HPLC-ELSD法测定龙泽熊胆胶囊中牛磺熊去氧胆酸和牛磺鹅去氧胆酸的含量

以牛磺熊去氧胆酸和牛磺鹅去氧胆酸为指标,建立龙泽熊胆胶囊中熊胆粉的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱串联蒸发光检测器,色谱柱为ChromCore AQ C18（4.6 mm×250 mm,5 μm）,乙腈（A）-5 mmol·L-1醋酸铵溶液（B）为流动相,梯度洗脱（0~40 min,25%A;40~50 min,25%A→29%A;50~80 min,29%A;80~100 min,29%A→40%A）,流速1.0 mL·min-1,柱温30 ℃,ELSD漂移管温度110 ℃,氮流量2.5L·min-1。结果：牛磺熊去氧胆酸进样量在1.069~9.57μg内、牛磺鹅去氧胆酸进样量在0.740 46~7.404 64 μg内,进样量的对数与峰面积的对数呈良好的线性关系;仪器精密度、重复性、稳定性试验的RSD＜2.0%;经低、中、高3个浓度的准确度试验考察,牛磺熊去氧胆酸的回收率为95.2%~97.7%,牛磺鹅去氧胆酸的回收率为91.9%~95.9%。测定样品42批次,牛磺熊去氧胆酸和牛磺鹅去氧胆酸的含量分别为0.18~0.43、0.10~0.44 mg·粒-1。结论：本法适用于龙泽熊胆胶囊中熊胆粉的质量控制,可为完善龙泽熊胆胶囊的质量标准提供科学的依据。     

HPLC测定牛磺熊去氧胆酸胶囊中的有关物质

目的采用RP-HPLC法测定牛磺熊去氧胆酸胶囊中的有关物质。方法采用Diamonsil C18色谱柱(150 mm×4.6mm,5μm),流动相为0.02 mol.L-1磷酸二氢钠-乙腈(60∶40,磷酸调pH5.5),检测波长为205 nm,流速为1.0 mL.min-1,柱温30℃。结果牛磺熊去氧胆酸0.9694～96.94μg.mL-1与峰面积的线性关系良好(r=0.9999),检测限为0.3635 ng,定量限为1.454 ng。牛磺鹅去氧胆酸0.9443～94.43μg.mL-1与峰面积的线性关系良好(r=0.9999),检测限为9.447 ng,定量限为23.62 ng,方法回收率为99.54%。结论所用方法准确、灵敏、快速,适用于牛磺熊去氧胆酸胶囊中微量杂质的控制。     

HPLC法测定熊胆舒喉片中牛磺熊去氧胆酸和牛磺鹅去氧胆酸的含量

采用HPLC法测定熊胆舒喉片中牛磺熊去氧胆酸(TUDCA)和牛磺鹅去氧胆酸(TCDCA)的含量,以μ-BonndapakC18为分析柱(10μm,4.6×250mm),甲醇-磷酸二氢钠溶液(0.03mol/L,6530)为流动相,紫外检测波长为210nm,平均回收率分别为98.8%(RSD=1.41%,n=5))和101.3%(RSD=0.74%,n=5).     

HPLC-ELSD法同时测定生物转化样品中牛磺熊去氧胆酸等5种成分的含量

目的:建立同时测定生物转化样品中牛磺熊去氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸、熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸、牛磺7-酮石胆酸5种成分含量的方法。方法:采用高效液相色谱法,检测器为蒸发光散射检测器。色谱柱为Agilent XBD-C18,流动相为0.05%三氟乙酸-乙腈,梯度洗脱,流速为1.0 ml/min;漂移管温度为80℃,N2流量为3.0 ml/min,柱温为40℃。结果:牛磺熊去氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸、熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸、牛磺7-酮石胆酸检测质量浓度线性范围分别为10.00²00.08、10.22200.08、10.22²04.32、10.00204.32、10.00¹99.92、9.85199.92、9.85¹97.08、10.25197.08、10.25²04.92μg/ml(r=0.999 5204.92μg/ml(r=0.999 5⁰.999 8);精密度、稳定性、重复性试验的RSD均不大于2.0%。5种成分的平均回收率分别为97.9%、98.4%、97.9%、98.1%、98.3%,RSD分别为0.49%、0.63%、0.81%、0.72%、0.78%(n=3)。结论:该方法快速、准确、重复性好,可用于生物转化样品中牛磺熊去氧胆酸等5种成分的定量测定。     

