食蟹猴静脉注射抗CD20功能人源化单克隆抗体SM09重复给药毒性研究

目的:评价食蟹猴静脉重复给药抗CD20功能人源化单克隆抗体SM09的安全性。方法:将食蟹猴随机分为溶媒对照组,SM09低、高剂量组(25,50 mg.kg-1),每组6只,静脉注射给药,每周1次,连续8周,恢复期12周,进行各项毒理学指标检测。结果:除个别动物偶见呕吐外,体重、进食量、体温、尿、心电图、骨髓细胞计数等均未显示与供试品相关的改变。SM09给药后能够诱导动物产生快速深度的外周血B细胞清除,至恢复期结束,多数动物外周血中B细胞水平恢复正常。给药4周,动物血液白细胞及淋巴细胞下降,之后逐渐回升。给药结束时动物补体C4水平略有降低。组织病理学检查结果除药理学作用相关的改变外,未见其他与供试品相关的改变。结论:食蟹猴连续静脉注射SM09,总体上具有良好的剂量耐受性,除观察到与药理作用相关的效应外,未见其他毒性反应。     

食蟹猴心电图研究

目的 研究食蟹猴在清醒状态下的心电图特点,为食蟹猴在药物临床前安全性评价实验研究中的应用提供参考.方法 选择72只2～3岁食蟹猴,体重2.5～3.5 kg,雌雄各36只.在环境安静、动物清醒状态下,测定Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、aVR、aVL、aVF 6个导联的心电图变化,并计算平均心率,P波、QRS波群和T波的振幅,PR间期、QT间期等指标.结果 72只食蟹猴均为窦性心律,并发现在肢体Ⅱ导联中,P波均为向上直立波,Ⅱ、Ⅲ、aVF导联中大部分食蟹猴没有S波,aVR导联中大部分食蟹猴没有Q波.食蟹猴P波较尖,振幅较小,QRS波群多样化,QT间期的K值范围是0.302±0.040,ST段位于等电位线,T波以圆滑为主,Ⅱ导联中绝大部分为直立.结论 此研究建立了食蟹猴心电图基础数据,为相关的研究提供了参考.     

重组人白细胞介素-12对食蟹猴的反复给药毒性研究

目的:观察重组人白细胞介素-12(rhIL-12)对食蟹猴的长期毒性。方法:食蟹猴皮下注射给予rhIL-12,剂量分别为0.5,5和40μg·kg-1,每周3次,共13周。检测指标包括临床症状、血液学、血生化、免疫、血清抗体和组织病理学检查。结果:rhIL-12给药后导致动物出现腹泻、面部及眼睑部肿胀、腹股沟淋巴结肿大、溃疡、及注射局部红斑和硬结等临床症状,并出现贫血和白细胞分类异常,血液生化指标出现肝脏转氨酶升高,免疫学指标出现外周血总T淋巴细胞比例增加,CD4细胞百分率下降,CD8细胞百分率增加。第7次给药后,给药组动物产生了rhIL-12抗体。结论:食蟹猴皮下注射给予rhIL-12,毒性靶器官和组织为血液系统、肝脏、心脏、肾脏和淋巴结等免疫调节系统,其安全剂量为0.5μg·kg-1。     

食蟹猴sc重组人干扰素β-1a注射液30 d安全性评价

目的 研究重组人干扰素β-1a （rhIFN β-1a）注射液的毒副反应靶器官及其恢复情况,预测可能引起的临床不良反应,为临床用药提供参考。方法 食蟹猴sc重复给予rhIFN β-1a注射液3.9、13.2、45.0 μg/kg,连续30 d,每组6只动物,雌雄各半,停药后恢复16 d。观察药物对一般体征、饮食、肛温、体质量的影响,同时进行尿液分析、血液学、血液生化、心电图、眼科检查、骨髓涂片、免疫学指标、免疫原性检查,在给药结束和恢复结束进行大体剖检并进行组织病理学检查。结果 45.0 μg/kg rhIFN β-1a组动物出现一过性肛温升高,以及活化部分凝血活酶时间（APTT）、凝血酶时间（TT）延长,血浆纤维蛋白原（FIB）浓度降低,该变化在给药期内能恢复。其余一般指标、心电图、血液生化、尿液生化、骨髓检查、大体解剖、脏器质量及系数、组织学检查、免疫学指标检查未见异常。免疫原性试验可见给药20 d后绝大部分动物开始出现抗体,给药30 d时所有动物均出现抗体,各剂量组绝大多数产生结合抗体的动物血清可检测到具有中和rhIFN β-1a注射液活性的抗体,结合抗体以及中和抗体的滴度均与剂量呈非相关性关系,具有随给药时间延长抗体强度增强的趋势。结论 食蟹猴连续sc重复给予rhIFN β-1a注射液30 d,无可见有害作用水平（NOAEL）为13.2 μg/kg,该剂量为人临床拟用剂量0.135 μg/kg的97.8倍。rhIFN β-1a注射液对食蟹猴具有一定的免疫原性。     

