迟发性神经元损伤的实验研究——沙土鼠脑组织水和离子含量的变化

本文以结扎沙土鼠双侧项总动脉5min,然后使血流再通的方法制作迟发性神经元损伤动物模型。用原子吸收分光光度法测定了沙土鼠脑6个分区水和离子含量在脑缺血及缺血后重灌流1～96h的经时变化。实验结果表明,至重灌流24h,海马CA_1区组织钙浓度开始明显增高;随后在48h,水和钠含量亦增多;到96h,钾含量才出现显著性降低。除CA_1区外其它部位的脑组织中则没有上述变化。从本实验可以得出结论,即钙的过负荷加速了迟发性神经元损伤现象的产生。     

迟发性神经元损伤的实验研究沙土鼠脑海马区组织酶谱及同工酶谱的变化

本文用蒙古沙土鼠制作迟发性神经元损伤(DND)动物模型。在5min脑缺血及缺血后重灌流1～96h,测定了动物脑海马CA_1区组织乳酸脱氢酶(LDH)、α—羟丁酸脱氢酶(α—HBDH)、磷酸肌酸激酶(CK)、谷草转氨酶(GOT)、谷丙转氨酶(GPT)和碱性磷酸酶(ALP)的活性以及LDH及CK同工酶分布的经时变化。本实验的结果进一步证实了能量代谢的变化是DND发生机理中最重要的因素。     

Mechanism of action of arginine vasopressin on acute ischemic brain edema.

The purpose of this experiment is to study the role of arginine vasopressin (AVP) in acute cerebral ischemic edema in Mongolian gerbils. The results show that intracerebroventricular injection (ICV) of AVP exacerbates acute ischemic brain edema, while ICV of AVP antiserum significantly decreases the ischemic brain edema. Nimodipine (calcium antagonist) cannot block this role of AVP in brain edema. In addition, the cortical Na(+)-K+ ATPase activity is significantly decreased, while the cAMP content of ischemic cortex and hypothalamus and the cGMP content of the hypothalamus are markedly increased after AVP ICV. These suggest that AVP may play an important role in the pathophysiologic process of ischemic brain edema by inhibiting the Na(+)-K+ ATPase activity of the cerebral cell membrane and the AVP receptors mediated by cAMP and cGMP.

     

低温对脑缺血/再灌注期间沙土鼠海马CA1区延迟性神经元死亡及ATP水平和细胞色素氧化酶活性的影响

目的观察低温对脑缺血/再灌注期间海马ATP水平和细胞色素氧化酶（CCO）活性的影响,以探讨低温减少延迟性神经元死亡（DND）的机制。方法采用沙土鼠前脑缺血/再灌注模型,缺血时间10 min。动物随机分为假手术组、常温组和低温组,3组动物又根据再灌注时间不同进一步分为再灌注6 h、48 h、96 h 3个亚组。所有沙土鼠脑缺血期间脑温均维持（38.0±0.2）℃,再灌注6 h内,低温组脑温维持（30.0±0.2）℃,常温组脑温维持（38.0±0.2）℃。光镜下观察海马CA1区存活锥体细胞数目。ATP、ADP、AMP含量测定采用高效液相紫外检测器法,CCO活性测定采用酶组织化学染色结合计算机图像分析。结果再灌注96 h,低温组海马CA1区存活锥体细胞数目明显多于常温组（P〈0.01）。除再灌注6 h外,低温组海马ATP和腺苷酸池（ATP＋ADP＋AMP）含量均明显高于常温组（P〈0.05）。低温组各再灌注时间点海马CA1区CCO活性均明显高于常温组（P〈0.05）。结论低温可通过保护CCO活性减轻脑缺血/再灌注期间的细胞能量代谢障碍,从而减少DND。     

兴奋性氨基酸在短暂性脑缺血后海马DND发生机制中的作用

本实验首先通过结扎沙土鼠双侧颈总动脉10分钟再灌流7天,造成海马DND模型,以计数海马CA_1区神经元密度作为指标,观察谷氨酸钠和氯胺酮对海马DND的影响;用氨基酸自动分析技术测定脑缺血10分钟时背侧海马氨基酸含量。结果示谷氨酸钠加重海马DND损伤;氯胺酮对海马DND有明显保护作用;短暂性脑缺血10分钟时兴奋性氨基酸含量升高。此结果均直接或间接说明兴奋性氨基酸在海马DND发生机制中起着重要作用。     