HPLC法测定牛磺熊去氧胆酸胶囊含量的临床分析

目的：建立测定牛磺熊去氧胆酸胶囊含量的方法。方法采用KromasilC18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.05 mol/L磷酸二氢钠溶液(80%磷酸调pH至3.5),梯度洗脱,检测波长205 nm,柱温30℃,流速1.2 ml/min,进样量20μl。结果牛磺熊去氧胆酸在0.0953~1.9050 mg/ml范围内与浓度呈良好的线性关系(r=0.9999);加样回收率为99.93%,RSD=1.0%(n=9)。结论采用高效液相色谱法(HPLC)测定牛磺熊去氧胆酸胶囊含量,该方法简便准确、精密度和重复性良好,结果准确可靠。     

牛磺熊去氧胆酸的合成

熊去氧胆酸在亚磷酸三乙酯和三乙胺作用下,与2,2'-二硫二苯并噻唑缩合得熊去氧胆酸-2-苯并噻唑硫酯,再与牛磺酸反应得牛磺熊去氧胆酸,总收率约76%.     

高效液相色谱法测定荷胆胶囊中牛磺熊去氧胆酸含量

目的建立测定荷胆胶囊中牛磺熊去氧胆酸含量的高效液相色谱法。方法采用Alltech Alltima C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为用磷酸调pH至4.4的甲醇-0.03 mol/L磷酸二氢钠溶液(65∶35),流速1 mL/min,检测波长210 nm。结果牛磺熊去氧胆酸进样量在4.067 4～12.2μg范围内与峰面积线性关系良好(r=0.999 6),平均回收率为97.99%,RSD=1.43%(n=6)。结论高效液相色谱法快速、准确、有效,可用于荷胆胶囊中牛磺熊去氧胆酸的含量测定。     

熊胆眼用凝胶含量测定方法学的建立

目的:建立高效液相色谱法测定熊胆眼用凝胶中牛磺熊去氧胆酸的含量.方法:色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱;甲醇-0.03mol/l磷酸二氢钠溶液(65∶30)(用磷酸调pH值至4.4)为流动相;检测波长:210nm.结果:牛磺熊去氧胆酸在1～11μg范围内呈良好的线性关系(r=0.9999,n=6),回归方程为Y=6882...     

HPLC法测定荷胆胶囊中牛磺熊去氧胆酸的含量

目的:建立高效液相色谱法测定荷胆胶囊中牛磺熊去氧胆酸的含量.方法:色谱柱:Alltech Alltima C18(250 mm×4.6mm,5μm);流动相∶甲醇-0.03 mol·L-1磷酸二氢钠溶液(65∶ 30)(用磷酸调节pH至4.4);流速:1ml·min-1;检测波长:210 nm.结果:牛磺熊去氧胆酸在4.1～12.2μg范围内线性关系良好(r=0.999 9);平均回收率为98.0％(RSD=1.46％,n=6).结论:该含量测定方法快速,准确,有效,可用于荷胆胶囊中牛磺熊去氧胆酸的含量测定.     

HPLC测定熊胆贝母止咳胶囊中牛磺熊去氧胆酸的含量

目的 建立熊胆贝母止咳胶囊中牛磺熊去氧胆酸的测定方法。方法 采用中性氧化铝吸附黄酮类的干扰杂质,色谱柱为ODS柱(4.6 mm×150 mm,5μm);甲醇-0.03 mol·L-1磷酸二氢钠缓冲溶液(65∶35,pH 4.41)为流动相;检测波长205 nm。结果 平均回收率99.62％,方法精密度RSD=0.25%(n=5);结论 本法简便、准确可靠、重复性好,能较好地将牛磺熊去氧胆酸从有黄酮类组分干扰的混合物中分离出来。     