食蟹猴重复给予溶瘤病毒药物HSV-1/hPD-1的毒性研究

目的：考察食蟹猴重复给予溶瘤病毒药物HSV-1/hPD-1后的体内毒性,探索安全剂量范围,为后续临床试验提供参考信息。方法：30只食蟹猴随机分成3组,包括溶媒对照组和低、高剂量(1.0×10⁸、4.0×10⁸ pfu)组,每组10只,雌雄各半。采用肌肉注射给药,每周给药2次,连续给药6周,恢复期8周。试验期间,每天观察动物的临床症状和摄食量,每次给药后1～2天观察注射部位症状,每周称量体重。分别在检疫期、首次给药后、给药期结束、恢复期结束的不同时间点进行安全药理(体温、血压、心电图)测定、临床病理(血液学、血凝、血清生化、尿生化)检查、免疫学(T淋巴细胞、细胞因子、免疫原性)测定、组织病理学检查和脏器称重。结果：给药后,动物未见异常症状、注射部位刺激性、体重和摄食量改变,未见安全药理和临床病理指标有意义的变化。与溶媒对照组比较,第41天,低剂量会引起动物CD3⁺CD4⁺T细胞比例升高,高剂量未见明显变化。第13至97天,低、高剂量均能引起动物产生抗载体结合抗体、抗抗体,以及个别动物检出hPD-1表达...     

注射用灯盏花素在比格犬与食蟹猴的体内毒性比较

目的:比较注射用灯盏花素对比格(Beagle)犬和食蟹猴的体内毒性。方法:普通级Beagle犬32只,雌雄各半,设生理氯化钠溶液(NS)对照和注射用灯盏花素40,80,120 mg·kg~(-1)剂量组。食蟹猴4只,设NS对照和注射用灯盏花素200 mg·kg~(-1)组。2种动物均静脉滴注给药13周,停药恢复4周,观察体内毒性。结果:Beagle犬80和120 mg·kg~(-1)组出现呕吐、腹泻、流涎等不良反应。120 mg·kg~(-1)组有1只动物给药11d皮肤出现斑疹、荨麻疹;给药第11周有1只动物出现呕血、便血后死亡。食蟹猴200 mg·kg~(-1)组仅发现1只动物出现间断性流涎。Bea- gle犬和食蟹猴各剂量组体重增长,进食量正常,血液、生化等其他各项检测指标未见明显异常。结论:食蟹猴和Beagle犬对注射用灯盏花素的耐受性、敏感性和毒性反应均存在种属差异。     

注射用重组人成纤维细胞生长因子-21食蟹猴药动学研究

目的 研究注射用重组人成纤维细胞生长因子-21（FGF-21）在食蟹猴体内单次和多次皮下给药后的药代动力学特征。方法 采用随机、平行和剂量递增设计,18只食蟹猴分别单次sc150、300和600 μg/kg的FGF-21或多次sc 300 μg/kg的FGF-21,按设计采集动态血清样本。采用双抗体夹心ELISA法检测血清中药物浓度的动态变化,采用DAS 3.2.4药动程序拟合并计算药动参数。结果 食蟹猴单次sc FGF-21后,各剂量组峰浓度C_max和药时曲线下面积AUC_（0-24h）、AUC_（0-∞）均随给药剂量的增加而增大,C_max、AUC_（0-24h）和AUC_（0-∞）三者均与剂量呈线性相关,各剂量组t_1/2Z、T_max、CL_z和V_z均较为一致。与单次给药相比,食蟹猴多次sc给药后的t_1/2z有所延长但其他主要PK参数（T_max、V_z和CL_z等）均较为一致,多次给药后,体内药物无蓄积倾向。结论 食蟹猴单次sc FGF-21后,在150~600 μg/kg剂量范围内呈现线性动力学特征。单次与多次sc给予FGF-21后,两者的PK行为特征基本一致,无明显药物蓄积。     

