DPP IV基因影响卵巢癌细胞生物学行为的机制探讨

目的 探讨DPP IV基因高表达对卵巢癌细胞系恶性行为的影响及其机制.方法 应用体外增殖能力、黏附和侵袭试验检验HO-8910PM、HOPcDNA和HODPP IV细胞恶性行为差异;利用流式细胞技术、吖啶橙染色、DNA ladder、透射电镜以及Western blot检测Fas/Bcl-2基因蛋白表达水平,探讨HO-8910PM、HOPcDNA和HODPP IV细胞中凋亡状况.结果 DPP IV基因高表达可显著抑制卵巢癌细胞的增殖、黏附和侵袭能力;同时HODPP IV细胞的凋亡率、Fas基因蛋白表达水平明显高于HOPcDNA和HO-8910PM细胞(P<0.05);HO-8910PM和HOPcDNA细胞的Bcl-2基因蛋白表达水平明显高于HODPP IV细胞(p<0.05).结论 DPP IV基因高表达可抑制卵巢癌细胞的恶性行为;凋亡可能是DPP IV基因发挥生物学作用机制之一.     

野生型DPP Ⅳ真核表达质粒的构建和鉴定

目的构建野生型DPP Ⅳ真核表达质粒。方法将野生型DPP Ⅳ基因定向克隆到真核表达质粒pcDNA3.1(+),构建成重组质粒pcDNA3 DPP Ⅳ;然后用限制性内切酶消化和DNA序列测定鉴定。结果经酶切和DNA序列测定鉴定证实重组质粒构建正确。结论真核表达质粒pcDNA3DPP Ⅳ构建成功,为进一步研究DPP Ⅳ基因在卵巢癌细胞中的表达和生物学作用奠定了基础。     

右美托咪定对卵巢癌细胞相关生物学行为的影响

目的探讨右美托咪定对卵巢癌细胞相关生物学行为的影响。方法通过CCK-8检测右美托咪定对卵巢癌SKOV3细胞活性的影响;通过流式细胞术FITC-Annexin V/PI双染色验证右美托咪定能否诱导SKOV3卵巢癌细胞凋亡;划痕实验检测右美托咪定对SKOV3卵巢癌细胞迁移能力的影响;Transwell侵袭实验检测右美托咪定对SKOV3卵巢癌细胞侵袭能力的影响。结果右美托咪定能降低SKOV3卵巢癌细胞的活性,且呈剂量依赖性和时间依赖性;右美托咪定能诱导SKOV3卵巢癌细胞凋亡,当右美托咪定浓度达到10、100 nmol/L,凋亡率分别为8.21%和8.30%;右美托咪定能减弱SKOV3卵巢癌细胞的迁移能力和侵袭能力。结论右美托咪定能通过诱导细胞凋亡抑制SKOV3卵巢癌细胞的活性,减弱细胞的迁移和侵袭能力。     

R-1579类似物的合成及其二肽基肽酶Ⅳ(DPP-Ⅳ)抑制活性

目的设计合成R-1579的类似物,并对其体外DPPⅣ-抑制活性进行评价。方法以取代苯甲醛和丙二腈为原料经缩合、与脒环合、氧化及催化氢化等反应制得目标化合物;选择其中部分化合物测试其DPPⅣ-抑制活性。结果与结论共制得18个目标化合物,经过1H-NMR、MS确证结构,其中化合物8h、10 c及10d的活性优于阳性对照R-1579。     

川楝素对卵巢癌细胞恶性生物学行为的影响

目的 研究川楝素对体外卵巢癌细胞恶性生物学行为的作用及其可能的作用机制.方法 体外培养人卵巢癌SKOV3细胞,分为低、中、高剂量实验组和对照组,分别以50,60,70μmol·L-1川楝素与等量生理盐水干预,分别干预24,48和72 h.用活细胞计数(CCK-8)法检测人卵巢癌SKOV3细胞增殖抑制情况;用细胞划痕实验...     