血塞通注射液对沙土鼠脑缺血损伤的保护作用

通过夹闭沙土鼠双侧颈总动脉１０ ｍｉｎ 或２０ ｍｉｎ 后再灌７ ｄ 或１ ｄ , 造成脑缺血再灌模型, 检测血塞通对沙土鼠脑组织钙、水含量的影响, 以及对海马 Ｃ Ａ１ 区死亡的神经元迟发性损伤的保护作用． 结果显示, 血塞通可降低缺血后脑组织钙的含量, 减少海马 Ｃ Ａ１ 区死亡的神经元数量, 增加神经元密度． 实验结果提示血塞通对脑缺血再灌损伤有一定的保护作用．     

阿司匹林铜对沙土鼠脑缺血损伤的保护作用

采用沙土鼠双侧颈总动脉夹闭１０ｍｉｎ或２０ｍｉｎ后再灌７ｄ或１ｄ，造成脑缺血再灌损伤模型，观察阿司匹林铜对沙土鼠脑组织钙、水含量的影响，及对海马ＣＡ１区神经元迟发性损伤的保护作用．结果显示：阿司匹林铜（７．５ｍｇ／ｋｇ）即能减轻脑组织钙累积，剂量１５ｍｇ／ｋｇ能增加脑缺血后海马ＣＡＩ区的神经元密度．提示阿司匹林铜对缺血再灌脑组织损伤有一定的保护作用．     

海马不同地区域缺血时损伤和hsp70mRNA表达差异

目的：探讨缺血再灌注后鼠脑海马CA1区选择性易损伤和迟发神经元死亡现象,以及hsp70mRNA差异表达的可能机制。方法：观察鼠前脑缺血再灌注时,海马CA1区、CA3区及齿状回锥体细胞在组织学变化;以及原位杂交技术检测各区hsp70mRNA的诱导表达。结果：缺血再灌注7d后海马CA1区锥体细胞缺失明显,而CA3区及齿状回未见明显形态学变化。CA1区hsp70mRNA的诱导较其余两区迟,而持续时间较长。结论：在缺血早期加强或在缺血后期抑制hsp70mRNA的诱导,有可能保护CA1区锥体细胞。     

NGF对缺血性脑损伤引起的大鼠海马CA1区神经细胞凋亡的作用

目的　研究神经生长因子 (NGF)对缺血性脑损伤引起的大鼠海马CA1区神经细胞凋亡的形态学影响。方法　采用Pulsinelli闭塞大鼠四动脉全脑缺血模型 ,应用光镜、透射电子显微镜及原位末端标记法 (TUNEL染色法 )观察模型组和NGF治疗组动物脑缺血 30min再灌注 7d海马神经细胞凋亡的情况。所得数据应用SPSS软件包进行统计学分析。结果　TUNEL染色法显示模型组有大量凋亡细胞 ;给药B、C组的神经细胞凋亡数目接近正常组 ,明显少于模型对照组 ,其差异具有高度显著性P <0 0 1。结论　给予外源性神经生长因子能明显抑制海马神经细胞的凋亡 ,减少缺血再灌注对神经细胞的损害     

低温对脑缺血再灌注期间海马ATP含量和羟自由基生成的影响

目的研究低温对脑缺血再灌注期间海马ATP和羟自由基（OH·）含量的影响,并探讨二者的变化与延迟性神经元死亡的关系。方法沙土鼠前脑缺血再灌注模型,缺血时间10min。随机将动物分为假手术组、常温组和低温组,后两组又分为再灌注6h、48h、96h三个亚组。每组13只动物,其中5只用于海马组织形态学观察,另8只用于ATP、ADP、AMP和OH-含量测定。ATP、ADP、AMP含量测定采用高效液相紫外检测器法,采用水杨酸捕捉法结合高效液相及电化学检测器法测定OH·含量。结果再灌注96h,常温组海马CA1区存活锥体细胞数目仅为假手术组的5％（P〈0．01）,而低温组为假手术组的45％,明显多于常温组（P〈0．01）。常温组各再灌注时间点海马ATP含量和腺苷酸池（ATP＋ADP＋AMP）含量均明显低于假手术组（P〈0．01）。除再灌注6h外,低温组海马ATP和腺苷酸池含量均明显高于常温组（P〈0．05）。常温组再灌注6h,海马2,3-DHBA含量明显高于假手术组和低温组（P〈0．01或P〈0．05）,但再灌注48h和96h,三组间海马2,3-DHBA含量已无显著性差异。结论延迟性神经元死亡主要与脑缺血后持续的细胞能量代谢障碍有关,而低温可通过减轻细胞能量代谢障碍,起到减少延迟性神经元死亡的作用。     