本维莫德的单次给药和重复给药毒性研究

目的:观察皮下注射给予本维莫德的单次给药和重复给药毒性反应,为临床安全用药提供依据。方法:单次给药毒性研究通过皮下注射方式一次性给予受试动物本维莫德2 000 mg·kg^-1(小鼠)或500 mg·kg^-1(家兔),给药后连续观察14～15 d,记录受试动物毒性反应及死亡情况。重复给药毒性研究通过皮下注射方式给予本维莫德40,100,200 mg·kg^-1·d^-1(大鼠)或30,60,150 mg·kg^-1·d^-1(家兔),连续注射6个月,给药结束后观察1个月。每日观察实验动物一般情况,每周测量实验动物体重及摄食量,末次给药终止后24 h,每组取50%受试动物(雌雄各半)进行血液生化学及病理学检查。剩余受试动物停药1个月,同前完成相应指标检查。结果:小鼠单次给药的无可见有害作用水平(no observed adverse effect level, NOAEL)剂量为2 000 mg·kg^-1,家兔单次给药的NOAEL剂量为500 m...     

人骨髓间充质干细胞脑内注射给予食蟹猴的长期毒性研究

目的研究人骨髓间充质干细胞(BMSC)脑内注射给予食蟹猴的长期毒性,为临床试验提供依据。方法24只食蟹猴随机分为对照组(生理盐水)、低剂量组(3×105个细胞/kg)和高剂量组(2.5×106个细胞/kg),每只动物脑内基底节外囊区域定向注射人BMSC2次,间隔3周。注射后观察动物的一般毒性反应,并进行体重、体温、神经功能、心电图、血液学和血液生化学、体液免疫(IgG、IgM)、细胞免疫(CD3、CD4、CD8)、尿液、脑脊液(一般性状、细胞计数、葡萄糖、蛋白质和氯化物含量)及组织病理学等指标测定。结果病理结果显示食蟹猴脑内基底节外囊区域注射人BMSC后,注射部位大脑局部出现组织坏死及炎症反应,对照组、低剂量组和高剂量组的损伤程度和范围呈递增趋势,随着时间推移,各组脑组织病变基本修复,残存少量瘢痕组织。其他各项检测指标均未见有生物学意义的显著改变。结论在本试验条件下,2.5×106/kg的剂量范围内,人BMSC食蟹猴脑内基底节外囊区域注射仅对注射局部大脑组织产生一定的病理损伤,损伤可随着时间推移逐渐修复。     

全人源抗人肿瘤坏死因子α单克隆抗体注射液对食蟹猴的长期毒性试验

目的评价全人源抗人肿瘤坏死因子α单克隆抗体(抗-h TNF-αFHMA)注射液对食蟹猴的长期毒性。方法将40只食蟹猴随机分成5组,分别为阴性对照组、阿达木单抗10 mg·kg~(- 1)对照组和抗-h TNF-αFHMA 2,10和50 mg·kg~(- 1)组,经皮下注射每周给药1次,连续给药5次,停药后恢复期4周。实验期间进行临床观察、体质量、体温、心电图、血细胞计数、凝血功能、血液生化、尿液、眼科、免疫指标、脏器及组织病理观察,同时进行血药浓度检测,分析毒代动力学参数。结果实验期间各组食蟹猴的观察、体质量、体温、心电图参数、眼科检查、血细胞计数、凝血功能、血生化、尿液分析、淋巴细胞亚群、细胞因子、血清免疫球蛋白和血清补体等指标均未见与给药相关的具有毒理意义的改变;抗-h TNF-αFHMA和阿达木单抗均可引起食蟹猴体内产生抗药抗体,且具有中和活性。抗-h TNF-αFHMA在体内基本呈线性动力学特征。相同剂量下与阿达木单抗呈现相似的免疫原性和代谢动力学特征。结论抗-h TNF-αFHMA未观察到不良反应的剂量为50 mg·kg~(- 1),相当于临床拟用剂量(0.67 mg·kg~(- 1))的75倍,表明抗-h TNF-αFHMA临床应用安全性较好。     