siRNA沉默卵巢癌CXCR4基因对卵巢癌腹腔转移的影响

目的研究应用基因靶向治疗对卵巢癌腹腔转移的实验疗效观察。方法制作好的卵巢癌大鼠模型60只,采用随机数字表法随机分为实验组和对照组,实验组应用基因靶向治疗,对照组采用阴性治疗,siRNA沉默卵巢癌CXCR4基因后,观察CXCR4蛋白的表达情况,对卵巢癌细胞增殖的影响,观察应用基因靶向治疗后腹腔转移情况,评价大鼠生存情况。结果实验组在治疗后腹水中的CXCR4显著减少（P〈0．05）;对照组治疗后腹水中的CXCR4量显著性增加（P〈0．05）;实验组与对照组相比,治疗前腹水中CXCR4,差异无统计学意义（P〉0．05）;治疗后差异有统计学意义（P〈0．05）。实验组腹水抽出量与实验组相比,明显减少（P〈0．05）。结论应用基因靶向治疗方法siRNA沉默卵巢癌CXCR4基因对卵巢癌腹腔转移,具有较好的疗效,临床预后较好。     

MIF-173G＞C基因多态性与卵巢癌易感性的关系

目的 研究巨噬细胞移动抑制因子(MIF)基因-173G＞C多态性与江苏人群卵巢癌遗传易感性的关系.方法 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术,检测MIF-173G＞C多态性在130例卵巢癌患者和145例年龄相匹配正常对照者的频率和分布,比较不同基因型携带者患卵巢癌的危险性;通过分层分析探讨年龄、初潮年龄、产次、流产数及绝经状态对罹患卵巢癌的影响.结果 与携带MIF-173GG基因型相比,携带MIF-173GC/CC基因型者罹患卵巢癌的风险降低了43.2％(OR=0.568,95％CI=0.323～0.997).分层分析结果显示,产次0～1次、流产≥2次及已绝经的女性携带-173GC/CC基因型较携带GG基因型者罹患卵巢癌的风险降低尤为显著(产次0～1:OR=0.392,95％CI=0.179～0.860;流产≥2次:OR=0.394,95％CI=0.166～0.934;已绝经:OR=0.436,95％CI=0.221～0.861).结论 MIF-173G＞C多态性可能与江苏人群卵巢癌的发生有关.     

地塞米松对卵巢癌SKOV-3细胞的影响

目的研究地塞米松对体外培养条件下的卵巢癌细胞SKOV-3细胞增殖的影响及诱导其凋亡的情况。方法取对数生长期的SKOV-3细胞（细胞数为5×10^4／mL）分别接种于不同细胞培养板上,试验组每孔加入200μL不同浓度的地塞米松,空白对照组加入等体积PRMI-1640培养液孵育,采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测吸光度（A490值）并计算SKOV-3细胞增殖抑制率;PI染色细胞后上流式细胞仪检测各个时间点的细胞凋亡率。结果MTT法检测结果显示,SKOV-3细胞增殖抑制率随着地塞米松浓度和作用时间的增加均明显增大,以40μmol／L浓度的试验组培养48h的抑制率最高,达（45．25±3．12）％。流式细胞仪检测显示。地塞米松处理后可引起G0／G1期细胞明显增加（P〈0．05）,且SKOV-3细胞凋亡率随着地塞米松浓度增加有升高趋势。结论地塞米松能诱导卵巢癌SKOV-3细胞凋亡。     