沙鼠脑缺血再灌注后海马CA1区细胞存活数量的实验观察

①目的 利用沙鼠脑缺血模型,从分子生物学角度探讨脑缺血再灌注不同时期对海马CA1区的影响.②方法 采用双侧颈总动脉夹闭法制作沙鼠脑缺血再灌注损伤模型.HE染色观察沙鼠脑缺血后海马CA1区的组织病理改变.③结果 单次5分钟缺血的沙鼠HE染色海马CA1区存活细胞数与假手术组及正常对照组相比减少,差异具有极显著性(P<0.01);反复5分钟缺血,中间间隔时间为10分钟的缺血组,与持续性10分钟缺血组、假手术组及正常对照组相比,差异具有极显著性(P<0.01);反复5分钟缺血,中间间隔时间为1小时的缺血组,在各个时间段呈现出最为严重的缺血性变化;与其它组相比,差异具有极显著性(P<0.01);反复5分钟缺血,中间间隔时间为24小时的缺血组,却呈现出较轻的病理变化;与持续性5分钟缺血组相比差异无显著性(P=0.0501).④结论 重复性脑缺血损伤的严重程度可能与缺血持续时间、间隔时间的长短等有关.重复5分钟缺血,中间间隔时间为1小时的缺血组,缺血损伤程度最重.提示对于脑梗死的患者,应该不间断的施行综合治疗,防止重复性脑梗塞的发生.     

急性脑缺血时沙土鼠脑区精氨酸加压素含量的变化

本文利用放射免疫分析方法,测定了蒙古种沙土鼠急性脑缺血不同时程大脑皮层等4个脑区AVP 含量的动态变化。结果表明,大脑皮层等缺血脑区AVP 含量明显升高,而没有明显缺血的桥延部AVP 含量变化不明显。提示脑内AVP 含量的变化和急性脑缺血关系密切,在缺血性脑损伤的病理生理过程中,AVP 可能具有重要作用。     

乳酸在短暂性脑缺血后海马DND发生机制中的作用

本实验测定了短暂性脑缺血后不同再灌时间乳酸含量的变化,结果发现在短暂性脑缺血时乳酸含量显著增加(P<0.01);再灌流30分钟后乳酸恢复到对照水平(P>0.05);而再灌流48小时后海马乳酸量又再次升高(P<0.01)。本实验结果揭示乳酸在短暂性脑缺血后海马迟发性神经元坏死(DND)发生中起着重要作用。     

脑缺血再灌注期间海马CA1区细胞色素氧化酶活性的变化

目的观察脑缺血再灌注后海马CA1区细胞色素氧化酶活性的变化.方法沙土鼠前脑缺血再灌注模型,运用酶组织化学方法结合计算机图像分析,测定脑缺血再灌注6h、2d、4d海马CA1区细胞色素氧化酶的活性,应用高效液相紫外监测器测定海马ATP、ADP、AMP含量.结果随着再灌注时间的延长,海马CA1区细胞色素氧化酶活性呈进行性下降的趋势,再灌注4d时降至假手术组的51%(P<0.01).海马ATP含量的变化与细胞色素氧化酶活性的变化一致.结论脑缺血再灌注损伤的机制可能与细胞色素氧化酶活性下降导致的细胞能量代谢障碍有关.     