血管紧张素Ⅱ受体对血管紧张素-(1-7)作用的影响

目的：探讨血管紧张素-（1-7）[Ang-（1-7）1对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导大鼠系膜细胞（GMC）增殖及血管紧张素Ⅱ受体对血管紧张素-（1-7）作用的影响。方法：选择对数生长期GMC,分为对照组、AngⅡ组、Ang-（1-7）组、[Sar^1,Ile^8]-AngⅡ＋Ang-（1-7）组、、PD123319＋Ang-（1-7）组,通过[^3H]-Thymidine及[^3H]-Leucine掺入分别测定GMC的DNA、蛋白质合成;结晶紫染色检测细胞数日,观察系膜细胞增殖情况,探讨Ang-（1-7）是否通过AngⅡ受体发挥作用。结果：Ang-（1—7）可抑制AngⅡ诱导GMC的DNA、蛋白质合成及细胞数日增加;[Sar^1,Ile^8]-AngⅡ和PD123319不影响Ang-（1—7）的上述作用。结论：Ang-（1—7）能抑制基础和AngⅡ诱导的GMC增殖,其作用的发挥不通过AngⅡ的AT1和AT2受体介导。     

应用HPLC-MS技术测定健康受试者和肝癌患者血浆中13种胆汁酸的含量

目的建立HPLC-MS方法同时检测健康人和原发性肝癌患者血浆中13种胆汁酸的含量。方法血浆样品前处理采用乙腈-蛋白沉淀法,色谱分离采用SHISEIDO MG C18（100 mm×3.0 mm,3.0μm）柱,流动相：乙腈-水（含0.1%甲酸和0.5%氨水）,梯度洗脱,流速0.4 ml/min,柱温25℃,进样量5μl。质谱监测采用ESI源负离子模式,选择离子（SIM）分段监测。结果 13种胆汁酸在3.3~4 400 ng/ml的浓度范围内线性关系良好;日内和日间精密度均〈7%;平均回收率为82.67%~109.75%。样品测定结果显示,与健康对照组相比,原发性肝癌患者血浆中胆汁酸含量升高,其中以结合型胆汁酸TUDCA、TCDCA、TCA、GCA和GCDCA的升高最为明显。结论所建HPLC-MS方法灵敏度高、选择性好,可用于原发性肝癌患者与健康人体内血清胆汁酸的含量差异比较,该研究为肝癌患者体内胆汁酸的代谢和疾病的临床诊治奠定了基础。     

椭圆叶花锚的利胆有效成分分离与鉴定

目的通过药理实验确定椭圆叶花锚利胆作用的有效部位,并对其进行成分分离与鉴定。方法采用胆管引流法试验椭圆叶花锚的利胆作用,并确定了有效部位。再利用硅胶柱色谱、ODS、葡聚糖凝胶等色谱手段分离,通过1H-NMR、13C-NMR等波谱技术确定化合物的结构。结果从椭圆叶花锚利胆有效部位分离得到了9个化合物,分别为2,3,5-trimethoxy-1-O-primevero-syloxyxanthone（1）、2,3,4,5-etramethoxy-1-O-primeverosyloxyxanthone（2）、l,8-dihydroxy-3,5-dimethoxanthone（3）、2,3,4,5,7-pentamethoxy-1-O-primeverosyloxyxanthone（4）、2,3,4,7-etramethoxy-1-O-primeverosyl-oxyxanthone（5）、木犀草苷（6）、木犀草素（7）、齐墩果酸（8）、熊果酸（9）。结论其中化合物3为首次从椭圆叶花锚中分得。     

