信号转导途径在糖尿病肾病ECM积聚中发挥重要作用。     

缺氧诱导因子在大鼠肾缺血再灌注损伤中的表达和意义

目的：探讨缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）和氧自由基在肾脏缺血再灌注损伤中的表达情况。方法：SD大鼠随机分为假手术组、缺血组、缺血再灌注组、RNAi阴性对照缺血组及HIF-1αRNAi预处理后的缺血组和预处理后缺血再灌注组，利用RT—PCR和western blot技术检测各组大鼠肾脏中HIF-1α和bcl-2的表达情况。检测细胞超氧化物歧化酶（SOD）的活性和丙二醛（MDA）的含量，间接反应氧自由基的生成量。测定各组大鼠肾功能。取各组大鼠肾组织切片并做HE染色。结果：缺血组HIF-1α的表达在5组中最高（P〈0．05）。与缺血组对比，缺血再灌注后HIF-1α和bcl-2的表达降低，同时氧自由基的生成增加（P〈0．05），肾功能明显降低，但经HIF-1αRNAi预处理后上述指标与假手术组相比改变甚微，肾功能得到明显改善。HE染色可见缺血及再灌注组排列紊乱，胞浆萎缩，纹状缘消失，细胞间质增宽，经HIF-1αsiRNA预处理后，接近假手术组水平。结论：HIF-1α的过度表达可能导致氧自由基生成增加，肾功能受损，从而加重缺血再灌注肾脏的损伤，而HIF-1αRNAi可以减轻并改善这一状况，其机制可能与上调凋亡抑制基因有关。     

有丝分裂原活化蛋白激酶在妊娠期高血压疾病大鼠心脏组织中的表达及意义

目的通过检测妊娠期高血压疾病大鼠心脏组织中有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)表达水平及活性的变化,以探讨妊娠期高血压疾病心脏病理生理变化发生的机制。方法注射亚硝基左旋精氨酸甲酯(L-NAME)方法制备妊娠期高血压疾病动物模型并应用Western印迹试验及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)半定量方法分别检测15只妊娠期高血压疾病大鼠、正常妊娠大鼠、健康育龄大鼠对照组心脏组织MAPK活性及其ERK亚型的表达情况。结果妊娠期高血压疾病大鼠心脏组织MAPK活性明显高于正常妊娠组(P<0.01),而正常妊娠组心脏组织MAPK活性明显高于对照组(P<0.01)。妊娠期高血压疾病大鼠心脏组织中MAPK的蛋白及mRNA表达水平显著高于正常妊娠组(P<0.01),正常妊娠组心脏组织MAPK的蛋白、基因表达水平明显高于对照组(P<0.01)。结论在妊娠期高血压疾病大鼠心脏组织中存在MAPK活性升高以及蛋白、基因的过度表达,这可能在妊娠期高血压疾病心脏病理损伤中起着重要作用。     

细胞间黏附分子-1在自发性高血压大鼠肾损害作用的研究

目的：研究细胞间黏附分子-1（ICAM-1）在自发性高血压大鼠（SHR）肾组织的表达及其与肾损害的关系。方法：以同龄雄性正常血压大鼠（WKY）和SHR为研究对象,分别于10周龄和28周龄检测两种大鼠尾动脉压、24h尿蛋白定量、肾功能等;留取肾组织行HE染色、免疫组织化学及RT-PCR法检测ICAM-1蛋白及mRNA表达情况,并作分析。结果：与同龄WKY大鼠比较,SHR尾动脉压和24h尿蛋白定量明显增高（P〈0.05和P〈0.05）;与12周龄SHR比较,28周龄SHR尾动脉压和24h尿蛋白定量明显增加（P〈0.05和P〈0.05）。SHR组肾组织ICAM-1蛋白及mRNA表达较同龄WKY增强（P〈0.05）,28周龄SHR较10周龄SHR表达增强（P〈0.05）,ICAM-1表达与24h尿蛋白定量呈正相关（P〈0.05）。结论：SHR出现蛋白尿时,肾组织ICAM-1表达增强,炎症参与了高血压肾损害的发生。     