Reg Ⅳ基因对5-FU干预结直肠癌LoVo细胞增殖、凋亡的影响

目的 观察Reg Ⅳ基因对5-FU干预结直肠癌LoVo细胞增殖、凋亡的影响.方法 构建重组质粒pcDNA3.1-RegⅣ并转染LoVo细胞,RT-PCR和细胞免疫组化检测转染前后细胞中Reg Ⅳ基因的mRNA和蛋白表达.终浓度80 μmol/L的5-FU干预细胞48 h后,MTT检测细胞的增殖活性.平板克隆实验观察细胞的克隆形成能力.FCM检测细胞凋亡.结果 LoVo细胞不表达Reg Ⅳ基因,转染后的LoVo/RegⅣ细胞高表达RegⅣ.5-FU干预后,未转染组(LoVo)和空转质粒组(LoVo/空载)细胞增殖活性、克隆形成能力较RegⅣ转染组(LoVo/RegⅣ)明显降低(P<0.05),细胞凋亡率较RegⅣ转染组明显升高(P<0.05).结论 RegⅣ基因表达可能降低5-FU抑制LoVo细胞的增殖活性及克隆形成能力,并能抑制5-FU诱导LoVo细胞凋亡的作用.Reg Ⅳ基因可能是患者对5-FU化疗产生抗药性的标志及导致临床化疗失败的原因之一.     

Survivin基因沉默对裸鼠人卵巢癌细胞移植瘤凋亡的影响

目的探讨survivin基因沉默对人卵巢癌细胞株SKOV3裸鼠移植瘤凋亡的影响。方法将重组survivin shRNA plasmid转染人卵巢癌细胞株SKOV3细胞,通过裸鼠移植瘤实验比较survivin基因沉默对裸鼠移植瘤的生长抑制作用,荧光定量聚合酶链反应(PCR)和蛋白印迹法检测与凋亡密切相关的cytochrome-c、caspase-9和caspase-3基因的表达。结果裸鼠移植瘤实验显示,与对照组(空载体组和未转染组)相比,survivin shRNA plasmid转染组人卵巢癌细胞株SKOV3细胞生长速度减慢,肿瘤体积缩小(P<0.05);荧光定量PCR和蛋白印迹法结果都显示,与对照组相比,survivin shRNA plasmid转染组cytochrome-c、caspase-9和caspase-3的表达明显升高(P<0.05)。结论 survivin基因沉默可通过促进肿瘤细胞的凋亡而抑制裸鼠移植瘤生长。     

苦参碱诱导卵巢癌SKOV_3细胞凋亡的机制研究

目的探讨苦参碱(matrine,Mat)诱导SKOV3细胞凋亡及可能的作用机制。方法四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度Mat(0.4、0.8、1.2、1.6、2.0g·L-1)处理24、48、72h对SKOV3细胞增殖作用;流式细胞仪检测细胞的凋亡率,RT-PCR检测Survivin mRNA表达,Western blot检测Sur-vivin和Caspase-3蛋白的表达。结果一定浓度范围的Mat对SKOV3细胞的增殖均有抑制作用,且呈量效和时效关系,24、48、72h的IC50分别为3.38、1.57、1.13g·L-1;0.8、1.6g·L-1Mat作用48h后SKOV3细胞凋亡率分别为(11.44±0.56)%、(17.68±0.98)%,与空白对照组(4.85±0.31)%比较差异具有显著性(P<0.05)。RT-PCR及Western blot分析表明药物处理后SKOV3细胞的Survivin mRNA和蛋白表达均明显下调,而Caspase-3蛋白表达增加(P<0.05)。结论 Mat能抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖,促进其凋亡,其作用机制可能与下调Survivin表达和提高Caspase-3活性有关。     

Survivin在卵巢癌中的表达

细胞增殖和凋亡的平衡使机体能够维护正常的形态和功能,研究表明所有的肿瘤都有不同程度的增殖活跃和凋亡减少。Survivin是最新发现的凋亡抑制蛋白 （ inhibitor of apoptosis protein,IAP） 家族的新成员,是具有抑制凋亡和调节细胞分裂双功能的蛋白,是迄今发现最强的凋亡抑制因子。     