高效液相色谱校正因子法测定苦碟子提取物中5种主要成分的含量

目的通过测定苦碟子提取物中咖啡酸、菊苣酸、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷-(1→6)-β-D-葡萄糖苷、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷与木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷的校正因子,建立以1种对照品测定苦碟子提取物中5种主要成分的含量的方法。方法以Agilent TC-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)为分析柱,柱温30℃,流动相为甲醇(A)-0.05%磷酸(B),梯度洗脱:0~10 min:30%A,10~30 min:30%~50%A,流速1.2 mL.min-1,检测波长350 nm。结果咖啡酸、菊苣酸、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷-(1→6)-β-D-葡萄糖苷、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷的校正因子分别为:1.129、0.873 3、1.320、1.129(RSD=1.6%~2.1%),苦碟子提取物中咖啡酸、菊苣酸、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷-(1→6)-β-D-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷与芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷的含量分别为4.2%、29.5%、6.5%、23.0%、5.0%。结论本法简便,灵敏,重现性好,可用于苦碟子提取物和制剂的定量分析及质量控制。     

胆囊切除致胆管损伤的诊治

目的探讨胆囊切除致胆管损伤的原因及防治措施。方法回顾性分析近7年收治27例胆囊切除致胆管损伤的临床资料。27例胆囊切除致胆管损伤中,实施手术34例次。胆肠Roux-en-Y吻合术19例次,腹腔引流术2例次,胆管修补术2例次,胆管对端吻合、T管支撑引流术3例次,胆管修补、T管支撑引流术3例次,内镜下鼻胆管引流(endoscopic nasobiliary drainage,ENBD)和肝总管自体脐静脉瓣修复各1例等。结果全组末次近期效果:优20例(74.1%),良6例(22.2%),死亡1例(3.7%)。随访2～7年(平均3年)20例,优15例(75.0%),良4例(20.0%),差1例(5.0%),无死亡病例,其中胆肠Roux-en-Y吻合术15例,优11例(73.3%),良3例(20.0%),差1例(6.7%)。结论胆囊切除术容易发生胆管损伤,损伤的原因是在病理、解剖和人为因素的基础上,主要与其术式选择不当有关。胆管损伤时要取得好的治疗效果,关键是及时发现和正确处理。胆管空肠Roux-en-Y吻合术是大多数胆管损伤或损伤性胆管狭窄修复重建的有效术式。     

2-(咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)乙酸的合成工艺改进

目的改进骨质疏松治疗药米诺膦酸的关键中间体2-(咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)乙酸的合成工艺。方法以反式-4-氧基-2-丁烯酸乙酯和2-氨基吡啶为起始原料,经环合、水解得到2-(咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)乙酸。结果与结论该合成方法首次以纯水替代有机溶剂作为反应溶剂,采用"一锅法"合成目标化合物,降低了该中间体的制备成本,而且环境友好,更适合于工业化生产。     

腹腔镜、胆道镜联合加减大柴胡汤治疗二、三期胆道（残余）结石临床疗效观察

目的探讨腹腔镜、胆道镜联合加减大柴胡汤治疗二、三期胆道残余结石的可行性。方法将75例二、三期胆道结石患者随机分为3组,每组25例。Ⅰ组予以常规开腹手术治疗,Ⅱ组予以腹腔镜、胆道镜联合治疗,Ⅲ组予以腹腔镜、胆道镜联合加减大柴胡汤治疗。观察3组治疗后患者术中手术时间、术中胃肠或胆管损伤例数、术后肛门排气时间、术后体温恢复正常时间、术后腹腔引流管留置时间、术后残余或继发胆管结石例数、术后胆漏发生率、术后肠黏连肠梗阻例数、术后住院时间等。结果3组患者75例均治愈出院,Ⅰ组病例,术中平均手术时间（120.43±19.05）min,平均出血（93.66±27.6）ml,无胃肠、胆管损伤及胆漏发生,术后切口感染2例,平均肛门排气时间（56.5±5.95）h,体温恢复正常时间（76.6±10.68）h,腹腔引流管留置时间（7.5±1.17）d,术后平均住院时间（12.8±0.74）d,术后进食后出现腹胀3例、便秘2例、腹泻1例;术后残余肝胆管结石7例,继发胆管结石5例,术后肠黏连肠梗阻2例;Ⅱ组病例,术中平均手术时间（94.63±19.21）min,平均出血（73.57±27.38）ml,无胃肠、胆管损伤及胆漏发生,中转开腹1例,平均肛门排气时间（37.03±3.9）h,体温恢复正常时间（70±6.10）h,腹腔引流管留置时间（5.43±1.08）d,术后平均住院时间（7.4±0.55）d,术后进食后出现腹胀2例、便秘1例、腹泻1例;继发胆管结石3例;Ⅲ组病例术中平均手术时间（94.33±19.11）min,平均出血（73.75±27.83）ml,无胃肠、胆管损伤及胆漏发生,中转开腹1例,平均肛门排气时间（35.03±3.39）h,体温恢复正常时间（61±6.10）h,腹腔引流管留置时间（5.14±1.28）d,术后平均住院时间（7.1±0.45）d,术后进食后出现腹胀1例、便秘0例、腹泻1例;术后无明显并发症发生。结论腹腔镜、胆道镜联合加减大柴胡汤治疗二、三期胆道残余结石,在临床上可行,值得推广应用。     