白介素-6在自发性高血压大鼠肾损害中的表达和意义

目的 研究白介素-6在自发性高血压大鼠肾组织的表达及其意义.方法 以同龄雄性正常血压大鼠和自发性高血压大鼠为研究对象,检测10周龄和28周龄两种大鼠尾动脉压、24 h尿蛋白定量、尿β2微球蛋白、肾功能;取肾组织作苏木精-伊红染色、免疫组织化学及反转录-聚合酶链式反应法检测白介素-6蛋白及信使核糖核酸表达情况.结果 与同龄正常血压大鼠比较,自发性高血压大鼠尾动脉压、24 h尿蛋白定量和尿β2微球蛋白明显增高,28周龄自发性高血压大鼠较10周龄明显增高.肾组织白介素-6蛋白及信使核糖核酸表达自发性高血压组较同龄正常血压大鼠增强,28周龄自发性高血压大鼠较10周龄自发性高血压大鼠增强,白介素-6表达与24 h尿蛋白定量、尿β2微球蛋白呈正相关.结论 白介素-6在自发性高血压肾组织表达增强,可能是高血压肾损害发生的重要机制之一.     

高糖通过血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1通路促进人近端肾小管上皮细胞合成纤连蛋白

目的 研究血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1(SGK1)在高糖诱导人近端肾小 管上皮细胞(HKC)产生纤连蛋白(FN)中的作用,探讨SGK1在糖尿病肾病(DN)肾小管间质纤 维化中的作用机制。方法 将带有SGK1显性激活型突变体质粒(pIRES2-EGFP-S422DSGK1 mutant, SD)和带有SGK1显性失活型突变体质粒(pIRES2-EGFP-K127NSNSGK1 mutant,KN)分别瞬时转染 HKC;同时,设空质粒(pIRES2-EGFP,FP)转染组和未转染组(NT)为对照。分别用正常糖(NG, 5.5 mnlol／L D-葡萄糖)和高糖(HG,25 mmol/L D-葡萄糖)刺激8 h后,采用RT-PCR和Western 印迹来观察SGK1和FN的mRNA及蛋白的表达。结果 正常葡萄糖环境下转染SD和KN后, HKC合成的FN mRNA和蛋白的表达没有显著性改变。高糖环境下,转染SD的HKC与其它组 比较,其SGK1mRNA表达显著性增高(P<0.01),SGK1蛋白过度活化(P<0.01),其FN mRNA和 蛋白的表达显著增加(P<0.01)。转染KN的HKC与其它高糖组HKC比较,其活化的SGK1蛋 白显著减少(P<0.01),其合成FN mRNA和蛋白亦显著减少(P<0.01)。结论 高糖诱导HKC 的FN mRNA和蛋白的表达增加是依赖于SCK1的表达与活化,提示在DN中,高糖能通过SGK1 介导的信号通路来诱导人近端肾小管上皮细胞过度合成FN,促进肾小管间质纤维化。     

SPHK1在神经母细胞瘤中的表达及其临床意义

目的 探讨鞘氨醇激酶1(SPHK1)在神经母细胞瘤中的表达及其临床意义.方法 通过免疫组织化学方法观察SPHK1在1995年1月至2009年10月我科连续收治的142例神经母细胞瘤石蜡切片的表达,分析其与神经母细胞瘤临床分期、预后等之间的关系.结果 142例神经母细胞瘤中SPHK1低表达69例,高表达73例.SPHK1的表达和神经母细胞瘤的INSS分期明显相关(P＜0.01),和生存亦明显相关(P＜0.01).结论 SPHK1在神经母细胞瘤中的表达和其临床分期及预后明显相关,可以作为神经母细胞瘤的肿瘤标记物.     