赛庚啶对脑缺血实验治疗的研究

为了探讨脑缺血时５－羟色胺（ｓｅｒｏｔｏｎｉｎ，５－ＨＤ）的变化及５－ＨＴ２受体拮抗剂的保护作用：（１）实验通过结扎沙土鼠双侧颈总动脉１０，３０ｍｉｎ，及结扎３０ｍｉｎ再灌２ｈ后，测定脑缺血及缺血再灌双侧大脑皮层５－ＨＴ和５－羟吲哚乙酸（５－ＨＩＡＡ）的变化，结果发现：脑缺血时５－ＨＴ，５－ＨＩＡＡ含量显著降低；再灌后５－ＨＩＡＡ恢复并有增加的趋势．（２）应用５－ＨＴ２受体拮抗剂赛庚啶（ｃｙｐｒｏｈｅｐｔａｄｉｎｅ，ＣＹＰ）对沙土鼠脑缺血５ｍｉｎ再灌７ｄ海马ＣＡ１区神经元损伤的影响，结果赛庚啶能明显提高海马ＣＡ１区存活神经元密度。（３）５－ＨＴ，受体拮抗剂赛庚啶对沙土鼠单侧颈总动脉结扎所致单侧脑缺血及再灌时，有明显减轻脑水肿及钙离子积聚作用，但赛庚啶对ＳＯＤ，ＭＤＡ无影响．对赛庚啶作用的可能机制进行了讨论。     

NGF预处理对全脑缺血再灌注沙土鼠海马CA1区神经细胞凋亡的影响

目的探讨NGF预处理对沙土鼠脑缺血再灌注后海马CA1区神经细胞凋亡的影响及最佳给药时间窗。方法采用夹闭沙土鼠双侧颈总动脉造成全脑缺血再灌注模型。NGF侧脑室注射法。蒙古种沙土鼠30只随机分为五组，每组6只：假手术组（A）、缺血再灌注损伤组（B）、NGF预处理48h、24h、12h组（C、D、E），B、C、D、E各组分别行脑缺血20min再灌注72h后处死取标本。TUNEL法观察沙土鼠脑缺血再灌注后海马CAI区神经细胞凋亡的变化。结果与缺血再灌注损伤组相比，NGF预处理各组可显著减少沙土鼠海马CA1区神经细胞凋亡数目（P〈0．05）；其中以NGF预处理48h组神经细胞凋亡指数最低。结论NGF预处理能明显减轻沙土鼠脑缺血再灌注引起的神经细胞凋亡，具有明显脑保护作用；而以NGF预处理48h脑保护效果最好。     

低温对脑缺血再灌注期间微管相关蛋白-2免疫活性的影响

目的 观察低温对脑缺血再灌注期间海马CA1区微管相关蛋白－2免疫活性的影响。方法 沙土鼠前脑缺血再灌注模型。动物随机分为假手术组、常温再灌组和低温再灌组，后两组又各分为再灌注6h、48h、96h3个亚组，每组10只。采用免疫组织化学方法结合计算机图像分析测定微管相关蛋白－2活性，观察再灌注48h、96h海马CA1区细胞膜、核膜完整，核仁清楚的锥体神经元数目。结果 常温再灌注6h、48h、96h海马CA1区微管相关蛋白－2免疫活性分别为假手术组的81％、69％和51％（P＜0．01）。低温再灌注6h、48h、96h海马CA1区微管相关蛋白－2免疫活性分别为假手术组的93％、86％和71％，均明显高于常温再灌组（P＜0．05或P＜0．01）。再灌注96h时，常温再灌组海马CA1区细胞膜、核膜完整，核仁清楚的锥体细胞数目仅为假手术组的5％（P＜0．01），低温再灌组为假手术组的47％，明显多于常温再灌组（P＜0．01）。结论 低温减轻脑缺血后延迟性神经元死亡的作用可能与其抑制微管相关蛋白－2的活性降解有关。     

EFFECT OF EXCITATORY AMINO ACIDS．Ca~（2＋） ON DELAYED NEURONAL DEATH IN HIPPOCAMPUS FOLLOWING TRANSIENT FOREBRAINISCHEMIA IN GE

ＥＦＦＥＣＴＯＦＥＸＣＩＴＡＴＯＲＹＡＭＩＮＯＡＣＩＤＳ．Ｃａ~（２＋）ＯＮＤＥＬＡＹＥＤＮＥＵＲＯＮＡＬＤＥＡＴＨＩＮＨＩＰＰＯＣＡＭＰＵＳＦＯＬＬＯＷＩＮＧＴＲＡＮＳＩＥＮＴＦＯＲＥＢＲＡＩＮＩＳＣＨＥＭＩＡＩＮＧＥＲＢＩＬＳ￥ＸｕＣｈａｎｇｑｉ?..