抗CD19单抗的质量控制研究

目的：研究并建立针对抗白细胞分化抗原19(Cluster of Differentiation 19,CD19)单抗的关键质量属性质控方法。方法：运用肽图对抗CD19的单抗进行鉴别;采用还原/非还原十二烷基磺酸钠毛细管电泳(Capillary Electrophoresis-sodium Dodecyl sulfonate,CE-SDS)和分子排阻色谱(Size ExclusionHigh Performance Liquidchromatography,SEC-HPLC)进行单抗纯度的控制;运用成像毛细管等电聚焦电泳(Imaging Capillary Isoelectricfocusing Electrophoresis,iCIEF)测定电荷异质性;运用高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography, HPLC)分析抗CD19单抗的糖基化,采用基于报告基因的抗体依赖的细胞介导的细胞毒效应(Antibody-Dependent Cell-mediated Cytotoxicity,ADCC) 测定生物学活性。其他各项指标均应符合现行版《中华人民共和国药典》以及其他相关要求。结果： 肽图检测抗CD19单抗具有相应的特征图谱,能够用于鉴别;还原CE-SDS的轻链与重链峰面积之和百分比为(98.77±0.05)%;非还原CE-SDS主峰峰面积百分比为(96.19±0.05)%,片段百分比为 (3.81±0.05)%;SEC-HPLC单体的峰面积百分比为(99.42±0.001)%,聚合物峰面积百分比为 (0.54±0.001)%;iCIEF分析的主要亚型的峰面积百分比为(66.41±0.38)%,酸性亚型的峰面积百分比为(13.69±0.16)%,碱性亚型的峰面积百分比为(19.90±0.46)%;在糖型分析中,占比最高的三个糖型分别为G0、G0-GN和M5,G0的含量为(64.64±0.61)%,G0-GN的含量为(9.75±0.42)%, M5含量为(6.22±0.35)%,生物学活性的半数最大效应浓度(Concentration for 50% of Maximal Effect, EC₅₀)值为(10.09±1.40)ng·mL^-1。结论：针对抗CD19单抗的关键质量属性,研究并建立了相应的质量控制方法,以确保其安全、有效和质量可控,为该类单抗产品的质量控制方法和策略提供参考依据。     

Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Modeling of a Humanized Anti-IL-13 Antibody in Naive and Ascaris-Challenged Cynomolgus Monkeys

Purpose  Neutralization of IL-13 is an attractive approach for treatment of asthma. In this report, we developed a novel PK–PD model that described the relationship between the circulating concentrations of total IL-13 and a neutralizing anti-IL-13 antibody (Ab-02) in the model of acute airway inflammation induced by Ascaris challenge to cynomolgus monkeys, as well as in naive monkeys. Methods  Cynomolgus monkeys were administered a single intravenous or subcutaneous dose of Ab-02. Total IL-13 and Ab-02 concentrations were measured by immunoassays. Results  Modeling and simulations indicated that: (1) Ascaris challenge induced ∼ three-fold increase in circulating IL-13 concentrations, when compared to naive animals, consistent with the notion that Ascaris-induced airway inflammation was IL-13-mediated; (2) the transient increase in total IL-13 concentrations observed in both naive and Ascaris-challenged monkeys following Ab-02 administration was due to the increase in Ab-02-bound IL-13, while free IL-13 was decreased; and (3) the extent and duration of neutralization of circulating IL-13 were different in naive and Ascaris-challenged monkeys for the same Ab-02 dose regimen. Conclusions  The PK–PD model presented in this report may be applied to study drug–ligand interactions when a free ligand cannot be directly assayed but total ligand concentrations are modulated by the drug administration.     