高血压及高血压前期血清尿酸水平的变化及临床意义

目的：探讨高血压及高血压前期血清尿酸水平变化及临床意义。方法选择某社区常住居民412例为研究对象。根据血压情况分为血压正常组、高血压前期组、高血压组。检测和比较3组的血清尿酸水平。结果血压正常组尿酸水平为（236.3±61.4）μmol/L,高血压前期组（292.7±73.6）mol/L,高血压组（336.2±113.7）mol/L,3组间比较 P ＜0.01。血清尿酸水平为228～280μmol/L、281～344μmol/L 和≥345μmol/L 组收缩压和舒张压水平显著高于血清尿酸为＜228μmol/L 组（P ＜0.05或＜0.01）。回顾分析显示尿酸水平≥228μmol/L 是高血压及高血压前期的危险因素。结论血清尿酸水平与高血压及高血压前期具有相关性。     

Wnt-1诱导分泌蛋白1在直肠癌中的表达及其临床意义

目的定量检测Wnt-1诱导分泌蛋白1（Wnt-1 induced secreted protein-1，WISP-1）基因在人直肠癌及远端正常直肠组织中的表达，为进一步研究该基因功能提供线索。方法提取人直肠癌及癌旁正常直肠组织总RNA，采用实时RT—PCR分析WISP-1的表达，再对PCR结果进行分析。结果WISP-1 mRNA在直肠癌组织中的表达水平显著高于癌旁正常直肠组织，差异有统计学意义（P〈0．05）。WISP-1的表达与肿瘤的分化程度、Dukes分期及淋巴结转移等因素有相关性。结论WISP-1基因的异常表达可能与直肠癌的发生、发展有关，有望成为直肠癌诊断预后的标志物和治疗的新靶点。     

生物力学因素在激素性股骨头坏死中对软骨细胞的作用

目的建立大鼠激素性股骨头坏死正常负重和超负重模型,探究力学因素在激素性股骨头坏死中对于软骨细胞的作用。方法4月龄健康Wistar大鼠随机分成实验组与对照组。臀肌注射地塞米松磷酸钠(20mg/kg),每周1次,共计8w。实验组,置于1km/h跑步机中,强迫动物跑动,形成股骨头坏死超负重模型;对照组,生理状态下正常负重。分别于2、4、6、8w处死大鼠,取右侧股骨头标本,行免疫组织化学法Bcl-2和MMP-1染色,比较不同组之间的累计光密度(IOD)值。取左侧股骨头行组织病理学检查。结果实验组Bcl-2和MMP-1累计光密度(IOD)与对照组比较,第4周起有明显统计学差异(P0.05)。实验组Bcl-2和MMP-1表达随激素注射时间增加有统计学意义(P0.05),q检验显示实验组Bcl-2和MMP-1表达从4w开始两两之间有统计学意义,8w时表达最多(P0.05)。实验组8w时病理学呈股骨头坏死表现。结论力学因素通过影响Bcl-2和MMP-1的生成,调节着软骨细胞的凋亡,促进软骨组织的改建。     

肾透明细胞癌组织中T细胞淋巴瘤侵袭和转移诱导蛋白1表达及其临床意义

目的 探讨肾透明细胞癌组织中T细胞淋巴瘤侵袭和转移诱导蛋白l( T-lymphomainvasion and metastasis 1,Tiam1)的表达与临床病理特征及预后的关系. 方法 选取原发性肾透明细胞癌组织标本107例.男78例,女29例.年龄32～87岁,平均59岁.肿瘤大小按手术切除标本测量.肿瘤最大径1.4～7.6 cm,平均4.5 cm.≤2.5 cm者23例,2.6 ～5.0 cm者65例,＞5.0 cm者19例.有淋巴结转移者46例,有血管浸润者32例.Fuhrman分级:Ⅰ级22例,Ⅱ级41例,Ⅲ级27例,Ⅳ级17例.2002 AJCC TNM分期:T129例,T244例,T3 16例,T4 18例.20例正常肾组织标本作为对照组.免疫组织化学方法检测标本中Tiam1蛋白表达,结合临床病理学资料进行分析.随访5～8年,生存分析采用Kaplan-Meier法,组间差异采用Log-rank检验. 结果 20例正常肾组织中Tiam1蛋白阳性表达率为15.0％ (3/20),肿瘤组织中Tiam1蛋白阳性表达率为73.8％ (79/107),组间差异有统计学意义(P＜0.01);Ⅰ～Ⅱ级与Ⅲ～Ⅳ级肾癌组织中Tiam1蛋白高表达阳性率分别为47.6％( 30/63)、72.7％( 32/44),T1～T2期与T3 ～T4期肾癌组织分别为49.3％(36/73)、76.5％ (26/34),无淋巴结转移组与有淋巴结转移组分别为47.5％ (29/61)、71.7％ (33/46),无血管浸润组与有血管浸润组分别为48.0％(36/75)、81.3％(26/32),组间差异均有统计学意义(P＜0.01).Tiam1蛋白高表达组与低表达组患者术后5年生存率分别为46.8％(29/62)、84.4％( 38/45),组间差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 肾癌组织中Tiam1蛋白阳性表达率明显高于正常组织,Tiam1蛋白高表达与肾癌的分期、分级、淋巴结转移、血管浸润有关,与患者性别、年龄、肿瘤大小无相关性.检测Tiam1蛋白有助于肾癌的诊断及预后评估.     