生长抑素在肝胆手术后胆漏治疗中的临床应用

目的探讨生长抑素在肝胆手术后胆漏患者治疗中的作用。方法将28例肝胆手术后胆漏患者随机分为研究组13例和对照组15例。对照组给予常规治疗,研究组在常规治疗的基础上加用生长抑素肌内注射。治疗后比较2组术后腹腔引流量、拔管时间及并发症发生情况。结果研究组术后1～7d的引流量明显少于对照组,拔管时间明显短于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);研究组无1例膈下积液发生,对照组发生膈下积液3例。结论生长抑素能明显减少肝胆术后胆漏量,提高胆漏自愈率,值得推广应用。     

猪胆汁中三种主要胆汁酸的提取分离

目的从提取胆红素下脚料中同时提取三种胆汁酸。方法混合猪胆汁酸粗品在硫酸催化下形成甲酯,利用猪去氧胆酸甲酯与苯形成的加合物不溶于苯的性质将其分离出来;用乙酸酐将剩余胆汁酸甲酯中的所有羟基转化为乙酸酯,利用猪胆酸甲酯三乙酸酯在正己烷中溶解度低的性质,使其分离,最后用无水乙醇结晶分离出鹅去氧胆酸甲酯二乙酸酯。所得各种猪胆汁酸酯经乙醇-NaOH溶液水解得到纯猪去氧胆酸、猪胆酸和鹅去氧胆酸,并对产物结构进行了表征,纯度经HPLC测定均大于98%。结果通过一次工艺流程分离出三种胆酸,含量均大于98%。结论该提取工艺提高了原料的利用率,适合工业化生产。     

肝再生过程中胆汁酸对FXR的影响

目的：从物质代谢角度解释，胆汁酸对FXR在肝细胞再生中的影响。方法：挑选60只雄性清洁级SD大鼠，建立30％（A），50％（B），70％（C）大鼠肝切除模型，分别给予葡萄糖喂养（1组）及胆汁酸（2组）喂养，每组10只，分为6个实验组，分别标记为A1，A2，B1，B2，C1，C2，在进行葡萄糖和胆汁酸喂养之后的24h、48h以及72h等时间点进行检测肝再生率及通过westernblot—ting检测大鼠肝脏FXR的表达，并且根据数据的变化做好细致的比较：结果：①肝再生情况的测定：首先，进行的是组间对比，两组相比明显可以发现，1组在不同时间点的大鼠肝再生率明显低于2组；其次，进行的是组内对比，比较发现，在各个时间点，葡萄糖喂养组肝再生率A1〉B1〉C1和A2〉B2〉c2（P值均〈0．05）。②肝组织内FXR表达情况：首先，进行的是组间对比，两组相比明显可以发现，1组在不同时间点的FXR表达明显低于2组；其次，进行的是组的内部比较，比较发现，每组在各个时间点的大鼠肝内FXR蛋白表达均为A1〉B1〉C1和A2〉B2〉C2（P值均〈0．05）。结论：通过对实验数据的分析发现，胆汁酸能够通过对FXR的影响进而影响到肝再生的进程。