Pharmacokinetics of Anti-hepcidin Monoclonal Antibody Ab 12B9m and Hepcidin in Cynomolgus Monkeys

Hepcidin is a key regulator responsible for systemic iron homeostasis. A semi-mechanistic PK model for hepcidin and a fully human anti-hepcidin monoclonal antibody (Ab 12B9m) was developed to describe their total (free + bound) serum concentration-time data after single and multiple weekly intravenous or subcutaneous doses of Ab 12B9m. The model was based on target mediated drug disposition and the IgG–FcRn interaction concepts published previously. Both total Ab 12B9m and total hepcidin exhibited nonlinear kinetics due to saturable Fc–FcRn interaction. Ab 12B9m showed a limited volume of distribution and negligible linear elimination from serum. The nonlinear elimination of Ab 12B9m was attributed to the endosomal degradation of Ab 12B9m that was not bound to the FcRn receptor. The terminal half-life, assumed to be the same for free and total serum Ab 12B9m, was estimated to be 16.5 days. The subcutaneous absorption of Ab 12B9m was described with a first-order absorption rate constant k_a of 0.0278 h⁻¹, with 86% bioavailability. The model suggested a rapid hepcidin clearance of approximately 800 mL h⁻¹ kg⁻¹. Only the highest-tested Ab 12B9m dose of 300 mg kg⁻¹ week⁻¹ was able to maintain free hepcidin level below the baseline during the dosing intervals. Free Ab 12B9m and free hepcidin concentrations were simulated, and their PK profiles were nonlinear as affected by their binding to each other. Additionally, the total amount of FcRn receptor involved in Ab 12B9m recycling at a given time was calculated empirically, and the temporal changes in the free FcRn levels upon Ab 12B9m administration were inferred.KEY WORDS: FcRn, hepcidin, modeling, monkey, pharmacokinetics     

13-Week Inhalation Toxicity Study of Dimethylformamide (DMF) in Cynomolgus Monkeys

This study was conducted to assess the subchronic inhalationtoxicity of dimethylformamide (DMF) in the cynomolgus monkey.Particular attention was paid to the liver since DMF has beenshown to produce liver damage in rodents, dogs, and humans.Groups of three cynomolgus monkeys/sex/group received whole-bodyexposures for 6 hr/day, 5 days/week for 13 weeks to0, 30, 100,or 500 ppm DMF. Evaluations for toxicity included body and organweights, clinical observations, hematology, serum chemistry,urinalysis, and gross and microscopic examinations. Clinicallaboratory evaluations were conducted twice prior to the startof the study at exposure weeks 2, 4, 8, and 12 and at necropsy.Semen, collected from male monkeys three times prior to thestart of the study and weekly during the course of the study,was analyzed for sample volume, sperm count, motility, and morphology.In addition, daily vaginal swabs were obtained from all femalesprior to exposure to determine mean menses cycle length. Althoughthere was a slight trend toward increased cycle length, thistrend could not be definitely attributed to compound exposure.Based on extensive monitoring of the monkeys' clinical condition,semen quantity and quality, and clinical and pathological evaluations,no exposure-related adverse health effects were detected followingexposure to concentrations of DMF ranging from 30 to 500 ppmfor 13 weeks.     

重组人CD11α单克隆抗体生物学活性测定方法的优化

用竞争性荧光免疫抑制细胞实验法对重组人CD11α单克隆抗体注射剂进行生物学活性测定,对LFA1转染的293细胞的培养、抗体包被时间及活性测定过程中样品的制备等条件进行了优化,建立了规范可行的操作方法。3批样品的生物学活性分别为:1.03×104U/mg蛋白,0.98×104U/mg蛋白及0.97×104U/mg蛋白,5次测定的RSD分别为4.554、5.039及1.443。     