白细胞介素-1受体相关激酶-4在血吸虫病门脉高压小鼠肠系膜静脉的表达变化及其意义

目的 探讨血吸虫病门脉高压小鼠肠系膜静脉组织白细胞介素-1受体相关激酶-4(IRAK-4)的表达变化及意义.方法 将55只雄性昆明小鼠随机分为对照组(n=15)和感染组(n=40).感染组采用腹部敷贴法感染日本血吸虫尾蚴,分别于感染后12、20周随机分为12周组(n=20)、20周组(n=20);采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测肠系膜静脉IRAK-4 mRNA表达与肿瘤坏死因子(TNF)-α mRNA表达,Western blot法检测肠系膜静脉IRAK-4蛋白表达.结果 感染组小鼠肠系膜静脉IRAK-4 mRNA表达强度值(12周组0.734±0.081,20周组0.682±0.069)和IRAK-4蛋白表达水平(12周组:1034.52±89.72,20周组:989.56±69.35)较对照组(IRAK-4mRNA表达强度值0.163±0.031,IRAK-4蛋白表达水平667.45±72.22)明显升高(P＜0.01,P＜0.05);20周组IRAK-4 mRNA和蛋白表达与12周组比较差异无统计学意义(P＞0.05);各组IRAK-4mRNA的表达与其效应分子TNF-α mRNA的表达呈显著正相关(r=5.56,P＜0.01).结论 门静脉高压症小鼠内脏血管IRAK-4在转录和翻译水平的表达升高,并激活下游炎性反应,是参与门静脉高压性血管病变的重要因素.     

内皮素反义基因治疗门静脉高压症的研究

目的研究内皮素-1反义寡核苷酸（ET1-ASON）在内毒素（LPS）致门静脉高压中的作用.方法应用ET1-ASON预处理后将LPS以1 mg/kg体重腹腔注射大鼠,以正义、错义ET1-ASON和生理盐水作为对照,4 h后检测大鼠PVF、PVP、PVR和IVCP;应用放射免疫法、RT-PCR检测各组门静脉血和肝脏的ET1表达情况.结果ET1-ASON处理组大鼠门静脉血浆和肝脏组织ET1表达减低;PVR和PVP较对照组明显降低,PVF无明显改变.结论ET1-ASON在内毒素致门脉高压中主要通过降低PVR起作用.     

急性排斥反应时移植肾组织中程序性死亡配体-1及其受体的表达

目的探讨急性排斥反应时移植肾组织中程序性死亡配体-1(PD-L1)及程序性死亡-1(PD-1)的表达及其与肾小管间质病理损害程度的关系。方法当肾移植患者发生急性排斥反应并经病理检查确认时,采取移植肾组织,以免疫组化和原位杂交染色法,观察肾组织中PD-L1和PD-1的表达,分析PD-L1阳性强度与肾小管-间质PD-1阳性细胞数、肾小管间质病理损害程度的关系。以正常肾组织为对照。结果急性排斥反应时,移植肾组织中的PD-L1及PD-1的表达较正常组织增多、增强(P<0.01);肾小管PD-L1阳性强度与肾间质PD-1阳性细胞数呈正相关,与肾小管间质病理损害程度呈负相关。结论急性排斥反应时,PD-L1及PD-1的表达增强,它们可能在肾小管间质病理损害中起重要作用。