OSTP-DDP靶向抑制卵巢癌A2780细胞生长作用的研究

目的研究卵巢癌特异性结合肽(ovarian cancer specific targeting peptide,OSTP)与顺铂(cis-dichlorodiamineplatinum,DDP)偶联物(OSTP-DDP)对卵巢癌A2780细胞的靶向抑制作用。方法化学合成OSTP-DDP,体外培养卵巢癌A2780细胞,采用CCK-8法分别检测OSTP-DDP和DDP对卵巢癌A2780细胞的生长抑制作用;通过Annexin V-FITC凋亡试剂盒分别检测OSTP-DDP和DDP对卵巢癌A2780细胞的周期和凋亡作用。结果通过质谱分析和高效液相色谱(HPLC)分析,提示成功合成OSTP-DDP。CCK-8法检测显示,OSTP-DDP与DDP分别以不同浓度(10、20、40、80、160、320μmol·L~(-1))处理卵巢癌A2780细胞24、48、72 h后,均可对该细胞的生长起到抑制作用,且呈时间、浓度依赖性。且OSTP-DDP的作用强于DDP(P<0.05),提示OSTP-DDP具有靶向抑制细胞生长作用。流式细胞术检测结果显示,经OSTP-DDP和DDP处理后,细胞周期均被阻滞于G_1期,作用72 h后,OSTP-DDP对卵巢癌A2780细胞的周期抑制作用强于DDP,差异具有统计学意义(P<0.05)。作用24、48、72 h后,OSTP-DDP对卵巢癌A2780细胞凋亡的作用强于DDP(P<0.01)差异具有统计学意义,提示OSTP-DDP具有较强的靶向诱导细胞凋亡作用。结论 OSTP-DDP对卵巢癌A2780细胞的生长具有靶向抑制作用,OSTP作为化疗药物靶向载体治疗卵巢癌有良好的应用前景。     

RNAi 靶向沉默 CDX2 基因对白血病细胞生物学行为的影响及其作用机制

Abstract: Objective To detect the effects of siRNA targeting CDX2 gene expression on of BCR-ABL, caspase and Bax expressions, and the mechanisms thereof. Methods According to the earlier experiments, siRNA specifically targeting CDX2 gene (CDX2-siRNA) and the negative control sequence (CDX2-siRNA-NC) were selected, and then were transfected into K562 cells by Roche X-tremeGENE HP DNA Transfection Reagent. The flow cytometry analysis was used to detect the effects of siRNA on cell apoptosis. The expressions of BCR-ABL, caspase- 9, Bax mRNA and protein were tested by RTPCR and Western blot assay. Results MTT and flow cytometry analysis showed that after the silence of CDX2 gene expression, the proliferation of K562 cells was prohibited and the apoptotic rate of K562 cells was distinctly increased compared with that of normal cell group, but the negative control group had no significant change. According to the RT-PCR and Western blot assay, in comparison with the normal cell group and the negative control group, the expression levels of BCR-ABL mRNA and protein were obviously decreased, and the difference was statistic significance. On the other hand, the expressions of caspase- 9 and Bax mRNA and protein were significantly higher than those of other two groups (P＜0.05).Conclusion CDX2-siRNA can promote apoptosis of K562 cells obviously, and the mechanism is related with the downregulation of BCR-ABL and the up-regulation of caspase-9 and Bax.     

体外转染Kiss-1基因对人黑色素瘤细胞A375生长增殖的影响

目的 探讨转染Kiss-1基因对人黑色素瘤细胞A375生长增殖的影响,筛选出有意义的肿瘤治疗的生物学靶标.方法 在人黑色素瘤细胞A375中转染Kiss-1基因,经G418筛选,建立稳定高表达Kiss-1蛋白的细胞系.Western blot方法 检测Kiss-1蛋白以证实转染成功.流式细胞术检测Kiss-1基因对A375生长增殖的影响.结果 稳定转染Kiss-1基因的A375细胞中不仅Kiss-1蛋白稳定表达（1.20±0.21）高于对照组（0.60±0.41）,Kiss-1基因转染A375细胞48 h后对其具有凋亡的作用（凋亡率为28.42%）高于对照组（2.12%）.结论 外源性Kiss-1基因导入A375细胞后,可诱导A375细胞其凋亡,从而抑制肿瘤细胞增殖.     