抗HER2靶点抗体偶联药物大鼠重复给药毒性研究

目的：通过对大鼠尾静脉重复注射给药重组抗HER2人源化单克隆抗体偶联美登素衍生物DM1,对其进行临床前安全性评价。方法：大鼠随机分成5个试验组,包括空白对照组、受试物低（5 mg·kg^-1）、中（11 mg·kg^-1）、高（22 mg·kg^-1）剂量组和已知对照药品组（22 mg·kg^-1,Kadcyla?）,每组30只动物,雌性各半。尾静脉注射给药,每周给药1次,连续给药3次,末次给药后恢复3周。研究期间,在不同时间点对动物临床症状、体重、摄食量、体温、尿液、血液学、血清生化及组织病理学等指标进行检测。结果：给药后,动物出现一定程度的不良反应,且作用强度呈剂量依赖性递增。毒副反应症状包括摄食量减少、尿液pH值改变;血液学检查发现,动物Lymph、RBC、HGB、HCT、MCV、MCH、MCHC、APTT下降,WBC、Neut、Mono、Eos、Baso、Retic计数升高;血清生化检查发现,动物TG、A/G、Na⁺、K⁺下降,ALT、AST、ALP、GGT、CHO、LDH、BUN、TP升高;骨髓检查发现,受试物影响动物红系细胞成熟分化;受试物引起动物肝脏、脾脏、肺（含支气管）重量增加,睾丸、附睾重量减少;组织病理学检查发现,肝脏、肾脏、脾脏、垂体、肾上腺、舌、皮肤细胞有丝分裂项增加,睾丸生精细胞数目减少和变性坏死,附睾精子减少和纤维组织增生。对照品组动物,给药后出现上述同样的改变。试验结果表明,受试物和已知对照药品两种药物的大鼠毒性研究结果具有相似性。结论：大鼠尾静脉重复注射给予重组抗HER2人源化单克隆抗体偶联美登素衍生物DM1后,毒性靶器官为肝脏、肾脏、脾脏、胸腺、肺（含支气管）、肠系膜淋巴结、十二指肠、睾丸、附睾、眼球、垂体、肾上腺、皮肤、舌、胸骨（骨髓）。未见毒性反应剂量（NOAEL ≤ 5 mg·kg^-1）。上述研究结果支持该药物成功获得临床试验批准,为后续开展临床研究提供了参考依据。     

抗CD33单克隆抗体在急性髓细胞性白血病中的应用

大量已经完成和正在进行的临床研究都表明，GO作为AML免疫治疗的重要手段将日渐占据更为重要的位置，其单独或者联合其他药物在不同AML治疗阶段中的应用方案也将日趋完善。     

抗CD20单克隆抗体治疗难治性肾病综合征

肾病综合征是儿童常见的肾脏疾病,常见病理表现为微小病变和局灶节段性肾小球硬化.虽然大部分微小病变型肾病综合征患儿对激素治疗敏感,但有50%以上的患儿出现频复发,需要其他免疫抑制剂治疗,如环孢素、环磷酰胺、霉酚酸酯等;25%以上的频复发患儿需要2种以上免疫抑制剂长期治疗,以至于出现激素依赖或环孢素依赖及严重的药物毒性反应,表现为局灶节段性肾小球硬化的患儿通常对激素耐药,即便采用最强的免疫抑制治疗方案,肾病综合征的缓解率最高达到50%～70%.     

Feasibility Studies of Nebulized SARS-CoV-2 Neutralizing Antibody in Mice and Cynomolgus Monkeys

Pharmaceutical Research - Neutralizing antibodies, administrated through intravenous infusion, have shown to be highly efficacious in treating mild and moderate COVID-19 caused by SARS-CoV-2...     

复幼颗粒剂对大鼠的单次给药毒性及幼龄动物重复给药毒性试验研究

目的 评价复幼颗粒对SD大鼠的非临床安全性。方法 单次给药毒性试验：20只SD大鼠(6~7周龄),随机分为溶媒对照组(去离子水)和复幼颗粒组(18 g·kg^-1),按每次30 mL·kg^-1灌胃给药,24 h给药2次(上、下午),给药后观察14 d;检查项目包括临床观察、体质量、大体解剖等。重复给药毒性试验：将192只幼龄SD大鼠(出生后4 d)按体质量随机分为溶媒对照组(去离子水),低、中、高剂量复幼颗粒组(1.2,2.5,5 g·kg^-1),按每次10 mL·kg^-1灌胃给药,每天2次,连续给药13周,恢复期4周;检查项目包括一般生理指标、眼科检查、发育指标、血液生化指标、免疫学指标、激素指标、生殖功能指标、组织病理学观察等。结果 单次给药毒性试验：SD大鼠灌胃给予复幼颗粒按18 g·kg^-1(生药：82 g·kg^-1),无明显急性毒性。重复给药毒性试验：幼龄SD大鼠灌胃给予2.5 g·kg^-1(生药：11.33 g·kg^-1)复幼颗粒连续给药13周,未见明显毒性反应。恢复期高剂量组雌鼠孕酮水平显著降低。结论 复幼颗粒对受试动物在临床拟用剂量范围内未见明显的单次给药毒性和重复给药毒性反应。