lncRNA EPB41L4A-AS2对卵巢癌细胞SKOV-3凋亡的影响及其机制

目的探讨卵巢癌中长非编码RNA EPB41L4A-AS2差异表达,检测其对卵巢癌细胞凋亡的影响及其作用机制。方法从TCGA数据库中下载并处理新一代测序(RNASEQ V2)数据,利用COX单因素风险回归分析以及K-M生存分析方法,识别与卵巢癌患者预后显著相关的lncRNA。利用生物信息学方法获取卵巢癌显著相关的lncRNA与mRNA共表达网络,挖掘风险lncRNA有关的互作子网,预测卵巢癌患者生存有关的lncRNA及其功能。同时,通过MTT、AO/EB、Western blot检测细胞表型及凋亡相关蛋白,进而研究其机制。结果共识别130个与卵巢癌风险显著相关的lncRNA(P<0.05),其中46个风险lncRNA能够显著区分卵巢癌患者的高低生存率;识别了2个重要的风险lncRNA EPB41L4A-AS2(HR=1.72,P=0.000 016 8)和C20orf203(HR=2.07,P=0.04),其中度最大的为EPB41L4A-AS2。该lncRNA的62个互作基因映射到病毒致癌作用(Viral carcinogenesis pathway)通路中,并且能影响下游信号通路。其lncRNA能通过影响下游增殖通路及内质网蛋白合成通路诱导卵巢癌。过表达lncRNA EPB41L4A-AS2可影响SKOV-3细胞增殖,同时使Bcl-2家族蛋白的表达下调,促凋亡蛋白Bax的表达上调,增加Caspase-3的活性,同时能够使MAPK信号通路中的p38、JNK、ERK1/2蛋白表达上调。结论 lncRNA EPB41L4A-AS2通过MAPK信号途径调节卵巢癌细胞系SKOV-3的凋亡,为长链非编码RNA EPB41L4A-AS2成为临床卵巢癌患者的有效治疗药物提供了新依据。     

氧化苦参碱对卵巢癌HO8910细胞凋亡影响的血清药理学研究

目的探讨氧化苦参碱体内生物转化及含氧化苦参碱血清对人卵巢癌细胞HO8910的诱导凋亡作用机制。方法采用中药血清药理学实验方法,获得大鼠含氧化苦参碱血清,通过HPLC测定含药血清中氧化苦参碱的生物转化情况,通过MTT法、荧光显微镜、DNA琼脂糖凝胶电泳测定含药血清对人卵巢癌HO8910细胞的诱导凋亡作用,流式细胞术检测含药血清作用后细胞周期时相分布。结果给药大鼠血清中出现保留时间为10.8m in的氧化苦参碱峰图,且血清提取液中氧化苦参碱的浓度为40μg/mL,含氧化苦参碱血清能抑制HO8910细胞生长,经含药血清处理的细胞48h出现典型的细胞凋亡形态学变化和DNA片段的梯形条带,HO8910细胞被阻滞在G0-G1期。结论氧化苦参碱经肌注体内生物转化后,血清中的主要代谢成分仍保持不变,含氧化苦参碱血清也具有诱导HO8910细胞凋亡的作用。     

氧化苦参碱对卵巢癌HO8910细胞凋亡影响的血清药理学研究

目的探讨氧化苦参碱体内生物转化及含氧化苦参碱血清对人卵巢癌细胞HO8910的诱导凋亡作用机制。方法采用中药血清药理学实验方法,获得大鼠含氧化苦参碱血清,通过HPLC测定含药血清中氧化苦参碱的生物转化情况,通过MTT法、荧光显微镜、DNA琼脂糖凝胶电泳测定含药血清对人卵巢癌HO8910细胞的诱导凋亡作用,流式细胞术检测含药血清作用后细胞周期时相分布。结果给药大鼠血清中出现保留时间为10.8m in的氧化苦参碱峰图,且血清提取液中氧化苦参碱的浓度为40μg/mL,含氧化苦参碱血清能抑制HO8910细胞生长,经含药血清处理的细胞48h出现典型的细胞凋亡形态学变化和DNA片段的梯形条带,HO8910细胞被阻滞在G₀-G₁期。结论氧化苦参碱经肌注体内生物转化后,血清中的主要代谢成分仍保持不变,含氧化苦参碱血清也具有诱导HO8910细胞凋亡的作用。